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    水牛乳乳餅發(fā)酵菌種篩選及工藝優(yōu)化

    2022-04-08 05:06:28曾慶坤謝耀峰
    中國乳業(yè) 2022年3期
    關(guān)鍵詞:凝乳乳清原料

    但 霞,曾慶坤*,謝耀峰

    1 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院廣西水牛研究所,廣西南寧 530001

    2 廣西水牛乳工程技術(shù)研究中心,廣西南寧 530001

    0 引言

    乳餅(Dairy Cake)是路南撒尼族地區(qū)的一種傳統(tǒng)乳制品,以香醇的風味和良好的可烹飪性而廣受歡迎。乳餅是一種典型的加熱酸凝鮮干酪,目前乳餅大多采用傳統(tǒng)作坊式生產(chǎn),加工工藝沒有標準化;乳餅生產(chǎn)用的酸水,多為憑經(jīng)驗自然生成,因此,存在微生物組成復(fù)雜,可能導(dǎo)致污染和產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定等問題。而酸水質(zhì)量直接影響到乳餅的產(chǎn)量、色澤、風味以及成型,沒有標準化的酸水使乳餅生產(chǎn)很難走向工業(yè)化、規(guī)?;痆1~5]。因此,篩選發(fā)酵菌株建立標準化的生產(chǎn)工藝流程是乳餅產(chǎn)業(yè)化的發(fā)展方向。

    廣西奶水牛存欄量4.42 萬頭,是我國水牛存欄第一的省份,水牛奶資源豐富,產(chǎn)量2.76 萬噸,位居全國首位[6],但水牛奶深加工技術(shù)較為缺乏,產(chǎn)品形式及種類較為單一。因此,發(fā)展新型水牛乳加工技術(shù),豐富水牛乳產(chǎn)品種類,對我區(qū)水牛產(chǎn)業(yè)發(fā)展壯大具有重要意義。

    本研究利用云南乳餅的加工工藝,篩選優(yōu)良的乳清發(fā)酵菌株,并通過正交試驗優(yōu)化水牛乳乳餅的生產(chǎn)工藝,為乳清巴氏殺菌后接種鼠李糖乳桿菌RSF1,37 ℃發(fā)酵至乳清pH3.6停止;原料乳標準化,預(yù)熱至90 ℃,隨后降溫至70 ℃,分兩次添加發(fā)酵乳清,保溫凝乳4 min,過濾入模壓制2 h后放入4 ℃冷藏,所制得乳餅得率最高可得32.500%,質(zhì)地細膩,奶香濃郁,可烹飪性強。

    1 試驗材料與方法

    1.1 試驗材料

    生水牛乳:廣西水牛研究所種蓄場。

    試驗菌株:水牛乳乳清自然發(fā)酵分得乳酸菌18 株。

    試驗試劑:MRS肉湯培養(yǎng)基,MRS瓊脂培養(yǎng)基,廣州環(huán)凱微生物科技有限公司;游離脂肪酸檢測試劑盒,南京建成生物工程研究所;石油醚,乙醚,無水乙醇,鹽酸,三氯乙酸,鄰苯二甲醛等試劑,分析純,天津博迪化工股份有限公司。

    試驗設(shè)備:FOSS120乳成分檢測儀,F(xiàn)OSS8400蛋白檢測分析儀,丹麥 福斯集團公司,TMS-Pro質(zhì)構(gòu)儀,美國FTC公司,ME204E分析天平,梅特勒-托利多中國公司,Galaxy 170s恒溫培養(yǎng)箱,德國艾本德公司,UV-800紫外分光光度計,上海元析儀器有限公司,Thermo D-37520冷凍離心機,美國賽默飛科技公司。

    1.2 試驗方法

    1.2.1 發(fā)酵菌株篩選

    將乳酸菌活化,用MRS肉湯37 ℃培養(yǎng)24 h,至生長對數(shù)期,傳代3 次,離心收集菌體,用無菌生理鹽水洗滌,按體積5.000%(v/v)接種巴氏滅菌乳清,37 ℃發(fā)酵48 h,檢測發(fā)酵液pH值、游離脂肪酸濃度和蛋白水解度,游離脂肪酸采用試劑盒方法檢測。

