犬源H9N2亞型流感病毒的遺傳進(jìn)化及其致病性分析

曾 昊，何劍橋，崔柏楊，郭嘉寧，郭金凡，周華波，韋祖樟，歐陽康，黃偉堅(jiān)，陳 櫻*

（1廣西動(dòng)物疫病預(yù)防與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧 530004；2南寧市華波寵物醫(yī)院，廣西 南寧 530004）

0 引言

【研究意義】流感病毒（Influenza virus）屬于正黏病毒科（Orthomyxoviridae）負(fù)股單鏈RNA病毒，依據(jù)核蛋白抗原性的不同，可分為A型、B型、C型和D型（Compans et al.，1977；van de Sandt et al.，2015；Asha and Kumar，2019），其中A型流感病毒主要感染野生水禽，并將其作為天然宿主（Webster et al.，1992）。目前已鑒定出18個(gè)HA亞型和11個(gè)NA亞型的流感病毒（Tong et al.，2013；Zhu et al.，2013），其中H9N2 亞型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）在我國大部分地區(qū)已呈地方性流行，在家禽及一些哺乳動(dòng)物中以低致病性形式存在，并未引起廣泛關(guān)注，但可持續(xù)在這些宿主中不斷衍化以適應(yīng)新宿主，對家禽和哺乳動(dòng)物的毒力及傳播力也不斷增強(qiáng)。除了衍化成為具有結(jié)合人源受體特性和可通過氣溶膠在雪貂間進(jìn)行傳播外（Wan et al.，2008），H9N2亞型流感病毒還可廣泛承受同個(gè)亞型或不同亞型間基因片段的重配，從而產(chǎn)生攜帶不同H9N2亞型譜系片段的新基因型病毒（Su et al.，2015；Li et al.，2017）。犬呼吸道內(nèi)同時(shí)擁有結(jié)合人流感和禽流感的受體（Wasik et al.，2017），可作為流感病毒的中間宿主。當(dāng)2種或多種流感病毒同時(shí)存在于犬體內(nèi)時(shí)，不同基因片段的重配會導(dǎo)致新型流感病毒產(chǎn)生。此外，犬作為人類的伴侶動(dòng)物，在流感病毒的生態(tài)循環(huán)過程中發(fā)揮重要作用，當(dāng)H9N2亞型流感病毒突破中間宿主屏障時(shí)勢必會對人類的健康造成潛在威脅。因此，了解犬源H9N2亞型流感病毒的分子變異特征和致病性，可為揭示H9N2亞型流感病毒突破禽—人宿主屏障的分子機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】根據(jù)流感病毒8個(gè)基因片段的不同來源，Gu等（2014）對H9N2亞型流感病毒建立了一種基因型劃分方法，以BJ/94類譜系的H9N2亞型為A基因型，基因片段來源不同則定義為其他基因型。按照這種劃分方法，我國目前流行的H9N2亞型流感病毒至少可劃分為23種基因型（A～W）（Guan et al.，1999；Gu et al.，2014；Liu et al.，2016）。最初，A基因型在我國H9N2亞型流感病毒中占主導(dǎo)到位，但1998年后H基因型（A基因型的PB2、PB1、PA和NP基因片段由F/98類譜系所替代）逐漸取代A基因型，成為優(yōu)勢基因型（Liu et al.，2003）。研究表明，F(xiàn)/98類譜系病毒較BJ/94類譜系病毒在雞群中擁有更高的復(fù)制和傳播力（Sun et al.，2010），因此H基因型擁有更強(qiáng)的禽類宿主適應(yīng)能力。2007年出現(xiàn)的S基因型（在H基因型的基礎(chǔ)上替換了G1類譜系的PB2和M基因片段）具有很強(qiáng)的傳播性，可在家禽中穩(wěn)定傳播，成為目前我國H9N2亞型流感病毒的主要基因型（Gu et al.，2014）。H9N2亞型流感病毒能感染多種哺乳動(dòng)物，包括犬、貓、雪貂和豬等（Wan et al.，2008；Yu et al.，2008；Sun et al.，2013；Zhou et al.，2015；孔子榮等，2020），更重要的是H9N2亞型流感病毒能跨越宿主感染人類（Sun and Liu，2015；Song and Qin，2020）。此外，H9N2亞型流感病毒可提供病毒基因，導(dǎo)致H5N1亞型流感病毒出現(xiàn)遺傳多樣性（Lei and Shi，2011），同時(shí)為H7N7、H5N2、H7N9和H10N8亞型流感病毒提供內(nèi)部基因，產(chǎn)生新的基因型流感病毒（Li et al.，2014；Xu et al.，2015；Yang et al.，2017）。至今，已有不同亞型流感病毒感染犬的研究報(bào)道，如H5N1、H5N2和H9N2亞型AIV，其中H5N1亞型AIV甚至可引起犬死亡（Songserm et al.，2006；Chen et al.，2010，2015；Zhao et al.，2012）。2013年在廣西地區(qū)分離獲得犬源H9N2亞型流感病毒，且H9亞型陽性率逐年升高，2012年的檢出率甚至高達(dá)44.85%（Sun et al.，2013）。楊新艷等（2012）的犬血清學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示遼寧錦州地區(qū)犬血清H9亞型病毒陽性檢出率為1.3%；Zhou等（2015）對我國江西、福建、浙江和江蘇地區(qū)家禽養(yǎng)殖場附近的流浪犬和流浪貓進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)犬血清中H9亞型病毒陽性檢出率為3.9%，且4.71%的貓血清能與分離獲得的H3N2亞型犬流感病毒（Canine influenza virus，CIV）抗原抗體反應(yīng)，故推測犬在流感病毒傳播中充當(dāng)中間宿主的角色。Saberi等（2019）對伊朗東南部地區(qū)的犬血清學(xué)調(diào)查顯示H9N2病毒陽性檢出率為38.23%。此外，Amirsalehy等（2012）在實(shí)驗(yàn)室條件下以H9N2亞型AIV感染犬，結(jié)果發(fā)現(xiàn)接種組和接觸組犬均出現(xiàn)打噴嚏、咳嗽和流鼻涕等臨床癥狀，且在犬鼻拭子和糞便中均能檢測到病毒存在。Zhang等（2013）進(jìn)行同樣試驗(yàn)，但結(jié)果顯示僅在肺臟組織中檢測到H9N2亞型AIV，在鼻拭子和咽拭子未檢測到病毒。【本研究切入點(diǎn)】目前，H9N2亞型流感病毒已在家禽中廣泛流行，但國內(nèi)外有關(guān)H9N2亞型流感病毒感染犬后其分子變異特征及致病性的研究鮮見報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】通過病毒分離鑒定、全基因組擴(kuò)增及測序，對比分析犬源H9N2亞型流感病毒與H9N2亞型AIV間的遺傳進(jìn)化關(guān)系和關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)變化特點(diǎn)，旨在掌握犬源H9N2亞型流感病毒的分子變異特征及致病性，為今后探究流感病毒的禽—犬跨種傳播機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

