用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀聯(lián)合PCR擴(kuò)增儀診斷乙型病毒性肝炎的價(jià)值研究

劉元鐘

（電子科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬綿陽(yáng)市中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，四川 綿陽(yáng) 621000）

乙型病毒性肝炎是臨床上常見的一種疾病，是指患者因感染乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）而發(fā)生的肝臟病變。該病的傳染性較高。該病患者的臨床癥狀主要是乏力、惡心及肝區(qū)疼痛，并可伴有不同程度的肝功能損害，病情嚴(yán)重的患者甚至?xí)l(fā)生肝硬化及感染[1]。乙肝兩對(duì)半是判定是否發(fā)生HBV感染的血清免疫標(biāo)志物。全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀可用于檢測(cè)乙肝兩對(duì)半。HBV是一種雙鏈DNA病毒。臨床上可根據(jù)患者血清中HBV-DNA的含量判定其是否患有乙型病毒性肝炎。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）擴(kuò)增儀可用于進(jìn)行HBV-DNA定量檢測(cè)[2-3]。本文主要是探討使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀聯(lián)合PCR擴(kuò)增儀診斷乙型病毒性肝炎的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本文的研究對(duì)象為2020年1月至2021年2月期間電子科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬綿陽(yáng)市中心醫(yī)院收治的186例疑似患有乙型病毒性肝炎的患者。在這些患者中，有男性患者105例，女性患者81例；其年齡為15～78歲，平均年齡為（46.50±31.50）歲。本次研究經(jīng)該醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

本次研究中使用的主要儀器和試劑為全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（品牌：西門子，型號(hào)：ADVIA Centaur CP）及配套試劑、PCR擴(kuò)增儀（品牌：萊恩德，型號(hào)：LD-PCR）及配套試劑。在清晨使用真空負(fù)壓采血管采集患者5 m L的空腹靜脈血。將血液標(biāo)本放在水浴箱中10 m in。用離心機(jī)以4000 r/m in的速度對(duì)血液標(biāo)本進(jìn)行離心處理。將血清低溫保存。為所有患者均使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀進(jìn)行乙肝五項(xiàng)檢測(cè)，然后根據(jù)檢測(cè)結(jié)果判定其是否患有乙型病毒性肝炎。檢測(cè)乙肝五項(xiàng)的方法是：按照試劑盒的說明書，使待檢血清分別與包被乙型肝炎病毒表面抗原（hepatitis B virus surface antigen，HBsAg）、乙 型 肝 炎 病毒表面抗體（hepatitis B virus surface antibody，HBsAb）、乙 型 肝 炎 病 毒e抗 原（hepatitis B virus e antigens，HBeAg）、乙型肝炎病毒e抗體（hepatitis B virus e antibody，HBeAb）及 乙 肝病毒核心抗體（hepatitis B virus core antibody，HBcAb）的順磁顆粒結(jié)合，并向其中添加吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物。用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀觀測(cè)復(fù)合物出現(xiàn)的發(fā)光反應(yīng)。乙肝五項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)為：患者的血清HBsAg定量≥0.5 IU/m L、HBsAb定量＞10.00 MIU/m L、HBeAg定量＞0.100 IU/m L、HBeAb定量＞0.20 IU/m L或HBcAb定量＞0.60 IU/m L。若為這些患者使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)乙肝五項(xiàng)的結(jié)果為陽(yáng)性，則可判定其患有乙型病毒性肝炎。為所有患者均使用PCR擴(kuò)增儀進(jìn)行HBV-DNA定量檢測(cè)，然后根據(jù)監(jiān)測(cè)結(jié)果判定其是否患有乙型病毒性肝炎。進(jìn)行HBV-DNA定量檢測(cè)的方法是：在待檢血清中加入100 μL的裂解液，混勻后靜置10 min，離心25 s，去除上層清液。在獲得的溶液中加入150μL的洗滌液，混勻后靜置10 m in，離心25 s，去除上層清液。在獲得的溶液中再次加入150μL的洗滌液，混勻后靜置10 m in，離心25 s，去除上層清液。在獲得的溶液中加入30 μL的反應(yīng)液，并放入PCR擴(kuò)增儀中。將熒光猝滅基團(tuán)標(biāo)記探針與熒光報(bào)告基團(tuán)標(biāo)記探針分別添加在HBV-DNA模板的兩端，用Taq酶降解探針作為引導(dǎo)。當(dāng)兩個(gè)基團(tuán)的抑制作用消失后，根據(jù)該熒光信號(hào)測(cè)定HBV-DNA的含量。HBV-DNA檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)為：患者血清中HBV-DNA的水平＞1000 copy/m L。若為這些患者使用PCR擴(kuò)增儀檢測(cè)HBV-DNA的結(jié)果為陽(yáng)性，則可判定其患有乙型病毒性肝炎。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察為這些患者單獨(dú)使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀、單獨(dú)使用PCR擴(kuò)增儀、聯(lián)合使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀和PCR擴(kuò)增儀診斷乙型病毒性肝炎的結(jié)果、敏感度、特異度和準(zhǔn)確度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

