• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    提取方法對(duì)真菌多糖得率及結(jié)構(gòu)特征影響研究進(jìn)展

    2022-03-30 12:10:38許藝嫻周禹慧馬小清董宇盧旭
    食品與發(fā)酵工業(yè) 2022年5期
    關(guān)鍵詞:酶法半乳糖熱水

    許藝嫻,周禹慧,馬小清,董宇,盧旭,2,3*

    1(福建農(nóng)林大學(xué) 食品科學(xué)學(xué)院,福建 福州,350002)2(福建省特種淀粉品質(zhì)科學(xué)與加工技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,福建 福州,350002)3(中國(guó)-愛(ài)爾蘭國(guó)際合作食品物質(zhì)學(xué)與結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)研究中心,福建 福州,350002)

    早在三千多年前,我國(guó)就有栽培菌菇并作為食用菌的記載。食用菌類一般為高等真菌的子實(shí)體,在我國(guó)已發(fā)現(xiàn)的品種至少有350 種,常見(jiàn)的食用菌類型有蘑菇、草菇、香菇、靈芝、金針菇、黑木耳、松口蘑等。其中部分可作藥用,如具有補(bǔ)中、固腎、益脾、補(bǔ)肺、止血作用的靈芝,滋陰、補(bǔ)腎、潤(rùn)肺、強(qiáng)精、補(bǔ)血提神的銀耳,對(duì)消化道腫瘤有較好療效、可治療神經(jīng)衰弱、消化不良等慢性疾病的猴頭菇,止血外敷藥的馬勃等。國(guó)際上多糖被稱為“生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物”(biological reaction modulator,BRM),作為食用菌一種重要的生理活性物質(zhì),食用菌多糖具有可提高人體免疫力、治療腫瘤、哮喘和糖尿病等疾病等藥用功效,可作為機(jī)體免疫的增強(qiáng)和激活劑,在臨床治療中已有廣泛運(yùn)用[1]。目前學(xué)者對(duì)食用菌多糖進(jìn)行的熱點(diǎn)研究集中于真菌多糖的提取效率和得率的提高,多糖結(jié)構(gòu)、分子質(zhì)量和生物活性等。提取工藝作為食用菌多糖研究的首要前處理環(huán)節(jié),除了獲得高得率的多糖外,往往對(duì)獲得多糖結(jié)構(gòu)變化產(chǎn)生重要的影響。因此本文對(duì)目前研究較常使用的食用菌多糖提取方式、得率和對(duì)應(yīng)多糖結(jié)構(gòu)變化進(jìn)行概括和綜述,為將來(lái)多糖構(gòu)效關(guān)系的研究提供相應(yīng)的理論基礎(chǔ)。

    1 食用菌多糖現(xiàn)代提取工藝

    常用真菌多糖提取方法有熱水提取法、酶提取法、超聲輔助提取法、堿提取法等,多糖的提取率及結(jié)構(gòu)的差異受提取溫度、料液比、提取功率、提取次數(shù)等因素的影響。食用真菌多糖的提取方法和步驟與其他植物多糖相似,其工藝流程大致為:食用菌子實(shí)體→粉碎→加水浸提→過(guò)濾→蒸發(fā)濃縮→除蛋白→沉淀→離心→干燥→食用菌多糖。為了提高效率和提取率,科研工作者往往也使用一些其他方法進(jìn)行輔助水浸提法,如:超聲-微波協(xié)同法、超聲波酶法、微波協(xié)同酶法。

    1.1 超聲-微波協(xié)同法

    超聲-微波協(xié)同提取法可克服單一超聲波或微波提取處理的缺陷,如單一超聲波法提取平均回收率較低,單一微波提取法易受溶劑特性影響、樣品量大時(shí)溫度分布不均等。超聲-微波協(xié)同提取法與傳統(tǒng)的微波和超聲波提取相比更安全,并且具有檢測(cè)樣品量大、受溶劑影響小等優(yōu)點(diǎn)。2種方法協(xié)同使用,可利用微波產(chǎn)生的能量和超聲波對(duì)細(xì)胞的破壞能力加速有效成分的溶出,來(lái)減少萃取時(shí)間以及降低能耗。超聲-微波協(xié)同法提取靈芝多糖比熱水法減少了3/4的提取時(shí)間、效率可提高26.27%,提取率是熱水提取的2倍,應(yīng)用于水溶性膳食纖維的提取時(shí),與傳統(tǒng)酶法提取相比得率可提高46.88%[2]。

    1.2 超聲波酶法

    超聲波酶法是利用超聲波將提取原料的細(xì)胞壁震碎破壞,擴(kuò)大可溶性物質(zhì)透過(guò)細(xì)胞多孔透析膜的通量,并協(xié)助酶更好地降解細(xì)胞內(nèi)物質(zhì),如蛋白酶可破壞肽鍵,水解蛋白質(zhì);纖維素酶可以降解細(xì)胞中的纖維素,進(jìn)而提取出更多的多糖并提高多糖提取率。超聲波酶法提取粗提取物中的多糖含量比超聲法提取多糖高20%以上,如超聲波酶法提取靈芝多糖,粗提取物中的多糖含量達(dá)到57.62%,是超聲波法提取多糖的1.8倍[3]。

    1.3 微波協(xié)同酶法

    微波輻射是高頻電磁波穿透萃取介質(zhì)到達(dá)物料細(xì)胞后,細(xì)胞吸收微波能后溫度上升而產(chǎn)生內(nèi)外壓力的過(guò)程,壓力使植物細(xì)胞膨脹破碎進(jìn)而釋放功能性成分。微波結(jié)合酶法是利用微波具有的加熱高效性和酶對(duì)植物細(xì)胞組織間質(zhì)中的胞間結(jié)構(gòu)的破壞,使細(xì)胞破碎率進(jìn)一步升高,同時(shí)水分子在微波場(chǎng)下高速轉(zhuǎn)動(dòng)形成激發(fā)態(tài),并釋放出能量傳遞給其他物質(zhì)分子,促進(jìn)了溶劑分子熱運(yùn)動(dòng)加快,縮短萃取時(shí)間、降低萃取溫度,溶出更多的多糖。因微波結(jié)合酶法具有高效性、操作簡(jiǎn)便、得率高、產(chǎn)物易于純化等特點(diǎn),已廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物的提取,如微波協(xié)同酶法相比單一酶法提取的金針菇多糖得率可由17.26%提高至21.76%[4]。

    1.4 超高壓提取法

    超高壓提取全稱為超高冷等靜壓提取,是指采用50~1 000 MPa的流體靜壓力處理目標(biāo)物質(zhì)。在超高壓提取的升壓過(guò)程中,溶劑通過(guò)滲透作用進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,在此過(guò)程中細(xì)胞的結(jié)構(gòu)在超高壓下受到不同程度的破壞。在保壓時(shí),細(xì)胞內(nèi)容物與進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部的溶劑接觸并溶于溶劑中;而在泄壓后細(xì)胞外部的壓力減小至零,由于反向高滲透壓差作用導(dǎo)致有效成分溶出,達(dá)到提取的目的,是一種非熱力學(xué)提取法。CHEN等[5]運(yùn)用超高壓技術(shù)提取蟲(chóng)草多糖,多糖得率在300~400 MPa時(shí)迅速增加,在時(shí)間不變的情況下,多糖提取率隨溫度和壓力的升高而增加。超高壓過(guò)程中,細(xì)胞膜內(nèi)外的壓差很大,更多的溶劑進(jìn)入細(xì)胞,細(xì)胞壁在較高壓力下容易破壞和溶解,誘導(dǎo)更多化合物滲透至細(xì)胞膜中。高壓破壞了蛋白質(zhì)和糖之間的鍵,使膳食纖維溶于提取液中,從而增加了葡聚糖含量。另一方面,高靜水壓結(jié)合熱水法提取可保護(hù)β-糖苷鍵不被破壞,較大程度地保留了多糖的生物活性。

