銀白魚人工繁殖受精卵附著介質(zhì)篩選

范姝云 肖勇 田敏 曲品 楊劍虹 安莉

(昆明市水產(chǎn)科學(xué)研究所，云南昆明 650021)

銀白魚(Anabariliusalburnops)隸屬于鯉科、鲌亞科、白魚屬，是白魚屬中個(gè)體較大的種類，其營養(yǎng)豐富、肉質(zhì)鮮嫩肥美，是滇池特有的土著魚種，一直以來深受廣大昆明市民的青睞，二十世紀(jì)七十年代以前是滇池主要的經(jīng)濟(jì)魚類[1]。后隨著昆明城市化、工業(yè)化的發(fā)展以及大規(guī)模圍湖造田，破壞了水生生物繁殖棲息場所，加之外來物種侵入、酷漁濫捕等因素，導(dǎo)致滇池水生態(tài)環(huán)境遭到破壞，水質(zhì)逐漸惡化至Ⅳ類[2-3]，銀白魚在滇池中的生存空間遭到擠占，產(chǎn)卵場面積縮小，種群幾近消失，現(xiàn)已被《中國瀕危動(dòng)物紅皮書——魚類》《中國紅色名錄》《IUCN紅色名錄》列為瀕危種類，同時(shí)也被列入云南省特有珍稀保護(hù)動(dòng)物名錄[3]。

銀白魚體長而側(cè)扁，頭后背部隆起，背包平直，腹緣呈弧形，體高略小于頭長。吻端尖，吻長大于眼徑而微微小于眼間距，口端位或次上位，下頜略突出，其前端的小突起嵌入上頜的凹陷處，口裂斜向上，后端伸達(dá)鼻孔前緣的正下方，無須。腹棱自腹鰭基后延伸至肛門。銀白魚生活于水體的中上層，常在水草叢中覓食。該魚食性雜，在不同生長階段所攝取的食物組成不同：體長110～170 mm時(shí)，以枝角類為主，其次是絲狀藻、小魚和蝦等；體長171～335 mm時(shí)，以小魚和蝦為主[1-2]。銀白魚為小型魚類，生長較慢，1冬齡魚可達(dá)到性成熟，產(chǎn)卵盛期為2月至3月中旬，卵為黏性。據(jù)觀察，銀白魚多選擇滇池邊礫石較多的湖灣產(chǎn)卵。

開展銀白魚人工繁殖及孵化研究是銀白魚種群恢復(fù)的關(guān)鍵技術(shù)手段。目前，對(duì)銀白魚人工繁殖及孵化的研究極少，幾乎沒有可供查證的學(xué)術(shù)資料，故亟須系統(tǒng)地開展人工繁殖和孵化各基本參數(shù)的研究。本試驗(yàn)為銀白魚人工繁殖探索性試驗(yàn)，旨在篩選出最利于受精卵孵化的附著介質(zhì)，提高孵化效率，保障孵化質(zhì)量，為今后開展銀白魚人工增養(yǎng)殖提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)場地

試驗(yàn)在昆明市尋甸縣境內(nèi)水產(chǎn)科學(xué)研究所土著魚繁育實(shí)驗(yàn)室的鋼架大棚內(nèi)進(jìn)行，大棚面積為667 m2，水源采用地下井水，棚內(nèi)設(shè)有工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖設(shè)施1套，包含生物凈化、紫外線殺菌、增氧等設(shè)施設(shè)備。另準(zhǔn)備足量的授精攪拌器皿、注射器、塑料方形箱、塑料漏水方框、充氧泵、10 mL量杯、鐵絲、白瓷盤等。

1.2 親魚來源

親魚是由2017—2019年在滇池收集到的銀白魚馴化后人工繁殖得到的子一代養(yǎng)成而來。

1.3 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)選用4種受精卵附著介質(zhì)，分別為尼龍紗窗網(wǎng)、棕片、礫石(工業(yè)用)、瓦片。尼龍紗窗網(wǎng)和棕片為魚類人工繁殖中常用的介質(zhì)。采用礫石和板瓦是為了模擬銀白魚自然產(chǎn)卵場的沙礫和岸邊巖石環(huán)境。礫石平均粒徑約2 cm，均勻置于底面積為20 cm×30 cm的矩形塑料漏水筐中。瓦片大小為16 cm×16 cm，鉆孔，以方便用鐵絲固定。紗窗網(wǎng)的網(wǎng)目大小為1 mm×1 mm，剪裁為50 cm×50 cm的網(wǎng)片。棕片除去硬質(zhì)部分，用手撕拉至松軟。另外單獨(dú)準(zhǔn)備1塊30 cm×30 cm的紗窗網(wǎng)片，用于計(jì)算受精率。

