• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接探討枸杞子治療阿爾茨海默病的作用機(jī)制

    2022-03-25 18:56:27吉潔梅俊信琪琪叢偉紅張穎徐鳳芹
    世界中醫(yī)藥 2022年3期
    關(guān)鍵詞:枸杞子藥理學(xué)靶點(diǎn)

    吉潔 梅俊 信琪琪 叢偉紅 張穎 徐鳳芹

    摘要 目的:基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法及分子對(duì)接研究枸杞子治療阿爾茨海默?。ˋD)的作用機(jī)制。方法:采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法,通過(guò)檢索中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)(TCMSP),GeneCards、NCBI基因數(shù)據(jù)庫(kù)及OMIM數(shù)據(jù)庫(kù),篩選枸杞子治療AD的相關(guān)靶點(diǎn),通過(guò)構(gòu)建韋恩圖,得到枸杞子-AD共同靶點(diǎn),運(yùn)用STRING數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建二者靶點(diǎn)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)圖,并且運(yùn)用Cytoscape 3.8.0軟件進(jìn)行可視化處理,篩選關(guān)鍵基因,同時(shí)對(duì)藥物-疾病共有靶點(diǎn)進(jìn)行基因本體(GO)富集分析和京都基因和基因組百科全書(KEGG),并使用AutodockTools1.5.6進(jìn)行分子對(duì)接,驗(yàn)證靶點(diǎn)與小分子的結(jié)合度。結(jié)果:通過(guò)篩選,共得到121個(gè)枸杞子-AD共有靶點(diǎn),41個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn),包括JUN、AKT1、MAPK1、RELA、IL-6等,GO分析發(fā)現(xiàn),生物學(xué)過(guò)程主要與氧化應(yīng)激、衰老等相關(guān),KEGG通路分析富集在AGE-RAGE、HIF-1等信號(hào)通路。將靶點(diǎn)MAPK1與β-谷甾醇進(jìn)行分子對(duì)接發(fā)現(xiàn),結(jié)合活性較好。結(jié)論:本研究初步探討了枸杞子治療阿爾茨海默病的主要活性成分、相關(guān)靶點(diǎn)及其相關(guān)通路,發(fā)現(xiàn)其多成分、多靶點(diǎn)、多通路的特點(diǎn),為后續(xù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證提供了一定的參考和物質(zhì)基礎(chǔ)。

    關(guān)鍵詞 枸杞子;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);阿爾茨海默病;靶點(diǎn);信號(hào)通路;作用機(jī)制;分子對(duì)接;β-谷甾醇

    Mechanism of Lycii Fructus in Treatment of Alzheimer′s Disease Based on Network Pharmacology and Molecular Docking

    JI Jie1,MEI Jun2,XIN Qiqi2,CONG Weihong2,ZHANG Ying2,XU Fengqin2

    (1 School of Graduate,China Academy of Chinese Medical Sciences,Beijing 100029,China; 2 Xiyuan Hospital,China Academy of Chinese Medical Sciences,Beijing 100091,China)

    Abstract Objective:To explore the mechanism of Lycii Fructus in the treatment of Alzheimer′s disease (AD) based on network pharmacology and molecular docking.Methods:The targets of Lycii Fructus against AD were screened out from TCMSP,GeneCards,NCBI,and OMIM by network pharmacology.The Venn diagram was plotted to obtain the common targets of Lycii Fructus and AD.The protein-protein interaction (PPI) network was delineated by STRING.Cytoscape 3.8.0 was used for visualization processing,and key genes were screened out.The common targets of Lycii Fructus and AD underwent GO and KEGG pathway enrichment analyses.AutoDock Tools 1.5.6 was used for molecular docking to verify the binding degree between the targets and small molecules.Results:A total of 121 common targets and 41 key targets of Lycii Fructus and AD were obtained,including JUN,AKT1,MAPK1,RELA,and IL-6.As revealed by GO analysis,oxidative stress,aging,and other biological processes were mainly involved.KEGG pathway analysis showed that the pathways were mainly enriched in AGE-RAGE,HIF-1,and other signaling pathways.MAPK1 had good binding activity with β-sitosterol as indicated by molecular docking.Conclusion:The present study investigated the main active components,related targets,and related pathways of Lycii Fructus in the treatment of AD,and unraveled the characteristics of multi-component,multi-target,and multi-pathway,which provided references and material basis for the follow-up experimental verification.

    Keywords Lycii Fructus; Network pharmacology; Alzheimer′s disease; Target;Signaling pathway;Mechanism of action;Molecular docking;Beta-sitosterol

    中圖分類號(hào):R285文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:Adoi:10.3969/j.issn.1673-7202.2022.03.011

    阿爾茨海默?。ˋlzheimer Disease,AD)是以進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙和行為損害為主要表現(xiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變,主要發(fā)生在老年及老年前期,隨著阿爾茨海默病的進(jìn)展,患者甚至可能會(huì)出現(xiàn)個(gè)性的改變、情緒波動(dòng)等。隨著人口老齡化的加劇,與年齡相關(guān)的癡呆如AD患病率也逐年上升[1]。枸杞的干燥果實(shí)即為枸杞子[2]。《本草綱目》中載其具有補(bǔ)肝益腎、益精明目的功效。枸杞子性平,歸肝、腎二經(jīng),常用于治療肝腎陰虛、頭暈健忘等臨床癥狀[3]?,F(xiàn)代植物化學(xué)研究發(fā)現(xiàn),枸杞子中主要包含枸杞子多糖、酚類、槲皮素、胡蘿卜素、煙酸、甜菜堿、豆甾醇等成分[4]?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示,枸杞子具有抗氧化、抗衰老、神經(jīng)保護(hù)、清除自由基、抗炎等作用,目前被廣泛用于養(yǎng)生保健及醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域[5]。藥食同源是枸杞子的優(yōu)勢(shì),具有很好的開發(fā)前景,然而其成分、靶點(diǎn)等作用方式復(fù)雜,治療疾病的機(jī)制尚不明確。