    不同提取方法會(huì)影響多糖的結(jié)構(gòu),如熱水提取的靈芝子實(shí)體多糖主要以β-(1→3)、(1→4)、(1→6)糖苷鍵為主鏈的葡聚糖構(gòu)成,而堿提法獲得的多糖則以β-(1→3)糖苷鍵連接,具有前者結(jié)構(gòu)的多糖具有較高抗氧化活性,而后者則有較強(qiáng)抗腫瘤活性和免疫調(diào)節(jié)作用[6]。此外提取方式對(duì)多糖中醛酸含量有重要影響,熱水和超聲提取靈芝多糖的醛酸含量分別約為9.89%和14.41%,后者具有較高的抗氧化活性[7]。目前的研究大多對(duì)一種食用真菌的不同提取方法進(jìn)行對(duì)比,缺少系統(tǒng)性的概括,本文將不同提取方法和不同品種食用真菌間的多糖得率和結(jié)構(gòu)進(jìn)行歸納總結(jié),便于篩選各食用真菌多糖的較優(yōu)提取方法和結(jié)構(gòu)特征,為食用真菌多糖深加工提供指導(dǎo)。

    2 不同提取方法對(duì)多糖得率和結(jié)構(gòu)的影響

    2.1 靈芝多糖

    靈芝多糖主要由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、巖藻糖、木糖和阿拉伯糖組成,其具有分子質(zhì)量和分支程度較高的三級(jí)結(jié)構(gòu)以及不同的組分,包括β-葡聚糖、雜β-葡聚糖、雜聚糖或α-甘露聚糖、β-葡聚糖組成的復(fù)合物。同型葡聚糖是由α-或β-連接的葡萄糖單元組成的主鏈為直鏈或支鏈聚合物,如(1→3)、(1→6)-β-葡聚糖和α-(1→3)-葡聚糖,可以以非支鏈β-(1→3)-連接主鏈或具有β-(1→6)分支的β-(1→3)連接主鏈;雜葡聚糖側(cè)鏈包含葡糖醛酸、木糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖或核糖作為主要成分或以不同形式組合。其他聚糖通常在主鏈中含有除葡萄糖以外的單元,根據(jù)主鏈的單糖組成可分為半乳聚糖、巖藻聚糖、木聚糖和甘露聚糖。雜聚糖側(cè)鏈包含阿拉伯糖、甘露糖、巖藻糖、半乳糖、木糖、葡萄糖和葡萄糖醛酸,它們以不同組合的形式存在。熱水提取的靈芝子實(shí)體多糖結(jié)構(gòu)為以β-糖苷鍵連接的雜聚糖,其中菌絲體多糖則是以α-D-(1→6)葡萄糖、α-D-葡萄糖、α-D-甘露糖為主鏈的雜多糖,單糖組成為葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖。子實(shí)體則由葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、甘露糖、木糖、果糖構(gòu)成。不同的提取方法對(duì)靈芝子實(shí)體的多糖組成也有差異,超聲提取下的靈芝子實(shí)體多糖并未發(fā)現(xiàn)木糖和果糖,但存在巖藻糖。如表1所示,靈芝多糖的超聲法提取得率比熱水法更低,可能由于該多糖受提取溫度影響大于超聲波功率[8],同時(shí)超聲提取時(shí)靈芝多糖更易被破壞降解,導(dǎo)致分子質(zhì)量降低[7]。

    表1 不同提取方法對(duì)靈芝多糖得率以及結(jié)構(gòu)的影響

    微波功率和提取時(shí)間對(duì)靈芝多糖得率影響較大,一般微波功率越大,提取時(shí)間越短產(chǎn)率越高,但熱穩(wěn)定性化合物可能受高功率微波的影響發(fā)生分解而降低了萃取效率。酶法提取靈芝多糖效果相對(duì)較好,不同種類的酶復(fù)配及用量、酶解條件等對(duì)得率有很大影響。木瓜蛋白酶、破壁酶、纖維素酶和果膠酶都對(duì)靈芝粗多糖的提取效果較好,這可能是由于這些酶促進(jìn)了細(xì)胞壁中果膠、纖維素等物質(zhì)的溶解,并導(dǎo)致多糖的溶出[9-10]。

    2.2 蟲(chóng)草多糖

    蟲(chóng)草是一種稀有食品,目前已分離出4種天然蟲(chóng)草多糖,第1種天然蟲(chóng)草多糖為葡聚糖,主鏈重復(fù)的骨架大多數(shù)是以α-(1→4)鍵連接的葡萄糖,分支點(diǎn)主要位于C6位,此外還含有(1→3)糖苷鍵連接的半乳糖和(1→2)鍵連接的甘露糖殘基,以及少量(1→6)和(1→4,6)連接的甘露糖殘基,端基為葡萄糖;第2種多糖主要為α-(1→2)-連接的甘露糖,分支點(diǎn)位于甘露糖殘基,支鏈部分由(1→3),(1→5),(1→4),(1→6)-半乳糖殘基組成,非還原端為半乳糖和甘露糖;第3、4種都通過(guò)堿法提取的,第3種為甘露聚糖,主鏈部分是以α-(1→6)-甘露糖殘基線性連接,在O-2和O-4位有分支,其中O-2與α-(1→2)-甘露糖殘基或半乳呋喃糖鏈相連,O-4與半乳呋喃糖鏈相連,分支的半乳糖鏈由β-(1→5)-半乳糖和β-(1→6)-半乳糖交替連接或以β-(1→6)-半乳糖殘基連接至甘露糖殘基的O-2和O-4位,端基為半乳糖;第4種是一種β-(1→3)-葡聚糖,在葡萄糖的C-6位置分支,端基為葡萄糖。在天然蟲(chóng)草子實(shí)體中提取得到的3種多糖主鏈均為α-1,4-葡萄糖,單糖組成以葡萄糖為主,并含有少量半乳糖和甘露糖。而菌絲體多糖的結(jié)構(gòu)較復(fù)雜,主要以1,4-葡萄糖和1,4-半乳糖為主鏈,由葡萄糖、半乳糖和甘露糖組成,以及少量的阿拉伯糖和半乳糖酸。

    當(dāng)然,因?yàn)榕c工業(yè)互聯(lián)網(wǎng)的差異太大,消費(fèi)互聯(lián)網(wǎng)翹楚們自知一下子接不上“話茬”,于是,一個(gè)似是而非的“產(chǎn)業(yè)互聯(lián)網(wǎng)”名詞就被用來(lái)替代“工業(yè)互聯(lián)網(wǎng)”。

