長鏈非編碼RNA SNHG1對增生性瘢痕成纖維細胞增殖的影響

萬瑀，馬芳，賀茜，馬勝超，姜怡鄧，沈江涌

1寧夏醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，銀川 750004；2國家衛(wèi)生健康委代謝性心血管疾病研究重點實驗室，銀川 750004；3寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院燒傷整形外科，銀川 750004；4寧夏醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，銀川 750004

增生性瘢痕是創(chuàng)面愈合異常的結(jié)果，主要包括成纖維細胞過度增殖和膠原纖維代謝失衡[1-2]。據(jù)統(tǒng)計，創(chuàng)傷后皮膚創(chuàng)面增生性瘢痕的發(fā)生率為38%～68%，手術(shù)后高達45%～100%[3]。增生性瘢痕外觀呈紅色，質(zhì)地較硬，瘢痕組織高于皮面[4]，伴有瘙癢和壓痛[5-6]等癥狀，發(fā)生于頭面部及四肢時破壞美觀、影響日?；顒?，嚴重時可引起焦慮[7]、睡眠障礙[8-9]等，甚至造成創(chuàng)傷后應(yīng)激反應(yīng)[10]，給患者帶來巨大的心理負擔(dān)。臨床治療增生性瘢痕的方法雖多，但療效個體差異較大，易復(fù)發(fā)。目前對增生性瘢痕形成的潛在機制知之甚少，近年來基因靶向治療技術(shù)發(fā)展迅速，在多種疾病中的應(yīng)用初見成效。因此，在基因水平探究增生性瘢痕的形成機制，尋找新的基因治療靶點，從而建立有效的防治策略，對預(yù)防增生性瘢痕的形成具有重要意義。

長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA，lncRNA)是一類長度大于200個核苷酸的非編碼RNA，雖缺乏編碼蛋白質(zhì)的能力[11]，但在細胞周期、增殖、分化、凋亡等多種病理生理過程中具有重要的調(diào)控作用[12-16]。研究發(fā)現(xiàn)，過表達核仁小RNA宿主基因1(SNHG1)可促進胃癌細胞、食管癌細胞和非小細胞肺癌細胞的增殖[17-18]。目前SNHG1調(diào)控人增生性瘢痕成纖維細胞生物學(xué)行為的相關(guān)研究較少。lncRNA可與microRNA相互作用，從而發(fā)揮調(diào)控效應(yīng)[19-21]。本課題組前期研究采用starBase v3.0在線軟件預(yù)測發(fā)現(xiàn)，miR-382-3p與SNHG1存在結(jié)合位點，即SNHG1可能靶向結(jié)合miR-382-3p[22]。有研究發(fā)現(xiàn)，miR-382可促進腎小管間質(zhì)的纖維化[23]。然而，SNHG1通過靶向調(diào)控miR-382-3p而在增生性瘢痕成纖維細胞中發(fā)揮作用的研究鮮有報道。為此，本研究探討了SNHG1靶向miR-382-3p對人增生性瘢痕成纖維細胞增殖的影響，以期發(fā)現(xiàn)增生性瘢痕形成機制的新靶點，為預(yù)防和治療增生性瘢痕提供新思路。

1 材料與方法

1.1 組織標本 2019-2021年于寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院燒傷整形外科接受手術(shù)治療的22例增生性瘢痕患者，收集其增生性瘢痕組織與瘢痕旁正常皮膚組織(瘢痕旁3 cm以內(nèi))。納入標準：具有增生性瘢痕典型的臨床癥狀，即瘢痕高于皮面且不超過原有傷口大小，質(zhì)地較正常皮膚硬。排除標準：瘢痕疙瘩患者；瘢痕有潰瘍；接受過放化療；患有其他皮膚疾病、腫瘤或免疫性疾病等。本研究通過寧夏醫(yī)科大學(xué)倫理委員會審批(2018-087)，患者及其家屬均簽署知情同意書。

