食品中氟喹諾酮類藥物殘留的快速檢測研究進(jìn)展

孫敏君，高 雪，徐陽鑫，劉秀英，勵建榮

（渤海大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，遼寧省食品安全重點實驗室，生鮮農(nóng)產(chǎn)品貯藏加工及安全控制技術(shù)國家地方聯(lián)合工程研究中心，遼寧 錦州 121013）

人類在日常生活和生產(chǎn)中都需要消耗大量的動物源性食品[1]，畜牧業(yè)和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)是動物源性食品的主要供應(yīng)來源[2]。為了解決畜牧業(yè)和水產(chǎn)養(yǎng)殖中動物疾病問題，抗生素類獸藥被廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中細(xì)菌性疾病的預(yù)防和醫(yī)治[3-5]。目前，我國允許在動物養(yǎng)殖中使用的抗生素類獸藥主要有氨基糖苷類、四環(huán)素類、酰胺醇類、磺胺類和部分喹諾酮類藥物[6]。

自1962年Lesher等[7]研制出第一個喹諾酮類抗菌劑藥物萘啶酸，喹諾酮類藥物迅速發(fā)展，到現(xiàn)在為止已開發(fā)了四代喹諾酮類藥物[8]。第三代含氟的喹諾酮藥物——氟喹諾酮類藥物（fluoroquinolones，F(xiàn)Qs），通過抑制DNA回旋酶，破壞DNA的合成和復(fù)制，從而導(dǎo)致細(xì)菌死亡[9-10]。由于其具有抗菌譜廣、殺菌力強和價格低廉等特點[11-12]，已然成為獸醫(yī)的常用藥物。但由于養(yǎng)殖和生產(chǎn)過程中一些不合理用藥以及過量用藥物問題的發(fā)生[13]，殘留的FQs通過食物鏈被人體攝入后，會對中樞神經(jīng)系統(tǒng)和肝腎器官產(chǎn)生危害及毒性作用[14-15]。對于食品中FQs的檢測，傳統(tǒng)的檢測方法有液相色譜法、酶聯(lián)免疫法、電化學(xué)分析法及微生物分析法等[16]，但均存在操作繁瑣、設(shè)備龐大和檢測時間較長等缺點。因此，研發(fā)應(yīng)用設(shè)備簡便、靈敏度高的快速檢測方法具有十分重要的意義[17]。

熒光是物質(zhì)被紫外線或X射線照射時發(fā)射出的各種顏色、不同強度的可見光。熒光分析法就是利用熒光強度及顏色變化進(jìn)行定性和定量分析，是近十幾年發(fā)展迅速的一種檢測方法。它的特點是靈敏度較高且操作簡單、響應(yīng)時間短（由激發(fā)光照射后，幾納秒至幾微秒即可發(fā)射可見光），正因為這些優(yōu)點，使得熒光分析法在食品安全檢測工作中被廣泛應(yīng)用且得到的很好的發(fā)展[18]。如Wang Chongwen等[19]設(shè)計了一種熒光定量分析試紙條，可在30 min內(nèi)對食品中蛋白質(zhì)毒素進(jìn)行快速定量檢測。2020年Chen Jiamin等[20]研發(fā)了一種基于鉑納米顆粒的熒光生物傳感器，建立了快速檢測水產(chǎn)品新鮮度敏感指標(biāo)（次黃嘌呤）的熒光分析法。除此之外，熒光分析法同樣被廣泛地應(yīng)用在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域、藥物分析以及環(huán)境檢測等工作中的痕量分析[21]。若將熒光分析法應(yīng)用于食品中FQs藥物殘留檢測，可以簡化操作、縮短檢測時間、提高靈敏度及降低檢測成本。本文綜述近些年運用熒光法快速檢測食品中FQs殘留的研究進(jìn)展以及部分FQs殘留限量，旨在為食品中FQs殘留檢測提供參考。