    使用熱水法提取蟲(chóng)草多糖過(guò)程中若熱水溫度>70 ℃、時(shí)間>40 min會(huì)造成多糖水解并降低得率。與熱水提取法相比,微波與超聲法的多糖得率較高,但應(yīng)注意控制浸提時(shí)間和超聲功率[14]。超聲法利用空化作用使細(xì)胞破裂,但超聲波空穴作用會(huì)產(chǎn)生較強(qiáng)的剪切力,而當(dāng)超聲功率>105 W、超聲時(shí)間>40 min時(shí)會(huì)嚴(yán)重破壞蟲(chóng)草多糖的結(jié)構(gòu),并使其他雜質(zhì)溶出而導(dǎo)致多糖得率下降[15];而微波輻射能直接穿透真菌細(xì)胞介質(zhì),由于極性物質(zhì)在微波輻射過(guò)程中的強(qiáng)吸收作用,使多糖分子偶極矩發(fā)生變化并產(chǎn)生分子振動(dòng),從而加熱物料使得細(xì)胞內(nèi)部的水分氣化,產(chǎn)生的壓力能使真菌細(xì)胞壁破損,從而釋放真菌細(xì)胞中的多糖[16]。使用酶提取法提取蟲(chóng)草多糖是利用酶使組織細(xì)胞壁以及壁上的纖維素等物質(zhì)酶解提高得率,酸性蛋白酶效果優(yōu)于堿性蛋白酶,這可能由于在酸性條件下對(duì)蟲(chóng)草細(xì)胞破壞更大所導(dǎo)致[17]。

    冷熱水、微波、超聲、酶解提取蟲(chóng)草(菌絲體)多糖后對(duì)多糖的糖苷鍵和糖環(huán)的類別沒(méi)有顯著影響,其中微波和熱水提取法的多糖得率較高,但提取率為酶解和微波法較高,冷熱水的提取率較低;如表2所示,5種提取方法提取的蟲(chóng)草多糖分子質(zhì)量分布于4.2~2 940 kDa,分子質(zhì)量分布主要集中于極高分子質(zhì)量的多糖中(2 414~2 940 kDa),分子質(zhì)量大小為:微波>熱水>超聲>酶解>冷水,輔助提取后半乳糖和甘露糖的占比也隨之升高,酶法提取最高;黏度大小為:酶解>微波>熱水>超聲>冷水,以上結(jié)果表明通過(guò)加熱、微波等輔助手段的提取方式可能更容易破壞蟲(chóng)草組織細(xì)胞結(jié)構(gòu),促進(jìn)高分子質(zhì)量多糖的溶出,進(jìn)而影響多糖組分分布;其中微波、熱水和酶解處理可能會(huì)使蟲(chóng)草多糖的多螺旋結(jié)構(gòu)向單螺旋或片狀轉(zhuǎn)變,而超聲使其向介于螺旋形和片狀之間的結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變,總體而言對(duì)多糖結(jié)構(gòu)影響較小[18]。

    表2 不同提取方法對(duì)蟲(chóng)草多糖得率以及結(jié)構(gòu)的影響

    2.3 銀耳多糖

    多糖的主要結(jié)構(gòu)由單糖殘基的位置和序列、糖苷鍵的位置和手性決定,這些因素導(dǎo)致多糖結(jié)構(gòu)具有多樣性。銀耳多糖的主要結(jié)構(gòu)以α-D-甘露糖為主鏈,其中甘露糖C-2連接有β-D-木糖、β-D-葡萄糖醛酸和β-D-木二糖,該鏈具有左旋三螺旋對(duì)稱結(jié)構(gòu),此外連接有6個(gè)甘露糖殘基組成的支鏈;還有研究發(fā)現(xiàn)其多糖鏈?zhǔn)怯?1→3)連接的葡聚糖和(1→2)或(1→4)為主要糖苷鍵連接的甘露糖。銀耳子實(shí)體和菌絲體多糖在單糖組成上存在細(xì)微差別,銀耳子實(shí)體是以甘露糖為主鏈且有多個(gè)分支的酸性雜多糖,主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、木糖和巖藻糖組成;菌絲體多糖則是由α-(1→3)-D-甘露糖為主鏈,C2位上連有β-D-葡萄糖醛酸和β-(1→2)-D-木糖殘基,單糖組成為甘露糖、葡萄糖醛酸、木糖、半乳糖的吡喃型多糖。

    超聲提取的銀耳多糖不含還原糖、淀粉型多糖和蛋白質(zhì),部分組分含有糖醛酸[20];多糖的得率受提取次數(shù)影響較大,超聲處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)很容易使銀耳多糖結(jié)構(gòu)破壞,提取次數(shù)超過(guò)2次之后得率即開(kāi)始下降[21],這可能是由于超聲的空化作用導(dǎo)致多糖分子質(zhì)量降低。與熱水浸提法相比,超聲提取后銀耳多糖的單糖組成缺少巖藻糖且葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)變?yōu)橹行云咸烟?可能是由于超聲空化導(dǎo)致多糖糖苷鍵斷裂,進(jìn)而產(chǎn)生小分子質(zhì)量多糖所致[22]。

    高溫高壓法提取多糖時(shí),100 ℃的高溫有利于多糖的浸出,在2 h后趨于平緩,如表3所示,高溫高壓輔助提取銀耳多糖的效果優(yōu)于超聲波處理效果[21]。堿和酶法也可用于銀耳多糖的提取,多糖得率與堿濃度呈正相關(guān)性,堿處理有助于多糖的溶出,加入少量硼氫化鉀可防止堿對(duì)多糖結(jié)構(gòu)的降解;多糖得率:復(fù)合酶法>堿提法>水提法,且復(fù)合酶提取得率高于單一酶法提取[23];雖然酶法提取較為溫和,但提取過(guò)程由于需要考慮調(diào)整pH,可能會(huì)出現(xiàn)多糖提取液黏度增大、難過(guò)濾、蛋白質(zhì)雜質(zhì)較多等問(wèn)題[24],但銀耳多糖提取液在pH 4.5~10.5具有良好的酸堿穩(wěn)定性。

    表3 不同提取方法對(duì)銀耳多糖得率以及結(jié)構(gòu)的影響

    濕法打漿是部分真菌多糖提取方法的前處理步驟,但目前只在銀耳提取中應(yīng)用較多,暫無(wú)發(fā)現(xiàn)應(yīng)用于其他真菌多糖的提取。當(dāng)銀耳吸水膨脹后,組織結(jié)構(gòu)和質(zhì)地變得松軟,打漿機(jī)更易將組織細(xì)胞打碎從而溶出更多的多糖,濕法打漿能較好地保護(hù)銀耳多糖結(jié)構(gòu)。但由于銀耳吸水后的細(xì)胞組織膨大,加上其膠質(zhì)和糖類的溶解作用,導(dǎo)致打漿后的銀耳提取液變黏稠而過(guò)濾困難。為提高過(guò)濾的效率,可采用提高料液比或離心后再用200目濾網(wǎng)過(guò)濾的方式進(jìn)行處理,可減少溶液過(guò)濾而堵住濾孔。陳麗娟等[25]發(fā)現(xiàn)濕法打漿的得率是傳統(tǒng)熱水浸提法的2.2 倍,時(shí)間僅為其1/60,主要影響因素大小為:料液比>打漿時(shí)間>加水的溫度,濾渣中多糖含量?jī)H為(1.13±0.21)%,效能顯著提升,2種方法提取的銀耳多糖分子質(zhì)量十分相近。

