南充地區(qū)牛病毒性腹瀉病的分子流行病學(xué)調(diào)查及防控措施

王懷禹，劉強(qiáng)，李彩虹，龍冬梅，魏玲

摘要：為了解四川南充地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)牛病毒性腹瀉病的感染情況，通過隨機(jī)采集來自8個(gè)縣（市、區(qū)）的不同規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)、不同用途、不同飼養(yǎng)方式等牛的血清共計(jì)1，000份，進(jìn)行牛病毒性腹瀉抗體水平檢測(cè)。結(jié)果顯示，牛血清抗體平均陽性率為18.53%，證實(shí)南充地區(qū)調(diào)查牛場(chǎng)牛群普遍存在牛病毒性腹瀉病感染。由此初步了解了本地區(qū)牛病毒性腹瀉病感染和流行病學(xué)特點(diǎn)，為該病防控提供理論依據(jù)，逐步實(shí)現(xiàn)該疫病凈化的目的。

關(guān)鍵詞：牛病毒性腹瀉;分子流行病學(xué);調(diào)查;防控措施

牛病毒性腹瀉?。╞ovine viral diamhe，BVD）是牛場(chǎng)一種最為常見的傳染病，臨床上該病病原是牛病毒性腹瀉病毒（bovine viral diamhe virus，BVDV），BVDV能夠感染牛羊、豬、駱駝、鹿等多種動(dòng)物，但臨床上牛最為易感[1]。BVDV屬黃病毒科瘟病毒屬，可進(jìn)行母嬰傳播等垂直傳播，也可進(jìn)行水平傳播如飛沫傳播等，牛感染后多為隱性感染，主要表現(xiàn)為犢牛腹瀉、急慢性膜病、母畜流產(chǎn)、產(chǎn)死胎或畸形胎等[2]。臨床上該病常持續(xù)感染和混合感染，引發(fā)機(jī)體免疫耐受、免疫抑制，給養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴(yán)重危害。當(dāng)前BVD在全世界尤其是畜牧業(yè)相對(duì)發(fā)達(dá)地區(qū)廣泛流行及傳播，是危害全球養(yǎng)牛業(yè)的重大經(jīng)濟(jì)性疾病和免疫抑制性疾病。BVD被世界衛(wèi)生組織定為B類傳染病，我國(guó)在進(jìn)出口檢疫中將其定為二類傳染病[3]。我國(guó)自1980年首次分離出BVDV以來，該病在我國(guó)養(yǎng)殖場(chǎng)普遍存在，并且陽性率逐漸呈遞增趨勢(shì)。根據(jù)已報(bào)道的BVDV流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，新疆北疆部分集約化奶牛場(chǎng)、福建省部分規(guī)模牛場(chǎng)、黑龍江省部分奶牛場(chǎng)等20多個(gè)省市自治區(qū)牛群存在BVDV感染，且感染率居高不下，研究發(fā)現(xiàn)BVDV可通過持續(xù)感染的胎牛進(jìn)而造成永久性傳播，BVD是危害牛群健康的重要傳染病之一，嚴(yán)重制約著養(yǎng)牛業(yè)的健康發(fā)展[4]。本研究基于牛病毒性腹瀉病的流行現(xiàn)狀和危害，且BDV流行病學(xué)調(diào)查西南區(qū)域研究極少的現(xiàn)狀，通過檢測(cè)當(dāng)?shù)夭糠逐B(yǎng)牛場(chǎng)部分牛群血清樣本，分析BVDV的感染情況，初步了解南充地區(qū)牛BVD的流行情況和流行病學(xué)特點(diǎn)。根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果，建議相關(guān)養(yǎng)殖場(chǎng)采取及時(shí)淘汰陽性感染的牛只，同時(shí)加強(qiáng)免疫保護(hù)牛群，降低感染風(fēng)險(xiǎn)，有助于在當(dāng)?shù)乜刂萍皟艋２《拘愿篂a病。

1材料與方法

1.1材料

1）被檢血清來源

2020—2021年，通過尾靜脈采血隨機(jī)采集到四川省南充地區(qū)8縣（市、區(qū)）牛血液樣本共計(jì)1，000份，分離血清后待用。采集血清樣本中，規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)血清份數(shù)一共700份，分別來源于高坪區(qū)、順慶區(qū)、營(yíng)山縣、蓬安縣、閬中市及南部縣各100份，西充縣50份，儀隴縣50份;散養(yǎng)戶牛血清數(shù)共計(jì)300份，分別來源于高坪區(qū)、順慶區(qū)、營(yíng)山縣、蓬安縣、閬中市及南部縣各40份，西充縣30份，儀隴縣30份。