1 部分氟喹諾酮類藥物殘留限量

我國政府對FQs殘留的危害性十分重視，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第2292號[22]規(guī)定“自2015年12月31日起，停止生產(chǎn)用于食品動物的洛美沙星（lomefloxacin，LOM）等4 種FQs獸藥，同時撤銷相關(guān)批準(zhǔn)文號”。2019年9月6日發(fā)布的GB 31650—2019《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留限量》規(guī)定了達(dá)氟沙星（danofloxacin，DAN）等4 種FQs獸藥在動物性食品中最大殘留限量（maximum residue limit，MRL）[23]。國際食品法典委員會（Codex Alimentarius Commission，CAC）為保障消費者健康制定了關(guān)于動物源性食品中FQs的MRL[24]，在2009年，歐盟委員會發(fā)布了《食品中藥物活性物質(zhì)最大殘留限量》（EU）No 37/2010號條例[25]，同樣制定了部分FQs在動物源性食品的限量標(biāo)準(zhǔn)，主要藥物的名稱和在食品中的MRL如表1所示。

表1 部分FQs在食品中MRLTable 1 Maximum residue limits of some fluoroquinolones in foods

2 氟喹諾酮類藥物殘留熒光檢測法

采用熒光分析法檢測FQs，首先是對熒光材料的選擇，熒光材料是熒光分析方法的重要基礎(chǔ)。目前常用的熒光材料主要有有機熒光染料、納米金、納米銀（Ag nanoparticles，AgNPs）、稀土發(fā)光納米材料、量子點（quantum dots，QDs）等[26]。稀土發(fā)光納米材料分為上轉(zhuǎn)換發(fā)光和下轉(zhuǎn)化發(fā)光兩種。上轉(zhuǎn)換納米顆粒（upconversion nanoparticles，UCNPs）發(fā)光是在近紅外較低能量激發(fā)下，發(fā)射較高能量熒光，具有背景干擾小的優(yōu)勢[27]。UCNPs通常由無機基質(zhì)和摻雜稀土離子組成[28]。QDs是半導(dǎo)體納米材料，具有電致發(fā)光和光致發(fā)光的特性[29]，包含金屬Q(mào)Ds和碳QDs（carbon quantum dots，CDs）。金屬Q(mào)Ds一般由IIB-VIA族或IIIA-VA族元素合成，如CdTe QDs、ZnSe QDs等。CDs相對其他熒光材料具有很強熒光可調(diào)性，且低毒、穩(wěn)定性高，近年來受到廣泛的關(guān)注和應(yīng)用[30]。如Ding Hui等[31]以L-谷氨酸和鄰苯二胺為前體，通過改變反應(yīng)溶劑并按適當(dāng)?shù)谋壤M合，合成了熒光發(fā)射從藍(lán)色到近紅外可調(diào)諧的CDs。

熒光分析的方法有很多，如直接的熒光增強和猝滅法、熒光免疫分析法、分子印跡聚合物（molecularly imprinted polymer，MIP）熒光檢測法、熒光適配體傳感器檢測法、比率熒光和熒光比色分析法等。這些方法和技術(shù)的應(yīng)用使熒光分析法朝著便捷、痕量以及智能的方向發(fā)展。

2.1 熒光增強檢測法

熒光增強檢測法是檢測物通過給電子取代基與熒光物質(zhì)形成共軛體系，產(chǎn)生共軛效應(yīng)而引起熒光增強。熒光增強檢測法可分為兩種，一種是通過抑制光致電子轉(zhuǎn)移（photoinduced electron transfer，PET）而使熒光增強[32]，在PET體系中，電子供體通過間隔基與熒光團相連，PTE體系可導(dǎo)致熒光團猝滅，電子供體與檢測物結(jié)合后，PET受到抑制，熒光恢復(fù)，如圖1A所示[33]。另外一種是分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移（intramolecular charge transfer，ICT）使熒光團熒光增強，檢測物通過配位或氫鍵的形成作用于熒光團的供電子基團（供體）或吸電子基團（受體），供體供電子能力或受體的吸電子能力越強，ICT效應(yīng)越強[34]，增強熒光發(fā)射（圖1B）。

圖1 熒光增強示意圖[33]Fig. 1 Schematic diagram of fluorescence enhancement[33]