    2.4 杏鮑菇多糖

    杏鮑菇多糖為一種吡喃型多聚糖,ZHENG等[29]從中分離了2種多糖,其中一種由(1→4)-D-葡萄糖、(1→3,4)-D-葡萄糖、(1→6)-D-半乳糖、(1→3)-D-甘露糖和端基葡萄糖組成,另一種由(1→4)-D-葡萄糖、(1→3,4)-D葡萄糖、(1→6)-D-半乳糖、(1→3,6)-D-甘露糖、(1→3)-D-甘露糖、(1→3)-D-葡萄糖和端基葡萄糖組成。杏鮑菇子實(shí)體和菌絲中多糖組成成分相同,但是摩爾比例卻有顯著差異,菌絲中葡萄糖摩爾比較高[29]。

    熱水提取的杏鮑菇多糖沒(méi)有蛋白質(zhì)和核酸,微波和熱水法提取杏鮑菇多糖得率相差不大,但微波提取時(shí)微波可穿透杏鮑菇細(xì)胞直接作用于內(nèi)部,加快杏鮑菇多糖從原料內(nèi)部向外部的界面擴(kuò)散和擴(kuò)散速度,增大多糖溶解度和介質(zhì)驅(qū)動(dòng)力,提取速度提高數(shù)倍[30]。

    石翛然[31]利用超聲法提取杏鮑菇多糖,發(fā)現(xiàn)超聲功率在200 W和溫度>60 ℃后得率變化不顯著,可能是由于多糖分子運(yùn)動(dòng)速率減小和分解作用造成。

    在溫和的提取條件下為了避免多糖被分解,可以使用酶來(lái)輔助提取多糖,凡軍民等[32]通過(guò)各單因素顯著性分析對(duì)纖維素酶提取杏鮑菇多糖的最佳工藝條件進(jìn)行優(yōu)化,試驗(yàn)表明隨著加水量的增大,多糖提取率也迅速增加,料液比在1∶30(g∶mL,下同)時(shí)基本達(dá)到最大。取1∶30為最優(yōu)料液比加酶,當(dāng)酶添加量為0.35%時(shí)多糖提取率達(dá)到最高,之后加酶量增加提取率保持不變,這可能是因?yàn)楫?dāng)酶添加量低于最佳酶量時(shí),杏鮑菇酶解不完全導(dǎo)致多糖溶出較少,當(dāng)酶添加量超過(guò)最佳時(shí),酶與底物接觸面積過(guò)剩反而降低了反應(yīng)速率。由此可得出料液比1∶30、酶添加量0.35%、酶解溫度50 ℃、酶解時(shí)間2 h、酶提一次為最優(yōu)提取條件,在該條件下多糖提取率可達(dá)到18.57%,各提取方法如表4所示。

    表4 不同提取方法對(duì)杏鮑菇多糖得率以及結(jié)構(gòu)的影響

    多糖的分子質(zhì)量和分子結(jié)構(gòu)是影響多糖功能性的主要因素,蝸牛酶是從蝸牛的嗦囊和消化道中制備的,含有纖維素酶、果膠酶、淀粉酶、蛋白酶等共20多種的復(fù)合酶,JIAO等[33]發(fā)現(xiàn)使用蝸牛酶法提取的杏鮑菇多糖為非均一性多糖,平均分子質(zhì)量為29.3 kDa;與熱水提取的多糖分子質(zhì)量相比有較大提升。REN等[34]從杏鮑菇子實(shí)體中得到的2種組分的多糖,分子質(zhì)量分別為25.4 kDa和463 kDa,且較高分子質(zhì)量多糖抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)效果較好,多糖結(jié)構(gòu)差異較大的原因可能是由于不同栽培品種、培養(yǎng)條件和提取程序的差異所致。

    2.5 金針菇多糖

    金針菇子實(shí)體多糖是由D-半乳糖、D-甘露糖、L-巖藻糖和D-葡萄糖組成的均一雜多糖,多糖主鏈由(1→2,4)-α-D-吡喃半乳糖、(1→6)-α-D-吡喃葡萄糖和(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖構(gòu)成,其中(1→4)-α-D-吡喃半乳糖上連接著(1→3)-α-D-吡喃甘露糖分支,以及連接在(1→3)-β-D-葡萄糖上的(1→6)-α-L-吡喃果糖分支。金針菇菌絲體中已分離提純出2種多糖,單糖組成和連接方式均不同,一種由葡萄糖、半乳糖、甘露糖組成,并以α-D-(1→4)糖苷鍵連接主鏈,且?guī)в笑?D-(1→6)分支;另一種結(jié)構(gòu)較復(fù)雜,多糖由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、巖藻糖組成,此外在葡萄糖端基碳具有α、β兩種構(gòu)型。

    熱水、超聲、微波和酶法提取后的金針菇多糖含有一定的蛋白質(zhì),但不含淀粉、還原糖、糖醛酸或多酚;多糖得率和蛋白含量基本呈正相關(guān)關(guān)系(微波>超聲波>熱水>酶解)[35]。超聲提取法提取金針菇多糖后,空化氣泡在粉末組織接觸點(diǎn)產(chǎn)生很強(qiáng)的擠壓力,使表面更易滲透破裂,并促進(jìn)擴(kuò)散過(guò)程,所產(chǎn)生的多糖得率、蛋白質(zhì)和糖醛酸含量較高,作用產(chǎn)生的瞬時(shí)高壓或剪切力可破壞金針菇多糖鏈的三螺旋結(jié)構(gòu)并降解為分子質(zhì)量多糖[36]。

    微波輔助酶法提取,利用微波深入滲透細(xì)胞,快速升高提取溫度;黃瓊等[4]使用微波輔助纖維素酶、果膠酶及2種復(fù)合酶混合物提取金針菇多糖,發(fā)現(xiàn)果膠酶效果更好,原因可能是果膠酶能破壞金針菇組織間質(zhì)中的胞間連結(jié)構(gòu)促進(jìn)多糖釋放。游麗君等[37]使用纖維素酶、果膠酶、內(nèi)切木聚糖酶、木瓜蛋白酶、胰酶分別作用于金針菇多糖,發(fā)現(xiàn)其中果膠酶和纖維素酶(特別是果膠酶)相比另外3種酶具有較好地特異性保護(hù)多糖主要組分片段,與原多糖具有相似的單糖組成,也說(shuō)明果膠酶很可能是單一作用于細(xì)胞壁而非多糖的機(jī)制提高多糖得率。不同提取方法的金針菇多糖得率以及結(jié)構(gòu)變化如表5所示。

    表5 不同提取方法對(duì)金針菇多糖得率以及結(jié)構(gòu)的影響

    濕法超微粉碎技術(shù)首先使用膠體磨對(duì)金針菇進(jìn)行膠磨,隨后85 ℃熱水提取90 min,其多糖得率較熱水提取工藝提高75 %,但在此基礎(chǔ)上再輔助超聲波或微波工藝則得率提高并不顯著;磨齒間隙越小越有利于細(xì)胞壁破壁,但植物細(xì)胞粒子太小會(huì)導(dǎo)致顆粒表面積吸附一部分金針菇多糖,磨齒間隙設(shè)置為42 μm時(shí)提取效果較優(yōu)[38]。

