• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    體外模擬胃腸消化過(guò)程中四種茶葉活性成分及抗氧化性變化規(guī)律

    2020-02-18 08:21:42劉靜敏史靜蘭陳小強(qiáng)
    食品工業(yè)科技 2020年1期
    關(guān)鍵詞:福鼎大白花青素

    劉靜敏,史靜蘭,魯 江,徐 歆,李 倩,陳小強(qiáng)

    (湖北工業(yè)大學(xué)生物工程與食品學(xué)院,湖北武漢 430068)

    紫娟是云南大葉群體茶樹(shù)品種中的一個(gè)變異品種,其芽、葉、莖都為紫色[8]。有研究表明,紫鵑茶的原花青素含量很高,具有極強(qiáng)的抗氧化能力[9-10]。中黃一號(hào)在春季發(fā)芽時(shí)新梢嫩葉葉色有可逆性黃化現(xiàn)象,相較于一般綠茶具有更高含量的氨基酸[11],且由于其形態(tài)特征的特異性、制茶品質(zhì)的優(yōu)異性和較強(qiáng)的適應(yīng)性,產(chǎn)品供不應(yīng)求,經(jīng)濟(jì)效應(yīng)顯著。白葉一號(hào)是安吉白茶的一個(gè)茶樹(shù)品種,其特異性主要表現(xiàn)在春季發(fā)芽時(shí)新梢嫩葉葉色的可逆性白化現(xiàn)象,在白化過(guò)程中新梢的葉綠素含量急劇下降,氨基酸含量明顯上升[12]。福鼎大白茶作為傳統(tǒng)茶葉的一個(gè)代表,同時(shí)也是全國(guó)茶葉區(qū)試標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照種,種植面積最廣[13]。

    Green等[14]對(duì)綠茶進(jìn)行體外模擬胃腸消化,采用高效液相色譜法對(duì)消化前后的兒茶素進(jìn)行評(píng)估,結(jié)果發(fā)現(xiàn),飲茶習(xí)慣可能影響兒茶素的消化,并可能導(dǎo)致不同的生理特征。Tenore等[15]將同一茶樹(shù)品種采用不同加工方式生產(chǎn)的白茶、綠茶與紅茶,通過(guò)模擬胃腸消化、腸道滲透和血漿蛋白相互作用對(duì)比三種茶葉中兒茶素的變化發(fā)現(xiàn),白茶中兒茶素在口服條件下具有良好的穩(wěn)定性,具有最好的腸道生物可接受性和生物利用度,并可能在調(diào)節(jié)血糖和血漿膽固醇方面發(fā)揮重要作用。目前對(duì)茶葉活性成分多酚類(lèi)物質(zhì)在消化過(guò)程中的含量及抗氧化性變化規(guī)律的研究主要集中在兒茶素,而尚未發(fā)現(xiàn)對(duì)茶葉中黃酮、原花青素類(lèi)物質(zhì)的相關(guān)報(bào)道。

    為總結(jié)茶葉中多酚類(lèi)物質(zhì)及其抗氧化活性變化規(guī)律,本文采用紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)和福鼎大白作為研究對(duì)象,用體外模擬胃腸消化的方法,測(cè)定四種茶葉的多酚、黃酮、原花青素的含量和總結(jié)變化規(guī)律,以及分析消化過(guò)程對(duì)抗氧化活性的影響。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)、福鼎大白 江蘇省茶葉研究所玉山基地提供(江蘇宜興),于2018年4月份手工采摘,采摘標(biāo)準(zhǔn)為一芽二葉,并通過(guò)在120 ℃下烘干半小時(shí)處理獲得成品,粉碎(過(guò)60 目)于4 ℃保存;香草醛、濃鹽酸、乙醇 百靈威科技有限公司;兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品 南京狄爾格醫(yī)藥科技有限公司;氯化鈉、甲醇、膽鹽3號(hào)、碳酸鈉、Folin-酚試劑、硝酸鋁、乙酸鉀 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;胃蛋白酶(456 U/mg)、胰蛋白酶(100~500 U/mg)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、ABTS 上海阿拉丁生化科技股份有限公司;所有分離用有機(jī)溶劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

    T6型新世紀(jì)紫外光分光光度計(jì) 尤尼科儀器有限公司;DK-S22型恒溫水槽 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;RJ-TLT-16G離心機(jī) 無(wú)錫市瑞江分析儀器有限公司;GZX-9140 MBE電熱鼓風(fēng)干燥箱 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司;ME104E/02電子天平 梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;SHB-Ш循環(huán)水式多用真空泵 鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司;Multiskan FC酶標(biāo)儀 賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司;KQ-300E超聲波清洗機(jī) 上海之信儀器有限公司;JYL-CO2OE九陽(yáng)料理機(jī) 九陽(yáng)有限公司。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 茶湯提取 根據(jù)傳統(tǒng)飲茶習(xí)慣,分別稱取4種茶粉(紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)和福鼎大白)10 g,置于500 mL 90 ℃水中,持續(xù)攪拌5 min,然后將茶湯過(guò)濾并冷卻,各茶湯定容至500 mL。