Hua Jianhao等[35]利用CDs建立了FQs的熒光增強檢測法。該方法以聚(4-苯乙烯磺酸-共聚-馬來酸)為前體，通過水熱法合成了硫摻雜CDs（sulfur-doped carbon quantum dots，S-CDs）作熒光探針并結(jié)合Fe3O4磁納米粒子（magnetic nanoparticles，MNPs），MNPs獨特的超順磁性使它在外加磁場下快速富集，去除外部磁場后，立即在溶液中重新分散[36]。基于S-CDs和NOR/CIP之間的強氫鍵相互作用和電荷轉(zhuǎn)移，引起S-CDs熒光增強。通過外部磁鐵作用，構(gòu)建了CIP和NOR的吸附-洗脫-檢測的熒光分析法。NOR和CIP的檢測線性范圍分別為0.02～1.25 μmol/L和0.02～1.0 μmol/L，檢出限分別為4.6 nmol/L和6.7 nmol/L。

Kaur等[37]采用化學(xué)共沉淀法合成了聚乙二醇包覆的Tb3＋摻雜的ZnS納米粒子，用于NOR熒光檢測。聚乙二醇包覆的Tb3＋摻雜的ZnS納米粒子在波長334 nm的激發(fā)下，產(chǎn)生兩個發(fā)射峰（490 nm和545 nm），分別對應(yīng)于Tb3＋的5D4→7F6和5D4→7F5電子躍遷。隨著NOR的加入，納米粒子在545 nm波長處的熒光增強。以此來檢測NOR殘留量。

2.2 熒光猝滅與恢復(fù)檢測法

熒光猝滅分析法是利用檢測物和某一種熒光物質(zhì)形成復(fù)合物或產(chǎn)生能量轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生猝滅作用，猝滅作用主要包括靜態(tài)猝滅和動態(tài)猝滅，以及內(nèi)濾效應(yīng)（inner filter effect，IFE）等。圖2A是熒光靜態(tài)猝滅示意圖，檢測物和熒光物質(zhì)分子發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，形成不發(fā)光的復(fù)合物。動態(tài)猝滅是檢測物與熒光物質(zhì)的激發(fā)態(tài)分子發(fā)生相互作用而引起的猝滅效應(yīng)（圖2B）。在IFE機制中，檢測物（吸收體）的吸收與熒光團的發(fā)射帶重疊，引起非輻射能量轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致熒光發(fā)射強度減小或猝滅[38]。

圖2 熒光猝滅示意圖Fig. 2 Schematic diagram of fluorescence quenching

Lu Wenjing等[39]以鄰苯二胺和4-氨基丁酸為前驅(qū)體并采用水熱一步法合成了亮黃色熒光CDs。由于NOR和CDs之間的絡(luò)合反應(yīng)形成穩(wěn)定的復(fù)合材料，導(dǎo)致靜態(tài)熒光猝滅。并且觀察到CDs-NOR猝滅的熒光可以通過引入組氨酸來恢復(fù)。CDs-FQs系統(tǒng)具有在“開啟”模式下監(jiān)測組氨酸水平的潛力。對實際樣品牛奶中FQs殘留分析表現(xiàn)出良好的檢測性，NOR、CIP和OFL檢測線性范圍分別為0.05～150.00、0.2～2.0、0.4～10.0 μmol/L，NOR、CIP和OFL的檢出限分別為17、35、67 nmol/L。

Guo Xingjia等[40]以蘋果酸和甘氨酸為原材料，采用水熱法合成了棕色的CDs，當(dāng)在368 nm激發(fā)波長下，CDs在452 nm發(fā)射藍(lán)色熒光。并且Cu2＋存在下通過電子轉(zhuǎn)移可猝滅CDs的熒光，而加入ENR后可以逐漸恢復(fù)。由于ENR對Cu2＋的結(jié)合親和力高于CDs，二者形成了較大尺寸的配合物，CDs原始熒光才得以恢復(fù)。為此，設(shè)計了基于CDs-Cu2＋體系熒光恢復(fù)的快速靈敏熒光傳感策略，用于ENR的選擇性檢測。