    在系統(tǒng)生物學(xué)的理論基礎(chǔ)上,通過(guò)構(gòu)建分析“藥物-靶點(diǎn)-疾病”的網(wǎng)絡(luò),分析其互作關(guān)系即為網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)將網(wǎng)絡(luò)生物學(xué)概念、方法和技術(shù)應(yīng)用到藥物相關(guān)的研究上,其在藥物靶點(diǎn)選擇、新的適應(yīng)證預(yù)測(cè)、挖掘藥物研發(fā)規(guī)律等方面都應(yīng)用頗廣,其強(qiáng)調(diào)從網(wǎng)絡(luò)層面闡釋中藥治療疾病的機(jī)制[6-7]。本研究擬采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法及分子對(duì)接法,通過(guò)對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)的檢索,分析枸杞子的活性成分,并找到其作用靶標(biāo),結(jié)合AD疾病數(shù)據(jù)庫(kù),預(yù)測(cè)枸杞子治療AD的作用靶點(diǎn),為從分子水平、基因水平等闡明枸杞子抗AD的作用機(jī)制提供一定的參考依據(jù)及理論基礎(chǔ)。

    1 資料與方法

    1.1 獲取枸杞子的潛在靶點(diǎn)

    基于中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)(TCMSP)(https://tcmspw.com/tcmsp.php)檢索枸杞子的化合物成分及潛在靶點(diǎn)[8]。結(jié)合藥代動(dòng)力學(xué)吸收、分布、代謝和排泄(Absorption, Distribution, Metabolism and Excretio,ADME),本研究將口服生物利用度(Oral Bioavailability,OB)及藥物類藥性(Drug Likeness,DL)作為篩選依據(jù),在TCMSP中,將篩選條件設(shè)定為OB≥30%,DL≥0.18,對(duì)枸杞子的成分及其作用靶點(diǎn)進(jìn)行篩選及構(gòu)建。

    1.2 篩選AD相關(guān)靶點(diǎn)

    在GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.genecards.org/)[9],美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NCBI)基因數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)以及OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)(http://ctdbase.org/)中,以“Alzheimer′s disease”為關(guān)鍵詞,進(jìn)行人類基因檢索,獲取AD的疾病靶點(diǎn)。其中,在GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)中,根據(jù)Score進(jìn)行中位值的篩選以獲得更相關(guān)的靶點(diǎn),并且通過(guò)UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)查詢靶點(diǎn)蛋白的基因名稱。

    1.3 疾病-藥物-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

    將枸杞子潛在靶點(diǎn)與AD的疾病靶點(diǎn)于UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化統(tǒng)一命名,導(dǎo)入Excel表,并運(yùn)用VENNY2.1繪制韋恩圖,運(yùn)用Cytoscape 3.8.0軟件構(gòu)建藥物成分-疾病-靶點(diǎn)可視化網(wǎng)絡(luò),并且根據(jù)Degree值篩選關(guān)鍵藥效成分。

    1.4 藥物-靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

    得到枸杞子-AD的共有靶點(diǎn),將其導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)(https://string-db.org/cgi/input.pl),構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò),生物種類設(shè)定為“Homo Sapiens”,本研究設(shè)定置信度閾值>0.9,篩選蛋白質(zhì)相互作用,得到PPI網(wǎng)絡(luò),并且根據(jù)Degree值篩選出關(guān)鍵靶點(diǎn)。

    1.5 基因本體論(GO)及京都基因和基因組百科全書(KEGG)通路富集分析

    運(yùn)用STRING數(shù)據(jù)庫(kù),使用R語(yǔ)言3.6.3,應(yīng)用clusterProfiler、enrichplot、ggplot2數(shù)據(jù)包,將藥物疾病得到的共有靶點(diǎn)進(jìn)行GO富集,包括3部分:生物過(guò)程(Biological Process,BP)、分子功能(Molecular Function,MF)、細(xì)胞組分(Cell Component,CC),并且進(jìn)行KEGG通路富集。

    1.6 分子對(duì)接

    將枸杞子的核心成分與得到的關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接,得到對(duì)接的親和力,利用TCMSP下載中藥成分格式3D結(jié)構(gòu),運(yùn)用AutodockTools1.5.6,打開配體小分子,進(jìn)行加氫、加電荷、檢測(cè)配體的root、并搜尋與定義可旋轉(zhuǎn)鍵;從RCSB Protein Data Bank(www.rcsb.org)下載得到蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu),作為對(duì)接所用蛋白質(zhì),通過(guò)添加氫原子、計(jì)算Gasteiger電荷、合并非極性氫,將其保存為受體。運(yùn)用Autodock vina 1.1.2,選取affinity最佳構(gòu)象作為最終對(duì)接構(gòu)象,進(jìn)行半柔性對(duì)接,并使用Pymol進(jìn)行可視化作圖。

    2 結(jié)果

    2.1 枸杞子活性成分及靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

    在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中,結(jié)合OB值及DL值,剔除重復(fù)化合物并且匯總后,最終得出45個(gè)化合物成分,對(duì)納入的化合物成分進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測(cè),通過(guò)Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù),進(jìn)行了確認(rèn)并且轉(zhuǎn)換,共得到196個(gè)靶點(diǎn)。

    2.2 AD靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

    以“Alzheimer′s disease”為關(guān)鍵詞檢索在GeneCards、NCBI、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索查詢,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)檢索到1 350個(gè)相關(guān)靶點(diǎn),NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)獲得1 198個(gè)靶點(diǎn),OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)獲得527個(gè)靶點(diǎn)。結(jié)合UniProt轉(zhuǎn)換,基因合并并且刪除重復(fù)后,得到2 413個(gè)AD相關(guān)靶點(diǎn)。

    2.3 疾病-藥物-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

    將篩選出來(lái)的枸杞子藥物靶點(diǎn)與AD的疾病靶點(diǎn)導(dǎo)入Excel表,并運(yùn)用VENNY2.1繪制韋恩圖。枸杞子藥物靶點(diǎn)196個(gè)與AD疾病靶點(diǎn)2 413個(gè),交集靶點(diǎn)121個(gè)。見圖1。將結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0軟件構(gòu)建藥物成分-疾病-靶點(diǎn)可視化網(wǎng)絡(luò)。見圖2。在網(wǎng)絡(luò)圖中,淡紫色為枸杞子的活性成分,綠色為枸杞子作用于AD的靶點(diǎn),橙色矩形為疾病即AD,連線則代表化合物和靶標(biāo)之間的作用關(guān)系。見圖2。將藥效成分Degree排序,Degree值越高成分越重要,現(xiàn)將其藥效成分列于下表。見表1。

