女貞子中齊墩果酸和熊果酸含量提取轉(zhuǎn)移率研究

施棟磊?繆琦?袁清風(fēng)

【中圖分類號】R282 【文獻標(biāo)識碼】A 【文章編號】1673-9026（2022）05--01

女貞子為木犀科植物女貞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果實。冬季果實成熟時采收，除去枝葉，稍蒸或置沸水中略燙后，干燥;或直接干燥。其性味甘、苦、涼， 歸肝、腎經(jīng)。具有滋補肝腎、明目烏發(fā)的功效[1]。隨著現(xiàn)代藥理學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展和進步，發(fā)現(xiàn)女貞子不但具有保肝、改善視力的作用，還具有抗病毒、治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松[2]、免疫調(diào)節(jié)[3]、促進生長增強體質(zhì)[4]等功能。《神農(nóng)本草經(jīng)》將其列之為上品，是名副其實的。目前， 從女貞子中分離到的主要化合物為苯乙醇類、裂環(huán)環(huán)烯醚萜類、三萜類及黃酮類， 其中齊墩果酸和熊果酸是女貞子中主要脂溶性成分，也是女貞子的活性成分， 兩者屬五環(huán)三萜類化合物， 結(jié)構(gòu)極為相似。齊墩果酸毒性很低，具有多種生物活性：抗病毒、消炎、增強免疫和免疫調(diào)解、抑制血小板凝集、降血脂、降糖、保肝、護腎、抗艾滋病毒等作用[5-7]熊果酸毒性小， 具有多種生物學(xué)活性， 尤其是在抗腫瘤、抗氧化、保肝、降血脂方面作用顯著[8-10]。為了提高女貞子的利用率，會將女貞子進行炮制，研究表明酒制女貞子中齊墩果酸含量升高[11]。本文比較了使用女貞子生藥材與炮制品、軋扁粉碎與不粉碎、采用不同提取溶劑的時候齊墩果酸和熊果酸的提取轉(zhuǎn)移率的差異，以指導(dǎo)女貞子用于中藥制劑時提取工藝提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1實驗儀器

高效液相色譜儀（Agilent 1260），色譜柱（Kromasil 100-5C18， 4.6×250mm，5μm），電子天平（梅特勒，ME204）、藥材粉碎機、超聲波清洗器、數(shù)顯恒溫水浴鍋。

1.2實驗材料

中藥女貞子和酒制女貞子均購自當(dāng)?shù)厮幉呐l(fā)公司，各考察了三個不同批號;齊墩果酸對照品和熊果酸對照品均購自中國食品藥品檢定研究院;甲醇和磷酸為色譜純，購自默克公司;三乙胺為分析純，購自西隴科學(xué)化學(xué)試劑有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1女貞子含量測定

2.1.1對照品溶液的制備

精密稱取熊果酸與齊墩果酸對照品適量，加甲醇分別制成每1ml中含熊果酸50μg和齊墩果酸150μg的溶液，即得。

2.1.2供試品溶液的制備

取女貞子粉末（過三號篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇100ml， 稱定重量，超聲提取40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3高效液相色譜方法

色譜條件：高效液相色譜儀;色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相：甲醇-水-磷酸-三乙胺（87：13：0.2：0.04）;檢測波長：214nm：溫度：25℃，流速：1.0ml/min。理論板數(shù)按齊墩果酸計應(yīng)不低于10000。熊果酸與齊墩果酸分離度符合要求（≥1.5）。

2.1.4女貞子含量結(jié)果

2.2女貞子提取工藝

2.2.1提取工藝方法

將女貞子粉碎處理或者不粉碎400g，加入3倍量不同濃度的乙醇，浸泡2小時，回流提取1.5小時（完全沸騰后計時），趁熱濾過，收集醇提液，藥渣再用相同方法醇提1次1.5小時，合并醇提液，濃縮，定量至100ml，即得女貞子提取液。

2.2.2按照正交表設(shè)計試驗

2.2.3提取液含量測定的方法

2.2.3.1對照品溶液的制備

對照品溶液同2.1.1

2.2.3.2供試品溶液的制備

提取液充分搖勻，精密量取10ml至25ml容量瓶中，甲醇超聲溶解即得。

2.2.3.3高效液相色譜方法

高效液相色譜方法同2.1.3

2.2.4正交試驗結(jié)果

2.3正交實驗結(jié)果分析

正交試驗結(jié)果顯示， 3個因素對齊墩果酸和熊果酸轉(zhuǎn)移率的影響不同， 以極差大小比較， 3個因素影響主次順序為乙醇濃度、粉碎與否、藥材或酒制， 由各列均值之和分析得最佳提取工藝為A2B1C1， 即酒制女貞子，經(jīng)粉碎前處理，60%乙醇提取。

2.4正交試驗驗證

將酒制女貞子粉碎處理，加入3倍量60%乙醇，之后的工藝同2.2.1，得到提取液。用高效液相色譜法檢測齊墩果酸和熊果酸含量，計算得出總轉(zhuǎn)移率。

驗證試驗結(jié)果如下：

3討論

對于中藥制劑生產(chǎn)企業(yè)，選擇中藥提取溶劑時，在安全有效的前提下，主要考慮有效成分的溶出和成本之間的平衡。齊墩果酸、熊果酸為三萜類成分， 主要分布在女貞子的脂溶性提取液中[12] 。通過60%乙醇和80%乙醇的提取率比較，一方面驗證了在60%乙醇作為提取溶劑時，有利于齊墩果酸和熊果酸能更充分溶出;一方面也為制劑企業(yè)節(jié)約了提取成本。

藥材前處理在提取環(huán)節(jié)占據(jù)著重要的作用，根據(jù)藥材本身具有的質(zhì)地，女貞子為質(zhì)地較硬實的果實，不經(jīng)碎制處理影響有效成分的提取。

在選擇女貞子藥材或者飲片酒制品時，企業(yè)也可以權(quán)衡投入成本，從本文試驗數(shù)據(jù)中，用女貞子藥材經(jīng)粉碎前處理，提取溶劑選擇60%乙醇，齊墩果酸和熊果酸轉(zhuǎn)移率為64.74%，并不比最佳提取工藝轉(zhuǎn)移率低很多;另外，正交實驗結(jié)果也顯示藥材或者酒制的影響程度較小，故企業(yè)在選擇時候，可以權(quán)衡女貞子采購的成本和提取液轉(zhuǎn)移率之間的關(guān)系。

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