Qian Sihua等[41]用溶劑熱法制備了近紅外（nearinfrared，NIR）-CDs，NIR-CDs顯示出寬的激發(fā)帶范圍（200～600 nm），最佳的激發(fā)和發(fā)射波長分別在420 nm和680 nm處。對于FQs（以NOR為例）檢測，隨著NOR濃度增加，引起的NIR-CDs熒光強度下降是以IFE為基礎(chǔ)的穩(wěn)定猝滅機制所致。

2.3 熒光免疫分析法

熒光免疫分析法是利用抗體和抗原的特異性反應(yīng)與熒光技術(shù)聯(lián)結(jié)起來的一種檢測方法。主要是通過熒光標(biāo)記的抗體與抗原與結(jié)合，通過檢測抗原抗體復(fù)合物的特異性熒光[42]，最后根據(jù)熒光強度變化對檢測物進(jìn)行定性和定量分析。

Hu Gaoshuang等[43]利用UCNPs作為信號探針，建立了動物源性食品中FQs的熒光免疫分析方法。該方法以包衣抗原修飾的聚苯乙烯顆粒為免疫探針，結(jié)合羧基功能化的抗NOR單克隆抗體，建立了UCNPs生物傳感體系NaYF4∶YbEr作為熒光免疫信號探針（在542 nm波長處記錄發(fā)射強度，在980 nm波長處激發(fā)）。以水產(chǎn)品（海鱸魚、魷魚和蝦）進(jìn)行檢測。NOR的檢測限為10 pg/mL，檢測線性范圍在1×101～1×104pg/mL。

Li Shijie等[44]基于CDs/AgNPs建立了熒光免疫層析分析法，應(yīng)用于ENR的特異性檢測。采用水熱合成法制備氮摻雜CDs（nitrogen-doped carbon quantum dots，N-CDs），并根據(jù)熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理構(gòu)建了一個N-CDs-AgNPs-抗ENR多克隆抗體共軛物的猝滅體系。當(dāng)ENR存在時，破壞了熒光共振能量體系，使N-CDs熒光得以恢復(fù)，且能夠在30 min內(nèi)通過簡單的操作檢測ENR，檢測限為0.1 μg/L。

Kergaravat等[45]將NOR的羧基通過活性酯法共價連接到牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）的賴氨酸基上。圖3為在96 孔聚苯乙烯微孔板上建立的熒光免疫法檢測FQs示意圖。該方法是基于一種間接免疫競爭法，即樣品中的FQs與固定在磁珠（magnetic bead，MB）上的FQs競爭抗FQs抗體，加入抗免疫球蛋白G抗體標(biāo)記過氧化物酶及其底物（鄰苯二胺），以鄰苯二胺產(chǎn)物（2,3-二甲苯胺）的熒光強度為信號檢測FQs，熒光信號與FQs濃度間接相關(guān)。ENR、CIP、DAN、OFL、SAR和NOR的檢出限和定量限分別為13、10、13、30、29、22 μg/L和40、30、40、100、88、65 μg/L。

圖3 熒光競爭免疫分析法檢測FQs示意圖[45]Fig. 3 Schematic diagram of fluoroquinolone detection by fluorescence competitive immunoassay[45]

2.4 分子印跡聚合物熒光檢測法

分子印跡技術(shù)是模仿抗體抗原、酶與底物的特異性識別原理[46]，將模板分子（檢測物）先記憶，然后再洗脫，在印跡材料上形成特定的MIP，可以自然、選擇性地識別檢測物[47]。MIP具有良好的識別性能，但是缺乏檢測信號傳輸，將熒光物質(zhì)通過聚合反應(yīng)與MIP相結(jié)合，形成分子印跡熒光傳感器，以熒光信號作檢測分析（圖4）。常見的分子印跡熒光傳感器分為有機染料分子印跡熒光傳感器、稀土分子印跡熒光傳感器和QDs分子印跡熒光傳感器[48]。