    2.6 香菇多糖

    具有三股螺旋構(gòu)象的香菇多糖重復(fù)單元不同于同樣具有三螺旋構(gòu)象真菌-裂褶菌(SchizophyllumcommuneFr)所產(chǎn)的胞外多糖。ZHANG等[40]發(fā)現(xiàn)香菇多糖是一種以β-(1→3)-D-葡聚糖為多糖,且每5個(gè)線性(1→3)-β-吡喃葡萄糖苷鍵中具有2個(gè)(1→6)-β-吡喃葡萄糖糖的分支;而裂褶菌多糖也是以β-(1→3)-D-葡聚糖為主鏈,但每3個(gè)β-(1→3)-D-吡喃葡萄糖苷具有一個(gè)β-(1→6)-D-吡喃葡萄糖苷的分支。香菇子實(shí)體和菌絲體所提取多糖的單糖組成成分差別不大,主要有葡萄糖、甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖。不同的品種存在細(xì)微差別,部分香菇子實(shí)體分離得到的多糖中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)鼠李糖成分。

    酸堿溶液相比熱水提取可顯著提高香菇多糖的得率,其中HCl濃度在0~0.4 mol/L,NaOH在0~0.8 mol/L時(shí)濃度與提取率呈正相關(guān),這可能由于酸堿可溶解大量單糖和其他物質(zhì)所致[41]。與超聲復(fù)合酶法相比,單純超聲提取的多糖得率較低,這可能由于在酶作用下其首先破壞細(xì)胞壁和組織,導(dǎo)致固液相的接觸表面積更大,進(jìn)而使溶劑更好地接觸細(xì)胞內(nèi)活性成分。ZHAO等[42]在采用單一超聲提取香菇多糖的過(guò)程中發(fā)現(xiàn),超聲功率對(duì)香菇多糖得率的影響最大,其次為提取時(shí)間和溫度。超聲復(fù)合酶法提取香菇多糖時(shí)先使用超聲處理將細(xì)胞震碎,隨后酶作用位點(diǎn)隨之暴露,有利于加速酶和底物的反應(yīng);同時(shí)利用超聲的空穴化作用將細(xì)胞進(jìn)一步震碎也能提高多糖得率,但超聲功率過(guò)大,其產(chǎn)生的熱效應(yīng)可能會(huì)影響酶的活性和得率;提取溫度對(duì)得率影響不顯著,在室溫(25 ℃)下就可以進(jìn)行提取,得到的香菇多糖可保持良好的DPPH清除活性[43]。

    LI等[44]利用高壓蒸煮法提取香菇多糖,與熱水法相比,高壓處理可以通過(guò)破壞氫鍵和疏水力來(lái)提高得率,但不會(huì)降解包括共價(jià)鍵在內(nèi)的主鏈,增強(qiáng)溶劑向原料的傳質(zhì),并改善可溶性成分,此處理得到的多糖分子質(zhì)量也較低,這可能由于分子團(tuán)聚體在高壓環(huán)境下溶解所致,但對(duì)多糖組成成分并無(wú)明顯差異。

    動(dòng)態(tài)高壓微射流技術(shù)是一種新興的動(dòng)態(tài)高壓剪切技術(shù),與高靜水技術(shù)壓不同,其可產(chǎn)生高速?zèng)_擊、高頻振動(dòng)、瞬時(shí)壓降、強(qiáng)剪切、空化和高達(dá)200 MPa的超高壓的合力;在提取香菇多糖時(shí)主要通過(guò)3個(gè)因素影響得率:(1)可能通過(guò)結(jié)合剪切、沖擊力和高頻振動(dòng)來(lái)提高傳質(zhì)速率和細(xì)胞破碎程度;(2)細(xì)胞內(nèi)外的壓力差增大導(dǎo)致溶劑通量增大并加快效率;(3)空化引起的植物細(xì)胞解體。如表6所示,與熱水提取法相比,此法提取后的多糖得率提高,但分子質(zhì)量由965.361 kDa降低為913.329 kDa,這可能是由于高壓機(jī)械力和空化作用導(dǎo)致的多糖降解,多糖表面變得更加松散[45]。

    表6 不同提取方法對(duì)香菇多糖得率以及結(jié)構(gòu)的影響

    2.7 猴頭菇多糖

    不同提取方法對(duì)猴頭菇多糖得率以及結(jié)構(gòu)的影響如表7所示。WANG等[47]報(bào)道了猴頭菇子實(shí)體中得到的多糖大多數(shù)是由2種或多種單糖組成的雜多糖,當(dāng)前的研究表明,雜多糖中廣泛存在(1→6)連接的α-D-吡喃半乳糖基骨架,并且分支通常由O-2位置的α-L-呋喃葡糖組成。并且還發(fā)現(xiàn)具有(1→6)-連接的β-D-吡喃葡萄糖基殘基作為主鏈并且具有(1→3)-連接的β-D-吡喃葡萄糖基支鏈的結(jié)構(gòu),其主要由巖藻糖、葡萄糖和半乳糖組成,某些品種含有少量的甘露糖。菌絲體的單糖組成成分和子實(shí)體有明顯差異,主要由阿拉伯糖、木糖、葡萄糖和半乳糖組成,其中半乳糖的含量比子實(shí)體高。猴頭菇的高分子質(zhì)量多糖具有較強(qiáng)的抗氧化活性和生物活性,此外甘露糖、阿拉伯糖和半乳糖的單糖組成也與其生物活性有關(guān)。

    單一酶法指提取時(shí)僅用一種酶輔助提取食用菌多糖,而復(fù)合酶法為多種酶聯(lián)合使用提取。張素斌等[48]分別采用2種酶法分別提取猴頭菇多糖,單一木瓜蛋白酶加酶量為0.5%,溫度50 ℃,提取時(shí)間90 min,pH 4,多糖提取率為9.77%;復(fù)合酶的加酶量為纖維素酶、木瓜蛋白酶、果膠酶各0.5%,其他相同條件下提取率提高至10.89%。ZHU等[49]使用復(fù)合酶法提取猴頭菇多糖時(shí)發(fā)現(xiàn),與熱水法相比得率可提高67.72%,產(chǎn)生的多糖為陽(yáng)性(熱水提取為陰性),但不改變基團(tuán)結(jié)構(gòu);可能由于適宜的pH值對(duì)酶空間結(jié)構(gòu)、構(gòu)象和活性有影響,由分支和相互纏結(jié)的構(gòu)象轉(zhuǎn)變?yōu)楦L(zhǎng)的多糖鏈并增加了分子柔韌性,這種變化是由葡萄糖的船-椅式構(gòu)象轉(zhuǎn)變所引起,此外酶的種類如細(xì)胞壁降解酶會(huì)削弱或破壞細(xì)胞壁(即纖維素),使細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)更易于提取;相比熱水浸提法復(fù)合酶提取后產(chǎn)物中有較高比例的葡萄糖,而甘露糖和木糖的比例減少;對(duì)酶輔助提取得率的影響因素相對(duì)大小為:pH>溫度>時(shí)間>酶濃度。超聲復(fù)合酶法為在復(fù)合酶法的基礎(chǔ)上輔助增加超聲條件,超聲的聲空化作用有利于單一復(fù)合酶法的提取,提取率由10.89%提高至15.59%[48]。