    2.4 藥物-靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

    得到枸杞子-AD的共有靶點(diǎn),將其導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù),根據(jù)本研究設(shè)定條件得到PPI網(wǎng)絡(luò)。該網(wǎng)絡(luò)中有121個(gè)節(jié)點(diǎn),417條邊,平均度值為6.89,平均局部聚類系數(shù)為0.462。見圖3。運(yùn)用Cystoscape 3.8.0,導(dǎo)入節(jié)點(diǎn)信息,利用Network Analyzer工具進(jìn)行拓?fù)浞治觯鶕?jù)Degree篩選排序,將分值大于平均分的基因作為關(guān)鍵靶點(diǎn),共篩選出41個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn),并且將前20個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行可視化展示,圖中橫坐標(biāo)為每個(gè)靶點(diǎn)的度值。見圖4。

    2.5 GO及KEGG通路富集分析

    運(yùn)用STRING數(shù)據(jù)庫(kù),將枸杞子-AD的共有靶點(diǎn)進(jìn)行GO富集,將校正條件設(shè)定為P值≤0.05進(jìn)行篩選,共富集到2 405個(gè)生物過(guò)程,209個(gè)分子功能,102個(gè)細(xì)胞組分。使用R 3.6.3,應(yīng)用ClusterProfiler、Enrichplot、Ggplot2數(shù)據(jù)包,發(fā)現(xiàn)生物過(guò)程包括:細(xì)胞對(duì)化學(xué)應(yīng)激的反應(yīng)(Cellular Response to Chemical Stress)、氧化應(yīng)激反應(yīng)(Response to Oxidative Stress)、細(xì)胞對(duì)氧化應(yīng)激的反應(yīng)(Cellular Response to Oxidative Stress)、對(duì)活性氧的反應(yīng)(Response to Reactive Oxygen Species)、衰老(Aging)、神經(jīng)元死亡調(diào)節(jié)(Regulation of Neuron Death)等。細(xì)胞組分包括:膜筏(Membrane Raft)、小凹(Caveola)、質(zhì)膜筏(Plasma Membrane Raft)、膜區(qū)(Membrane Region)、谷氨酸能突觸(Glutamatergic Synapse)、膜微結(jié)構(gòu)域(Membrane Microdomain)、突觸前膜的組分(Integral Component of Presynaptic Membrane)、蛋白激酶復(fù)合物(Protein Kinase Complex)、遠(yuǎn)端軸突(Distal Axon)、核被膜(Nuclear Envelope)等。分子功能包括:蛋白酪氨酸激酶活性(Protein Tyrosine Kinase Activity)、磷酸酶結(jié)合(Phosphatase Binding)、蛋白磷酸酶結(jié)合(Protein Phosphatase Binding)、蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶活性(Protein Serine/Threonine Kinase Activity)、藥物結(jié)合(Drug Binding)、核受體活性(Nuclear Receptor Activity)、配體激活轉(zhuǎn)錄因子活性(Ligand-Activated Transcription Factor Activity)、胰島素受體底物結(jié)合(Insulin Receptor Substrate Binding)等。排名前10的生物過(guò)程、細(xì)胞組分、分子功能柱狀圖見圖5。

    圖5 枸杞子潛在靶點(diǎn)治療AD GO分析柱狀圖(前10位)

    將枸杞子-AD的共有靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG通路富集分析,運(yùn)用STRING數(shù)據(jù)庫(kù),設(shè)定校正P值≤0.05,進(jìn)行篩選,總共富集到164條信號(hào)通路。使用R3.6.3,安裝并引用clusterProfiler包后,對(duì)排名前20個(gè)結(jié)果可視化處理見圖6。通路主要富集在糖尿病并發(fā)癥晚期糖基化終產(chǎn)物(AGE)及其受體(RAGE)信號(hào)通路(AGE-RAGE Signaling Pathway in Diabetic Complications)、EGFR酪氨酸激酶抑制劑抵抗(EGFR Tyrosine Kinase Inhibitor Resistance)、VEGF信號(hào)通路(VEGF Signaling Pathway)、流體剪切力及動(dòng)脈粥樣硬化通路(Fluid Shear Stress and Atherosclerosis)、低氧誘導(dǎo)因子-1(HIF-1)信號(hào)通路(HIF-1 Signaling Pathway)、人巨細(xì)胞病毒感染(Human Cytomegalovirus Infection)等。

    圖6 枸杞子治療AD潛在靶點(diǎn)KEGG分析的氣泡圖(前20位)? 注:橫坐標(biāo)代表目標(biāo)基因?qū)儆谶@個(gè)分支的基因數(shù)量/背景基因集中于這個(gè)分支所有基因的數(shù)量比值,縱坐標(biāo)代表通路名稱,氣泡面積大小代表目標(biāo)基因富集于這個(gè)分支的數(shù)量,氣泡顏色代表富集顯著性,即P值的大小

    2.6 成分-疾病-通路-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

    運(yùn)用Cytoscape 3.8.0,導(dǎo)入成分—疾病—通路—靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò),繪制通路網(wǎng)絡(luò)圖,更直觀地展示枸杞子活性成分在治療阿爾茨海默病過(guò)程中的多成分-多靶點(diǎn)-多通路的作用特點(diǎn)。見圖7。如圖7所示,藍(lán)色為化合物,黃色為枸杞子作用于AD的靶點(diǎn),紅色為疾病即AD,綠色為最顯著的前20條通路。