Wu Chunxia等[50]選擇異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）有機染料作為熒光信號材料，在FITC改性二氧化硅納米球表面合成MIP，以親水性功能單體丙烯酰胺在熒光印跡納米粒子上制備有效的CIP識別位點，采用多步沉淀法合成了MIPs@SiO2-FITC，激發(fā)波長為470 nm，發(fā)射波長為525 nm。熒光強度隨著猝滅劑（CIP）濃度的增加而降低。制備的MIPs@SiO2-FITC具有良好的選擇性，檢出限是4.04 nmol/L。

Tang Yiwei等[51]采用NaYF4∶Yb3＋、Er3＋UCPs并結(jié)合MNPs，通過局域光聚合法制備了多功能MIP熒光探針。該方法在UCPs分散的正丙醇溶液中加入Fe3O4納米粒子和正硅酸四乙酯，利用水解反應(yīng)制備了磁性上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米粒子。使MIP成為磁性富集、分子識別和上轉(zhuǎn)換熒光的三元探針。

圖4 MIP熒光檢測法示意圖[49]Fig. 4 Schematic diagram of molecularly imprinted polymer fluorescence detection[49]

Shi Tian等[52]以3-氨丙基三乙氧基硅烷為功能單體，聚乙二醇辛基苯基醚作為表面活性劑，NOR為分子模板，在硅烷化CdTe QDs表面合成了MIP。將模板分子洗脫后，得到與NOR分子的大小、形狀和化學(xué)基團互補的特定三維印跡腔。NOR結(jié)合MIP-CdTe QDs后由于電子轉(zhuǎn)移引起熒光猝滅，洗脫NOR后熒光再次出現(xiàn)，成功地制備了對NOR具有特異性的分子印跡熒光納米探針。檢出限為0.18 μmol/L。

2.5 熒光適配體傳感器檢測法

適配體是RNA寡核苷酸或DNA單鏈，它能特異性地與多種靶分子結(jié)合，如核酸、蛋白質(zhì)、金屬離子、抗生素以及細(xì)胞等，具有很高的親和力、選擇性和敏感性[53]。適配體在與靶點結(jié)合前后具有明顯不同的構(gòu)象，以熒光團修飾適配體互補DNA鏈或直接修飾適配體，適配體和靶分子結(jié)合后可以影響熒光物質(zhì)的熒光信號的變化[54-56]，無論是增強還是減弱，都可以反映結(jié)合過程的程度，從而可以對目標(biāo)物進(jìn)行定性和定量檢測，如圖5所示。

圖5 熒光適配體傳感器檢測FQs示意圖[56]Fig. 5 Schematic diagram of fluoroquinolone detection by fluorescence aptamer sensor[56]

Liu Xiuying等[57]設(shè)計了一種基于適配體修飾的Fe3O4MNPs與Yb、Er離子對摻雜UCNPs相結(jié)合的熒光適配體傳感器。Fe3O4首先與具有適配體互補DNA鏈的UCNPs反應(yīng)，在適配體與其互補DNA之間形成雙鏈結(jié)構(gòu)，生成雜交探針。因為探針在有ENR條件下優(yōu)先與靶點結(jié)合，導(dǎo)致之前的部分雙鏈結(jié)構(gòu)解離后，雜交探針中的部分UCNPs被釋放，熒光強度減弱，得到特異性好、靈敏度高的用于ENR測定的熒光適配體傳感器。

2017年Liu Xiuying等[58]又提出了一種新型的ENR熒光“雙識別”檢測方法。將生物素化ENR適配體固定在UCNPs表面，以捕獲ENR作為識別的第一個保障。當(dāng)適配體在已有靶標(biāo)上正確折疊后，結(jié)合分子印跡技術(shù)與ENR剩余官能團相互作用是第二個保障。對魚類樣本檢測表現(xiàn)出良好的檢測性能。