    1.2.2 模擬體外消化 為了研究茶湯中活性成分及抗氧化變化規(guī)律,將1.2.1方法提取得到的茶湯溶液300 mL置于500 mL的錐形瓶中,用鹽酸調(diào)節(jié)pH至2.0,加入0.6 g NaCl,然后加入0.378 g胃蛋白酶,用保鮮膜封口后,再將錐形瓶置于37 ℃水浴中振蕩2 h。模擬胃部消化結(jié)束后,用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)消化液pH至7.0,然后加入20 mg的胰蛋白酶和125 mg的膽鹽,然后在相同水浴條件下反應(yīng)2 h。胃腸消化期間每隔30 min取一次樣,將取出的各消化液于90 ℃條件下加熱1 min,使消化酶失活,6000 r/min,離心6.5 min后,取上清液在4 ℃條件下儲(chǔ)存?zhèn)溆肹6,16]。

    1.2.3 總多酚含量的測(cè)定 Folin-酚試劑比色法[17]測(cè)定總多酚,以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品。分別移取四種茶葉樣品各階段消化液1 mL于試管中,在每個(gè)試管中分別加入5 mL 10%的Folin-酚試劑,混合后在3~8 min內(nèi)再加入4 mL 7.5%的Na2CO3溶液。搖勻后在室溫條件下避光放置1 h后,于765 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以沒(méi)食子酸濃度為橫坐標(biāo),沒(méi)食子酸工作液的吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性方程為y=0.0097x+0.0043,R2=0.9999。

    鰻魚(yú)帶肉骨→預(yù)處理→凈鰻魚(yú)帶肉骨→烘干→干鰻魚(yú)帶肉骨→粉碎、均質(zhì)→鰻魚(yú)肉骨粉→水提→鰻魚(yú)肉骨粉料液→酶解→酶解液→均質(zhì)→噴霧干燥→成品。

    1.2.4 總黃酮含量的測(cè)定 根據(jù)Zielinski等[18]Al(NO3)3-CH3COOK顯色法測(cè)定總黃酮,分別移取四種茶葉樣品各階段消化液1 mL于試管中,先加入1 mL 10%的硝酸鋁溶液,再加1 mL 0.98%的醋酸鉀溶液。搖勻后在室溫條件下避光放置1 h,于415 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以兒茶素濃度為橫坐標(biāo),兒茶素工作液的吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性方程為y=0.527x+0.0082,R2=1。

    1.2.5 原花青素含量的測(cè)定 香草醛-甲醇-鹽酸顯色法測(cè)定原花青素[19],分別移取四種茶葉樣品各階段消化液0.5 mL于試管中,先加入2.5 mL 1%的香草醛-甲醇溶液,再加入2.5 mL 30%的鹽酸溶液,用上述方法蒸餾水代替樣品制備空白試樣,搖勻后在室溫條件下避光放置1 h,于500 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以兒茶素濃度為橫坐標(biāo),兒茶素工作液的吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性方程為y=1.0284x+0.0073,R2=1。

    1.2.6 ABTS自由基清除能力的測(cè)定 根據(jù)Ksouri等[20]、Chang等[21]的方法進(jìn)行測(cè)定,稍作改動(dòng)。取4 mL 7 mmol/L ABTS原液,加入88 μL 140 mmol/L過(guò)硫酸鉀溶液,混合均勻后暗處?kù)o置12~16 h,0 ℃保存?zhèn)溆?。將ABTS溶液用無(wú)水乙醇稀釋,使其在734 nm處吸光值為0.70±0.02,得到ABTS工作液。準(zhǔn)確移取3 μL不同質(zhì)量濃度(100~400 μg/mL)的樣品液與237 μL ABTS工作液混合,于室溫下避光反應(yīng)30 min,測(cè)定反應(yīng)液在734 nm處的吸光值,以無(wú)水乙醇作為空白,平行測(cè)定3次,取其平均值,并用0.5 mg VC/mL溶液作對(duì)照。

    1.2.7 DPPH自由基清除能力的測(cè)定 測(cè)定方法參考Gorjanovic等[22]的方法,稍作改動(dòng)。將10 μL不同質(zhì)量濃度(100~400 μg/mL)的樣品液與100 μL 0.1 mmol/L甲醇-DPPH自由基充分混勻后,置于避光處反應(yīng)30 min,在517 nm處測(cè)定吸光值,以甲醇作為空白,平行測(cè)定3次,取其平均值,并用0.5 mg VC/mL溶液作對(duì)照。