    2.7 分子對(duì)接分析

    將排名前三的關(guān)鍵活性成分槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇與5個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)AKT1、IL6、JUN、MAPK1、RELA進(jìn)行分子對(duì)接。表格中對(duì)接的親和力越小,代表配體與受體蛋白結(jié)合更穩(wěn)定,表明該藥物成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)具有強(qiáng)結(jié)合力。見表2。結(jié)果顯示β-谷甾醇與MAPK1分子對(duì)接效果最佳。見表2。為了從分子水平闡明蛋白MAPK1與β-谷甾醇的作用模式,本研究將化合物對(duì)接至蛋白的活性口袋,其對(duì)接打分為-9.0 kcal/mol,理論結(jié)合模式如圖8所示,從圖8中可看出化合物和蛋白氨基酸MET108形成氫鍵作用,使得蛋白與化合物形成穩(wěn)定的復(fù)合物。分子對(duì)接研究為蛋白與化合物的相互作用方式給予一定的解釋,為進(jìn)一步研究小分子藥物奠定理論基礎(chǔ)。

    3 討論

    隨著老齡化進(jìn)程的加快,到2050年預(yù)計(jì)全球癡呆癥患者的人數(shù)將增加至1.315億[10]。據(jù)國(guó)際阿爾茨海默病協(xié)會(huì)(ADI)的“世界阿爾茨海默病2020年報(bào)告”,2020新冠肺炎席卷世界,在第一波新冠肺炎疫情死亡者中,超過(guò)四分之一患有癡呆癥;全球每年新發(fā)癡呆的病例預(yù)估為990萬(wàn),大約每3.2 s增加1例,此估值較2010年新發(fā)病例高30%;全球癡呆費(fèi)用亦增長(zhǎng)超過(guò)30%。盡管目前針對(duì)AD的癥狀管理等治療藥物,乙酰膽堿酯酶抑制劑,如多奈哌齊,N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑,如美金剛胺等可延緩延遲認(rèn)知障礙的進(jìn)展,但AD仍未能得到有效的改善控制,提示其病理生理機(jī)制及治療尚有許多未知,亟須積極開發(fā)新的有效治療藥物[11-14]。

    枸杞子具有補(bǔ)益肝腎之效,現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn),枸杞子具有抗氧化、抗衰老、神經(jīng)保護(hù)等作用,廣泛用于醫(yī)學(xué)及保健領(lǐng)域,臨床顯示其對(duì)AD具有一定的治療效果。但枸杞子含有多組分、多靶點(diǎn),各組分之間可產(chǎn)生協(xié)同作用,因此形成的體系龐大復(fù)雜,想要完全了解其作用機(jī)制不易。近年來(lái),隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)的不斷發(fā)展和生物醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)的應(yīng)用,網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)成為闡釋中藥作用機(jī)制的方法之一。

    通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法,獲得枸杞子活性成分包括槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇等。槲皮素可降低氯化鋁誘導(dǎo)的AD動(dòng)物模型海馬神經(jīng)元的損傷[15],顯著提高β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)干預(yù)的HT-22細(xì)胞MAPK1和CYCS水平,降低MAPT、PIK3R1、CASP8和DAPK1水平,具有一定的治療AD價(jià)值[16]。有學(xué)者將卵磷脂/β谷甾醇用鞣酸包裹在非神經(jīng)毒性脂質(zhì)體中,發(fā)現(xiàn)其可以成功通過(guò)小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞血腦屏障,并且可以減少人神經(jīng)母細(xì)胞瘤(SK-N-SH)細(xì)胞誘導(dǎo)的Tau蛋白聚集,表現(xiàn)出一定的抗AD作用[17]。

    通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究預(yù)測(cè),枸杞子作用的核心靶點(diǎn)包括JUN、AKT1、MAPK1、RELA、IL-6、APP、FOS等。JNK通路對(duì)神經(jīng)發(fā)育和神經(jīng)元再生至關(guān)重要,由炎癥介質(zhì)或環(huán)境應(yīng)激激活,在程序性細(xì)胞死亡中起重要作用,JUN及FOS是JNK通路的下游蛋白,具有調(diào)控細(xì)胞凋亡、生長(zhǎng)、增殖等作用,目前JNK通路特異性抑制劑正在被開發(fā),可作為神經(jīng)保護(hù)藥物[18-21]。AKT磷酸化是胰島素和其他生長(zhǎng)因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn),與AD神經(jīng)病理和認(rèn)知功能下降有關(guān)[22]。MAPK1作為MAPKs的天然負(fù)調(diào)控因子,在MAPKs去磷酸化過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[23]。在本次分子對(duì)接中,發(fā)現(xiàn)MAPK1與小分子β-谷甾醇具有較強(qiáng)結(jié)合活性。RELA是ApoE的一種抑制性轉(zhuǎn)錄因子,可促進(jìn)β-淀粉樣蛋白(Aβ)水解分解,從而抑制β-淀粉樣蛋白異常積聚[24]。APP作為神經(jīng)細(xì)胞、突觸及腦功能正常發(fā)揮所需要的物質(zhì),可以保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞對(duì)抗毒性損害,調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞的增殖、分化,并且可調(diào)節(jié)突觸傳遞和突觸可塑性,改善學(xué)習(xí)記憶障礙[25]。

    通過(guò)對(duì)關(guān)鍵靶點(diǎn)的GO功能注釋及KEGG富集通路分析,發(fā)現(xiàn)GO生物過(guò)程主要集中在氧化應(yīng)激反應(yīng)、衰老、神經(jīng)元死亡調(diào)節(jié)等上。研究表明,自由基氧化應(yīng)激是導(dǎo)致衰老原因之一,且許多老齡化疾病的發(fā)病機(jī)制都與機(jī)體氧化應(yīng)激有關(guān),如AD、PD等[26-28]。通過(guò)對(duì)靶點(diǎn)KEGG富集通路分析,發(fā)現(xiàn)枸杞子抗AD的作用與AGE-RAGE信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路等相關(guān)。晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)與衰老和許多退行性疾病如AD、糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展也有一定的關(guān)系[29]。HIF-1是哺乳動(dòng)物氧穩(wěn)態(tài)的重要調(diào)節(jié)因子,隨著年齡的增長(zhǎng),大腦供氧及葡萄糖逐漸減少,這可能是導(dǎo)致低代謝的因素之一,而大腦對(duì)認(rèn)知和記憶至關(guān)重要的區(qū)域,如海馬體、頂葉、顳葉、皮質(zhì)等則更容易受到慢性缺氧的影響,而在AD患者中,可見這些低代謝腦部區(qū)域APP表達(dá)增強(qiáng),Aβ清除減少[30-31]。