Reinemann等[59]采用熒光素標(biāo)記尋找具有OFL特異性的適配體序列，并確定適配體-靶標(biāo)體系的解離常數(shù)，經(jīng)過8 輪的指數(shù)富集配體進(jìn)化技術(shù)程序，獲得了一個對幾種FQs藥物具有較高特異性的適配體?？梢钥闯隼眠m配體、分子印跡技術(shù)以及免疫結(jié)合的特異性與高靈敏度的熒光分析法聯(lián)用，能夠進(jìn)行識別性強，靈敏度高的分析檢測，對于食品中FQs藥物殘留檢測具有廣闊的應(yīng)用前景。

2.6 比率熒光檢測法

只有一個熒光信號的產(chǎn)生可能有背景干擾的限制，基于比率的傳感結(jié)構(gòu)利用兩個及以上不同波長熒光信號的比較（圖6），然后計算其信號強度比[60]，對FQs殘留進(jìn)行檢測分析，能夠更好地避免假陽性結(jié)果，進(jìn)一步提升檢測準(zhǔn)確性。

圖6 比率信號采集的示意圖[33]Fig. 6 Schematic diagram of radio signal acquisition[33]

Liu Xiqing等[61]以桂花葉片為碳源，通過水熱處理制備藍(lán)色熒光CDs，采用溶膠-凝膠法與巰基乙酸修飾的紅色CdTe QDs結(jié)合，隨著CIP的加入，在657 nm波長處熒光逐漸猝滅，但在465 nm波長處左右，熒光強度逐漸增強，利用比率熒光選擇性靈敏地測定CIP，檢出限為0.012 7 nmol/L，線性范圍為0～60 nmol/L。

Lu Changfang等[62]以硒酵母為原料，通過水熱法合成了CDs。它們進(jìn)一步與核黃素偶聯(lián)，形成雙發(fā)射比率熒光探針，在370 nm激發(fā)波長下，探針顯示雙發(fā)射峰，峰值在443 nm和510 nm。當(dāng)加入CIP時，由于CDs與CIP之間的氫鍵和共軛效應(yīng)所致，在相同的激發(fā)條件下CDs的藍(lán)色熒光增強。而核黃素的熒光（510 nm）強度保持不變。以熒光強度比率（I443nm/I510nm）反映CIP的濃度。檢測限為0.13 μmol/L。

Gui Rijun等[63]通過水熱法制備了氨基功能化的CDs和羧基功能化硅QDs（Si quantum dots，SiDs）。CDs和SiDs通過碳二亞胺活化偶聯(lián)反應(yīng)結(jié)合形成CDs/SiDs共軛物。將共軛物用雙(3-吡啶基甲基)胺（bis(3-pyridylmethyl)amine，BPMA）進(jìn)行了功能化修飾，加入CuCl2溶液形成了CDs/SiDs-BPMA-Cu2＋檢測體系。在Cu2＋存在下，Cu2＋與CDs/SiDs-BPMA的表面配體有配位作用，引起SiDs熒光猝滅。而隨著CIP的加入，Cu2＋可以與CIP的C3-羧基和C4-酮基結(jié)合，產(chǎn)生一種新的Cu2＋-CIP配合物，破壞了電子能量轉(zhuǎn)移，熒光恢復(fù)。此外，Cu2＋和CIP的加入不會影響紅色熒光的CDs。以此建立了ISiDs/ICDs比率熒光檢測法。

2.7 熒光比色分析法

熒光比色分析法是以熒光顏色變化為檢測形式，通過裸眼或目測比色計進(jìn)行觀察，實現(xiàn)定性和定量分析，視覺畫面的變化使人腦更容易更直接獲取信息，達(dá)到可視化的實時現(xiàn)場熒光檢測。熒光顏色變化分為顏色強度的變化和色調(diào)的變化[64]，例如從暗紅色到淺紅色的變化，或者由黃綠色變成藍(lán)色（圖7）。

圖7 熒光顏色隨檢測物濃度變化示意圖Fig. 7 Schematic diagram showing fluorescence color changes with concentrations of analytes

