• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    體外模擬胃腸消化過(guò)程中四種茶葉活性成分及抗氧化性變化規(guī)律

    2020-02-18 08:21:42劉靜敏史靜蘭陳小強(qiáng)
    食品工業(yè)科技 2020年1期
    關(guān)鍵詞:福鼎大白花青素

    劉靜敏,史靜蘭,魯 江,徐 歆,李 倩,陳小強(qiáng)

    (湖北工業(yè)大學(xué)生物工程與食品學(xué)院,湖北武漢 430068)

    紫娟是云南大葉群體茶樹(shù)品種中的一個(gè)變異品種,其芽、葉、莖都為紫色[8]。有研究表明,紫鵑茶的原花青素含量很高,具有極強(qiáng)的抗氧化能力[9-10]。中黃一號(hào)在春季發(fā)芽時(shí)新梢嫩葉葉色有可逆性黃化現(xiàn)象,相較于一般綠茶具有更高含量的氨基酸[11],且由于其形態(tài)特征的特異性、制茶品質(zhì)的優(yōu)異性和較強(qiáng)的適應(yīng)性,產(chǎn)品供不應(yīng)求,經(jīng)濟(jì)效應(yīng)顯著。白葉一號(hào)是安吉白茶的一個(gè)茶樹(shù)品種,其特異性主要表現(xiàn)在春季發(fā)芽時(shí)新梢嫩葉葉色的可逆性白化現(xiàn)象,在白化過(guò)程中新梢的葉綠素含量急劇下降,氨基酸含量明顯上升[12]。福鼎大白茶作為傳統(tǒng)茶葉的一個(gè)代表,同時(shí)也是全國(guó)茶葉區(qū)試標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照種,種植面積最廣[13]。

    Green等[14]對(duì)綠茶進(jìn)行體外模擬胃腸消化,采用高效液相色譜法對(duì)消化前后的兒茶素進(jìn)行評(píng)估,結(jié)果發(fā)現(xiàn),飲茶習(xí)慣可能影響兒茶素的消化,并可能導(dǎo)致不同的生理特征。Tenore等[15]將同一茶樹(shù)品種采用不同加工方式生產(chǎn)的白茶、綠茶與紅茶,通過(guò)模擬胃腸消化、腸道滲透和血漿蛋白相互作用對(duì)比三種茶葉中兒茶素的變化發(fā)現(xiàn),白茶中兒茶素在口服條件下具有良好的穩(wěn)定性,具有最好的腸道生物可接受性和生物利用度,并可能在調(diào)節(jié)血糖和血漿膽固醇方面發(fā)揮重要作用。目前對(duì)茶葉活性成分多酚類(lèi)物質(zhì)在消化過(guò)程中的含量及抗氧化性變化規(guī)律的研究主要集中在兒茶素,而尚未發(fā)現(xiàn)對(duì)茶葉中黃酮、原花青素類(lèi)物質(zhì)的相關(guān)報(bào)道。

    為總結(jié)茶葉中多酚類(lèi)物質(zhì)及其抗氧化活性變化規(guī)律,本文采用紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)和福鼎大白作為研究對(duì)象,用體外模擬胃腸消化的方法,測(cè)定四種茶葉的多酚、黃酮、原花青素的含量和總結(jié)變化規(guī)律,以及分析消化過(guò)程對(duì)抗氧化活性的影響。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)、福鼎大白 江蘇省茶葉研究所玉山基地提供(江蘇宜興),于2018年4月份手工采摘,采摘標(biāo)準(zhǔn)為一芽二葉,并通過(guò)在120 ℃下烘干半小時(shí)處理獲得成品,粉碎(過(guò)60 目)于4 ℃保存;香草醛、濃鹽酸、乙醇 百靈威科技有限公司;兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品 南京狄爾格醫(yī)藥科技有限公司;氯化鈉、甲醇、膽鹽3號(hào)、碳酸鈉、Folin-酚試劑、硝酸鋁、乙酸鉀 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;胃蛋白酶(456 U/mg)、胰蛋白酶(100~500 U/mg)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、ABTS 上海阿拉丁生化科技股份有限公司;所有分離用有機(jī)溶劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

    T6型新世紀(jì)紫外光分光光度計(jì) 尤尼科儀器有限公司;DK-S22型恒溫水槽 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;RJ-TLT-16G離心機(jī) 無(wú)錫市瑞江分析儀器有限公司;GZX-9140 MBE電熱鼓風(fēng)干燥箱 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司;ME104E/02電子天平 梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;SHB-Ш循環(huán)水式多用真空泵 鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司;Multiskan FC酶標(biāo)儀 賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司;KQ-300E超聲波清洗機(jī) 上海之信儀器有限公司;JYL-CO2OE九陽(yáng)料理機(jī) 九陽(yáng)有限公司。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 茶湯提取 根據(jù)傳統(tǒng)飲茶習(xí)慣,分別稱取4種茶粉(紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)和福鼎大白)10 g,置于500 mL 90 ℃水中,持續(xù)攪拌5 min,然后將茶湯過(guò)濾并冷卻,各茶湯定容至500 mL。