    本研究運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法,從分子水平揭示了枸杞子抗阿爾茨海默病的可能成分及關(guān)鍵作用機(jī)制。本研究中,枸杞子治療AD的作用靶點(diǎn)屬于預(yù)測(cè)階段,通過(guò)建立了中藥成分-蛋白質(zhì)靶標(biāo)、疾病-基因的相互作用網(wǎng)絡(luò)圖,發(fā)現(xiàn)枸杞子治療AD“多成分、多靶點(diǎn)、多通路”的特點(diǎn),并且將其PPI進(jìn)行了可視化分析,初步驗(yàn)證了枸杞子治療AD的藥理學(xué)作用機(jī)制,為其后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供了一定的參考依據(jù),但后續(xù)仍需要開展體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證靶點(diǎn),觀察這些靶點(diǎn)是否參與了藥物對(duì)疾病的調(diào)控,本研究可作為下一步實(shí)驗(yàn)的前期基礎(chǔ)。

    參考文獻(xiàn)

    [1]Aliev G,Ashraf GM,Tarasov VV,et al.Alzheimer′s Disease-Future Therapy Based on Dendrimers[J].Curr Neuropharmacol,2019,17(3):288-294.

    [2]趙明宇.枸杞子的藥理作用及臨床應(yīng)用研究[J].北方藥學(xué),2018,15(4):156.

    [3]Luo Q,Cai Y,Yan J,et al.Hypoglycemic and hypolipidemic effects and antioxidant activity of fruit extracts from Lycium barbarum[J].Life Sci,2004,76(2):137-149.

    [4]王瑩,金紅宇,李耀磊,等.不同分子量枸杞多糖對(duì)RAW264.7巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用[J].中國(guó)新藥雜志,2021,30(12):1079-1086.

    [5]Amagase H,F(xiàn)arnsworth NR.A review of botanical characteristics,phytochemistry,clinical relevance in efficacy and safety of Lycium barbarum fruit(Goji)[J].Food Research International,2011,44(7):1702-1717.

    [6]Hopkins AL.Network pharmacology[J].Nature Biotechnology,2007,25(10):1110-1111.

    [7]趙光躍,魏玉海,蘇姍姍,等.基于1H-NMR植物代謝組學(xué)技術(shù)分析青海產(chǎn)區(qū)枸杞子的化學(xué)特征[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2020,26(17):95-103.

    [8]Ru J,Li P,Wang J,et al.TCMSP:a database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines[J].J Cheminform,2014,6:13.

    [9]Safran M,Dalah I,Alexander J,et al.GeneCards Version 3:the human gene integrator[J].Database(Oxford),2010,2010:baq020.

    [10]Sengoku R.Aging and Alzheimer′s disease pathology[J].Neuropathology,2020,40(1):22-29.

    [11]Anonymous.2020 Alzheimer′s disease facts and figures[J].Alzheimers Dement,2020,Mar 10.doi:10.1002/alz.12068.Online ahead of print.

    [12]Kim S,Kim N,Lee J,et al.Dynamic Fas signaling network regulates neural stem cell proliferation and memory enhancement[J].Sci Adv,2020,6(17):eaaz9691.

    [13]Galluzzi L,Vitale I,Aaronson SA,et al.Molecular mechanisms of cell death:recommendations of the Nomenclature Committee on Cell Death 2018[J].Cell Death Differ,2018,25(3):486-541.

    [14]Aupperle PM.Navigating patients and caregivers through the course of Alzheimer′s disease[J].J Clin Psychiatry,2006,67(3):8-14.

    [15]Rifaai RA,Mokhemer SA,Saber EA,et al.Neuroprotective effect of quercetin nanoparticles:A possible prophylactic and therapeutic role in alzheimer′s disease[J].J Chem Neuroanat,2020,107:101795.

    [16]Qi P,Li J,Gao S,et al.Network Pharmacology-Based and Experimental Identification of the Effects of Quercetin on Alzheimer′s Disease[J].Front Aging Neurosci,2020,12:589588.

    [17]Hu Y,Hu X,Lu Y,et al.New Strategy for Reducing Tau Aggregation Cytologically by A Hairpinlike Molecular Inhibitor,Tannic Acid Encapsulated in Liposome[J].ACS Chem Neurosci,2020,11(21):3623-3634.

    [18]Coffey ET.Nuclear and cytosolic JNK signalling in neurons[J].Nat Rev Neurosci,2014,15(5):285-299.

    [19]Bruckner SR,Estus S.JNK3 contributes to c-jun induction and apoptosis in 4-hydroxynonenal-treated sympathetic neurons[J].J Neurosci Res,2002,70(5):665-670.

    [20]Muller FL,Lustgarten MS,Jang Y,et al.Trends in oxidative aging theories[J].Free Radic Biol Med,2007,43(4):477-503.

    [21]Clarke M,Pentz R,Bobyn J,et al.Stressor-like effects of c-Jun N-terminal kinase(JNK) inhibition[J].PLoS One,2012,7(8):e44073.

    [22]Arvanitakis Z,Wang HY,Capuano AW,et al.Brain Insulin Signaling,Alzheimer Disease Pathology,and Cognitive Function[J].Ann Neurol,2020,88(3):513-525.

    [23]Thiel G,Rssler OG.Resveratrol stimulates AP-1-regulated gene transcription[J].Mol Nutr Food Res,2014,58(7):1402-1413.

    [24]Ge X,Guo M,Hu T,et al.Increased Microglial Exosomal miR-124-3p Alleviates Neurodegeneration and Improves Cognitive Outcome after rmTBI[J].Mol Ther,2020,28(2):503-522.

    [25]王珉琦,李文惠,孫安陽(yáng).分泌型β-淀粉樣蛋白前體蛋白的神經(jīng)保護(hù)作用及其分子機(jī)制[J].中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào),2020,36(6):617-626.

    [26]Simioni C,Zauli G,Martelli A M,et al.Oxidative stress:role of physical exercise and antioxidant nutraceuticals in adulthood and aging[J].Oncotarget,2018,9(24):17181-17198.