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    以上實(shí)驗(yàn)均平行進(jìn)行3次,得到的數(shù)據(jù)經(jīng)OriginPro-9軟件處理,采用Dunnett’st檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性差異分析,以P<0.05為差異顯著。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 活性成分含量分析

    4種茶葉提取液中多酚、黃酮及原花青素含量見(jiàn)表1。消化前茶葉提取液中酚類(lèi)物質(zhì)含量范圍為2.03(白葉一號(hào))~2.32 mg GAE/mL(福鼎大白)。總黃酮含量范圍為2.41(紫娟)~3.41 mg GA/mL(福鼎大白),其中多酚及總黃酮含量福鼎大白茶最高。原花青素含量范圍為0.16(中黃一號(hào))~0.78 mg GA/mL(紫鵑),其中紫娟茶葉提取液中原花青素含量顯著高于其他茶葉提取液含量(P<0.05)。金孝芳等[23]研究認(rèn)為中黃一號(hào)原花青素含量略低于其他茶葉品種,與本次實(shí)驗(yàn)趨勢(shì)相似。呂海鵬等[24]推測(cè)紫娟茶中原花青素含量豐富,也與本研究變化一致。然而紫娟多酚含量較其他文獻(xiàn)所述含量偏低可能是由于地區(qū)差異所導(dǎo)致[25]。

    表1 4種茶葉提取液抗氧化活性成分含量Table 1 Antioxidant active ingredients content in 4 kinds of tea soup

    注:同列小寫(xiě)字母不同表示差異顯著(P<0.05)。

    2.2 模擬體外消化過(guò)程中活性物質(zhì)含量及抗氧化能力變化分析

    2.2.1 體外模擬消化過(guò)程中多酚變化規(guī)律 4種茶葉提取液在模擬胃、腸消化過(guò)程中多酚變化如圖1所示。經(jīng)過(guò)胃消化2 h后,福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)多酚含量分別下降7.27%、6.36%、16.95%、16.76%。再經(jīng)過(guò)腸消化2 h后,福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)多酚含量較原始茶葉提取液分別下降12.59%、13.44%、14.73%、13.30%。

    圖1 4種茶葉提取液在模擬胃、 腸消化過(guò)程中多酚含量變化Fig.1 Changes of polyphenols in four kinds of tea soup during simulated gastric and intestinal digestion

    通過(guò)對(duì)胃消化階段和腸消化階段的比較,發(fā)現(xiàn)在胃消化階段(0~2 h),福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)提取液中多酚含量下降趨勢(shì)較為明顯,原因可能是多酚類(lèi)物質(zhì)在胃部消化過(guò)程中發(fā)生降解,導(dǎo)致多酚含量下降。劉翼翔等[26]采用體外消化模型模擬人體胃腸對(duì)藍(lán)莓多酚的消化,發(fā)現(xiàn)胃消化后藍(lán)莓多酚的總酚含量與總花色苷含量都沒(méi)有發(fā)生明顯變化,這與本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果有所不同,需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。而在腸消化階段(2~4 h),福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)多酚含量存在一定的回升趨勢(shì)。原因可能是茶湯中多酚大分子受腸道環(huán)境影響分解為多酚小分子,其含量下降,但整體酚羥基含量上升,后當(dāng)小分子被完全釋放,受腸道環(huán)境影響,多酚含量再次下降。劉翼翔等[26]通過(guò)對(duì)藍(lán)莓多酚在胃腸消化過(guò)程中總酚及總花色苷含量變化發(fā)現(xiàn),經(jīng)小腸消化后,總酚含量發(fā)生了明顯降低,說(shuō)明小腸pH7.4的弱堿性環(huán)境能夠造成藍(lán)莓多酚分解,與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致,但多酚含量降低是否與胰蛋白酶發(fā)生了結(jié)合,隨不溶解的蛋白酶一起丟失,還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

    2.2.2 體外模擬消化過(guò)程中黃酮變化規(guī)律 4 種茶葉提取液在模擬胃、腸消化過(guò)程中黃酮變化如圖2所示,經(jīng)過(guò)胃消化2 h后,福鼎大白、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)黃酮含量分別下降16.52%、15.40%、19.88%,紫娟上升12.02%。再經(jīng)過(guò)腸消化2 h后,福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)黃酮含量分別上升43.26%、30.30%、9.29%、5.77%。