使用前，所有介質(zhì)經(jīng)高錳酸鉀溶液浸泡消毒。使用時(shí)，將介質(zhì)分別置于80 cm×60 cm×50 cm(長×寬×高)的長方形塑料箱中。對(duì)銀白魚人工授精完成后，用量筒分別裝10 mL受精卵布設(shè)到面積基本相同的4種介質(zhì)上，靜置20 min，待受精卵產(chǎn)生黏性附著牢固后，再將箱中的介質(zhì)取出分別移入4口培育缸中，使其處于培育缸的中上部以方便觀察。

1.3.1 人工授精及受精率計(jì)算

銀白魚授精采用干法授精。授精前用干毛巾擦拭親魚泄殖孔周圍，確保精液與卵子在獲取過程中不沾水。人工授精的雌雄比為1∶2，精子與卵子接觸后，加入適量0.85%的生理鹽水，用羽毛充分?jǐn)嚢?～3 min。隨后用少量水沖洗多次，均勻攪拌，直至受精卵開始出現(xiàn)輕微的黏附現(xiàn)象時(shí)，用量杯分別取10 mL受精卵布設(shè)在放有不同介質(zhì)的長方形箱中。

與此同時(shí)，另取2個(gè)10 mL量筒(分別編號(hào)為1號(hào)、2號(hào))。1號(hào)量筒取2 mL受精卵，倒入白瓷盤中統(tǒng)計(jì)受精卵的數(shù)量，以便計(jì)算各介質(zhì)附著魚卵的平均數(shù)。2號(hào)量筒取5 mL受精卵均勻布在30 cm×30 cm的紗窗網(wǎng)上，用作統(tǒng)計(jì)受精率，并觀察受精卵的孵化和發(fā)育情況。在不同發(fā)育時(shí)段，隨機(jī)取出一定量受精卵置于顯微鏡下觀察，當(dāng)觀察到發(fā)育至原腸期的卵子后，取50粒受精卵進(jìn)行鏡檢，當(dāng)超過60%的受精卵發(fā)育到原腸期后，開始計(jì)算受精率(%)。

受精率=原腸期卵數(shù)/總卵數(shù)×100

(1)

1.3.2 銀白魚魚卵孵化管理

試驗(yàn)前對(duì)提水、增氧、紫外線殺菌、凈水等設(shè)施設(shè)備進(jìn)行檢查調(diào)試，保證試驗(yàn)期間設(shè)備運(yùn)行正常。試驗(yàn)期間水溫保持在11～16 ℃，每天定時(shí)觀察受精卵的孵化情況，及時(shí)將發(fā)白、發(fā)霉的魚卵取出并記錄數(shù)量，記錄銀白魚受精卵的孵化時(shí)間，計(jì)算其孵化率(%)。

孵化率=出膜仔魚數(shù)/受精卵數(shù)×100

(2)

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 人工繁殖受精率

統(tǒng)計(jì)1號(hào)量筒中的受精卵數(shù)量可知，2 mL約有1 000粒受精卵，平均為500粒/mL。通過分時(shí)段觀測30 cm×30 cm紗窗網(wǎng)上布設(shè)的5 mL受精卵，達(dá)到原腸期的受精卵約有2 270粒。經(jīng)計(jì)算，本次試驗(yàn)的受精率約為90%。鏡檢觀察，受精卵卵徑為1 973.67～2 787.15 μm，卵黃直徑為1 218.93～1 843.89 μm。

2.2 不同介質(zhì)受精卵的孵化情況

定期觀測各培育缸中受精卵的孵化情況，直到全部孵化，統(tǒng)計(jì)出膜仔魚數(shù)量，記錄出膜時(shí)間，計(jì)算孵化率和孵化時(shí)長(見表1)。結(jié)果表明，4種介質(zhì)試驗(yàn)組的孵化率由高到低依次為：棕片組、紗窗網(wǎng)組、礫石組、瓦片組。棕片組孵化率最高，為80%，比紗窗網(wǎng)組高10%左右，比最低的瓦片組高了50%以上，且孵化時(shí)長也相較其他介質(zhì)要短。