    [27]Butterfield DA.Perspectives on Oxidative Stress in Alzheimer′s Disease and Predictions of Future Research Emphases[J].J Alzheimers Dis,2018,64(s1):S469-469S479.

    [28]Siddique YH,Naz F,Jyoti S.Effect of capsaicin on the oxidative stress and dopamine content in the transgenic Drosophila model of Parkinson′s disease[J].Acta Biol Hung,2018,69(2):115-124.

    [29]Sourris KC,Watson A,Jandeleit-Dahm K.Inhibitors of Advanced Glycation End Product(AGE) Formation and Accumulation[J].Handb Exp Pharmacol,2021,264:395-423.

    [30]Semenza GL.HIF-1 mediates metabolic responses to intratumoral hypoxia and oncogenic mutations[J].J Clin Invest,2013,123(9):3664-3671.

    [31]Ashok BS,Ajith TA,Sivanesan S.Hypoxia-inducible factors as neuroprotective agent in Alzheimer′s disease[J].Clin Exp Pharmacol Physiol,2017,44(3):327-334.

    (2021-01-30收稿 本文編輯:魏慶雙,徐穎)

    猜你喜歡
    枸杞子藥理學(xué)靶點(diǎn)
    El descubrimiento de las hierbas terapéuticas La historia de Shennong,el “Soberano de la Agricultura”
    基于藥理學(xué)分析的護(hù)理創(chuàng)新實(shí)踐探索
    維生素D受體或是糖尿病治療的新靶點(diǎn)
    中老年保健(2021年3期)2021-12-03 02:32:25
    腫瘤免疫治療發(fā)現(xiàn)新潛在靶點(diǎn)
    嚼服枸杞子緩解口干
    藝術(shù)藥理學(xué)
    特別健康(2018年4期)2018-07-03 00:38:26
    藥理學(xué)原則在抗微生物藥給藥方案設(shè)計(jì)中的應(yīng)用
    心力衰竭的分子重構(gòu)機(jī)制及其潛在的治療靶點(diǎn)
    枸杞子的簡(jiǎn)易鑒別法
    保健與生活(2014年1期)2014-04-29 11:31:23
    氯胺酮依賴腦內(nèi)作用靶點(diǎn)的可視化研究
    同位素(2014年2期)2014-04-16 04:57:16
    久久中文看片网| 婷婷亚洲欧美| 国产69精品久久久久777片 | 他把我摸到了高潮在线观看| 精品国产亚洲在线| 无限看片的www在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲免费av在线视频| 久久久久九九精品影院| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产精品久久久人人做人人爽| 人人妻人人澡欧美一区二区| 我的老师免费观看完整版| 欧美激情久久久久久爽电影| 久久久久久久久中文| 可以在线观看毛片的网站| 欧美中文综合在线视频| 午夜老司机福利片| 国产精品av久久久久免费| 国产av一区二区精品久久| 亚洲成人久久性| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 中文字幕久久专区| 日本一区二区免费在线视频| 国模一区二区三区四区视频 | 巨乳人妻的诱惑在线观看| 在线观看舔阴道视频| 一级毛片女人18水好多| 成人av在线播放网站| 亚洲黑人精品在线| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 色哟哟哟哟哟哟| 99久久99久久久精品蜜桃| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 老司机午夜十八禁免费视频| 俺也久久电影网| 九九热线精品视视频播放| 午夜a级毛片| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 久久这里只有精品19| 日本一二三区视频观看| 日韩高清综合在线| 岛国在线免费视频观看| 90打野战视频偷拍视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 他把我摸到了高潮在线观看| 午夜福利高清视频| 色老头精品视频在线观看| 又黄又粗又硬又大视频| 啦啦啦韩国在线观看视频| 午夜久久久久精精品| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 日韩欧美免费精品| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 久久欧美精品欧美久久欧美| 妹子高潮喷水视频| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产精品久久电影中文字幕| 给我免费播放毛片高清在线观看| 久久中文字幕一级| 精品国产美女av久久久久小说| 男女下面进入的视频免费午夜| 午夜福利18| 国产一区二区三区视频了| 人妻夜夜爽99麻豆av| 在线观看舔阴道视频| 国产激情欧美一区二区| 欧美3d第一页| 国产欧美日韩一区二区精品| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 亚洲熟妇熟女久久| www.999成人在线观看| 两个人免费观看高清视频| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产欧美日韩一区二区三| 99re在线观看精品视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产精品久久久人人做人人爽| 91成年电影在线观看| 一级片免费观看大全| 日韩大码丰满熟妇| 男插女下体视频免费在线播放| 国产69精品久久久久777片 | 亚洲avbb在线观看| 国产av麻豆久久久久久久| netflix在线观看网站| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 久久国产精品人妻蜜桃| 少妇的丰满在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲成av人片免费观看| 国产成人影院久久av| 免费搜索国产男女视频| 精品熟女少妇八av免费久了| 精品熟女少妇八av免费久了| 午夜免费激情av| 一边摸一边抽搐一进一小说| 日韩高清综合在线| 国产精品久久视频播放| a在线观看视频网站| 久久精品成人免费网站| 在线观看免费日韩欧美大片| 午夜免费激情av| 国产av又大| 99在线视频只有这里精品首页| 久久九九热精品免费| 精品国产亚洲在线| 看黄色毛片网站| 日本熟妇午夜| 久久久久免费精品人妻一区二区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产精品1区2区在线观看.| 欧美一级a爱片免费观看看 | 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 9191精品国产免费久久| 精品国内亚洲2022精品成人| 精品国产乱子伦一区二区三区| 国产99久久九九免费精品| 欧美最黄视频在线播放免费| 高潮久久久久久久久久久不卡| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久久精品大字幕| 亚洲精品av麻豆狂野| 成人亚洲精品av一区二区| 色av中文字幕| 日本三级黄在线观看| 亚洲第一电影网av| 啦啦啦韩国在线观看视频| 成熟少妇高潮喷水视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 久久久久九九精品影院| 91国产中文字幕| 中亚洲国语对白在线视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产精品久久视频播放| 一本一本综合久久| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 99在线视频只有这里精品首页| 成人av在线播放网站| 午夜老司机福利片| 国产单亲对白刺激| 国产成人aa在线观看| 黄片大片在线免费观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 