羥苯磺酸鈣藥物濃度對肌氨酸氧化酶法檢測肌酐的干擾試驗分析

錢 芳,陳 玉

1.江蘇省宿遷市泗洪縣人民醫(yī)院檢驗科，江蘇宿遷 223900；2.江蘇省宿遷市泗洪縣中醫(yī)院檢驗科，江蘇宿遷 223900

血清肌酐是評價腎小球濾過功能的有效指標(biāo)，能夠監(jiān)測腎功能，可作為臨床腎衰竭患者的主要透析指標(biāo)，因此，肌酐測定水平的可靠性對臨床診斷和治療有非常重要的意義。肌酐檢測的方法有多種，主要有苦味酸法(Jaffe法)、酶法和高效液相色譜法。Jaffe法主要缺點是特異度不高，存在“假肌酐”的干擾且試劑的穩(wěn)定性差，定標(biāo)周期短；酶法的特異度比較高，試劑的穩(wěn)定性好；高效液相色譜法特異度高、準(zhǔn)確性好，但不適合作為常規(guī)方法，一般用作參考方法[1]。目前，多家醫(yī)院檢測肌酐一般采用酶法，其試劑主要成分是肌氨酸氧化酶，但近年來有報道顯示羥苯磺酸鈣對此法有干擾作用[2]。作者于2021年3月20日遇見1例由于口服羥苯磺酸鈣導(dǎo)致血清肌酐檢測結(jié)果假性降低案例，為進(jìn)一步研究羥苯磺酸鈣對此方法學(xué)的干擾程度，本研究收集10份不同肌酐水平的新鮮血清(10例患者均未服用羥苯磺酸鈣)標(biāo)本，并進(jìn)行了相關(guān)性研究和分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

1.1.1標(biāo)本來源 收集10份不同肌酐水平的新鮮血清標(biāo)本，無溶血、無黃疸、無脂血。

1.1.2干擾藥物 羥苯磺酸鈣，每粒0.5 g，由上海朝暉藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.2儀器與試劑 儀器為日立7600全自動生化分析儀，肌氨酸氧化酶肌酐試劑為浙江金華市生物科技有限公司產(chǎn)品，校準(zhǔn)品為配套校準(zhǔn)品，質(zhì)控品為貝克曼公司質(zhì)控品。

1.3方法

1.3.1羥苯磺酸鈣配制 取0.5 g羥苯磺酸鈣溶于500 mL去離子水中，配成濃度為1 000 mg/L備用，再按比例稀釋成800、600、400、200、100 mg/L。

1.3.2含干擾物的標(biāo)本制備 各種濃度的羥苯磺酸鈣溶液與被測肌酐血清分別按1∶19稀釋(干擾溶液10 μL+血清190 μL)，配制一系列含相應(yīng)濃度的羥苯磺酸鈣實驗血清 (50、40、30、20、10、5 mg/L)。

1.3.3參照標(biāo)準(zhǔn) 相對偏倚=(實驗樣品均值-對照樣品均值)/對照樣品均值×100%，根據(jù)文獻(xiàn)[3]生物變異和參考美國 CLIA′88 能力比對檢驗的分析質(zhì)量要求肌酐的可接受范圍為15%[2]，按照1/2偏差7.5%作為干擾試驗的可接受標(biāo)準(zhǔn)，>7.5%為有干擾。

1.3.4檢測過程 試劑用配套校準(zhǔn)品校準(zhǔn)，當(dāng)日質(zhì)控均在控，未加干擾物的原血清為對照樣品，加一系列干擾物的為實驗樣品，上機檢測，每份標(biāo)本均測量3次。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用Excel 2010繪制表格，采用SPSS23.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理。 以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1相對偏倚 本研究發(fā)現(xiàn)，實驗樣品加入羥苯磺酸鈣濃度越大，其肌酐水平與對照樣品均值相差越大，干擾就越嚴(yán)重，相對偏倚也越大，并呈負(fù)向干擾，見表1。

表1 羥苯磺酸鈣濃度對肌酐水平的干擾(相對偏倚)

