食用玫瑰和土壤中啶酰菌胺殘留量的測(cè)定研究

姚福泉，侯祿懷，趙 云，孟文俊，張 瓊，和順琴*

（1.中國(guó)建筑材料工業(yè)地質(zhì)勘查中心云南總隊(duì)，云南昆明 650500；2.云南醫(yī)藥健康職業(yè)學(xué)院，云南昆明 650106）

食用玫瑰含有豐富的氨基酸、膳食纖維、維生素及各種微量元素，具有很高的營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值，可作食用和藥用[1]。云南省是食用玫瑰的主要產(chǎn)區(qū)，經(jīng)不斷發(fā)展已形成完整的產(chǎn)業(yè)鏈，其已被廣泛應(yīng)用于鮮花餅、鮮花醬、花茶等產(chǎn)品的加工，帶來(lái)了明顯的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益[2]。但受氣候環(huán)境、種植模式、區(qū)域分布等因素的影響，食用玫瑰的病害發(fā)生日益頻繁，危害嚴(yán)重。在玫瑰花開(kāi)時(shí)節(jié)氣候環(huán)境普遍低溫、高濕，易引起灰霉病、根腐病等病蟲(chóng)害的發(fā)生[3]。啶酰菌胺（Boscalid）是德國(guó)巴斯夫公司開(kāi)發(fā)的一種新型煙酰胺類內(nèi)吸性殺菌劑，是一種低毒殺菌劑[4]。其作用機(jī)制是通過(guò)葉面滲透在植物中轉(zhuǎn)移，抑制線粒體琥珀酸酯脫氫酶的生成，阻礙三羧酸循環(huán)，使氨基酸、糖缺乏，能量減少，干擾細(xì)胞的分裂和生長(zhǎng)，因此對(duì)植物病害具有防治作用。啶酰菌胺殺菌譜較廣，幾乎對(duì)所有類型的真菌病害都有活性，對(duì)防治白粉病、灰霉病、菌核病和各種腐爛病、褐腐病和根腐病等非常有效，對(duì)其他藥劑的抗性菌亦有效，與多菌靈、速克靈等無(wú)交互抗性[5-7]。其主要用于油菜、葡萄、草莓、果樹(shù)、蔬菜和大田作物等病害的防治，對(duì)作物安全、活性高、滲透?jìng)鲗?dǎo)作用優(yōu)良，是一種應(yīng)用前景廣闊的殺菌劑[8-9]。

啶酰菌胺為目前最常用的琥珀酸脫氫酶抑制劑（Succinate Dehydrogenase Inhibitors，SDHIs）化學(xué)農(nóng)藥，具有低毒、高效的優(yōu)點(diǎn)，但目前對(duì)于食用玫瑰病蟲(chóng)害防治方面的應(yīng)用尚未見(jiàn)報(bào)道[10-14]?？紤]到食用玫瑰的實(shí)用性及病蟲(chóng)害影響，本文對(duì)云南省安寧市八街鎮(zhèn)種植的食用玫瑰進(jìn)行施藥處理，對(duì)啶酰菌胺在食用玫瑰和土壤中的殘留量檢測(cè)方法進(jìn)行研究，以期為探索啶酰菌胺產(chǎn)品在食用玫瑰灰霉病等病蟲(chóng)害防治中的可行性應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

氣相色譜儀（Agilent 7890A，配ECD 檢測(cè)器）；色譜柱（Agilent，HP-5，30 m×0.32 mm，0.25 μm）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（BUCHI R-300 型）；粉碎機(jī)；低速大容量離心機(jī)（TDL-5-A，上海安亭），50 mL 塑料離心管；超聲波萃取器。

啶酰菌胺標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥99.97%，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；50%啶酰菌胺水分散粒劑，巴斯夫?股份公司；所用有機(jī)溶劑、無(wú)水硫酸鈉、氯化鈉等均為分析純（市售）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 田間試驗(yàn)方法

供試作物為滇紅玫瑰（Dian Hong Rose），露天種植，試驗(yàn)地點(diǎn)為云南省昆明市安寧市八街鎮(zhèn)，試驗(yàn)時(shí)間 為2021 年4 月14 日至2021 年5 月15 日。種植期間分別設(shè)置低劑量（375 g a.i.·hm-2）、高劑量（750 g a.i.·hm-2）以及3 次和4 次施藥處理，施藥間隔期為5 d，并設(shè)空白對(duì)照。最后一次施藥后3 d、5 d、7 d 時(shí)分別取玫瑰莖葉、花瓣和土壤樣品測(cè)定啶酰菌胺殘留量。

1.2.2 樣品處理

將玫瑰花瓣、莖葉及土壤充分粉碎后，取10 g樣品至50 mL 磨口三角瓶中，加入20 mL 乙腈（0.1%醋酸），密封后置于超聲波萃取器中提取5 min。靜置5 min 后加入1 g NaCl，再置于超聲波萃取器中提取5 min。萃取液轉(zhuǎn)移至離心管，于6 000 r·min-1離心5 min，取10 mL 上清至三角瓶中，無(wú)水硫酸鈉干燥后，過(guò)濾，取1 mL 濾液至樣品瓶備用。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