1.2 主要試劑及儀器 反轉(zhuǎn)錄試劑盒、熒光定量PCR試劑盒(日本TaKaRa公司)；蛋白提取試劑盒(江蘇凱基生物技術(shù)有限公司)；RNA提取試劑盒(北京天根生化科技有限公司)；p27抗體(江蘇親科生物研究中心有限公司)；增殖性細胞核抗原(PCNA)抗體(上海艾博抗貿(mào)易有限公司)；辣根過氧化物酶(HRP)標記的羊抗兔二抗(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)；β-actin抗體(武漢愛博泰克生物科技有限公司)；上樣緩沖液(北京康為世紀生物科技有限公司)；過表達慢病毒顆粒(上海吉凱基因醫(yī)學(xué)科技有限公司)；DMEM高糖培養(yǎng)基(北京賽默飛世爾生物化學(xué)制品有限公司)；胎牛血清(上海逍鵬生物科技有限公司)；青鏈霉素(北京索萊寶科技有限公司)；CCK-8試劑盒(美國Invigentech公司)；LipofectamineTM2000試劑盒、miR-382-3p模擬物(上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司)。5415D型微量臺式離心機(德國Eppendorf公司)；熒光定量PCR儀(德國耶拿分析儀器股份公司)；電泳儀及凝膠成像儀(美國Bio-Rad公司)；熒光顯微鏡(日本Olympus公司)；酶標儀(美國BioTek公司)；CO2培養(yǎng)箱(德國Heraeus公司)；超凈工作臺(蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 細胞分離及培養(yǎng) 從人增生性瘢痕組織及瘢痕旁正常皮膚組織中提取并分離成纖維細胞，并于含10%胎牛血清、1%青鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)，置于5% CO2、37 ℃細胞培養(yǎng)箱中。根據(jù)細胞狀態(tài)每1～2 d更換1次培養(yǎng)液，待細胞密度達80%～90%時，用0.25%胰蛋白酶消化傳代，取第3～6代成纖維細胞用于后續(xù)實驗。

1.3.2 細胞轉(zhuǎn)染及分組 采用常規(guī)轉(zhuǎn)染方法，按照過表達慢病毒顆粒試劑盒和LipofectamineTM2000試劑盒說明書步驟培養(yǎng)人增生性瘢痕成纖維細胞至對數(shù)生長期，消化后接種于6孔板中培養(yǎng)，待細胞融合度達60%時進行轉(zhuǎn)染。設(shè)置對照組(不做處理)、SNHG1陰性對照組(轉(zhuǎn)染慢病毒空載體)、SNHG1過表達組(轉(zhuǎn)染過表達慢病毒)、模擬物對照組(轉(zhuǎn)染對照模擬物)、miR-382-3p過表達組(轉(zhuǎn)染miR-382-3p模擬物)、SNHG1陰性對照+模擬物對照組(轉(zhuǎn)染慢病毒空載體和對照模擬物)、SNHG1過表達+模擬物對照組(轉(zhuǎn)染過表達慢病毒和對照模擬物)與SNHG1過表達+miR-382-3p過表達組(轉(zhuǎn)染過表達慢病毒和miR-382-3p模擬物)。

1.3.3 過表達慢病毒載體構(gòu)建效果鑒定 將SNHG1過表達慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染至增生性瘢痕成纖維細胞48 h后，熒光顯微鏡下觀察增生性瘢痕成纖維細胞生長情況。

1.3.4 qRT-PCR檢測SNHG1、PCNA、p27mRNA及miR-382-3p相對表達水平 (1)取人增生性瘢痕組織和瘢痕旁正常皮膚組織及其成纖維細胞，檢測SNHG1mRNA和miR-382-3p相對表達水平；(2)收集對照組、SNHG1陰性對照組、SNHG1過表達組和SNHG1過表達+miR-382-3p過表達組細胞，檢測SNHG1mRNA相對表達水平；(3)收集對照組、SNHG1陰性對照組、SNHG1過表達組細胞，檢測PCNA、p27mRNA和miR-382-3p相對表達水平；(4)收集對照組、模擬物對照組和miR-382-3p模擬物組細胞，檢測miR-382-3p相對表達水平；(5)收集SNHG1陰性對照+模擬物對照組、SNHG1過表達+模擬物對照組和SNHG1過表達+miR-382-3p過表達組細胞，檢測PCNA和p27mRNA相對表達水平。根據(jù)總RNA提取試劑盒說明書步驟提取總RNA，用反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄成cDNA，按照qRT-PCR說明書步驟進行擴增。miR-382-3p擴增條件：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃變性5 s，60 ℃退火及延伸34 s，共40個循環(huán)；熔解曲線95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，95 ℃15 s。SNHG1、PCNA、p27擴增條件：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃變性5 s，退火及延伸34 s(退火溫度：SNHG161 ℃，PCNA59.3 ℃，p2757.8 ℃)，共40個循環(huán)；熔解曲線95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，95 ℃15 s。設(shè)置空白對照和內(nèi)參(miR-382-3p內(nèi)參為U6；SNHG1、PCNA和p27內(nèi)參為GAPDH)對照同體系擴增。反應(yīng)結(jié)束后，根據(jù)擴增曲線，采用2-ΔΔCt法計算SNHG1、PCNA、p27mRNA及miR-382-3p的相對表達水平。miR-382-3p引物由廣州銳博生物科技有限公司設(shè)計并合成，SNHG1、PCNA、p27引物由上海生工生物工程有限公司合成，引物序列如表1所示。