    蛋白水解度(DH)檢測方法:稱取2 g乳餅樣品與10 mL三氯乙酸溶液(75.000%)混合,3 000 r/min,4 ℃離心15 min,取上清液用0.45 μm濾膜過濾,取30 μL濾液與1 mL鄰苯二甲醛混合,在室溫下保存2 min,用紫外分光光度計測340 nm波長下的吸光度,DH表示游離NH3基團在340 nm處的測量吸光度。

    1.2.2 乳餅工藝單因素試驗

    乳餅樣品的制備:新鮮牛奶,加熱75 ℃以上,添加發(fā)酵酸乳清(占牛奶15.000%~25.000%),攪拌,保溫凝乳(75~80 ℃,5 min),形成凝乳顆粒,過濾,壓制成型。

    (1)原料奶不同蛋白脂肪比

    分別調(diào)配蛋白脂肪百分比為0.55:1、0.6:1、0.65:1、0.7:1 的4 個比例的鮮水牛乳,用相同的乳餅工藝制作乳餅,測各比例得率。

    (2)不同凝乳溫度

    分別以65 ℃、70 ℃、75 ℃、80 ℃、85 ℃、90 ℃作為乳餅?zāi)闇囟?,測定不同溫度對乳餅得率及質(zhì)構(gòu)的影響。

    (3)不同乳清添加次數(shù)

    取用相同量的乳清,設(shè)置1 次、2 次、3 次乳清添加,每次添加后攪拌均勻并保溫凝乳2 min,觀察不同乳清添加次數(shù)對乳餅得率的影響。

    (4)不同預(yù)熱溫度

    對比不同預(yù)熱溫度對乳餅得率的影響。

    (5)不同乳清pH值

    設(shè)置3 個梯度pH值3.30、3.60、3.90,觀察不同乳清pH值對乳餅得率,乳清添加量等因素的影響。

    (6)不同加水量

    設(shè)置原料乳不加水、10.000%、20.000%(w/w)3 個梯度加水情況,觀察乳餅得率。

    1.2.3 乳餅工藝正交試驗

    設(shè)置凝乳溫度,預(yù)熱情況,乳清pH值,乳清添加次數(shù),4因素3水平正交試驗,具體試驗參數(shù)如表1所示。

    表1 正交試驗因素及水平設(shè)計

    1.2.4 乳餅理化指標

    水分質(zhì)量分數(shù)根據(jù)《GB 5009.3—2010 食品安全國家標準 食品中水分的測定》中常壓干燥法測定。蛋白質(zhì)根據(jù)《GB/T 5009.5—2010 食品安全國家標準 食品中蛋白質(zhì)的測定》采用微量凱氏定氮法(N×6.38)測定。脂肪根據(jù)《GB 5009.6—2016 食品安全國家標準食品中脂肪的測定》測定。乳餅得率= 鮮乳餅質(zhì)量/原料奶質(zhì)×100%。

    乳餅質(zhì)構(gòu)測定:TPA質(zhì)構(gòu)儀,感應(yīng)元件50.0 N,形變量25.000%,下降速度60 mm/s,最小作用力0.1 N,每個樣品取樣3 次,測3 次,取平均值。

    1.2.5 數(shù)據(jù)處理

    試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 20處理,Origin 2018 作圖,正交計算采用Minitable 17.0設(shè)計并計算。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 乳清發(fā)酵菌株篩選

    菌株發(fā)酵乳清結(jié)果如表2所示。乳餅制作過程主要靠酸化的乳清在高溫條件下絮凝牛乳中的蛋白,因此,菌株的產(chǎn)酸能力需要較強,從表2可以看出菌株RSF1、PY7、D3發(fā)酵液pH值較低,相同發(fā)酵條件下,3 個菌株產(chǎn)酸能力更強,比較符合要求。游離脂肪酸和水解蛋白濃度則可以表明菌株水解蛋白和脂肪的能力,而脂肪酸和氨基酸是風味的主要來源[7~9],因此,選擇分解脂肪蛋白能力強的菌株可以為發(fā)酵乳清帶來更多風味,更有利于乳餅風味的形成。從游離脂肪酸和蛋白水解度數(shù)據(jù)來看,菌株P(guān)Y7均低于RSF1,菌株D3蛋白水解度略高于RSF1,但游離脂肪酸濃度明顯低于RSF1,綜合數(shù)據(jù)來看,菌株RSF1產(chǎn)酸快,且分解蛋白脂肪能力較強,符合試驗?zāi)康?,所以選擇該菌株作為乳清發(fā)酵菌株。