Ye Yingwang等[65]報道了基于智能手機上QDs熒光比色分析法，通過將熒光信號轉(zhuǎn)換為視覺顏色效果以實現(xiàn)對真實食品和環(huán)境樣品中FQs的無標(biāo)簽現(xiàn)場檢測。以黃綠色熒光的CdTe QDs匹配加替沙星（gatifloxacin，GFLX）的本征藍(lán)色熒光，可在紫外光激發(fā)下形成雙發(fā)射熒光信號，隨著GFLX濃度的增加，通過PET，有效地觸發(fā)在557 nm波長處黃綠色QDs的熒光猝滅，并伴隨著448 nm波長處藍(lán)色熒光強度顯著增強。以QDs作為感應(yīng)中心涂覆濾紙條，并嵌入到裝有紫外燈的智能檢測平臺。一旦GFLX接觸到感應(yīng)中心，智能手機的內(nèi)部攝像頭啟動圖像捕獲功能，以收集變化熒光顏色的實時圖像。GFLX的檢測線性范圍在0.85～3.60 μmol/L，檢出限為0.26 nmol/L，檢測應(yīng)答時間為5 min，可以看出該智能平臺符合現(xiàn)場對食品中FQs殘留快速檢測的要求。

何偉杰[66]利用紅色熒光CDs和藍(lán)色熒光SINPs構(gòu)建了可視化熒光探針（CDs@SINPs），利用加入Cu2＋發(fā)生電子轉(zhuǎn)移，猝滅SINPs熒光，再加入CIP與Cu2＋鍵和，抑制光電子轉(zhuǎn)移，SINPs藍(lán)色熒光恢復(fù)，探針出現(xiàn)了由紅色向藍(lán)色的變化。并制備了熒光測試紙條，在實際樣品檢測中，可以通過肉眼觀察到測試紙的顏色變化，實現(xiàn)CIP的可視化檢測。

3 結(jié) 語

FQs抗菌藥物已經(jīng)廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中細(xì)菌性疾病的預(yù)防和醫(yī)治。但由于不規(guī)范用藥問題的發(fā)生會導(dǎo)致藥物殘留，殘留藥物被人體攝入后會產(chǎn)生危害。我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部對FQs殘留的危害性十分重視，并制定了殘留限量標(biāo)椎。對于FQs殘留檢測方面，熒光分析法相比傳統(tǒng)的高效液相色譜、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)和毛細(xì)管電泳法具有簡單、快速、靈敏度高以及成本低等優(yōu)勢，是檢測食品中FQs藥物殘留高效率方法。如表2所示，各類熒光分析法在食品中FQs檢測的應(yīng)用具有較低檢出限，并可在幾分鐘至幾十分鐘的時間內(nèi)完成快速檢測。

表2 熒光分析法在檢測食品中FQs的應(yīng)用Table 2 Application of fluorescence analysis in detection of fluoroquinolones in food

簡單的熒光增強與猝滅檢測法穩(wěn)定性和抗干擾性較差，不能適用復(fù)雜的食品環(huán)境基質(zhì)，熒光免疫分析法、分子印跡熒光傳感器以及熒光適配體傳感器都具有很強的特異性識別功能，在成分復(fù)雜的食品中，能夠識別目標(biāo)，提高熒光檢測法的特異性和選擇性，適用于檢測環(huán)境干擾因素較多的檢測條件。而比率熒光法提供了一種自校準(zhǔn)方法，繞過了儀器和環(huán)境因素，能夠提升檢測的穩(wěn)定性。

熒光比色分析法作為可視化的檢測方法，比以上的熒光檢測法具備直觀可視化的特點和優(yōu)勢。在檢測環(huán)境不能滿足相應(yīng)設(shè)備儀器的條件下，用熒光比色試紙進(jìn)行檢測判斷，采用肉眼辨別熒光顏色變化，作為對檢測物的定性及半定量分析，可以達(dá)到高效率、低耗能的現(xiàn)場快速檢測。但同樣也存在熒光顏色變化是否明顯，以及能否達(dá)到更低的檢測限要求的問題和挑戰(zhàn)，以熒光比色法研發(fā)可視化的智能檢測平臺和熒光比色試紙，將為現(xiàn)場實時快速檢測食品中FQs藥物殘留開拓新的視野，是未來幾年熒光分析檢測的研究熱點。