欧美在线一区亚洲| 香蕉丝袜av| 最近视频中文字幕2019在线8| 久久久国产欧美日韩av| 少妇粗大呻吟视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲精品在线观看二区| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲片人在线观看| 一进一出好大好爽视频| 五月玫瑰六月丁香| 国产黄a三级三级三级人| а√天堂www在线а√下载| 黄频高清免费视频| 久久久久久久精品吃奶| 嫁个100分男人电影在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 高清毛片免费观看视频网站| 在线观看免费日韩欧美大片| 好男人在线观看高清免费视频| 久久久国产成人免费| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产麻豆成人av免费视频| 在线看三级毛片| 可以免费在线观看a视频的电影网站| av片东京热男人的天堂| 国产区一区二久久| 精品午夜福利视频在线观看一区| 精品第一国产精品| 国产av麻豆久久久久久久| 国产精品国产高清国产av| 午夜两性在线视频| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 99热这里只有是精品50| 精品高清国产在线一区| 中文字幕av在线有码专区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| av福利片在线观看| 亚洲 国产 在线| 曰老女人黄片| 国产免费男女视频| 亚洲中文字幕日韩| 大型黄色视频在线免费观看| 一a级毛片在线观看| 亚洲av成人av| 夜夜爽天天搞| 欧美色视频一区免费| 亚洲免费av在线视频| 午夜久久久久精精品| 中文字幕av在线有码专区| 婷婷精品国产亚洲av| 人妻夜夜爽99麻豆av| 五月伊人婷婷丁香| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 精品国产亚洲在线| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲av片天天在线观看| 久久热在线av| 狂野欧美激情性xxxx| 成人三级做爰电影| 精品一区二区三区av网在线观看| 床上黄色一级片| 国产高清激情床上av| 亚洲,欧美精品.| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| a级毛片在线看网站| 一级作爱视频免费观看| 国产单亲对白刺激| 精品国内亚洲2022精品成人| 在线国产一区二区在线| 国产视频一区二区在线看| 女同久久另类99精品国产91| 日韩中文字幕欧美一区二区| 国产精品综合久久久久久久免费| 日本五十路高清| 岛国视频午夜一区免费看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 亚洲中文av在线| 久久精品91无色码中文字幕| 久9热在线精品视频| 女人被狂操c到高潮| 淫妇啪啪啪对白视频| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 欧美又色又爽又黄视频| 国产私拍福利视频在线观看| 麻豆av在线久日| 国产真实乱freesex| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 可以在线观看毛片的网站| 精品福利观看| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 两个人免费观看高清视频| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 精品高清国产在线一区| 亚洲av五月六月丁香网| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产成人av教育| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 欧美日本视频| 久热爱精品视频在线9| 男人舔女人下体高潮全视频| 岛国视频午夜一区免费看| 男女之事视频高清在线观看| 黄频高清免费视频| 又大又爽又粗| www国产在线视频色| 久久国产精品人妻蜜桃| 欧美激情久久久久久爽电影| 午夜福利在线在线| 长腿黑丝高跟| 久久亚洲真实| 夜夜夜夜夜久久久久| 精品久久久久久久久久免费视频| 曰老女人黄片| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产精品久久久久久人妻精品电影| av片东京热男人的天堂| 国产av一区在线观看免费| 窝窝影院91人妻| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久久国产欧美日韩av| 国产成年人精品一区二区| 一个人免费在线观看电影 | 一二三四社区在线视频社区8| av在线天堂中文字幕| 成年人黄色毛片网站| 日本三级黄在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲精品在线美女| 99re在线观看精品视频| 舔av片在线| 成年人黄色毛片网站| 国产精品一区二区免费欧美| 成年版毛片免费区| 村上凉子中文字幕在线| 99在线人妻在线中文字幕| 真人一进一出gif抽搐免费| 国产高清videossex| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 国产三级中文精品| 国产精品影院久久| 亚洲精品色激情综合| 亚洲精华国产精华精| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国内精品一区二区在线观看| av天堂在线播放| 国产私拍福利视频在线观看| 变态另类丝袜制服| 三级毛片av免费| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产成人精品久久二区二区免费| 欧美日韩精品网址| 大型黄色视频在线免费观看| 久久精品影院6| 欧美乱妇无乱码| 成人18禁在线播放| 午夜激情av网站| 国产一区在线观看成人免费| 性色av乱码一区二区三区2| 久久久久性生活片| 亚洲av片天天在线观看| 久久久久久人人人人人| 亚洲精品美女久久av网站| 午夜福利视频1000在线观看| 高清在线国产一区| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 男女视频在线观看网站免费 | 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 日本免费一区二区三区高清不卡| 国产高清视频在线观看网站| 国产精品久久视频播放| 老司机福利观看| 老司机深夜福利视频在线观看| 午夜免费成人在线视频| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲五月婷婷丁香| 国产片内射在线| 少妇熟女aⅴ在线视频| 亚洲乱码一区二区免费版| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 99热6这里只有精品| 又黄又粗又硬又大视频| www日本黄色视频网| 亚洲av熟女| 久久热在线av| 999久久久国产精品视频| 亚洲七黄色美女视频| 伦理电影免费视频| 欧美成人午夜精品| 1024香蕉在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 99热这里只有精品一区 | 一个人观看的视频www高清免费观看 | 午夜成年电影在线免费观看| 一本大道久久a久久精品| 波多野结衣高清无吗| 久久久久久久午夜电影| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产区一区二久久| 怎么达到女性高潮| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲18禁久久av| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 男男h啪啪无遮挡| 男女午夜视频在线观看| 一夜夜www| 亚洲精品国产一区二区精华液| 激情在线观看视频在线高清| 美女午夜性视频免费| 男女视频在线观看网站免费 | 91字幕亚洲| 淫秽高清视频在线观看| 99热6这里只有精品| 一本综合久久免费| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 精品久久久久久久末码| 中文字幕久久专区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产精品久久视频播放| 观看免费一级毛片| 国产99白浆流出| 国产一区二区在线av高清观看| 麻豆成人午夜福利视频| 丁香六月欧美| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产精品爽爽va在线观看网站| 操出白浆在线播放| 久久久久久久久中文| 欧美+亚洲+日韩+国产| av有码第一页| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产黄a三级三级三级人| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 一本大道久久a久久精品| 黄色女人牲交| 狠狠狠狠99中文字幕| 日本三级黄在线观看| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲成人国产一区在线观看| 国产精华一区二区三区| 日本一本二区三区精品| 成人av一区二区三区在线看| 99热只有精品国产| 在线观看日韩欧美| 久久久精品大字幕| 又紧又爽又黄一区二区| 黄片小视频在线播放| 毛片女人毛片| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| www.