將啶酰菌胺標(biāo)準(zhǔn)品溶解于乙腈，配制100 mg·L-1的母液。用乙腈將啶酰菌胺母液稀釋成0.01 mg·L-1、0.05 mg·L-1、0.10 mg·L-1、0.50 mg·L-1、1.00 mg·L-1和5.00 mg·L-1的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.2.4 色譜檢測(cè)條件

參考已報(bào)道的條件[15-16]并加以優(yōu)化確定本次色譜檢測(cè)條件，具體參數(shù)為氣相色譜儀（Agilent 7890A，ECD 檢測(cè)器）；色譜柱（Agilent，HP-5， 30 m×0.32 mm，0.25 μm）；恒壓模式：100 kPa；升溫程序：初始柱溫150 ℃，保持1 min，以10 ℃·min-1升溫至260 ℃，保持10 min；進(jìn)樣口溫度：260 ℃；檢測(cè)器溫度：280 ℃；進(jìn)樣量：1.0 μL；進(jìn)樣模式：分流進(jìn)樣，分流比1 ∶10；載氣：高純氮?dú)猓兌取?9.999%），流量：2 mL·min-1；ECD 尾吹： 30 mL·min-1。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

測(cè)定系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，以啶酰菌胺濃度為x軸，峰面積為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1），并進(jìn)行回歸分析。啶酰菌胺在0.01 ～5.00 mg·L-1線性關(guān)系良好，回歸方程為y=854 035x+9 365.6，R2=0.999 5。啶酰菌胺的最低檢出濃度為0.01 mg·kg-1。

圖1 啶酰菌胺標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

2.2 方法回收率及精密度試驗(yàn)結(jié)果

將不同濃度的啶酰菌胺標(biāo)樣溶液分別加入未施用啶酰菌胺的玫瑰花瓣、莖葉及土壤空白樣品中，進(jìn)行樣品處理，添加水平分別為0.01 mg·kg-1、 1.00 mg·kg-1、5.00 mg·kg-1，每個(gè)添加濃度重復(fù)檢測(cè)5 次，計(jì)算方法回收率，結(jié)果如表1 所示。結(jié)果表明，使用本方法測(cè)得啶酰菌胺在玫瑰花瓣、莖葉及土壤中的回收率均分別為94.80%～97.00%、94.69%～96.71%、94.25%～100.14%，變異系數(shù)分別為1.42%～7.05%、2.29%～4.41%、1.14%～4.99%。本方法準(zhǔn)確度和精密度符合農(nóng)藥殘留分析的要求。

表1 啶酰菌胺在食用玫瑰及土壤中的加標(biāo)回收率及精密度試驗(yàn)結(jié)果（n=5）

2.3 啶酰菌胺在玫瑰和土壤中的殘留檢測(cè)結(jié)果

最后一次施藥后3 d、5 d、7 d 時(shí)分別取玫瑰莖葉、花瓣和土壤，按照1.2.2 樣品處理方法進(jìn)行前處理，根據(jù)1.2.4 色譜檢測(cè)條件進(jìn)行檢測(cè)，試驗(yàn)共重復(fù)3 次，結(jié)果如表2 所示。施用量為750 g a.i.·hm-2時(shí)，啶酰菌胺在玫瑰花瓣、莖葉和土壤中的殘留量整體高于施用量為375 g a.i.·hm-2時(shí)的殘留量。施藥次數(shù)對(duì)啶酰菌胺在玫瑰花瓣、莖葉和土壤中的殘留量無(wú)明顯影響?！妒称钒踩珖?guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）規(guī)定啶酰菌胺在黃瓜中的最大殘留量（Maximum Residue Limit，MRL）為5 mg·kg-1，在蘋(píng)果中的最大殘留量為2 mg·kg-1，草莓和甜瓜等水果中的最大殘留量為3 mg·kg-1[17-18]。本研究開(kāi)展的試驗(yàn)中，在最后一次施用375 g a.i.·hm-2和750 g a.i.·hm-2劑量的啶酰菌胺水分散粒劑后3 d，玫瑰花瓣中啶酰菌胺殘留量多大于水果的MRL；最后一次施藥5 d后，啶酰菌胺殘留量有所下降，但仍高于蘋(píng)果的MRL；最后一次施藥7 d 后，玫瑰花瓣中的農(nóng)藥殘留低于水果中（除蘋(píng)果外）啶酰菌胺的MRL。

表2 啶酰菌胺在食用玫瑰和土壤中的最終殘留量（n=3）

3 結(jié)論

本文建立了食用玫瑰和土壤中啶酰菌胺殘留量的氣相色譜分析方法。該方法對(duì)啶酰菌胺的最低檢出濃度為0.01 mg·kg-1，在0.01 ～5.00 mg·L-1線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2為0.999 5，方法的回收率和精密度符合農(nóng)藥殘留分析要求。對(duì)田間試驗(yàn)的食用玫瑰花瓣、莖葉和土壤中啶酰菌胺殘留量進(jìn)行檢測(cè)，最后一次施藥7 d 后，玫瑰花瓣中的農(nóng)藥殘留低于水果中（除蘋(píng)果外）啶酰菌胺的MRL。本方法可應(yīng)用于食用玫瑰和土壤中啶酰菌胺的殘留量檢測(cè)及后期消解動(dòng)態(tài)研究。