    表2 不同菌株乳清發(fā)酵液檢測結(jié)果

    2.2 乳餅制作單因素試驗

    如圖1A所示,經(jīng)過不同蛋白脂肪比制作乳餅可知,相同加工條件下原料乳蛋白∶脂肪=0.65時乳餅得率最高,0.70比例次之,0.55最低。這說明蛋白越少,乳餅的得率越少,因此,在標準化的過程中,將蛋白脂肪的百分含量比調(diào)整為0.65更有利于生產(chǎn)。

    從不同的凝乳溫度試驗(圖1B)可以看出,凝乳溫度隨著從65 ℃到90 ℃越來越高,凝乳時所需的乳清越來越少;65 ℃時保溫凝乳,所需要酸乳清的質(zhì)量占原料乳的40.000%左右,70 ℃時即下降至24.000%,至90 ℃凝乳時,只需約14.500%,這是牛奶在加熱過程中形成磷酸鈣釋放H+而降低pH值,溫度越高酸度降低越明顯[10~12]。乳餅得率則在70 ℃時達到最高,75~90 ℃則隨溫度的升高迅速降低至22.000%左右,F(xiàn)ox等研究發(fā)現(xiàn),70~75 ℃時乳清蛋白中的β-Lg蛋白結(jié)構(gòu)展開,更容易與酪蛋白結(jié)合,且αs-CN和β-CN的解聚量在70 ℃左右達到最高;當加熱溫度高于70 ℃,蛋白解聚量與加熱溫度呈負相關(guān)[13,14],與試驗中70~75 ℃樣品得率較高的結(jié)論相吻合。而陶亮等[2]的試驗中乳餅最高得率凝乳溫度為80 ℃,這可能是水牛乳原料、工藝等多方面的差異因素造成。從咀嚼力看,凝乳溫度越高,咀嚼力越大,凝乳溫度越高,蛋白絮凝結(jié)構(gòu)越致密,硬度越高;而乳餅硬度較高時磨牙感強烈,食用感不佳,相對而言咀嚼力小的樣品口感更好。

    圖1 乳餅單因素試驗對乳餅得率的影響

    原料乳預(yù)熱后得率增加(圖1C),這說明延長高溫蒸煮時間更有利于此種條件下奶中更多蛋白的酸凝,酪蛋白是熱穩(wěn)定性蛋白,而乳清蛋白為熱敏感性蛋白,易熱變性,變性的乳清蛋白發(fā)生分子內(nèi)和分子間的相互作用形成凝聚物,加熱導(dǎo)致變性乳清蛋白與酪蛋白膠束表面蛋白結(jié)合,改變其膠束表面毛發(fā)狀結(jié)構(gòu),使膠束內(nèi)部疏水性基團和Ca2+敏感蛋白暴露出來,進而發(fā)生強烈凝聚趨勢,且跟容易與Ca2+發(fā)生絡(luò)合[15],所以在酸作用前,預(yù)熱加速了乳清蛋白的變性,使其更容易析出,但這是否是乳餅得率增加的原因,還需要進一步驗證。

    從圖1D可以看出,隨乳清pH值的增加,乳餅得率相應(yīng)增加,研究發(fā)現(xiàn)乳清蛋白中熱穩(wěn)定性隨pH值增加而降低[16],因此,在高pH值中乳清蛋白更容易變性析出。試驗中pH值3.30的乳清得率明顯低于pH值3.60和3.90樣品,但pH值3.90的乳清需要添加的量較多,不利于節(jié)能生產(chǎn)。傳統(tǒng)工藝中,原料乳直接在鍋中加熱,當原料乳固形物含量過高時容易出現(xiàn)糊鍋現(xiàn)象,所以在加熱水牛奶或羊奶時往往會加水稀釋,李昌盛等[17]還對加水量進行了對比發(fā)現(xiàn)將原料乳稀釋2 倍最佳。本試驗采用隔水加熱的模式,杜絕了糊鍋的現(xiàn)象,且經(jīng)過試驗發(fā)現(xiàn)(圖1E)不加水生產(chǎn)乳餅得率反而高,且加水后原料體積增加,對生產(chǎn)能源及飲用水都造成了不必要的浪費。