    圖2 4種茶葉提取液在模擬胃、 腸消化過(guò)程中黃酮含量變化趨勢(shì)Fig.2 Changes of flavonoids content in four kinds of tea soup during simulated gastric and intestinal digestion

    在胃消化階段(0~2 h),福鼎大白、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)黃酮含量下降趨勢(shì)較為明顯,原因可能是黃酮化合物在胃消化過(guò)程中穩(wěn)定性較差。李俶等[27]人選取七種不同種類(lèi)的酚類(lèi)化合物,研究模擬體外胃腸道消化對(duì)其穩(wěn)定性的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),類(lèi)黃酮化合物在胃消化過(guò)程中穩(wěn)定性較差,兒茶素下降17%、表兒茶素下降6%,這與本實(shí)驗(yàn)研究相符。而在紫娟提取液中某些黃酮大分子受環(huán)境影響分解為黃酮小分子,黃酮含量存在一定的上升,。在腸消化階段(2~4 h),福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)黃酮含量明顯提升,推測(cè)可能是在堿性環(huán)境下茶葉提取液中某些黃酮大分子受環(huán)境影響分解為黃酮小分子致使吸光值提高。唐琦等[28]通過(guò)體外模擬消化測(cè)定紅小豆萌發(fā)前后總多酚、總黃酮含量的變化規(guī)律,發(fā)現(xiàn)堿性環(huán)境條件下,總黃酮含量增加,原因可能是酚酸類(lèi)、花青素類(lèi)在腸液偏堿性條件下發(fā)生降解,總多酚結(jié)構(gòu)變化向更穩(wěn)定的黃酮類(lèi)轉(zhuǎn)化,從而導(dǎo)致總黃酮含量增加。這與本文所述相同。

    2.2.3 體外模擬消化過(guò)程中原花青素變化規(guī)律 4種茶葉提取液在模擬胃、腸消化過(guò)程中原花青素變化如圖3所示,經(jīng)過(guò)胃消化2 h后,福鼎大白、紫娟、白葉一號(hào)原花青素含量分別下降3.09%、2.24%、17.78%。再經(jīng)過(guò)腸消化2 h后,福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)原花青素含量分別下降22.87%、46.95%、10.89%、23.70%。

    圖3 4種茶葉提取液在模擬胃、 腸消化過(guò)程中原花青素含量變化趨勢(shì)Fig.3 Changes of proanthocyanidins content in four kinds of tea soup during simulated gastric and intestinal digestion

    在胃消化階段(0~2 h),福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)原花青素含量下降趨勢(shì)不明顯,這與原花青素在酸性環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定有關(guān)。在腸消化階段(2~2.5 h),福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)原花青素含量明顯下降,這與其在堿性環(huán)境下不穩(wěn)定有關(guān)。在腸消化階段(2.5~4 h),福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)原花青素含量下降不明顯。李華等[29]用不同的方法檢測(cè)葡萄籽超微粉經(jīng)體外消化后的抗氧化能力,通過(guò)對(duì)總酚和原花青素含量的測(cè)定發(fā)現(xiàn)原花青素在人工胃液中比較穩(wěn)定,在人工腸液中呈緩慢分解趨勢(shì),這與本文結(jié)論一致。

    2.2.4 體外模擬消化對(duì)抗氧化活性的影響 4種茶葉提取液在模擬體外消化過(guò)程的DPPH自由基清除能力變化如圖4所示,DPPH自由基清除能力IC50值為0.92~1.46 mg VC/mL;其中,福鼎大白自由基清除能力最高。陳金娥等[30]用DPPH法研究紅茶、綠茶、烏龍茶等八種茶葉活性成分的抗氧化性,得出茶葉中多酚含量順序與其對(duì)自由基的清除能力大小順序一致。福鼎大白茶多酚及總黃酮含量最高,與其DPPH自由基清除能力最高結(jié)果相符;在消化后,福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)DPPH自由基清除能力分別下降33.91%、41.78%、20.81%、31.55%,呈明顯下降趨勢(shì)。

    圖4 4種茶葉提取液DPPH自由基清除能力消化前后比較Fig.4 DPPH free radical scavenging ability comparison of 4 kinds of tea soup before and after digestion

    4種茶葉提取液在模擬體外消化過(guò)程的ABTS自由基清除能力變化如圖5所示,ABTS自由基清除能力IC50值在1.10~1.17 mg VC/mL之間,其紫娟ABTS+·抗氧化活性最高,其次為福鼎大白、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)。戴妙妙等[31]通過(guò)比較紫鵑茶中花青素提取物和兩種常用合成抗氧化劑BHA、BHT的抗氧化性及清除自由基能力,發(fā)現(xiàn)紫娟茶中花青素具有較強(qiáng)的抗氧化性活性及較強(qiáng)的清除自由基的能力。紫鵑茶原花青素含量最高,ABTS自由基清除能力最好,與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。在消化后,福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)ABTS自由基清除能力下降23.48%、29.06%、23.68%、23.64%,呈明顯下降趨勢(shì)。