乘坐當(dāng)?shù)貍鹘y(tǒng)的人力小船向湖心島劃去，清澈明亮的藍色湖水中倒映著遠處的阿爾卑斯雪山和近處蒼翠的山林。15世紀，人們在湖心島上修建了圣瑪利亞教堂。圣母堂雖然沒有大教堂的宏偉輝煌，但卻透著一份安詳和秀美，給布萊德湖帶來了靈性。

表1 qRT-PCR引物序列Tab.1 Primer sequence of qRT-PCR

1.3.5 CCK-8法檢測細胞增殖能力 (1)收集對照組、SNHG1陰性對照組和SNHG1過表達組細胞；(2)收集SNHG1陰性對照+模擬物對照組、SNHG1過表達+模擬物對照組和SNHG1過表達+miR-382-3p過表達組細胞。均接種于96孔板(3×103個/孔)中培養(yǎng)48 h后，每孔加入10 μl CCK-8試劑繼續(xù)孵育2 h。采用酶標儀測定各孔450 nm波長處的吸光度(OD)值，并繪制細胞生長曲線。

1.3.6 EdU染色觀察細胞增殖情況 (1)收集對照組、SNHG1陰性對照組和SNHG1過表達組細胞；(2)收集SNHG1陰性對照+模擬物對照組、SNHG1過表達+模擬物對照組和SNHG1過表達+miR-382-3p過表達組細胞。按照(4～100)×105個/孔接種于共聚焦小皿中，用DMEM培養(yǎng)液按5000∶1的比例稀釋EdU溶液，制備適量的50 μmol/L EdU培養(yǎng)基；每個皿中加入200 μl EdU培養(yǎng)基孵育2 h；棄掉培養(yǎng)基，依次采用固定液(含4%多聚甲醛的PBS)、甘氨酸和滲透劑進行孵育；PBS清洗細胞，加入1×Apollo染色反應(yīng)液室溫避光孵育30 min，加入滲透劑；用甲醇清洗細胞，加入1×Hoechst反應(yīng)液室溫避光孵育30 min；加入抗熒光淬滅劑封片，熒光顯微鏡下觀察，獲取圖像進行分析。

1.3.7 Western blotting檢測PCNA、p27蛋白相對表達水平 (1)收集對照組、SNHG1陰性對照組和SNHG1過表達組細胞；(2)收集SNHG1陰性對照+模擬物對照組、SNHG1過表達+模擬物對照組和SNHG1過表達+miR-382-3p過表達組細胞。常規(guī)提取蛋白，采用BCA蛋白定量試劑盒檢測蛋白樣品濃度。取蛋白上樣行SDS-PAGE電泳，0.3 A恒流轉(zhuǎn)膜2 h；5%脫脂奶粉封閉2 h，PBST洗膜10 min×3次；依次加入PCNA、p27特異性一抗4 ℃搖床孵育過夜，次日加入HRP標記的二抗，室溫下?lián)u床孵育2 h，參考ECL試劑盒說明書步驟進行發(fā)光顯色，在凝膠成像分析儀上進行成像分析。以β-actin為內(nèi)參，計算PCNA、p27蛋白相對表達水平。