2017年8月—2019年1月從廣西各地采集流浪犬鼻拭子，共393份。犬腎細(xì)胞（Madin-darby caine kidney，MDCK）由廣西疾病預(yù)防控制中心惠贈(zèng)；6周齡SPF級BALB/c雌性小鼠購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司；反轉(zhuǎn)錄酶、dNTP預(yù)混劑和DNA Marker購自TaKaRa公司；核酸提取試劑盒購自Axy-Prep公司；RNA酶抑制劑購自北京全式金生物技術(shù)股份有限公司；瓊脂糖凝膠粉末購自生工生物工程（上海）股份有限公司；EB替代染料購自APPLYGEN公司；DMEM液體培養(yǎng)基購自Corning公司；胎牛血清、0.05%胰酶和TPCK胰酶購自Gibco公司；血清白蛋白購自Solarbio公司；細(xì)胞板、細(xì)胞瓶及吸管等細(xì)胞生物耗材購自NEST公司；RT-PCR擴(kuò)增引物委托上海杰李生物技術(shù)有限公司合成。

1.2 樣品檢測及病毒分離

按照核酸提取試劑盒說明提取病毒總RNA，使用通用引物Uni12（5'-AGCAAAAGCAGG-3'）將其反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，利用針對A型流感病毒M基因片段的特異性引物（5'-ATGAGYCTTYTAACCGAGGTC GAAACG-3'和5'-TGGACAAANCGTCTACGCTGC AG-3'）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。RT-PCR鑒定呈陽性的樣品經(jīng)0.22 μm除菌濾器過濾后，接種至MDCK細(xì)胞，盲傳3代后收集細(xì)胞上清液進(jìn)行鑒定。