    多糖可溶于水、酸、堿,而不溶于乙醇、甲醇等有機(jī)溶劑,通過(guò)不同溶劑提取對(duì)多糖結(jié)構(gòu)也具有影響。YAN等[50]對(duì)不同溶劑提取猴頭菇多糖的效果進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)在相同的提取時(shí)間和溫度下堿提法優(yōu)于酸提法,特別是在95 ℃時(shí)可溶性長(zhǎng)鏈多糖降解為短鏈的酸水解作用較強(qiáng),短鏈游離糖可能不會(huì)被乙醇所沉淀;堿提過(guò)程中的堿可破壞細(xì)胞壁中纖維素與半纖維素之間的氫鍵,使不溶性多糖轉(zhuǎn)化為可溶性,以上2種情況都導(dǎo)致酸提法的得率較低,并且不同的萃取溶劑對(duì)多糖組成成分的影響不大,差別可能是由于原料來(lái)源和提取方法。不同溶劑提取的猴頭菇多糖都有2個(gè)主要的組分,如表7所示,熱水提取法的2種多糖組分分子質(zhì)量分別為597.6和314.7 kDa,鹽提法為449.4和442.7 kDa,酸提法為263.6和229.8 kDa,堿提法為320.8和256.8 kDa;酸堿提取的多糖具有更高的蛋白質(zhì)含量,此外分子質(zhì)量和黏度明顯低于熱水和鹽提取法,表明在此過(guò)程中多糖鏈可能受到一定程度的破壞和降解,一部分高分子質(zhì)量組分轉(zhuǎn)化為低分子質(zhì)量組分,從而增加了猴頭菇多糖中低分子質(zhì)量組分的含量;不同溶劑提取對(duì)猴頭菇多糖的有機(jī)基團(tuán)并無(wú)顯著影響[50]。

    表7 不同提取方法對(duì)猴頭菇多糖得率以及結(jié)構(gòu)的影響

    3 結(jié)論

    真菌多糖作為真菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)性成分存在,由2種主要類型的多糖組成:一種是由幾丁質(zhì)(或纖維素)組成的剛性原纖維結(jié)構(gòu),另一種是由α-葡聚糖、β-葡聚糖和糖蛋白組成的基質(zhì)樣結(jié)構(gòu)。不同提取方法提取的真菌多糖,由于提取工藝的差異對(duì)多糖得率、分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)等因素具有不同影響。與熱水和酶法相比,超聲和微波提取具有更高的效率、產(chǎn)量和更短的提取時(shí)間。超聲波提取法主要利用聲空化產(chǎn)生的氣穴氣泡的高強(qiáng)度沖擊作用力產(chǎn)生強(qiáng)烈的壓力、剪切力和溫度梯度作用于細(xì)胞,使真菌細(xì)胞壁和糖鏈斷裂,對(duì)大多數(shù)真菌多糖而言,超聲處理可較好地提高效率,但在得率上具有差異,如銀耳多糖較高,但對(duì)靈芝多糖作用不大,可能由于靈芝多糖受溫度影響較大。微波輔助提取技術(shù)可穿透萃取介質(zhì),直接作用于物質(zhì)內(nèi)部,使材料內(nèi)部累積了相當(dāng)大的壓力,這種高壓極大地破壞真菌細(xì)胞并改善組織的毛細(xì)孔結(jié)構(gòu),增大了多糖溶解度并加速目標(biāo)物質(zhì)的擴(kuò)散,微波功率對(duì)得率的影響比提取溫度和時(shí)間等因素更大,此方法對(duì)金針菇多糖提取較為有效。酶法提取主要為酶對(duì)真菌細(xì)胞壁組織的酶解和多糖溶出作用,加速目標(biāo)化合物從組織向周圍環(huán)境的遷移并增加接觸面積,是最溫和且多糖保留較好的一種方式,有趣的是蛋白酶對(duì)真菌多糖也具有一定的效果,如木瓜和酸性蛋白酶分別對(duì)靈芝和蟲(chóng)草多糖的提取效果較好,對(duì)杏鮑菇而言則是纖維素酶較好等;當(dāng)酶復(fù)配使用時(shí)要注意各種酶的加酶量,過(guò)多也可能會(huì)導(dǎo)致多糖分解,此外特別需要注意溫度、時(shí)間和最適pH值,才能發(fā)揮最大提取效能。酸堿可降解多糖中的鏈和鍵,增加多糖溶解率等,但采用酸法提取時(shí)溫度不宜過(guò)高,酸性多糖或糖醛酸含量高的多糖可采用堿提取法,適量濃度的堿能破除細(xì)胞壁聚合物分子間的結(jié)構(gòu),但過(guò)高濃度會(huì)造成多糖水解。酸堿法提取香菇多糖的得率最高,提取效果取決于酸堿濃度,香菇多糖堿濃度為0.8 mol/L、酸為0.4 mol/L,猴頭菇最適堿濃度為1.25 mol/L;采用這些提取方法效率比傳統(tǒng)熱水提取的得率更高,所得多糖的生物活性和自由基清除能力等也會(huì)相對(duì)提高,但是相對(duì)分子質(zhì)量有所降低。

    食用菌多糖在臨床治療疾病具有重要作用,這需要多糖具有較高的活性,因此如何獲得具有更高活性的多糖還需要進(jìn)一步的研究。目前用于藥用的真菌多糖大部分為單一多糖,各多糖間的協(xié)同作用也是今后研究的方向之一。