1.3.8 目標預(yù)測 運用在線生物信息學(xué)軟件starBase v3.0(http://starbase.sysu.edu.cn/)分析預(yù)測miR-382-3p與SNHG1的結(jié)合位點。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 25.0軟件進行統(tǒng)計分析，以GraphPad Prism 6.0軟件制圖。計量資料以±s表示，符合正態(tài)分布并滿足方差齊性，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗；多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1SNHG1和miR-382-3p在人增生性瘢痕組織和瘢痕旁正常皮膚組織及其成纖維細胞中的表達情況 qRT-PCR檢測結(jié)果顯示，與瘢痕旁正常皮膚組織及其成纖維細胞相比，增生性瘢痕組織(3.21±2.65vs. 1.14±0.61，t=4.26，P<0.001)及其成纖維細胞(0.91±0.08vs. 0.54±0.08，t=5.60，P<0.01)中SNHG1mRNA相對表達水平增高，而miR-382-3p相對表達水平下降(組織：0.53±0.34vs.1.15±0.61，t=6.30，P<0.001；細胞：0.84±0.09vs.1.01±0.004，t=3.22，P<0.05，圖1)。

圖1 SNHG1和miR-382-3p在人增生性瘢痕組織和瘢痕旁正常皮膚組織及其成纖維細胞中的表達情況Fig. 1 Expression of SNHG1 and miR-382-3p in human hypertrophic scar tissues, adjacent normal skin tissue and its fibroblasts

2.2 過表達慢病毒載體構(gòu)建結(jié)果 將SNHG1過表達慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染至增生性瘢痕成纖維細胞后，鏡下觀察顯示，增生性瘢痕成纖維細胞分布均勻且生長良好，細胞呈梭形，可見較強的綠色熒光，轉(zhuǎn)染效率>80%(圖2A)，表明過表達慢病毒載體構(gòu)建成功，可用于后續(xù)實驗。

qRT-PCR檢測結(jié)果顯示，SNHG1陰性對照組SNHG1mRNA相對表達水平與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；與SNHG1陰性對照組比較，SNHG1過表達組SNHG1mRNA相對表達水平明顯升高(16.81±0.92vs. 0.91±0.20，t=29.14，P<0.001)；SNHG1過表達+miR-382-3p過表達組SNHG1mRNA相對表達水平與SNHG1過表達組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，圖2B)。

圖2 過表達慢病毒載體構(gòu)建結(jié)果Fig.2 Construction of lentiviralvector with overexpression

EdU染色檢測結(jié)果顯示，SNHG1陰性對照組EdU陽性細胞百分比與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；與SNHG1陰性對照組比較，S N H G 1 過表達組E d U 陽性細胞百分比明顯增高(30.01%±5.70%vs. 7.13%±4.40%，t=13.25，P<0.001，圖3B)。

圖3 過表達SNHG1對增生性瘢痕成纖維細胞增殖的影響Fig.3 Effect of overexpression of SNHG1 on proliferation of hypertrophic scar fibroblasts

2.4 過表達SNHG1對增生性瘢痕成纖維細胞中PCNA、p27mRNA和蛋白表達的影響 qRT-PCR和Western blotting檢測結(jié)果顯示，SNHG1陰性對照組PCNA、p27mRNA和蛋白相對表達水平與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；與SNHG1陰性對照組比較，SNHG1過表達組PCNAmRNA和蛋白相對表達水平明顯升高(mRNA：2.97±0.33vs. 0.98±0.25，t=8.39，P<0.01；蛋白：2.20±0.09vs. 0.88±0.20，t=8.64，P<0.05)，p27mRNA和蛋白相對表達水平明顯降低(mRNA：0.30±0.03vs.1.42±0.15，t=12.46，P<0.001；蛋白：0.47±0.11vs. 1.13±0.19，t=4.34，P<0.05，圖4)。

圖4 過表達SNHG1對增生性瘢痕成纖維細胞中PCNA、p27 mRNA和蛋白表達的影響Fig.4 Effect of overexpression of SNHG1 on the expression of PNCA and p27 mRNA and proteins of hypertrophic scar fibroblasts