    1.2.2 模擬體外消化 為了研究茶湯中活性成分及抗氧化變化規(guī)律,將1.2.1方法提取得到的茶湯溶液300 mL置于500 mL的錐形瓶中,用鹽酸調(diào)節(jié)pH至2.0,加入0.6 g NaCl,然后加入0.378 g胃蛋白酶,用保鮮膜封口后,再將錐形瓶置于37 ℃水浴中振蕩2 h。模擬胃部消化結(jié)束后,用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)消化液pH至7.0,然后加入20 mg的胰蛋白酶和125 mg的膽鹽,然后在相同水浴條件下反應(yīng)2 h。胃腸消化期間每隔30 min取一次樣,將取出的各消化液于90 ℃條件下加熱1 min,使消化酶失活,6000 r/min,離心6.5 min后,取上清液在4 ℃條件下儲(chǔ)存?zhèn)溆肹6,16]。

    1.2.3 總多酚含量的測(cè)定 Folin-酚試劑比色法[17]測(cè)定總多酚,以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品。分別移取四種茶葉樣品各階段消化液1 mL于試管中,在每個(gè)試管中分別加入5 mL 10%的Folin-酚試劑,混合后在3~8 min內(nèi)再加入4 mL 7.5%的Na2CO3溶液。搖勻后在室溫條件下避光放置1 h后,于765 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以沒(méi)食子酸濃度為橫坐標(biāo),沒(méi)食子酸工作液的吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性方程為y=0.0097x+0.0043,R2=0.9999。

    鰻魚(yú)帶肉骨→預(yù)處理→凈鰻魚(yú)帶肉骨→烘干→干鰻魚(yú)帶肉骨→粉碎、均質(zhì)→鰻魚(yú)肉骨粉→水提→鰻魚(yú)肉骨粉料液→酶解→酶解液→均質(zhì)→噴霧干燥→成品。

    1.2.4 總黃酮含量的測(cè)定 根據(jù)Zielinski等[18]Al(NO3)3-CH3COOK顯色法測(cè)定總黃酮,分別移取四種茶葉樣品各階段消化液1 mL于試管中,先加入1 mL 10%的硝酸鋁溶液,再加1 mL 0.98%的醋酸鉀溶液。搖勻后在室溫條件下避光放置1 h,于415 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以兒茶素濃度為橫坐標(biāo),兒茶素工作液的吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性方程為y=0.527x+0.0082,R2=1。

    1.2.5 原花青素含量的測(cè)定 香草醛-甲醇-鹽酸顯色法測(cè)定原花青素[19],分別移取四種茶葉樣品各階段消化液0.5 mL于試管中,先加入2.5 mL 1%的香草醛-甲醇溶液,再加入2.5 mL 30%的鹽酸溶液,用上述方法蒸餾水代替樣品制備空白試樣,搖勻后在室溫條件下避光放置1 h,于500 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以兒茶素濃度為橫坐標(biāo),兒茶素工作液的吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性方程為y=1.0284x+0.0073,R2=1。

    1.2.6 ABTS自由基清除能力的測(cè)定 根據(jù)Ksouri等[20]、Chang等[21]的方法進(jìn)行測(cè)定,稍作改動(dòng)。取4 mL 7 mmol/L ABTS原液,加入88 μL 140 mmol/L過(guò)硫酸鉀溶液,混合均勻后暗處?kù)o置12~16 h,0 ℃保存?zhèn)溆?。將ABTS溶液用無(wú)水乙醇稀釋,使其在734 nm處吸光值為0.70±0.02,得到ABTS工作液。準(zhǔn)確移取3 μL不同質(zhì)量濃度(100~400 μg/mL)的樣品液與237 μL ABTS工作液混合,于室溫下避光反應(yīng)30 min,測(cè)定反應(yīng)液在734 nm處的吸光值,以無(wú)水乙醇作為空白,平行測(cè)定3次,取其平均值,并用0.5 mg VC/mL溶液作對(duì)照。

    1.2.7 DPPH自由基清除能力的測(cè)定 測(cè)定方法參考Gorjanovic等[22]的方法,稍作改動(dòng)。將10 μL不同質(zhì)量濃度(100~400 μg/mL)的樣品液與100 μL 0.1 mmol/L甲醇-DPPH自由基充分混勻后,置于避光處反應(yīng)30 min,在517 nm處測(cè)定吸光值,以甲醇作為空白,平行測(cè)定3次,取其平均值,并用0.5 mg VC/mL溶液作對(duì)照。