    不同的乳清添加次數(shù)所需要的乳清量也不同,圖1F試驗中1 次添加凝乳所需要的乳清最多,而2 次和3 次則相差不明顯,但3 次添加的乳餅得率較高。

    2.3 乳餅工藝正交試驗結(jié)果

    根據(jù)表3數(shù)據(jù)可知,2號處理的得率最高,可達32.500%,高于文獻記載得率[2],對乳餅得率影響的主次順序為:乳清的pH>原料乳預(yù)熱>凝乳溫度>乳清添加次數(shù),其最優(yōu)工藝為A1B2C2D2;因此在發(fā)酵乳清時要嚴格控制乳清pH值。原料乳預(yù)熱情況對乳餅得率影響也較為顯著,對比9 個樣品的預(yù)熱情況來看,在70 ℃凝乳時(樣品1~3)未預(yù)熱樣品得率只有25.5%,而預(yù)熱后樣品均在30%以上;高溫凝乳樣品(樣品4~9)預(yù)熱對得率的影響大大降低,但得率均高于1號未預(yù)熱70 ℃凝乳樣品,說明加熱對增加乳餅得率有較大的作用,雖然文獻中表面高溫會使乳清蛋白變性析出[10,15],但針對本研究的乳餅還需要進一步對蛋白成分檢測進行驗證。凝乳溫度對乳餅得率的影響較弱,說明試驗設(shè)置的溫度梯度范圍過小,但前期試驗表面,溫度過低會導(dǎo)致乳清的添加量大大增加,且未預(yù)熱的原料乳在低于70 ℃時凝乳對乳餅后續(xù)的可烹飪性有較大影響,因此,綜合各個因素選擇70~90 ℃的溫度區(qū)間。

    從乳餅咀嚼力的計算結(jié)果來看(表3),對乳餅咀嚼力影響的主次順序為:凝乳溫度>乳清的pH>乳清添加次數(shù)>原料乳預(yù)熱,最優(yōu)工藝為A1B3C1D2;乳清pH值在3.6和3.8試驗樣品結(jié)果不顯著,但高pH值會加大生產(chǎn)過程中使用的乳清量,從而造成能源及水的浪費;而較低的pH值則會延長乳清的發(fā)酵時間,占用發(fā)酵罐及消耗能量,或者需要加大接種量,因此需要對比具體的能源消耗以確定最優(yōu)pH值。

    表3 乳餅正交試驗結(jié)果

    根據(jù)表4數(shù)據(jù)可知乳餅蛋白脂肪含量、咀嚼力、硬度均與得率呈負相關(guān),水分含量與得率呈正相關(guān),即水分含量越大,蛋白脂肪含量越低,乳餅咀嚼力和硬度越低;彈力3,4號處理較高,而7,8,9號樣品較低,說明凝乳溫度高,乳餅彈力有所減弱,但總體樣品間彈力差異不明顯;黏性則隨凝乳溫度的升高而升高,70℃時黏性1.24~1.87,90℃時升高至3.64,說明溫度越高,乳餅結(jié)構(gòu)越致密。

    表4 乳餅樣品理化及質(zhì)構(gòu)檢測結(jié)果

    2.4 驗證試驗

    根據(jù)正交試驗結(jié)果,選取兩種最優(yōu)工藝進行放大驗證,結(jié)果如表5所示,A1B2C2D2工藝所制得樣品(1,2號)得率均在30%以上,明顯高于A1B3C1D2工藝樣品(3,4號),且在生產(chǎn)中,得率高的產(chǎn)品咀嚼力也相對較低,口感較佳,因此主要的判別指標為產(chǎn)品得率,故乳餅最優(yōu)工藝為A1B2C2D2。

    表5 驗證試驗

    3 結(jié)論

    經(jīng)過一系列試驗表明,影響乳餅得率和咀嚼力的主要因素是乳清pH值及凝乳溫度。溫度越高,乳餅咀嚼力越大,因此,低溫凝乳所制乳餅口感更佳;乳清pH值越低則乳餅得率越低,但過高的pH值則會導(dǎo)致乳清添加量大大增加,會增加生產(chǎn)用水和耗能。通過正交試驗表明,乳餅的較大得率,低咀嚼力生產(chǎn)工藝為:原料乳提前預(yù)熱至90 ℃,隨后降溫至70 ℃,分兩次添加乳清并保溫凝乳,隨后過濾,在模具中壓制成型,其得率可達32.500%。

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