2.5 過表達SNHG1對增生性瘢痕成纖維細胞中miR-382-3p表達的影響 starBase v3.0軟件預(yù)測結(jié)果顯示，SNHG1序列中含有與miR-382-3p互補的核苷酸序列，表明兩者存在結(jié)合位點，提示miR-382-3p可能是SNHG1的靶基因(圖5A)。

qRT-PCR檢測各組細胞中miR-382-3p相對表達水平，結(jié)果顯示，SNHG1陰性對照組miR-382-3p相對表達水平與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；與SNHG1陰性對照組比較，SNHG1過表達組miR-382-3p相對表達水平明顯降低(0.05±0.01vs. 1.03±0.12，t=13.98，P<0.001，圖5B)。

圖5 過表達SNHG1對增生性瘢痕成纖維細胞中miR-382-3p表達的影響Fig.5 Effect of overexpression of SNHG1 on the expression of miR-382-3p of hypertrophic scar fibroblast

2.6SNHG1調(diào)控miR-382-3p表達對增生性瘢痕成纖維細胞增殖的影響 qRT-PCR檢測結(jié)果顯示，模擬物對照組miR-382-3p相對表達水平與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；與模擬物對照組比較，miR-382-3p過表達組miR-382-3p相對表達水平明顯升高(43.52±0.10vs. 0.89±0.09，t=7.42，P<0.01，圖6A)。

CCK-8法檢測結(jié)果顯示，與SNHG1陰性對照+模擬物對照組比較，SNHG1過表達+模擬物對照組細胞增殖能力明顯增強(0.26±0.01vs. 0.17±0.01，t=10.42，P<0.001)；與SNHG1過表達+模擬物對照組比較，SNHG1過表達+miR-382-3p過表達組細胞增殖能力明顯減弱(0.15±0.02vs. 0.26±0.01，t=8.87，P<0.001，圖6B)。

EdU染色檢測結(jié)果顯示，與SNHG1陰性對照+模擬物對照組比較，SNHG1過表達+模擬物對照組EdU陽性細胞百分比增高(11.70%±0.87%vs.5.00%±0.53%，t=14.76，P<0.001)；與SNHG1過表達+模擬物對照組比較，SNHG1過表達+miR-382-3p過表達組EdU陽性細胞百分比下降(5.97%±0.33%vs.11.70%±0.87%，t=15.02，P<0.001，圖6C)。

q RT-P C R 和We s te r n b l o tt i n g 檢測結(jié)果顯示，與SNHG1陰性對照+模擬物對照組比較，SNHG1過表達+模擬物對照組PCNAmRNA和蛋白相對表達水平明顯升高(mRNA：3.33±0.38vs.0.67±0.07，t=11.79，P<0.001；蛋白：2.34±0.16vs. 1.00±0.00，t=14.39，P<0.001)，p27mRNA和蛋白相對表達水平明顯降低(mRNA：0.09±0.04vs.1.12±0.10，t=16.40，P<0.001；蛋白：0.50±0.09vs. 1.00±0.00，t=7.70，P<0.05)；與SNHG1過表達+模擬物對照組比較，SNHG1過表達+miR-382-3p過表達組PCNAmRNA和蛋白相對表達水平明顯降低(mRNA：0.64±0.09vs. 3.33±0.38，t=11.82，P<0.001；蛋白：1.70±0.36vs. 2.34±0.16，t=2.84，P<0.05)，p27mRNA和蛋白相對表達水平明顯升高(mRNA：1.01±0.44vs. 0.09±0.04，t=3.62，P<0.05；蛋白：1.38±0.31vs. 0.50±0.09，t=3.87，P<0.05，圖6D、E)。

圖6 SNHG1調(diào)控miR-382-3p表達對增生性瘢痕成纖維細胞增殖的影響Fig.6 Effcet of SNHG1 regulate miR-382-3p expression on proliferation of hypertrophic scar fibroblasts