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    以上實(shí)驗(yàn)均平行進(jìn)行3次,得到的數(shù)據(jù)經(jīng)OriginPro-9軟件處理,采用Dunnett’st檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性差異分析,以P<0.05為差異顯著。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 活性成分含量分析

    4種茶葉提取液中多酚、黃酮及原花青素含量見(jiàn)表1。消化前茶葉提取液中酚類(lèi)物質(zhì)含量范圍為2.03(白葉一號(hào))~2.32 mg GAE/mL(福鼎大白)。總黃酮含量范圍為2.41(紫娟)~3.41 mg GA/mL(福鼎大白),其中多酚及總黃酮含量福鼎大白茶最高。原花青素含量范圍為0.16(中黃一號(hào))~0.78 mg GA/mL(紫鵑),其中紫娟茶葉提取液中原花青素含量顯著高于其他茶葉提取液含量(P<0.05)。金孝芳等[23]研究認(rèn)為中黃一號(hào)原花青素含量略低于其他茶葉品種,與本次實(shí)驗(yàn)趨勢(shì)相似。呂海鵬等[24]推測(cè)紫娟茶中原花青素含量豐富,也與本研究變化一致。然而紫娟多酚含量較其他文獻(xiàn)所述含量偏低可能是由于地區(qū)差異所導(dǎo)致[25]。

    表1 4種茶葉提取液抗氧化活性成分含量Table 1 Antioxidant active ingredients content in 4 kinds of tea soup

    注:同列小寫(xiě)字母不同表示差異顯著(P<0.05)。

    2.2 模擬體外消化過(guò)程中活性物質(zhì)含量及抗氧化能力變化分析

    2.2.1 體外模擬消化過(guò)程中多酚變化規(guī)律 4種茶葉提取液在模擬胃、腸消化過(guò)程中多酚變化如圖1所示。經(jīng)過(guò)胃消化2 h后,福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)多酚含量分別下降7.27%、6.36%、16.95%、16.76%。再經(jīng)過(guò)腸消化2 h后,福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)多酚含量較原始茶葉提取液分別下降12.59%、13.44%、14.73%、13.30%。

    圖1 4種茶葉提取液在模擬胃、 腸消化過(guò)程中多酚含量變化Fig.1 Changes of polyphenols in four kinds of tea soup during simulated gastric and intestinal digestion

    通過(guò)對(duì)胃消化階段和腸消化階段的比較,發(fā)現(xiàn)在胃消化階段(0~2 h),福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)提取液中多酚含量下降趨勢(shì)較為明顯,原因可能是多酚類(lèi)物質(zhì)在胃部消化過(guò)程中發(fā)生降解,導(dǎo)致多酚含量下降。劉翼翔等[26]采用體外消化模型模擬人體胃腸對(duì)藍(lán)莓多酚的消化,發(fā)現(xiàn)胃消化后藍(lán)莓多酚的總酚含量與總花色苷含量都沒(méi)有發(fā)生明顯變化,這與本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果有所不同,需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。而在腸消化階段(2~4 h),福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)多酚含量存在一定的回升趨勢(shì)。原因可能是茶湯中多酚大分子受腸道環(huán)境影響分解為多酚小分子,其含量下降,但整體酚羥基含量上升,后當(dāng)小分子被完全釋放,受腸道環(huán)境影響,多酚含量再次下降。劉翼翔等[26]通過(guò)對(duì)藍(lán)莓多酚在胃腸消化過(guò)程中總酚及總花色苷含量變化發(fā)現(xiàn),經(jīng)小腸消化后,總酚含量發(fā)生了明顯降低,說(shuō)明小腸pH7.4的弱堿性環(huán)境能夠造成藍(lán)莓多酚分解,與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致,但多酚含量降低是否與胰蛋白酶發(fā)生了結(jié)合,隨不溶解的蛋白酶一起丟失,還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

    2.2.2 體外模擬消化過(guò)程中黃酮變化規(guī)律 4 種茶葉提取液在模擬胃、腸消化過(guò)程中黃酮變化如圖2所示,經(jīng)過(guò)胃消化2 h后,福鼎大白、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)黃酮含量分別下降16.52%、15.40%、19.88%,紫娟上升12.02%。再經(jīng)過(guò)腸消化2 h后,福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)黃酮含量分別上升43.26%、30.30%、9.29%、5.77%。

    圖2 4種茶葉提取液在模擬胃、 腸消化過(guò)程中黃酮含量變化趨勢(shì)Fig.2 Changes of flavonoids content in four kinds of tea soup during simulated gastric and intestinal digestion