1.3 病毒全基因組擴(kuò)增

使用Hoffmann等（2001）設(shè)計(jì)的特異性引物擴(kuò)增分離毒株全基因組。其中，PB2、PB1和PA基因分兩段進(jìn)行擴(kuò)增，其余5個(gè)基因片段直接擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)膠回純化后送至生工生物工程（上海）股份有限公司測序。

1.4 基因序列分析及其遺傳進(jìn)化分析

使用DNASTAR Lasergene 7.1中的SeqMan對測序結(jié)果進(jìn)行拼接，處理后的全長序列在NCBI（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）上進(jìn)行BLAST同源比對。選用國內(nèi)外的22株參考毒株，包括主要的H9N2 亞型各譜系代表性毒株BJ/94［A/chicken/Beijing/1/1994（H9N2）］、Y280［A/duck/Hong Kong/Y280/97（H9N2）］、G1［A/quail/Hong Kong/G1/1997（H9N2）］、G9［A/chicken/Hong Kong/G9/1997（H9N2）］、Y439［A/duck/Hong Kong/Y439/1997（H9N2）］、TY/WI/66［A/turkey/Wisconsin/1/1966（H9N2）］、F/98［A/chicken/Shanghai/F/1998（H9N2）］及廣西早期犬源分離毒株GX1［A/canine/Guangxi/1/2011（H9N2）］，采用MEGA 7.0的鄰接法（Neighborjoining）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹，Bootstrap設(shè)為1000次。

1.5 小鼠致病性試驗(yàn)

將小鼠隨機(jī)平均分為試驗(yàn)組和對照組，每組9只。采取麻醉滴鼻方式，試驗(yàn)組每只小鼠接種50 μL病毒液（含1.0×106PFU），對照組每只接種50 μL PBS。從攻毒當(dāng)天至攻毒后14 d，觀察小鼠臨床癥狀并記錄其體質(zhì)量，體質(zhì)量下降25%及以上則默認(rèn)其死亡（Li et al.，2012；Chen et al.，2015；Mitake et al.，2020），給予安樂死處理。攻毒后第3 d和第5 d每組隨機(jī)剖殺3只小鼠，采集腦、上鼻竇、肺臟、肝臟、心臟、腎臟及脾臟組織，通過空斑試驗(yàn)測定病毒效價(jià)。

2 結(jié)果與分析

2.1 病毒分離鑒定結(jié)果

2017年8月—2019年1月從疑似患流感癥狀［咳嗽、打噴嚏、流鼻涕，以及發(fā)熱（體溫＞39 ℃）］的流浪犬中采集393份犬鼻拭子樣品，經(jīng)RT-PCR檢測顯示有36份樣品呈陽性，陽性率為9.16%。將RT-PCR檢測呈陽性的犬鼻拭子樣品接種至MDCK細(xì)胞，結(jié)果僅有1份流浪犬樣品接種MDCK細(xì)胞后出現(xiàn)皺縮、拉長等明顯病變（圖1-A），而陰性對照孔無明顯變化（圖1-B）。對接種第3代后收集到的細(xì)胞上清液進(jìn)行RT-PCR鑒定，結(jié)果擴(kuò)增獲得約250 bp的目的片段（圖1-C），將該毒株命名為A/canine/Guangxi/LZ11/2018（簡寫為LZ11）。對分離毒株LZ11全基因組進(jìn)行分段擴(kuò)增，結(jié)果顯示所有擴(kuò)增片段大?。▓D1-D）均與理論值相符。

圖1 犬源流感病毒分離鑒定及其全基因擴(kuò)增電泳結(jié)果Fig.1 Isolation，identification and amplification electrophoresis of complete genome of canine-origin influenza virus

2.2 同源比對分析結(jié)果

BLAST同源比對分析結(jié)果（表1）表明，分離毒株LZ11的HA、NA基因分別與A/chicken/Hubei/01/2015（H9N2）和A/chicken/JinShui/JS1002/2018（H9N2）對應(yīng)基因序列的相似性最高，其相似性分別為99.43%和98.33%；而PB2、PB1、M 和NS 基因與H7N9 亞型AIV對應(yīng)基因序列的相似性最高，達(dá)98.55%～99.51%；PA和NP基因則與A/chicken/Anhui/LH99/2017（H9N2）對應(yīng)基因序列的相似性最高，分別為99.21%和99.53%。

表1 分離毒株LZ11的8個(gè)基因片段同源比對分析結(jié)果Table 1 Homology comparison of eight gene fragments of LZ11 isolate