    圖5 4茶葉提取液ABTS自由基清除能力消化前后比較Fig.5 ABTS free radical scavenging ability comparison of 4 kinds of tea soup before and after digestion

    在體外模擬消化過(guò)程中,4種茶葉提取液的抗氧化活性(DPPH自由基清除能力和ABTS自由基清除能力)呈逐漸下降的趨勢(shì),這與尹世磊等[32]的研究結(jié)果相似。其中,DPPH自由基清除能力和ABTS自由基清除能力的下降率以紫娟最大,分別達(dá)到了41.78%、29.06%。4 種茶葉提取液在經(jīng)過(guò)胃、腸消化后抗氧化值明顯下降,不同方法測(cè)定抗氧化值的變化趨勢(shì)均與多酚和黃酮含量的變化趨勢(shì)相近。

    3 結(jié)論

    本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體外模擬消化法對(duì)4種茶葉提取液中的抗氧化成分及其活性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,4種茶葉提取液未消化前的活性成分存在差異。酚類(lèi)物質(zhì)含量范圍為2.03(白葉一號(hào))~2.32 mg GAE/mL(福鼎大白),黃酮含量范圍為2.41(紫娟)~3.41 mg GA/mL(福鼎大白),原花青素的含量范圍為0.16(中黃一號(hào))~0.78 mg GA/mL(紫鵑)。4種茶葉提取液的抗氧化活性具有顯著性差異(P<0.05),DPPH自由基清除能力IC50值0.92(中黃一號(hào))~1.46 mg VC/mL(福鼎大白),ABTS自由基清除能力IC50值1.10(白葉一號(hào))~1.17 mg VC/mL(紫娟)。在模擬胃腸消化中,茶湯提取液多酚下降12.59%~14.73%,黃酮提升5.77%~43.26%,原花青素下降10.89%~46.95%。在模擬胃腸消化中,4種茶葉提取液抗氧化活性均成下降趨勢(shì)。DPPH自由基清除能力下降20.81%~41.78%,ABTS自由基清除能力下降23.48%~29.06%。體外模擬消化過(guò)程中多酚變化規(guī)律有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。