    在胃消化階段(0~2 h),福鼎大白、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)黃酮含量下降趨勢(shì)較為明顯,原因可能是黃酮化合物在胃消化過(guò)程中穩(wěn)定性較差。李俶等[27]人選取七種不同種類(lèi)的酚類(lèi)化合物,研究模擬體外胃腸道消化對(duì)其穩(wěn)定性的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),類(lèi)黃酮化合物在胃消化過(guò)程中穩(wěn)定性較差,兒茶素下降17%、表兒茶素下降6%,這與本實(shí)驗(yàn)研究相符。而在紫娟提取液中某些黃酮大分子受環(huán)境影響分解為黃酮小分子,黃酮含量存在一定的上升,。在腸消化階段(2~4 h),福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)黃酮含量明顯提升,推測(cè)可能是在堿性環(huán)境下茶葉提取液中某些黃酮大分子受環(huán)境影響分解為黃酮小分子致使吸光值提高。唐琦等[28]通過(guò)體外模擬消化測(cè)定紅小豆萌發(fā)前后總多酚、總黃酮含量的變化規(guī)律,發(fā)現(xiàn)堿性環(huán)境條件下,總黃酮含量增加,原因可能是酚酸類(lèi)、花青素類(lèi)在腸液偏堿性條件下發(fā)生降解,總多酚結(jié)構(gòu)變化向更穩(wěn)定的黃酮類(lèi)轉(zhuǎn)化,從而導(dǎo)致總黃酮含量增加。這與本文所述相同。

    2.2.3 體外模擬消化過(guò)程中原花青素變化規(guī)律 4種茶葉提取液在模擬胃、腸消化過(guò)程中原花青素變化如圖3所示,經(jīng)過(guò)胃消化2 h后,福鼎大白、紫娟、白葉一號(hào)原花青素含量分別下降3.09%、2.24%、17.78%。再經(jīng)過(guò)腸消化2 h后,福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)原花青素含量分別下降22.87%、46.95%、10.89%、23.70%。

    圖3 4種茶葉提取液在模擬胃、 腸消化過(guò)程中原花青素含量變化趨勢(shì)Fig.3 Changes of proanthocyanidins content in four kinds of tea soup during simulated gastric and intestinal digestion

    在胃消化階段(0~2 h),福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)原花青素含量下降趨勢(shì)不明顯,這與原花青素在酸性環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定有關(guān)。在腸消化階段(2~2.5 h),福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)原花青素含量明顯下降,這與其在堿性環(huán)境下不穩(wěn)定有關(guān)。在腸消化階段(2.5~4 h),福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)原花青素含量下降不明顯。李華等[29]用不同的方法檢測(cè)葡萄籽超微粉經(jīng)體外消化后的抗氧化能力,通過(guò)對(duì)總酚和原花青素含量的測(cè)定發(fā)現(xiàn)原花青素在人工胃液中比較穩(wěn)定,在人工腸液中呈緩慢分解趨勢(shì),這與本文結(jié)論一致。

    2.2.4 體外模擬消化對(duì)抗氧化活性的影響 4種茶葉提取液在模擬體外消化過(guò)程的DPPH自由基清除能力變化如圖4所示,DPPH自由基清除能力IC50值為0.92~1.46 mg VC/mL;其中,福鼎大白自由基清除能力最高。陳金娥等[30]用DPPH法研究紅茶、綠茶、烏龍茶等八種茶葉活性成分的抗氧化性,得出茶葉中多酚含量順序與其對(duì)自由基的清除能力大小順序一致。福鼎大白茶多酚及總黃酮含量最高,與其DPPH自由基清除能力最高結(jié)果相符;在消化后,福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)DPPH自由基清除能力分別下降33.91%、41.78%、20.81%、31.55%,呈明顯下降趨勢(shì)。

    圖4 4種茶葉提取液DPPH自由基清除能力消化前后比較Fig.4 DPPH free radical scavenging ability comparison of 4 kinds of tea soup before and after digestion

    4種茶葉提取液在模擬體外消化過(guò)程的ABTS自由基清除能力變化如圖5所示,ABTS自由基清除能力IC50值在1.10~1.17 mg VC/mL之間,其紫娟ABTS+·抗氧化活性最高,其次為福鼎大白、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)。戴妙妙等[31]通過(guò)比較紫鵑茶中花青素提取物和兩種常用合成抗氧化劑BHA、BHT的抗氧化性及清除自由基能力,發(fā)現(xiàn)紫娟茶中花青素具有較強(qiáng)的抗氧化性活性及較強(qiáng)的清除自由基的能力。紫鵑茶原花青素含量最高,ABTS自由基清除能力最好,與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。在消化后,福鼎大白、紫娟、中黃一號(hào)、白葉一號(hào)ABTS自由基清除能力下降23.48%、29.06%、23.68%、23.64%,呈明顯下降趨勢(shì)。

    圖5 4茶葉提取液ABTS自由基清除能力消化前后比較Fig.5 ABTS free radical scavenging ability comparison of 4 kinds of tea soup before and after digestion