2.2相關(guān)性分析 10份不同肌酐水平血清標(biāo)本經(jīng)Pearson相關(guān)分析，其r值均為負(fù)值，并接近-1，隨著干擾物(羥苯磺酸鈣溶液)濃度不斷增大，干擾越嚴(yán)重，且呈負(fù)向干擾(-1

表2 加入不同濃度羥苯磺酸鈣溶液后相關(guān)性分析

3 討 論

目前，我國檢測肌酐的主要方法有Jaffe法和酶法，因Jaffe法的特異度較差，血液中的蛋白質(zhì)、乙酰乙酸、丙酮、葡萄糖等物質(zhì)可與苦味酸發(fā)生反應(yīng)，使結(jié)果假性偏高，并且對環(huán)境影響較大，所以大多數(shù)都選擇酶法中的肌氨酸氧化酶法，其具有特異度高和很強的抗干擾能力的特點[4]，血清肌酐的檢測結(jié)果會受很多因素，特別是藥物的干擾，且不同藥物對不同檢測方法的干擾方向也不同[5]。目前，泗洪縣人民醫(yī)院仍采用Jaffe法，作者曾遇見1例由于口服羥苯磺酸鈣導(dǎo)致血清肌酐檢測結(jié)果假性降低案例。2021年3月20日，作者接到1例患者反饋，3 d前在外地一家醫(yī)院檢查腎功能顯示肌酐正常，而到泗洪縣人民醫(yī)院檢查高于正常值，為265 μmol/L，尿素氮、尿酸、胱抑素C、β2-微球蛋白結(jié)果也偏高，但是肝功能正常，血糖偏高。當(dāng)即查看標(biāo)本無異常，復(fù)檢，肌酐結(jié)果為262 μmol/L。詢問患者病史，得知該患者為慢性腎病，于1周前開始口服羥苯磺酸鈣，考慮是否為羥苯磺酸鈣對肌氨酸氧化酶法檢測肌酐產(chǎn)生干擾。因為不知道患者之前就診醫(yī)院肌酐檢測方法，無從考證。得知泗洪縣中醫(yī)院檢驗科用的酶法，當(dāng)即將此患者標(biāo)本轉(zhuǎn)運過去，測得肌酐水平為103 μmol/L。關(guān)于羥苯磺酸鈣對肌氨酸氧化酶法檢測肌酐的干擾，有文獻(xiàn)報道，羥苯磺酸鈣具有調(diào)節(jié)微血管的生理功能，是臨床上治療微血管循環(huán)障礙的常見藥物[6]，對糖尿病引起的視網(wǎng)膜病變、微循環(huán)障礙引起的心、腦、腎疾病等均有治療作用[7-8]，因此，其廣泛用于糖尿病微血管病變、糖尿病腎病、慢性腎功能不全等的治療。健康人口服500 mg羥苯磺酸鈣后，約4 h達(dá)到血藥濃度峰值(13 mg/L),消除半衰期約為5 h，腎功能正?；颊?4 h血藥濃度均在6 μg/mL以上，所以服藥期間采血對肌氨酸氧化酶法均會有干擾。其干擾機制可能與羥苯磺酸鈣的還原性有關(guān)，其消耗了肌氨酸氧化酶反應(yīng)中參與Tinder反應(yīng)的H2O2，抑制了紅色醌亞胺化合物的氧化顯色[9]，造成假性降低。為此，原中華人民共和國衛(wèi)生部臨床檢驗中心還做了此方面的調(diào)研，對羥苯磺酸鈣對肌氨酸氧化酶法檢測肌酐的干擾引起了重視，其濃度越大干擾越嚴(yán)重[10]，本研究也得到了證實。

當(dāng)臨床上發(fā)生肌酐水平與臨床病情不符時，要考慮藥物的干擾，對于腎功能不全患者用藥后結(jié)果出現(xiàn)差異，若與其他同期腎功能指標(biāo)不符時，審核報告時要謹(jǐn)慎，與臨床做好溝通，有條件時改用其他方法復(fù)核[11]。