    猜你喜歡
    福鼎大白花青素
    大白
    虎頭虎腦的“大白”
    福鼎茗洋村:紅是我們的底色
    紅土地(2019年10期)2019-10-30 03:35:06
    原花青素B2通過(guò)Akt/FoxO4通路拮抗內(nèi)皮細(xì)胞衰老的實(shí)驗(yàn)研究
    花青素對(duì)非小細(xì)胞肺癌組織細(xì)胞GST-π表達(dá)的影響
    中成藥(2017年5期)2017-06-13 13:01:12
    山楸梅漿果中花青素提取方法的優(yōu)化和測(cè)定
    中成藥(2016年8期)2016-05-17 06:08:41
    永順園名茶 福鼎白茶 政和白茶
    大白誕生記
    原花青素對(duì)腦缺血再灌注損傷后腸道功能的保護(hù)作用
    表面工程與再制造(2014年2期)2014-02-27 06:45:36
    国产xxxxx性猛交| 啦啦啦啦在线视频资源| 99久久综合免费| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 91大片在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 十八禁人妻一区二区| 国产精品偷伦视频观看了| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 精品少妇内射三级| 国产片内射在线| 高潮久久久久久久久久久不卡| 女性被躁到高潮视频| 黄色视频在线播放观看不卡| 午夜免费鲁丝| 我要看黄色一级片免费的| 精品人妻1区二区| 日韩电影二区| 国产欧美日韩一区二区三 | 五月开心婷婷网| 最近中文字幕2019免费版| 黄色视频,在线免费观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲久久久国产精品| 久久久欧美国产精品| 免费在线观看完整版高清| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 午夜福利乱码中文字幕| 伊人久久大香线蕉亚洲五| tube8黄色片| 国产主播在线观看一区二区| a级片在线免费高清观看视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲国产精品999| 男女无遮挡免费网站观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 一个人免费看片子| 国产成人系列免费观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲专区中文字幕在线| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲久久久国产精品| 90打野战视频偷拍视频| 成年人免费黄色播放视频| 久久亚洲国产成人精品v| 久久狼人影院| 蜜桃在线观看..| 成在线人永久免费视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 免费高清在线观看日韩| 啦啦啦 在线观看视频| 国产在线视频一区二区| 1024香蕉在线观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| www.999成人在线观看| 另类亚洲欧美激情| 精品国产一区二区三区四区第35| 欧美在线黄色| 国产精品.久久久| 大香蕉久久成人网| 精品一区二区三区四区五区乱码| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 一本久久精品| 亚洲欧洲日产国产| 成人影院久久| 国产免费视频播放在线视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 亚洲成人国产一区在线观看| 日韩视频在线欧美| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产xxxxx性猛交| 亚洲,欧美精品.| avwww免费| 亚洲视频免费观看视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产不卡av网站在线观看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲黑人精品在线| 亚洲天堂av无毛| 国产精品亚洲av一区麻豆| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 99国产精品99久久久久| 中文字幕精品免费在线观看视频| av在线播放精品| 婷婷丁香在线五月| 中文字幕最新亚洲高清| 热re99久久国产66热| 亚洲专区字幕在线| 久热爱精品视频在线9| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲国产成人一精品久久久| 午夜影院在线不卡| 国产又爽黄色视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 高清黄色对白视频在线免费看| 黄片大片在线免费观看| 极品人妻少妇av视频| 一级毛片电影观看| 日日夜夜操网爽| 岛国在线观看网站| 美女国产高潮福利片在线看| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲精品在线美女| 国产在线一区二区三区精| 国产真人三级小视频在线观看| 久久亚洲精品不卡| 久久av网站| 久久国产精品大桥未久av| 国产av精品麻豆| 国产精品国产三级国产专区5o| 成年av动漫网址| 久久久精品免费免费高清| 亚洲国产日韩一区二区| 99国产精品一区二区蜜桃av | 成年av动漫网址| 免费少妇av软件| 99国产精品免费福利视频| 午夜福利,免费看| 午夜福利,免费看| 性色av乱码一区二区三区2| 超色免费av| 久久久久视频综合| 搡老乐熟女国产| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 十八禁高潮呻吟视频| 热99久久久久精品小说推荐| 国产伦人伦偷精品视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 免费av中文字幕在线| 精品少妇久久久久久888优播| 水蜜桃什么品种好| 999久久久精品免费观看国产| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产男女超爽视频在线观看| 99久久国产精品久久久| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产在线观看jvid| 国产精品九九99| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 精品国产一区二区久久| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 啦啦啦在线免费观看视频4| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲全国av大片| 人妻一区二区av| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲天堂av无毛| 多毛熟女@视频| 午夜91福利影院| 亚洲精品国产区一区二| 男女午夜视频在线观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 亚洲av国产av综合av卡| 多毛熟女@视频| 国产成+人综合+亚洲专区| 免费日韩欧美在线观看| 无遮挡黄片免费观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产成人av激情在线播放| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 午夜免费观看性视频| 永久免费av网站大全| 99久久精品国产亚洲精品| 久久久精品94久久精品| 中文字幕高清在线视频| 国产精品久久久久久精品古装| 他把我摸到了高潮在线观看 | 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 日本一区二区免费在线视频| 国产99久久九九免费精品| 97精品久久久久久久久久精品| 