自偷自拍.com| 一个人免费在线观看电影 | 制服诱惑二区| 人人妻人人看人人澡| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲黑人精品在线| 91老司机精品| 神马国产精品三级电影在线观看 | 一级毛片高清免费大全| 此物有八面人人有两片| 国产成人精品无人区| 欧美久久黑人一区二区| 99国产极品粉嫩在线观看| 51午夜福利影视在线观看| 首页视频小说图片口味搜索| 久久国产精品影院| 一二三四社区在线视频社区8| 久久这里只有精品19| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 在线永久观看黄色视频| 99在线视频只有这里精品首页| 9191精品国产免费久久| 午夜福利欧美成人| 十八禁人妻一区二区| 天堂av国产一区二区熟女人妻 | 宅男免费午夜| 欧美日韩福利视频一区二区| 黑人操中国人逼视频| 国产高清激情床上av| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 老司机深夜福利视频在线观看| 久久久久久久久久黄片| 久久这里只有精品19| 亚洲一区中文字幕在线| 精品乱码久久久久久99久播| 免费在线观看亚洲国产| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 精品第一国产精品| 国产爱豆传媒在线观看 | www.精华液| 久久久久久人人人人人| 18禁美女被吸乳视频| 在线播放国产精品三级| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 色播亚洲综合网| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲真实伦在线观看| 制服诱惑二区| 国产精品一区二区精品视频观看| 久久久水蜜桃国产精品网| √禁漫天堂资源中文www| 我的老师免费观看完整版| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| www.精华液| 国产精品综合久久久久久久免费| 十八禁人妻一区二区| 午夜激情av网站| 黄色视频,在线免费观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 一区二区三区高清视频在线| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 伦理电影免费视频| av中文乱码字幕在线| 国产精品 国内视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 后天国语完整版免费观看| 人人妻人人看人人澡| 久久99热这里只有精品18| 黄色片一级片一级黄色片| 一二三四在线观看免费中文在| 久久久久久久午夜电影| 久久人妻av系列| 国产精品久久久av美女十八| 午夜精品在线福利| 国产精品免费视频内射| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 久久久国产成人免费| 国产精品免费视频内射| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产亚洲精品一区二区www| 亚洲无线在线观看| 日日夜夜操网爽| 国产黄a三级三级三级人| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产三级在线视频| 两性夫妻黄色片| 欧美精品啪啪一区二区三区| 久久香蕉国产精品| 日韩欧美国产在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 国产熟女午夜一区二区三区| av福利片在线观看| 久久久久久大精品| 啦啦啦韩国在线观看视频| 人妻夜夜爽99麻豆av| 一夜夜www| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久9热在线精品视频| 国产精品98久久久久久宅男小说| 99在线人妻在线中文字幕| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲全国av大片| 亚洲黑人精品在线| 亚洲成av人片在线播放无| 五月玫瑰六月丁香| 在线播放国产精品三级| www日本黄色视频网| 在线观看免费午夜福利视频| 麻豆成人av在线观看| 亚洲九九香蕉| 高潮久久久久久久久久久不卡| 他把我摸到了高潮在线观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 三级国产精品欧美在线观看 | 2021天堂中文幕一二区在线观| 男女之事视频高清在线观看| 久久 成人 亚洲| 免费电影在线观看免费观看| 婷婷丁香在线五月| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 在线观看免费视频日本深夜| 岛国在线免费视频观看| 亚洲午夜理论影院| 亚洲av成人av| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 日韩精品免费视频一区二区三区| e午夜精品久久久久久久| 午夜视频精品福利| 男人的好看免费观看在线视频 | 中文字幕熟女人妻在线| 欧美日本视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 九色国产91popny在线| 久久这里只有精品中国| 日本一区二区免费在线视频| 亚洲精品在线美女| www.www免费av| 亚洲欧美日韩东京热| 99国产综合亚洲精品| 在线国产一区二区在线| 变态另类丝袜制服| 九色国产91popny在线| 国产高清激情床上av| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲 国产 在线| 欧美日韩一级在线毛片| 我的老师免费观看完整版| 欧美黑人巨大hd| 欧美乱色亚洲激情| 久久精品综合一区二区三区| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 日韩有码中文字幕| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 亚洲人成网站高清观看| 国产不卡一卡二| 婷婷丁香在线五月| 亚洲自拍偷在线| 成人国语在线视频| 久久欧美精品欧美久久欧美| 欧美日韩福利视频一区二区| 免费在线观看影片大全网站| 母亲3免费完整高清在线观看| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产探花在线观看一区二区| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 岛国视频午夜一区免费看| 黄色a级毛片大全视频| 久久天堂一区二区三区四区| 中文字幕最新亚洲高清| 一区福利在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 香蕉av资源在线| 最新美女视频免费是黄的| 两个人免费观看高清视频| 国产成人啪精品午夜网站| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 午夜成年电影在线免费观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 成人三级黄色视频| 特大巨黑吊av在线直播| 国产精品av视频在线免费观看| 国产成人欧美在线观看| 丁香欧美五月| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 色噜噜av男人的天堂激情| 亚洲国产中文字幕在线视频| 日本 av在线| 中文字幕最新亚洲高清| 在线免费观看的www视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 黄色视频,在线免费观看| www日本在线高清视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 一区二区三区激情视频| 麻豆国产av国片精品| 欧美又色又爽又黄视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 男女下面进入的视频免费午夜| 伦理电影免费视频|