2）檢測(cè)試劑

牛病毒性腹瀉病毒抗體（BVDV-Ab）檢測(cè)試劑盒由北京愛德士元享生物科技有限公司研發(fā)生產(chǎn)。

1.2 方法

1）血清分離

采集的牛血用小型離心機(jī) 5，000 r/min 離心10 min，逐一收集血清并認(rèn)真編號(hào)，明確樣品來源信息，4℃保存待用。

2）試劑盒檢驗(yàn)

操作和結(jié)果判定均按照試劑盒說明書進(jìn)行，牛病毒性腹瀉抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)原理為酶聯(lián)免疫方法。

2 結(jié)果與分析

2.1不同地域牛血清樣品中BVDV抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)1，000份牛血清樣品進(jìn)行了牛病毒性腹瀉抗體檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)8個(gè)縣區(qū)抗體陽性率有所差異，詳見表1。由表1可見8個(gè)縣區(qū)樣品均有不同程度的BVDV感染情況，所采集群體陽性率為100%，其中嘉陵區(qū)陽性率31.4%最高，閬中市陽性率7.1%最低。

2.2 不同來源牛血清樣品中BVDV抗體檢測(cè)結(jié)果

1，000份牛血清樣品中，規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)血清共700份，散養(yǎng)戶牛血清共計(jì)300份，通過檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，規(guī)模化養(yǎng)牛場(chǎng)和散養(yǎng)戶BVDV抗體陽性率也有所不同，詳見表2。由表2可見無論是規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)還是散養(yǎng)戶都應(yīng)加強(qiáng)BVDV的防控和凈化工作，總體來看規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)血清抗體陽性率11.3%，顯著低于散養(yǎng)戶平均陽性率35.3%（P<0.01），規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)在BVDV防控工作做得要強(qiáng)于散養(yǎng)戶。

2.3 不同用途牛血清樣品中BVDV抗體檢測(cè)結(jié)果

1，000份牛血清樣品中，包括奶牛500份，肉牛300份，種牛200份，經(jīng)檢測(cè)乳用牛、肉用牛和種用牛BVDV抗體陽性率差別也較大，詳見表3。由表3可知，乳用牛和肉用牛BVDV抗體陽性率差異不顯著（P>0.05）。但兩者與種用牛BVDV抗體陽性率差異顯著（P<0.01）。種用牛BVDV凈化水平更好。

2.4 不同飼養(yǎng)方式下牛血清樣品中BVDV抗體檢測(cè)結(jié)果

將采集的牛血清按照飼養(yǎng)方式的不同進(jìn)行分類，舍飼、半舍飼及放牧三種飼養(yǎng)方式抗體陽性率差別較大，詳見表4。由表可見放牧飼養(yǎng)牛群的抗體陽性率最低為6.5%，舍飼和半舍飼牛血清BVDV抗體陽性率差異不顯著（P>0.05）。

3 討論與小結(jié)

牛病毒性腹瀉病是威脅全球畜牧業(yè)的危害巨大的重要疫病之一，每年因BVD的流行造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，極大阻礙了養(yǎng)牛業(yè)的快速健康發(fā)展。當(dāng)前我國(guó)規(guī)?；ｐB(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，規(guī)模化養(yǎng)殖水平不斷提高，尤其是四川地區(qū)作為傳統(tǒng)的重要牛養(yǎng)殖基地，及時(shí)了解、掌握當(dāng)?shù)谺VDV的流行情況非常必要。本研究采集四川南充地區(qū)8個(gè)縣（市、區(qū)） 1，000份牛血清樣品，應(yīng)用牛病毒性腹瀉病抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)血清樣品進(jìn)行了BVDV的抗體檢測(cè)，由此獲得了不同地域、不同來源、不同用途及不同飼養(yǎng)方式下牛BVDV抗體陽性率，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示調(diào)查牛群中BVDV感染情況普遍存在，整體陽性率略低于其他地區(qū)研究報(bào)告值。相關(guān)養(yǎng)殖單位應(yīng)通過加強(qiáng)管理進(jìn)行科學(xué)防范，逐步降低牛場(chǎng)感染率。感染率相對(duì)較低的單位及時(shí)淘汰清除陽性牛，能夠達(dá)到快速凈化的目的;感染率相對(duì)較高的單位應(yīng)制定科學(xué)有效的免疫程序，加強(qiáng)日常飼養(yǎng)管理，隔離飼養(yǎng)治療陽性牛，并逐漸淘汰年齡大、難治愈的持續(xù)感染牛;有條件的牛場(chǎng)，可在日常定期進(jìn)行BVDV抗體抗原監(jiān)測(cè)，及時(shí)了解牛群的感染情況，并根據(jù)監(jiān)測(cè)結(jié)果及時(shí)調(diào)整養(yǎng)殖策略。研究結(jié)果也揭示了BVD在南充地區(qū)的流行現(xiàn)狀，為當(dāng)?shù)谺VD的防控提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為后續(xù)病原分離鑒定及生物特性學(xué)分析打下詳實(shí)基礎(chǔ)。