    猜你喜歡
    酶法半乳糖熱水
    思維與智慧·下半月(2022年5期)2022-05-17 00:54:54
    高層建筑的熱水供暖系統(tǒng)設(shè)計(jì)
    多喝熱水
    花火彩版A(2021年2期)2021-09-10 07:22:44
    和讓你“多喝熱水”的男孩結(jié)婚
    海峽姐妹(2020年2期)2020-03-03 13:36:40
    澤蘭多糖對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化作用
    中成藥(2018年8期)2018-08-29 01:28:24
    黃芩-黃連藥對(duì)防治D-半乳糖癡呆小鼠的作用機(jī)制
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:11
    α-生育酚琥珀酸酯的酶法合成研究進(jìn)展
    半乳糖凝集素-3與心力衰竭相關(guān)性
    酶法制備大豆多肽及在醬油發(fā)酵中的應(yīng)用
    Sn-2二十二碳六烯酸甘油單酯的酶法合成
    亚洲精品久久成人aⅴ小说| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 欧美激情高清一区二区三区| 一区二区日韩欧美中文字幕| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲 国产 在线| 久久久久久久久免费视频了| 一区二区三区精品91| 久久久欧美国产精品| 久久人人爽人人片av| 欧美中文综合在线视频| 久久人妻熟女aⅴ| 国产xxxxx性猛交| 老司机靠b影院| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 咕卡用的链子| 女人精品久久久久毛片| 亚洲国产精品999| 妹子高潮喷水视频| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 久久九九热精品免费| 午夜福利,免费看| 国产亚洲av高清不卡| 亚洲国产精品一区三区| 国产黄色免费在线视频| 欧美人与善性xxx| 欧美 日韩 精品 国产| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲欧洲国产日韩| 看十八女毛片水多多多| 日本五十路高清| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 日韩av免费高清视频| 18在线观看网站| 亚洲精品美女久久av网站| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| av福利片在线| 一级片免费观看大全| 国产在线视频一区二区| 赤兔流量卡办理| 99国产精品一区二区三区| 成人国产av品久久久| 欧美精品一区二区大全| 国产伦理片在线播放av一区| 18禁观看日本| 最近手机中文字幕大全| 一本色道久久久久久精品综合| 高清黄色对白视频在线免费看| 夫妻性生交免费视频一级片| 免费看av在线观看网站| 中文字幕av电影在线播放| 亚洲欧洲国产日韩| 国产福利在线免费观看视频| 日韩制服骚丝袜av| 国产在线免费精品| videos熟女内射| a 毛片基地| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 亚洲av成人精品一二三区| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 精品久久蜜臀av无| 电影成人av| 国产在线视频一区二区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲国产精品成人久久小说| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 少妇人妻 视频| 嫁个100分男人电影在线观看 | 久久综合国产亚洲精品| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产精品国产三级专区第一集| 欧美激情极品国产一区二区三区| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲三区欧美一区| 亚洲国产最新在线播放| 欧美国产精品一级二级三级| 两人在一起打扑克的视频| 这个男人来自地球电影免费观看| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 欧美激情极品国产一区二区三区| 亚洲专区中文字幕在线| 大片免费播放器 马上看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 在线av久久热| 欧美精品一区二区免费开放| 日本色播在线视频| 亚洲人成电影免费在线| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲av日韩在线播放| 久久天堂一区二区三区四区| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 无限看片的www在线观看| 男女边吃奶边做爰视频| 免费在线观看黄色视频的| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲成人国产一区在线观看 | 免费观看人在逋| 在线精品无人区一区二区三| 日本91视频免费播放| 韩国高清视频一区二区三区| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲精品国产色婷婷电影| 少妇人妻 视频| 国产精品国产三级专区第一集| 波野结衣二区三区在线| 18禁国产床啪视频网站| 在线观看免费视频网站a站| www日本在线高清视频| 亚洲,一卡二卡三卡| 精品高清国产在线一区| 男男h啪啪无遮挡| 我要看黄色一级片免费的| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 中文字幕色久视频| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 国产人伦9x9x在线观看| 午夜福利免费观看在线| 欧美日韩亚洲高清精品| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 中文欧美无线码| 欧美xxⅹ黑人| 黄色一级大片看看| 久久亚洲精品不卡| av天堂在线播放| 国产成人欧美| 男人爽女人下面视频在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 男女高潮啪啪啪动态图| 操美女的视频在线观看| 制服诱惑二区| 国产福利在线免费观看视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 国产视频一区二区在线看| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲九九香蕉| 欧美激情极品国产一区二区三区| 香蕉丝袜av| 成人手机av| 性少妇av在线| 午夜激情久久久久久久| 黄频高清免费视频| 捣出白浆h1v1| a级片在线免费高清观看视频| 美女午夜性视频免费| 在线观看人妻少妇| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 久久久国产欧美日韩av| 午夜福利视频在线观看免费| 亚洲第一av免费看| 自线自在国产av| 亚洲三区欧美一区| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 中国国产av一级| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 晚上一个人看的免费电影| 国产精品免费大片| 亚洲人成77777在线视频| 激情视频va一区二区三区| 啦啦啦在线观看免费高清www| 亚洲精品美女久久av网站| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲av男天堂| 免费高清在线观看日韩| 亚洲图色成人| 欧美性长视频在线观看| 欧美日韩综合久久久久久| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 欧美xxⅹ黑人| 男的添女的下面高潮视频| 久久性视频一级片| 男女下面插进去视频免费观看| 国产高清不卡午夜福利| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 男人爽女人下面视频在线观看| 操出白浆在线播放| 亚洲精品一二三| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲国产av新网站| 国产欧美亚洲国产| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 日韩中文字幕视频在线看片| 老司机影院毛片| 亚洲精品一区蜜桃| 99久久综合免费| 日本wwww免费看| 91国产中文字幕| 又大又爽又粗| 国产黄色免费在线视频| 日韩一本色道免费dvd| 人成视频在线观看免费观看| 91国产中文字幕| 在线观看免费日韩欧美大片| 免费观看a级毛片全部| 亚洲国产av影院在线观看| 日韩av免费高清视频| 看免费av毛片| 午夜91福利影院| 欧美乱码精品一区二区三区| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产精品久久久久成人av| 日韩免费高清中文字幕av| 欧美乱码精品一区二区三区| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 欧美日韩精品网址| 久久久久久人人人人人| 999精品在线视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 欧美日韩黄片免| 欧美日韩亚洲高清精品| 韩国精品一区二区三区| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产av一区二区精品久久| 国产精品国产av在线观看| 国产免费现黄频在线看| 亚洲av美国av| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 亚洲av美国av| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产亚洲欧美在线一区二区| 成人免费观看视频高清| 老司机影院毛片| 亚洲欧美一区二区三区黑人| av网站免费在线观看视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 久久久国产一区二区| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 男女国产视频网站| 中国国产av一级| 久久99热这里只频精品6学生| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 午夜福利影视在线免费观看| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 婷婷色综合大香蕉| 久久久久精品国产欧美久久久 | 亚洲久久久国产精品| 欧美人与善性xxx| 亚洲成色77777| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产黄色视频一区二区在线观看| 秋霞在线观看毛片| 悠悠久久av| 纯流量卡能插随身wifi吗| 久久久久久人人人人人| 亚洲精品一二三| 国产伦人伦偷精品视频| 69精品国产乱码久久久| 亚洲欧洲国产日韩| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 热re99久久国产66热| 亚洲欧美一区二区三区国产| 成人国产一区最新在线观看 | 国产国语露脸激情在线看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产高清videossex| 天堂8中文在线网| 国精品久久久久久国模美| 一级毛片我不卡| 成年人午夜在线观看视频| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国精品久久久久久国模美| 国产1区2区3区精品| 看免费av毛片| av网站在线播放免费| 亚洲av男天堂| 视频区图区小说| 大码成人一级视频| 国产精品一区二区在线不卡| 久久久久久久精品精品| 色播在线永久视频| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产亚洲一区二区精品| 嫩草影视91久久| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲伊人色综图| 一区二区日韩欧美中文字幕| 最近中文字幕2019免费版| 日本午夜av视频| 国产人伦9x9x在线观看| 精品一区二区三区av网在线观看 | 久久国产精品人妻蜜桃| 中文字幕高清在线视频| 国产片特级美女逼逼视频| 在线观看www视频免费| 老熟女久久久| 美女中出高潮动态图| a级片在线免费高清观看视频| 国产精品.