    在體外模擬消化過(guò)程中,4種茶葉提取液的抗氧化活性(DPPH自由基清除能力和ABTS自由基清除能力)呈逐漸下降的趨勢(shì),這與尹世磊等[32]的研究結(jié)果相似。其中,DPPH自由基清除能力和ABTS自由基清除能力的下降率以紫娟最大,分別達(dá)到了41.78%、29.06%。4 種茶葉提取液在經(jīng)過(guò)胃、腸消化后抗氧化值明顯下降,不同方法測(cè)定抗氧化值的變化趨勢(shì)均與多酚和黃酮含量的變化趨勢(shì)相近。

    3 結(jié)論

    本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體外模擬消化法對(duì)4種茶葉提取液中的抗氧化成分及其活性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,4種茶葉提取液未消化前的活性成分存在差異。酚類(lèi)物質(zhì)含量范圍為2.03(白葉一號(hào))~2.32 mg GAE/mL(福鼎大白),黃酮含量范圍為2.41(紫娟)~3.41 mg GA/mL(福鼎大白),原花青素的含量范圍為0.16(中黃一號(hào))~0.78 mg GA/mL(紫鵑)。4種茶葉提取液的抗氧化活性具有顯著性差異(P<0.05),DPPH自由基清除能力IC50值0.92(中黃一號(hào))~1.46 mg VC/mL(福鼎大白),ABTS自由基清除能力IC50值1.10(白葉一號(hào))~1.17 mg VC/mL(紫娟)。在模擬胃腸消化中,茶湯提取液多酚下降12.59%~14.73%,黃酮提升5.77%~43.26%,原花青素下降10.89%~46.95%。在模擬胃腸消化中,4種茶葉提取液抗氧化活性均成下降趨勢(shì)。DPPH自由基清除能力下降20.81%~41.78%,ABTS自由基清除能力下降23.48%~29.06%。體外模擬消化過(guò)程中多酚變化規(guī)律有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。