對(duì)本次研究中的數(shù)據(jù)均采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 為這些患者使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀診斷乙型病毒性肝炎的結(jié)果

為這些患者使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀診斷乙型病毒性肝炎的結(jié)果顯示，有119例患者患有乙型病毒性肝炎，有67例患者未患有乙型病毒性肝炎。詳見表1。

表1 為這些患者使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀診斷乙型病毒性肝炎的結(jié)果（例）

2.2 為這些患者使用PCR擴(kuò)增儀診斷乙型病毒性肝炎的結(jié)果

為這些患者使用PCR擴(kuò)增儀診斷乙型病毒性肝炎的結(jié)果顯示，有123例患者患有乙型病毒性肝炎，有63例患者未患有乙型病毒性肝炎。詳見表2。

表2 為這些患者使用PCR擴(kuò)增儀診斷乙型病毒性肝炎的結(jié)果（例）

2.3 為這些患者使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀聯(lián)合PCR擴(kuò)增儀診斷乙型病毒性肝炎的結(jié)果

2.4 為這些患者使用三種方法診斷乙型病毒性肝炎的效能

為這些患者使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀聯(lián)合PCR擴(kuò)增儀診斷乙型病毒性肝炎的結(jié)果顯示，有133例患者患有乙型病毒性肝炎，有53例患者未患有乙型病毒性肝炎。詳見表3。

表3 為這些患者使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀聯(lián)合PCR擴(kuò)增儀診斷乙型病毒性肝炎的結(jié)果（例）

與單獨(dú)使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀或PCR擴(kuò)增儀相比，為本研究中的患者聯(lián)合使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀和PCR擴(kuò)增儀診斷乙型病毒性肝炎的敏感度、特異度及準(zhǔn)確度均較高，P＜0.05。詳見表4。

表4 為這些患者使用三種方法診斷乙型病毒性肝炎的效能（%）

3 討論

乙型病毒性肝炎是臨床上常見的一種傳染病。HBV的傳染源主要是乙型病毒性肝炎患者及HBV攜帶者，傳播方式包括母嬰傳播、血液傳播及性傳播。乙型病毒性肝炎患者病情的潛伏期可受到病原體種類、數(shù)量及個(gè)人免疫狀態(tài)等因素的影響[4-5]。乙肝五項(xiàng)的檢測(cè)指標(biāo)可反映出患者感染HBV后的免疫狀態(tài)。全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀是臨床上常用于檢測(cè)乙肝兩對(duì)的儀器，可利用化學(xué)發(fā)光法確定血液內(nèi)是否存在HBsAg、HBsAb、HBeAg、HbeAb及HBcAb，為臨床診治乙型病毒性肝炎提供依據(jù)[6-7]。相關(guān)的研究結(jié)果顯示，使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀診斷乙型病毒性肝炎的準(zhǔn)確率較高[8]。但使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀診斷乙型病毒性肝炎無(wú)法準(zhǔn)確地判定患者體內(nèi)HBV復(fù)制及傳染的情況，因此存在一定的漏診率及誤診率。HBV屬于DNA病毒，依靠HBVDNA完成復(fù)制。乙型病毒性肝炎患者體內(nèi)HBVDNA的含量越高，表示其體內(nèi)HBV的復(fù)制越活躍，其病情的傳染性越強(qiáng)[9-10]。PCR擴(kuò)增儀是一種可用于定量檢測(cè)特定DNA片段的儀器。使用PCR擴(kuò)增儀診斷乙型病毒性肝炎可將微量的HBVDNA大幅度擴(kuò)增并測(cè)定受檢品中HBV-DNA水平，為臨床診斷乙型病毒性肝炎提供依據(jù)[11-12]。將全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀和PCR擴(kuò)增儀聯(lián)合用于診斷乙型病毒性肝炎，可使兩種儀器相互彌補(bǔ)診斷過程中的不足之處，大大提高診斷的效能。

本次研究的結(jié)果證實(shí)，與單獨(dú)使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀或PCR擴(kuò)增儀相比，聯(lián)合使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀和PCR擴(kuò)增儀診斷乙型病毒性肝炎的敏感度、特異度及準(zhǔn)確度均較高。