久久久| 满18在线观看网站| 99久久精品国产亚洲精品| 国产男人的电影天堂91| www.熟女人妻精品国产| 超碰成人久久| 涩涩av久久男人的天堂| 国产有黄有色有爽视频| 最黄视频免费看| 午夜免费鲁丝| 亚洲精品在线美女| 亚洲精品一二三| a级毛片在线看网站| 男女边摸边吃奶| 久久国产精品人妻蜜桃| 老汉色∧v一级毛片| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 99精品久久久久人妻精品| av国产精品久久久久影院| 飞空精品影院首页| 精品国产乱码久久久久久男人| 成年女人毛片免费观看观看9 | 欧美日韩视频精品一区| 国产男女内射视频| 热re99久久国产66热| 国产一级毛片在线| 考比视频在线观看| 欧美精品一区二区大全| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲精品av麻豆狂野| 水蜜桃什么品种好| 男人舔女人的私密视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 亚洲中文字幕日韩| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲成色77777| 免费在线观看黄色视频的| 久久精品久久精品一区二区三区| netflix在线观看网站| av天堂在线播放| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲黑人精品在线| 777米奇影视久久| 一区二区三区乱码不卡18| 久久久久久免费高清国产稀缺| av视频免费观看在线观看| 国产av精品麻豆| 少妇人妻久久综合中文| 人人澡人人妻人| 欧美日韩av久久| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲成色77777| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 99国产精品一区二区三区| 国产一卡二卡三卡精品| 日韩伦理黄色片| 亚洲中文日韩欧美视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲av日韩在线播放| 精品少妇久久久久久888优播| 精品亚洲成国产av| 亚洲人成77777在线视频| 极品人妻少妇av视频| 黄色怎么调成土黄色| 秋霞在线观看毛片| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 最黄视频免费看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 成年人免费黄色播放视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲精品av麻豆狂野| 好男人电影高清在线观看| 国产欧美亚洲国产| 成人黄色视频免费在线看| 国产成人av激情在线播放| 在线观看www视频免费| 免费在线观看完整版高清| 国产黄色免费在线视频| www.熟女人妻精品国产| 黄色视频在线播放观看不卡| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 大话2 男鬼变身卡| 久久久久视频综合| 大片免费播放器 马上看| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲久久久国产精品| 欧美黄色片欧美黄色片| 黄频高清免费视频| 国产亚洲欧美精品永久| 咕卡用的链子| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 男女之事视频高清在线观看 | 黄色毛片三级朝国网站| 丝袜喷水一区| 国产黄色免费在线视频| av国产久精品久网站免费入址| 另类亚洲欧美激情| 日韩大码丰满熟妇| 在线av久久热| 国产精品熟女久久久久浪| 欧美97在线视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产男人的电影天堂91| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲第一av免费看| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲精品自拍成人| 高清不卡的av网站| 亚洲国产精品国产精品| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 黄片小视频在线播放| 99香蕉大伊视频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 中国美女看黄片| 校园人妻丝袜中文字幕| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 色94色欧美一区二区| xxx大片免费视频| 97精品久久久久久久久久精品| a级片在线免费高清观看视频| 麻豆av在线久日| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久久久久久国产电影| 老司机影院毛片| 777米奇影视久久| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 久久鲁丝午夜福利片| av片东京热男人的天堂| 国产精品久久久久久精品电影小说| 赤兔流量卡办理| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲中文字幕日韩| 久久中文字幕一级| 日韩中文字幕视频在线看片| 下体分泌物呈黄色| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| xxx大片免费视频| 日韩一区二区三区影片| 国产精品.久久久| 国产精品亚洲av一区麻豆| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲国产精品999| 国产精品三级大全| 99国产精品99久久久久| 免费少妇av软件| 亚洲一码二码三码区别大吗| 美女扒开内裤让男人捅视频| 韩国高清视频一区二区三区| 久久鲁丝午夜福利片| 中文字幕人妻熟女乱码| 丰满少妇做爰视频| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲精品av麻豆狂野| 午夜免费成人在线视频| 男女下面插进去视频免费观看| av天堂久久9| 18禁观看日本| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 亚洲精品久久午夜乱码| 美女视频免费永久观看网站| 久久女婷五月综合色啪小说| 精品欧美一区二区三区在线| 久久国产精品影院| 亚洲中文av在线| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| a级毛片黄视频| 18禁国产床啪视频网站| 欧美日韩一级在线毛片| 一本久久精品| 考比视频在线观看| 麻豆国产av国片精品| 91九色精品人成在线观看| 精品视频人人做人人爽| 国产成人影院久久av| 久久精品久久精品一区二区三区| 亚洲国产精品国产精品| 国产福利在线免费观看视频| 一边亲一边摸免费视频| 热re99久久精品国产66热6| 国产成人精品在线电影| av网站在线播放免费| 久久精品久久久久久久性| 女人久久www免费人成看片| 一本色道久久久久久精品综合| 老司机在亚洲福利影院| 99国产精品免费福利视频| 性少妇av在线| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲av美国av| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| √禁漫天堂资源中文www| 少妇 在线观看| 女性生殖器流出的白浆| 久久久久国产一级毛片高清牌| 欧美成人午夜精品| 视频区欧美日本亚洲| 国产男女内射视频| 美女视频免费永久观看网站| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 嫩草影视91久久| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲国产精品一区三区| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 69精品国产乱码久久久| 亚洲精品av麻豆狂野| 精品亚洲成国产av| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产成人系列免费观看| 免费高清在线观看视频在线观看| av在线播放精品| 精品国产一区二区三区四区第35| 久久精品亚洲av国产电影网| 国产1区2区3区精品| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产精品国产三级专区第一集| 久久国产亚洲av麻豆专区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 国产精品.久久久| 国产男女内射视频| 少妇粗大呻吟视频| 日韩av不卡免费在线播放| 日日夜夜操网爽| 欧美变态另类bdsm刘玥| 婷婷色综合大香蕉| 久久久久网色| 看免费成人av毛片| 亚洲欧洲日产国产| 午夜免费成人在线视频| 国产一区二区三区av在线| 女性被躁到高潮视频| 美女高潮到喷水免费观看| 一级毛片电影观看| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲五月婷婷丁香| 在现免费观看毛片| 99re6热这里在线精品视频| 国产男女内射视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 久久久国产精品麻豆| 国精品久久久久久国模美| 少妇被粗大的猛进出69影院| 性少妇av在线| 欧美成人精品欧美一级黄| 婷婷色麻豆天堂久久| 欧美乱码精品一区二区三区| 午夜福利,免费看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 老司机靠b影院| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲国产精品999| 成人三级做爰电影| 纯流量卡能插随身wifi吗| 中国美女看黄片| 五月天丁香电影| 男女免费视频国产| 中文字幕高清在线视频| 尾随美女入室| 国产片内射在线| 国产成人系列免费观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产日韩欧美视频二区| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 久久影院123| 一区福利在线观看| 久久这里只有精品19| 久久久精品区二区三区| 国产精品 国内视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 90打野战视频偷拍视频| 色视频在线一区二区三区| 成年动漫av网址| 成人国产av品久久久| 亚洲av电影在线进入| 欧美乱码精品一区二区三区| 99re6热这里在线精品视频| 国产成人啪精品午夜网站| 久久久欧美国产精品| 国产成人av激情在线播放| 美女高潮到喷水免费观看| 精品国产国语对白av| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 啦啦啦在线免费观看视频4| 五月开心婷婷网| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产一区二区激情短视频 | 久久久久精品国产欧美久久久 | 99九九在线精品视频| 黄色一级大片看看| 亚洲,一卡二卡三卡| www.av在线官网国产| 久久久久久久精品精品| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 两个人看的免费小视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲精品乱久久久久久| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产一级毛片在线| 欧美日韩视频精品一区| 婷婷色av中文字幕| 久久精品亚洲av国产电影网| 亚洲三区欧美一区| 国产精品偷伦视频观看了| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 一区二区三区乱码不卡18|