    猜你喜歡
    福鼎大白花青素
    大白
    虎頭虎腦的“大白”
    福鼎茗洋村:紅是我們的底色
    紅土地(2019年10期)2019-10-30 03:35:06
    原花青素B2通過(guò)Akt/FoxO4通路拮抗內(nèi)皮細(xì)胞衰老的實(shí)驗(yàn)研究
    花青素對(duì)非小細(xì)胞肺癌組織細(xì)胞GST-π表達(dá)的影響
    中成藥(2017年5期)2017-06-13 13:01:12
    山楸梅漿果中花青素提取方法的優(yōu)化和測(cè)定
    中成藥(2016年8期)2016-05-17 06:08:41
    永順園名茶 福鼎白茶 政和白茶
    大白誕生記
    原花青素對(duì)腦缺血再灌注損傷后腸道功能的保護(hù)作用
    表面工程與再制造(2014年2期)2014-02-27 06:45:36
    国产精品一区二区三区四区久久| 91在线观看av| av黄色大香蕉| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 三级毛片av免费| 国模一区二区三区四区视频| 最近最新免费中文字幕在线| 欧美日韩乱码在线| 两个人视频免费观看高清| 欧美一区二区亚洲| 观看美女的网站| 久久亚洲真实| 高清毛片免费观看视频网站| 少妇人妻精品综合一区二区 | 免费高清视频大片| 91麻豆精品激情在线观看国产| 亚洲精品成人久久久久久| 久久久久久人人人人人| 麻豆久久精品国产亚洲av| 1000部很黄的大片| 中文字幕av成人在线电影| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 精品不卡国产一区二区三区| 久久精品91蜜桃| 麻豆成人av在线观看| 网址你懂的国产日韩在线| 在线观看66精品国产| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 日日夜夜操网爽| 免费无遮挡裸体视频| 老汉色∧v一级毛片| 日本一二三区视频观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 日日干狠狠操夜夜爽| 在线看三级毛片| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 神马国产精品三级电影在线观看| 欧美一区二区亚洲| 午夜福利成人在线免费观看| 国产精品99久久99久久久不卡| 欧美av亚洲av综合av国产av| 丝袜美腿在线中文| 亚洲第一电影网av| 日韩中文字幕欧美一区二区| 丰满人妻一区二区三区视频av | 久久久久精品国产欧美久久久| 国产精品国产高清国产av| 最好的美女福利视频网| 黄色视频,在线免费观看| 国产成人aa在线观看| 99热精品在线国产| 成人国产一区最新在线观看| 欧美性感艳星| 无人区码免费观看不卡| 看黄色毛片网站| 午夜福利高清视频| 亚洲av一区综合| 国产成人欧美在线观看| 色老头精品视频在线观看| 美女大奶头视频| 精品免费久久久久久久清纯| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 18禁美女被吸乳视频| 又爽又黄无遮挡网站| 国产午夜精品论理片| 99国产极品粉嫩在线观看| 色综合站精品国产| 亚洲一区高清亚洲精品| 成年版毛片免费区| 丰满人妻一区二区三区视频av | 黄色日韩在线| 亚洲av免费在线观看| 高清毛片免费观看视频网站| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产99白浆流出| www.999成人在线观看| 成年人黄色毛片网站| 亚洲在线自拍视频| 午夜免费成人在线视频| 一夜夜www| 精品日产1卡2卡| 成人国产综合亚洲| 91麻豆精品激情在线观看国产| 男插女下体视频免费在线播放| 日本一本二区三区精品| 97碰自拍视频| 搡老妇女老女人老熟妇| av黄色大香蕉| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 丰满乱子伦码专区| 老司机午夜福利在线观看视频| 又黄又爽又免费观看的视频| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 国产乱人伦免费视频| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 免费无遮挡裸体视频| 国产免费av片在线观看野外av| 一边摸一边抽搐一进一小说| 成人欧美大片| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲七黄色美女视频| 欧美极品一区二区三区四区| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲精品色激情综合| 美女被艹到高潮喷水动态| 一个人免费在线观看电影| 一夜夜www| 亚洲久久久久久中文字幕| 麻豆成人av在线观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 三级毛片av免费| 欧美日韩国产亚洲二区| 99久久精品热视频| 欧美日韩一级在线毛片| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 国产极品精品免费视频能看的| 看免费av毛片| 丁香六月欧美| 亚洲色图av天堂| 日本黄大片高清| www.色视频.com| 两个人视频免费观看高清| 久久久色成人| 精品午夜福利视频在线观看一区| 最近最新中文字幕大全电影3| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 久久6这里有精品| 国产av一区在线观看免费| 日本黄色视频三级网站网址| 免费看美女性在线毛片视频| 99久久成人亚洲精品观看| 日本黄色视频三级网站网址| 舔av片在线| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲av二区三区四区| 99精品欧美一区二区三区四区| 可以在线观看的亚洲视频| 欧美日本视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产真实乱freesex| 免费av观看视频| 美女大奶头视频| 日韩欧美精品免费久久 | 日本免费一区二区三区高清不卡| 欧美zozozo另类| 国产高清videossex| 色哟哟哟哟哟哟| 欧美性猛交黑人性爽| 欧美一级毛片孕妇| 国产精品久久久久久久电影 | 日本在线视频免费播放| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产精品国产高清国产av| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 丰满乱子伦码专区| 一本久久中文字幕| 国内精品久久久久久久电影| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲无线观看免费| 国产免费一级a男人的天堂| 啦啦啦免费观看视频1| 有码 亚洲区| 午夜免费激情av| 狂野欧美激情性xxxx| 窝窝影院91人妻| 亚洲中文字幕日韩| 午夜a级毛片| 毛片女人毛片| 日本熟妇午夜| 变态另类丝袜制服| 色视频www国产| 日本成人三级电影网站| 国产精品精品国产色婷婷| 日本三级黄在线观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 亚洲av电影在线进入| 校园春色视频在线观看| 国产三级中文精品| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 他把我摸到了高潮在线观看| 少妇的丰满在线观看| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 欧美激情在线99| 日本一本二区三区精品| 少妇丰满av| 久久九九热精品免费| 搡老熟女国产l中国老女人| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 在线观看免费午夜福利视频| av福利片在线观看| 