表1 不同受精卵附著介質(zhì)孵化情況

3 討論

3.1 銀白魚受精卵的孵化時(shí)長

與同屬的其他種類相比，銀白魚孵化過程較長[4-6]，在水溫11～16 ℃條件下，仔魚出膜時(shí)長為282～300 h。究其原因，一方面可能是受到銀白魚產(chǎn)卵季節(jié)氣候條件的限制，此時(shí)水溫較低；另一方面可能是由銀白魚自身的生物特性決定的。此外，采用不同附著介質(zhì)受精卵的孵化時(shí)間也有差異。試驗(yàn)顯示，棕片組和紗窗網(wǎng)組仔魚的出膜時(shí)長相對(duì)于礫石組和瓦片組要短。結(jié)合銀白魚自然產(chǎn)卵場的產(chǎn)卵環(huán)境及條件分析，可能是棕片和紗窗網(wǎng)材質(zhì)柔韌度較高，在培育缸中可隨著水流擺動(dòng)，對(duì)受精卵產(chǎn)生較強(qiáng)的流水刺激，從而能加快受精卵的發(fā)育。此外，有研究發(fā)現(xiàn)，魚卵孵化所需的氧氣主要是通過擴(kuò)散得到的[7]，礫石和瓦片上的受精卵受流水?dāng)_動(dòng)較弱，溶解氧擴(kuò)散不充分，因而會(huì)導(dǎo)致發(fā)育較慢。

3.2 不同產(chǎn)卵介質(zhì)條件下的孵化率比較分析

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，銀白魚卵在4種介質(zhì)上均能很好地附著，但其孵化率有較大差異。孵化率由高到低的順序?yàn)樽仄?、紗窗網(wǎng)、礫石、瓦片，這很可能是由于介質(zhì)材質(zhì)不同造成的。棕片經(jīng)過撕拉后，具有張力強(qiáng)、立體性好、摩擦力大的特點(diǎn)，使得受精卵黏附程度高，在水下具有良好的透水性，能使受精卵在流水中擺動(dòng)，接觸更多的清潔水，溶解氧更充足。此外，柔韌的棕絲及其松散的結(jié)構(gòu)使人工剔除病變受精卵更加方便，有效地避免了交叉感染水霉的危險(xiǎn)，故孵化率較其他3種介質(zhì)高。紗窗網(wǎng)具有均勻統(tǒng)一的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，材質(zhì)細(xì)軟，但容易受水的張力和流水沖擊的影響，且網(wǎng)片容易粘在一起導(dǎo)致通透性變差。此外，如果受精卵感染水霉后較難將之從網(wǎng)片上剔除，因此孵化率低于棕片。與瓦片相比，礫石表面更為粗糙，且紋理不規(guī)則，能提供比瓦片更多的水體接觸面積，但因二者與受精卵表面接觸面積過大，受精卵布設(shè)在礫石及瓦片上時(shí)分布都不均勻，容易附著成團(tuán)，透水、透氣性很低。礫石、瓦片的物理輪廓還會(huì)影響水流方向，產(chǎn)生水流沖擊死角，水體溶解氧分布不均勻，導(dǎo)致受精卵水霉病發(fā)生的概率增加，從而降低孵化率。綜合分析比較，棕片透水、透氣性好，具有立體結(jié)構(gòu)，采購成本低，便于運(yùn)輸及操作，適用于銀白魚規(guī)?；斯し敝场?/p>

3.3 人工繁殖的必要性

經(jīng)過多年的實(shí)地調(diào)查，銀白魚產(chǎn)卵場受滇池湖岸環(huán)境變化影響較大，目前僅分布于滇池西部一小塊狹長的區(qū)域。雖然目前偶爾還可在滇池中捕獲銀白魚個(gè)體，但是數(shù)量極其有限。由于在自然界中銀白魚產(chǎn)卵季節(jié)水溫偏低，受精卵孵化時(shí)間較長，以及滇池水質(zhì)污染、外來魚類擠占其生存空間等因素，導(dǎo)致銀白魚在自然環(huán)境條件下繁殖越來越困難，成功孵化并成活的數(shù)量非常少，很難通過自然繁殖來擴(kuò)大種群數(shù)量。采用人工繁殖技術(shù)可以調(diào)控繁育環(huán)境條件，快速擴(kuò)大銀白魚的種群數(shù)量，為增殖放流恢復(fù)銀白魚種群數(shù)量提供基礎(chǔ)，是促進(jìn)滇池魚類生物多樣性及水生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定的有效途徑。