精品乱码久久久久久99久播| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲成人手机| 1024香蕉在线观看| 老司机午夜福利在线观看视频 | 男人舔女人的私密视频| 视频在线观看一区二区三区| 咕卡用的链子| 99精品欧美一区二区三区四区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 手机成人av网站| 91精品三级在线观看| 在线av久久热| 老司机靠b影院| 日韩欧美免费精品| 啦啦啦在线免费观看视频4| 在线观看一区二区三区激情| 免费在线观看黄色视频的| 五月天丁香电影| 国产欧美日韩精品亚洲av| 各种免费的搞黄视频| 亚洲精品在线美女| 美女大奶头黄色视频| 日日爽夜夜爽网站| 国产又色又爽无遮挡免| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产亚洲一区二区精品| 欧美精品一区二区大全| 大片免费播放器 马上看| 两个人免费观看高清视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 在线观看免费日韩欧美大片| 在线 av 中文字幕| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 欧美中文综合在线视频| 午夜免费成人在线视频| 欧美日韩成人在线一区二区| av不卡在线播放| 免费在线观看完整版高清| 十分钟在线观看高清视频www| 秋霞在线观看毛片| 亚洲七黄色美女视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 日韩电影二区| 国产97色在线日韩免费| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 久久久久网色| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 丁香六月欧美| 天天影视国产精品| 亚洲av美国av| www日本在线高清视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 丁香六月天网| 大陆偷拍与自拍| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 丝袜美足系列| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲久久久国产精品| 脱女人内裤的视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 天堂8中文在线网| 97人妻天天添夜夜摸| 国产精品国产av在线观看| 久久久久久久久久久久大奶| 精品一区在线观看国产| 久久久精品区二区三区| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 视频在线观看一区二区三区| 欧美国产精品一级二级三级| 日韩一区二区三区影片| 十八禁网站免费在线| 日韩视频在线欧美| 99国产精品一区二区三区| 久久精品国产a三级三级三级| 色94色欧美一区二区| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 国产成人a∨麻豆精品| 国产在线一区二区三区精| 久久女婷五月综合色啪小说| 久9热在线精品视频| 成人三级做爰电影| 成年人午夜在线观看视频| 男人添女人高潮全过程视频| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 欧美人与性动交α欧美软件| 久久狼人影院| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产精品一区二区免费欧美 | 亚洲av美国av| 成人黄色视频免费在线看| 一级毛片女人18水好多| 黄色 视频免费看| 国产精品.久久久| 国产成人欧美在线观看 | 日韩大码丰满熟妇| 精品少妇久久久久久888优播| 中文字幕制服av| 久久久国产精品麻豆| 老司机福利观看| 一本久久精品| 国产不卡av网站在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 又黄又粗又硬又大视频| 精品一区二区三卡| 大香蕉久久成人网| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 又黄又粗又硬又大视频| 精品人妻在线不人妻| 日本av免费视频播放| av天堂久久9| 国产精品一二三区在线看| 十八禁网站免费在线| 三级毛片av免费| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 1024视频免费在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 99热全是精品| 国产一区二区激情短视频 | 丝袜喷水一区| 亚洲七黄色美女视频| 久久久久精品国产欧美久久久 | 99国产精品免费福利视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 在线观看免费高清a一片| 日本欧美视频一区| 午夜福利在线观看吧| 青青草视频在线视频观看| 亚洲精品国产av蜜桃| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲精品国产一区二区精华液| 婷婷成人精品国产| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产精品 欧美亚洲| 成年av动漫网址| 69av精品久久久久久 | 一级毛片精品| 国产又爽黄色视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久 成人 亚洲| 欧美精品高潮呻吟av久久| 久久精品国产亚洲av高清一级| 看免费av毛片| 波多野结衣av一区二区av| 男女免费视频国产| 国产精品一区二区在线不卡| 999久久久国产精品视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久久精品94久久精品| 午夜视频精品福利| 亚洲七黄色美女视频| 黄色怎么调成土黄色| 国产精品久久久av美女十八| 中国美女看黄片| 精品国产乱子伦一区二区三区 | 一区二区av电影网| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 一级,二级,三级黄色视频| 欧美中文综合在线视频| 国产一级毛片在线| 久久国产精品大桥未久av| 国产精品免费大片| 国产精品99久久99久久久不卡| 久久久精品免费免费高清| 精品熟女少妇八av免费久了| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久久久国产欧美日韩av| 老熟妇仑乱视频hdxx| 女性被躁到高潮视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 在线 av 中文字幕| 国产精品免费视频内射| 亚洲国产精品成人久久小说| 欧美黄色片欧美黄色片| 欧美黄色淫秽网站| 一级a爱视频在线免费观看| a级毛片黄视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 日韩人妻精品一区2区三区| 国产1区2区3区精品| avwww免费| 麻豆国产av国片精品| 美女国产高潮福利片在线看| 99国产精品免费福利视频| 国产精品亚洲av一区麻豆| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 99久久人妻综合| 18在线观看网站| 一本综合久久免费| 久久天堂一区二区三区四区| 两人在一起打扑克的视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久久国产精品大桥未久av| 久久ye,这里只有精品| av线在线观看网站| 久久精品成人免费网站| 亚洲av成人一区二区三| 国产又色又爽无遮挡免| 日本wwww免费看| 秋霞在线观看毛片| 大陆偷拍与自拍| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产黄色免费在线视频| 亚洲国产欧美网| 国产欧美日韩一区二区三 | 丰满少妇做爰视频| 亚洲第一青青草原| 极品人妻少妇av视频| 一区二区三区四区激情视频| 婷婷成人精品国产| av网站免费在线观看视频| 大片免费播放器 