BVDV可進(jìn)行垂直方向和水平方向多途徑傳播，同時(shí)還具有跨越物種傳播能力，牛病毒性腹瀉病不僅可導(dǎo)致牛群的繁殖和生產(chǎn)性能下降，還可以通過混合感染其他牛呼吸道疾病或消化道疾病，一旦牛感染BVDV后，會(huì)在機(jī)體內(nèi)經(jīng)過一段短暫的潛伏期，就可能發(fā)展成病毒血癥，隨后BVDV就會(huì)隨著感染牛的分泌物如唾液、精液、乳汁等排出體外散毒，使得BVD的防控與凈化難度逐漸增大。BVDV感染普遍存在的原因，主要與日常飼養(yǎng)中管理措施不當(dāng)有很大關(guān)系，如牛場(chǎng)日常監(jiān)測(cè)不及時(shí)，衛(wèi)生清理不徹底、病牛不及時(shí)隔離及直腸檢查或疫苗免疫等未嚴(yán)格消毒操作等為BVDV的流行埋下了隱患[5]。

BVDV在我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)中的流行未得到有效控制，總體流行范圍與感染數(shù)量呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。近年來我國(guó)牛場(chǎng)均普遍存在BVDV感染，陳銳等[6]調(diào)查發(fā)現(xiàn)我國(guó)西部地區(qū)規(guī)?；?chǎng)BVDV陽性率高達(dá)84.1 %，其中乳用牛陽性率更是高達(dá)85.4 %，肉用牛和種用牛陽性率分別為47.7 %和48.6 %;我國(guó)東部省市牛場(chǎng)BVDV抗體陽性率約為77.8%[7]。目前商品化BVDV疫苗尚未研發(fā)應(yīng)用，臨床上也沒有有效的治療方法。BVD對(duì)養(yǎng)牛業(yè)的危害巨大，牛感染后會(huì)出現(xiàn)腹瀉、黏膜糜爛壞死、白細(xì)胞數(shù)下降等臨床癥狀，大大降低了牛的生產(chǎn)性能。種用牛感染BVDV后，凍精、胚胎等生物制品會(huì)被BVDV污染，該帶毒的生制品會(huì)通過配種或胚胎移植，引起該病的水平傳播。牛病毒性腹瀉病被認(rèn)為是“犢牛殺手”，就是因?yàn)闋倥０l(fā)病后具有極高的發(fā)病率和死亡率，該病也是臨床上導(dǎo)致犢牛死亡的主要原因。由此可見BVDV感染后對(duì)犢牛、育肥、產(chǎn)奶性能及繁殖性能有著重要的影響，進(jìn)而增加經(jīng)濟(jì)損失。同時(shí)BVDV也為畜禽共患病或人畜共患病，患病?；螂[性感染牛向環(huán)境中釋放病毒，對(duì)其他畜禽的養(yǎng)殖和疫病防控、畜牧從業(yè)者的生命健康、肉乳制品、公共飲水等公共衛(wèi)生環(huán)境安全存在潛在的威脅。當(dāng)前BVDV基因多樣性也是比較突出的問題，某一地區(qū)甚至同一牛場(chǎng)牛群中流行著多種BVDV亞型，使得BVDV防控和凈化難度增大。因此，養(yǎng)牛場(chǎng)開展BVD凈化是一項(xiàng)緊迫、長(zhǎng)期的工作目標(biāo)，對(duì)當(dāng)?shù)仞B(yǎng)牛業(yè)的健康發(fā)展及公共衛(wèi)生安全等方面具有重要意義。

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