3 討 論

瘢痕是傷口修復(fù)的正常結(jié)果，但皮膚成纖維細胞過度增殖、膠原分泌紊亂等一系列病理反應(yīng)會引起過度纖維化，最終導(dǎo)致增生性瘢痕[24]。近年來，許多研究聚焦于非編碼RNA在增生性瘢痕形成機制中的作用[25-27]。長度超過200個核苷酸的非編碼RNA即為lncRNA，其雖無法翻譯為蛋白質(zhì)，但參與細胞的多種生物學(xué)過程，如細胞周期、增殖和分化等[12,14,16]。大量研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA通過調(diào)控眾多生物學(xué)過程在增生性瘢痕的形成中起著重要作用，包括對成纖維細胞增殖和細胞外基質(zhì)沉積發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[28-31]。本研究中SNHG1定位于11q12.3，有11個外顯子。目前對SNHG1在增生性瘢痕形成中的作用研究較少，但其在多種增殖相關(guān)疾病如腫瘤中呈高表達，且與腫瘤細胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等重要癌變過程密切相關(guān)[32]。Zhu等[33]發(fā)現(xiàn)，與鄰近正常組織和細胞系相比，大腸癌組織和細胞系中SNHG1表達上調(diào)。本研究結(jié)果顯示，SNHG1在瘢痕組織及其成纖維細胞中呈高表達，與上述研究結(jié)果相似，提示SNHG1與增生性瘢痕的形成密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，過表達SNHG1可促進胃癌、食管癌和非小細胞肺癌細胞的增殖。本研究發(fā)現(xiàn)，過表達SNHG1后成纖維細胞的增殖能力增強，PCNA蛋白表達增加，p27蛋白表達減少，表明SNHG1高表達能促進增生性瘢痕成纖維細胞的增殖。

許多l(xiāng)ncRNA通過與miRNA相互作用來發(fā)揮生理學(xué)功能，從而引起基因表型的變化[21]。在lncRNA、miRNA和靶基因組成的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中，lncRNA被廣泛報道為“海綿”或“ceRNA”[34]。Zheng等[35]證實了SNHG1與miR-382-5p之間存在相互作用，且在體內(nèi)敲除SNHG1基因可抑制乳腺腫瘤細胞的增殖。本研究采用starBase v3.0軟件預(yù)測發(fā)現(xiàn)，miR-382-3p與SNHG1存在結(jié)合位點，而miR-382-3p在增生性瘢痕形成中的作用研究較少。本研究發(fā)現(xiàn)，增生性瘢痕組織和成纖維細胞中miR-382-3p表達下調(diào)。與SNHG1陰性對照組相比，SNHG1過表達組miR-382-3p表達亦明顯下調(diào)；為進一步證實SNHG1與miR-382-3p之間的相互作用，過表達SNHG1后繼續(xù)過表達miR-382-3p，發(fā)現(xiàn)SNHG1過表達+miR-382-3p過表達組細胞增殖能力減弱，增殖相關(guān)蛋白PCNA表達降低。由此可見，SNHG1可能通過海綿吸附miR-382-3p，抑制miR-382-3p對下游靶基因的作用，但過表達miR-382-3p可部分抵消SNHG1對成纖維細胞增殖的促進作用，從而抑制成纖維細胞的增殖，下調(diào)下游增殖相關(guān)蛋白PCNA的表達，上調(diào)下游蛋白p27的表達，表明SNHG1可通過負向調(diào)控miR-382-3p的表達來促進增生性瘢痕成纖維細胞的增殖。

綜上所述，本研究結(jié)果表明，SNHG1可通過調(diào)控miR-382-3p的表達而促進增生性瘢痕成纖維細胞的增殖。但本研究存在諸多不足，如組織樣本量不足及未進行體內(nèi)實驗進一步闡明增生性瘢痕成纖維細胞中SNHG1和miR-382-3p通過海綿吸附調(diào)控增殖相關(guān)蛋白表達的機制。通過查閱相關(guān)文獻發(fā)現(xiàn)，miR-382-3p廣泛參與心肌細胞纖維化相關(guān)的通路，如Akt/GSK-3β和TGF-β/MAPK通路等[36]，而過表達SNHG1可激活PI3K/Akt信號通路[37-38]。因此，SNHG1/miR-382-3p軸能否通過Akt信號通路調(diào)控下游靶基因的表達而影響增生性瘢痕成纖維細胞的增殖有待進一步驗證。隨著基因組學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，SNHG1等多種lncRNAs的功能多樣性及重要性逐漸被揭示，有望成為治療增生性瘢痕的潛在靶點。