马上看| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 久久 成人 亚洲| 啦啦啦免费观看视频1| 亚洲人成电影免费在线| 国产精品免费视频内射| 国产精品九九99| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产精品久久久av美女十八| 久久久国产成人免费| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲avbb在线观看| 另类精品久久| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲精品久久午夜乱码| 男人添女人高潮全过程视频| 美女主播在线视频| 9热在线视频观看99| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 日本黄色日本黄色录像| 一级片'在线观看视频| 18禁观看日本| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲欧美一区二区三区久久| 热99久久久久精品小说推荐| 制服诱惑二区| 老司机亚洲免费影院| 99re6热这里在线精品视频| 午夜激情久久久久久久| 丝瓜视频免费看黄片| 久久精品成人免费网站| av不卡在线播放| 视频区欧美日本亚洲| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲成人免费电影在线观看| 日本a在线网址| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲视频免费观看视频| av又黄又爽大尺度在线免费看| 婷婷色av中文字幕| 最近中文字幕2019免费版| 91老司机精品| 在线观看一区二区三区激情| 午夜老司机福利片| 黑人操中国人逼视频| 99久久国产精品久久久| 男女午夜视频在线观看| 亚洲全国av大片| 成年av动漫网址| 久久久久精品人妻al黑| 亚洲性夜色夜夜综合| 在线观看免费午夜福利视频| 老司机午夜福利在线观看视频 | 1024视频免费在线观看| 操美女的视频在线观看| 日韩免费高清中文字幕av| 涩涩av久久男人的天堂| 大型av网站在线播放| xxxhd国产人妻xxx| 五月天丁香电影| 亚洲av美国av| 热99re8久久精品国产| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 99国产精品一区二区蜜桃av | 又紧又爽又黄一区二区| 日本91视频免费播放| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 一本一本久久a久久精品综合妖精| 午夜影院在线不卡| 中国美女看黄片| 不卡av一区二区三区| 天天添夜夜摸| 久久青草综合色| 国产免费av片在线观看野外av| 色婷婷av一区二区三区视频| a 毛片基地| 亚洲中文av在线| 女警被强在线播放| 午夜日韩欧美国产| av视频免费观看在线观看| 亚洲av男天堂| 国产精品一二三区在线看| 国产在线视频一区二区| 一区在线观看完整版| 正在播放国产对白刺激| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 夜夜夜夜夜久久久久| 一区二区三区四区激情视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲精品成人av观看孕妇| 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久精品国产a三级三级三级| 大香蕉久久网| 在线av久久热| 精品福利观看| 久久久久精品人妻al黑| 日本a在线网址| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲七黄色美女视频| 正在播放国产对白刺激| 18禁观看日本| 成年美女黄网站色视频大全免费| 大码成人一级视频| 老司机亚洲免费影院| 青春草视频在线免费观看| 69av精品久久久久久 | 国产又色又爽无遮挡免| 欧美激情极品国产一区二区三区| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 日本精品一区二区三区蜜桃| 日韩中文字幕视频在线看片| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 人妻一区二区av| 麻豆av在线久日| 老司机福利观看| 韩国高清视频一区二区三区| 久久国产精品大桥未久av| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲性夜色夜夜综合| 精品国内亚洲2022精品成人 | 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 99热全是精品| 国产免费福利视频在线观看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产又爽黄色视频| 国产欧美日韩一区二区精品| a级毛片黄视频| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 黄片播放在线免费| 亚洲成人免费av在线播放| 中文字幕人妻熟女乱码| 欧美日韩av久久| 男女之事视频高清在线观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产又色又爽无遮挡免| 大码成人一级视频| 少妇粗大呻吟视频| 久久免费观看电影| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 搡老乐熟女国产| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 岛国在线观看网站| 91国产中文字幕| av在线app专区| 精品久久蜜臀av无| 黄片小视频在线播放| 看免费av毛片| 天天操日日干夜夜撸| 蜜桃国产av成人99| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 性高湖久久久久久久久免费观看| 岛国在线观看网站| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产成人系列免费观看| 亚洲国产中文字幕在线视频| 高清视频免费观看一区二区| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 两性夫妻黄色片| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲国产精品一区三区| 国产av精品麻豆| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 两性夫妻黄色片| 免费少妇av软件| 色视频在线一区二区三区| 男女免费视频国产| 性色av一级| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| www日本在线高清视频| 91国产中文字幕| 日本欧美视频一区| 啦啦啦视频在线资源免费观看| av超薄肉色丝袜交足视频| 午夜精品国产一区二区电影| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 少妇 在线观看| 精品久久久久久电影网| 久久av网站| 老司机影院成人| 亚洲天堂av无毛| 一区福利在线观看| 99国产精品99久久久久| 久久久久久久久久久久大奶| 97精品久久久久久久久久精品| 桃花免费在线播放| 亚洲精品一二三| av不卡在线播放| 国产欧美日韩一区二区精品| 精品一品国产午夜福利视频| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲一码二码三码区别大吗| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| www.精华液| 90打野战视频偷拍视频| 一二三四在线观看免费中文在| 国产区一区二久久| 国产精品二区激情视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看 | 动漫黄色视频在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 久久久精品免费免费高清| 色播在线永久视频| 交换朋友夫妻互换小说| 自线自在国产av|