日本免费a在线| 日韩欧美国产在线观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 免费观看的影片在线观看| 久久精品国产综合久久久| 国产精品av视频在线免费观看| 国产真实乱freesex| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 天堂动漫精品| svipshipincom国产片| 精品人妻偷拍中文字幕| 男插女下体视频免费在线播放| 韩国av一区二区三区四区| 久久精品国产清高在天天线| 美女高潮的动态| 国产精品亚洲一级av第二区| 午夜亚洲福利在线播放| 看黄色毛片网站| 免费av毛片视频| 99热6这里只有精品| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 午夜福利高清视频| 男插女下体视频免费在线播放| 国产午夜精品论理片| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产久久久一区二区三区| 男人舔奶头视频| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲内射少妇av| 精品久久久久久成人av| 2021天堂中文幕一二区在线观| 禁无遮挡网站| av天堂中文字幕网| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 9191精品国产免费久久| 九色成人免费人妻av| 亚洲av电影不卡..在线观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 中文资源天堂在线| 禁无遮挡网站| av黄色大香蕉| netflix在线观看网站| 12—13女人毛片做爰片一| 国产国拍精品亚洲av在线观看 | АⅤ资源中文在线天堂| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲精品456在线播放app | а√天堂www在线а√下载| 国产精品亚洲av一区麻豆| 韩国av一区二区三区四区| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 久久久久国内视频| 亚洲av电影不卡..在线观看| 欧美日韩国产亚洲二区| 男女午夜视频在线观看| 香蕉丝袜av| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 内射极品少妇av片p| 人人妻人人澡欧美一区二区| 制服丝袜大香蕉在线| 91麻豆av在线| 亚洲精品在线观看二区| 国产欧美日韩一区二区精品| 全区人妻精品视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 看黄色毛片网站| 岛国视频午夜一区免费看| 欧美极品一区二区三区四区| 91av网一区二区| 欧美日韩一级在线毛片| 国产老妇女一区| 日本a在线网址| 午夜视频国产福利| 久久香蕉国产精品| 欧美最黄视频在线播放免费| 五月玫瑰六月丁香| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 99久久精品热视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 欧美bdsm另类| 国产中年淑女户外野战色| 精品国产亚洲在线| 黄片大片在线免费观看| 在线a可以看的网站| 男女之事视频高清在线观看| 亚洲午夜理论影院| 亚洲国产欧美人成| 美女被艹到高潮喷水动态| 色吧在线观看| 欧美大码av| 亚洲精品成人久久久久久| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 不卡一级毛片| 久久午夜亚洲精品久久| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲精华国产精华精| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 偷拍熟女少妇极品色| 一级毛片高清免费大全| 国产真实伦视频高清在线观看 | 69人妻影院| 亚洲人成伊人成综合网2020| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产三级中文精品| 欧美性猛交黑人性爽| 欧美黄色淫秽网站| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 草草在线视频免费看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 久久人妻av系列| 1000部很黄的大片| 久久久国产精品麻豆| 国产成人欧美在线观看| 手机成人av网站| 18禁国产床啪视频网站| 午夜激情福利司机影院| 亚洲 国产 在线| 亚洲av免费高清在线观看| 国产毛片a区久久久久| 综合色av麻豆| 一级毛片高清免费大全| 久久久久久大精品| 午夜日韩欧美国产| 午夜福利免费观看在线| 亚洲国产精品久久男人天堂| 午夜日韩欧美国产| 99久久综合精品五月天人人| a级一级毛片免费在线观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲精品影视一区二区三区av| 亚洲人成网站高清观看| 日本黄大片高清| a级毛片a级免费在线| 久久伊人香网站| 亚洲 国产 在线| 一区二区三区免费毛片| 韩国av一区二区三区四区| 色综合亚洲欧美另类图片| 很黄的视频免费| 老司机深夜福利视频在线观看| 少妇丰满av| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产精品 欧美亚洲| 欧美最新免费一区二区三区 | 国产精品亚洲一级av第二区| 深夜精品福利| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美最新免费一区二区三区 | 美女大奶头视频| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 啦啦啦免费观看视频1| 毛片女人毛片| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 午夜a级毛片| 久9热在线精品视频| 伊人久久精品亚洲午夜| 欧美黑人欧美精品刺激| 又爽又黄无遮挡网站| av中文乱码字幕在线| 老司机午夜十八禁免费视频| av天堂在线播放| 亚洲人成伊人成综合网2020| 中文亚洲av片在线观看爽| 日本免费a在线| 午夜福利成人在线免费观看| 不卡一级毛片| 精品一区二区三区视频在线 | 欧美色欧美亚洲另类二区| av天堂在线播放| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 午夜免费成人在线视频| 狂野欧美激情性xxxx| 国产真实伦视频高清在线观看 | 国产中年淑女户外野战色| 日韩精品青青久久久久久| 女警被强在线播放| 此物有八面人人有两片| 国产麻豆成人av免费视频| 成人国产一区最新在线观看| 色视频www国产| 亚洲成人精品中文字幕电影| 色av中文字幕| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| svipshipincom国产片| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲激情在线av| 国产色爽女视频免费观看| 精品久久久久久久毛片微露脸| 午夜日韩欧美国产| 制服丝袜大香蕉在线| 在线观看舔阴道视频| or卡值多少钱| 欧美乱色亚洲激情| 91久久精品国产一区二区成人 | 午夜亚洲福利在线播放| 白带黄色成豆腐渣| 桃红色精品国产亚洲av| 日韩欧美 国产精品| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产精品影院久久| 国产v大片淫在线免费观看| 啦啦啦免费观看视频1| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 波多野结衣高清无吗| 在线观看免费午夜福利视频| 在线天堂最新版资源| 国产精品精品国产色婷婷| 婷婷丁香在线五月| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲avbb在线观看| 成年女人看的毛片在线观看| 国产av不卡久久| 校园春色视频在线观看| ponron亚洲| 天美传媒精品一区二区| 国产精品野战在线观看| 99久久精品热视频| 欧美3d第一页| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 欧美大码av| 一二三四社区在线视频社区8| 免费在线观看日本一区| www.色视频.com| 久久久久精品国产欧美久久久| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 精品午夜福利视频在线观看一区| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久性视频一级片| 亚洲欧美日韩东京热| 少妇的逼好多水| 亚洲一区高清亚洲精品| 精品电影一区二区在线| 欧美日韩一级在线毛片| 人人妻人人澡欧美一区二区| 国产精品久久电影中文字幕| 在线免费观看的www视频| 日本一本二区三区精品| 综合色av麻豆| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 夜夜爽天天搞| 成年女人永久免费观看视频| 黄色成人免费大全| 亚洲av熟女| 免费av不卡在线播放| a在线观看视频网站| 色哟哟哟哟哟哟| 三级毛片av免费| 精品久久久久久,| 国产单亲对白刺激| 午夜福利欧美成人| 在线播放国产精品三级| 亚洲18禁久久av| 麻豆一二三区av精品| 久久久久久久午夜电影| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 精品久久久久久久末码| 精品国产亚洲在线| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产真实伦视频高清在线观看 | 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 悠悠久久av| 国产亚洲欧美98| 亚洲美女视频黄频| 国产激情欧美一区二区| 偷拍熟女少妇极品色| 国语自产精品视频在线第100页| 天天添夜夜摸| 精品久久久久久久久久久久久| www.999成人在线观看| 在线播放无遮挡| 久久久久久久精品吃奶| 国产99白浆流出| 亚洲欧美激情综合另类| 在线观看一区二区三区| 免费观看精品视频网站| 性色av乱码一区二区三区2| 婷婷精品国产亚洲av| 99在线视频只有这里精品首页| 国产三级在线视频| www.熟女人妻精品国产| 变态另类丝袜制服| 免费看光身美女| 日韩av在线大香蕉| 我的老师免费观看完整版| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产真人三级小视频在线观看| 天堂影院成人在线观看| or卡值多少钱| 亚洲专区国产一区二区| 热99re8久久精品国产| 国产成人系列免费观看| 观看免费一级毛片| 国产精品精品国产色婷婷| 免费av不卡在线播放| 欧美日韩一级在线毛片| 99国产极品粉嫩在线观看| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产精品亚洲美女久久久| 日韩欧美精品免费久久 | 有码 亚洲区| 免费看光身美女| 久久九九热精品免费| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产av一区在线观看免费| 国产亚洲欧美在线一区二区| 手机成人av网站| 99精品久久久久人妻精品| 精品久久久久久,| 最近最新中文字幕大全电影3| 久久久精品欧美日韩精品| 黄色成人免费大全| 国产中年淑女户外野战色| 国产精品av视频在线免费观看| 窝窝影院91人妻| 亚洲av熟女| 两个人的视频大全免费| 成熟少妇高潮喷水视频| www.999成人在线观看| 内射极品少妇av片p| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲美女黄片视频| 国产精品一区二区免费欧美| 天天添夜夜摸| 在线天堂最新版资源| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲,欧美精品.| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 俺也久久电影网| 免费看a级黄色片| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 国产综合懂色| www.999成人在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 男人和女人高潮做爰伦理| 精品久久久久久,| 国产高清三级在线| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 女同久久另类99精品国产91| 一区二区三区免费毛片| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| av专区在线播放| 国产精品av视频在线免费观看| 中文字幕高清在线视频| 嫩草影院入口| av天堂在线播放| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 日本免费a在线| 国产视频一区二区在线看| 国产午夜福利久久久久久| 一夜夜www| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产日本99.免费观看| 丰满的人妻完整版| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产精华一区二区三区| 在线视频色国产色| 亚洲在线自拍视频| 99国产综合亚洲精品| 欧美日韩综合久久久久久 | 国产三级黄色录像| 波野结衣二区三区在线 | 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 特大巨黑吊av在线直播| 成年女人永久免费观看视频| 亚洲av二区三区四区| 国产日本99.免费观看| 99热只有精品国产| 亚洲最大成人中文| bbb黄色大片| 午夜免费观看网址| 国产亚洲精品一区二区www| 久久久久九九精品影院| 亚洲精品日韩av片在线观看 | 国产私拍福利视频在线观看| 又黄又粗又硬又大视频| 国产真实乱freesex| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 欧美日本视频| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 亚洲成人中文字幕在线播放| av专区在线播放| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产野战对白在线观看| 中文字幕久久专区| 日本 欧美在线| 午夜福利在线在线| 制服人妻中文乱码| 国产精品三级大全| 国产视频一区二区在线看| 久久草成人影院| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 欧美区成人在线视频| 老司机午夜福利在线观看视频| 久久久久久国产a免费观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 成人鲁丝片一二三区免费| 一二三四社区在线视频社区8| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲人成电影免费在线| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产伦一二天堂av在线观看| 在线观看日韩欧美| 国产91精品成人一区二区三区| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 国产欧美日韩精品一区二区| 在线观看午夜福利视频| 亚洲成人中文字幕在线播放| 99久久精品一区二区三区| 高清毛片免费观看视频网站| 国产不卡一卡二| 欧美最黄视频在线播放免费| 最后的刺客免费高清国语|