2.3 全基因組遺傳進(jìn)化分析結(jié)果

將分離毒株LZ11與國內(nèi)外22株參考毒株進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析，結(jié)果表明，分離毒株LZ11的HA、NA和NS基因?qū)儆贐J/94類譜系，PB2和M基因?qū)儆贕1類譜系，PB1、PA和NP基因?qū)儆贔/98類譜系，其中PB1、PA和NP基因節(jié)段組成與近年來我國流行的S基因型H9N2亞型AIV一致。分離毒株LZ11的HA、NS、PB2、M、PB1、PA和NP基因片段來源均與廣西早期犬源分離毒株A/canine/Guangxi/1/2011（H9N2）相同（圖2），僅NA基因片段來源不同，分離毒株LZ11的NA基因片段來源于BJ/94類譜系，而A/canine/Guangxi/1/2011（H9N2）的來源于G9類譜系。

圖2 基于H9N2亞型流感病毒8個(gè)基因片段相似性構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹Fig.2 Phylogenetic trees of eight gene fragments based on homology of canine-origin H9N2 subtype influenza virus

2.4 HA、NA和M2蛋白關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)分析結(jié)果

對分離毒株LZ11與H9N2亞型各譜系代表毒株和廣西早期犬源分離毒株A/canine/Guangxi/1/2011（H9N2）的HA蛋白裂解位點(diǎn)、HA蛋白受體結(jié)合位點(diǎn)、NA蛋白耐藥位點(diǎn)及M蛋白耐藥位點(diǎn)進(jìn)行比較，結(jié)果（表2）發(fā)現(xiàn)，分離毒株LZ11的HA蛋白在第324～331位存在1個(gè)裂解位點(diǎn)（PSRSSR↓GL），符合低致病性流感病毒的特征。與代表毒株相比，分離毒株LZ11的HA蛋白受體結(jié)合位點(diǎn)在第153、194、220和228位較保守，但在第183、190、195和226位的變異程度較大，尤其是第226位為亮氨酸（L），使得分離毒株LZ11具有優(yōu)先結(jié)合人類α-2,6唾液酸受體的能力。此外，分離毒株LZ11 的NA 蛋白耐藥位點(diǎn)保持為119E、151D、276E、292R和294N，說明其仍對神經(jīng)氨酸酶抑制劑敏感；由于分離毒株LZ11的M2蛋白發(fā)生31S→N突變，故推測其已對金剛烷胺類藥物產(chǎn)生耐藥性。

表2 分離毒株LZ11與各參考毒株的HA、NA和M2蛋白關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)比較Table 2 Comparison of key amino acids sites of HA，NA and M2 proteins in LZ11 isolate and reference strains

2.5 PB2、PB1和PA蛋白關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)分析結(jié)果

對分離毒株LZ11與H9N2亞型各譜系代表毒株和廣西早期犬源分離毒株A/canine/Guangxi/1/2011（H9N2）的PB2、PB1和PA蛋白進(jìn)行比較，結(jié)果（表3）發(fā)現(xiàn)，與H9N2亞型AIV代表毒株相比，分離毒株LZ11的PB1蛋白發(fā)生588A→F突變和PA蛋白發(fā)生356K→R突變，與其他代表毒株完全不同；但與A/canine/Guangxi/1/2011（H9N2）相比，PB2蛋白292V、PB1蛋白368V和PA蛋白409N并未發(fā)生突變，說明分離毒株LZ11保留了部分哺乳動(dòng)物適應(yīng)性突變位點(diǎn)，同時(shí)其他哺乳動(dòng)物適應(yīng)性位點(diǎn)出現(xiàn)新的氨基酸位點(diǎn)突變。

表3 分離毒株LZ11與各參考毒株的PB2、PB1和PA蛋白關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)比較Table 3 Comparison of key amino acids sites of PB2，PB1 and PA proteins in LZ11 isolate and reference strains

2.6 小鼠致病性試驗(yàn)結(jié)果

分離毒株LZ11經(jīng)滴鼻方式接種小鼠后，攻毒組的小鼠未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，也無任何臨床癥狀；僅在攻毒后2 d出現(xiàn)輕微的體質(zhì)量下降，平均體質(zhì)量下降4.4%，但至攻毒后3 d小鼠體質(zhì)量逐漸恢復(fù)至正常水平（圖3-A），與對照組小鼠一致。對攻毒組和對照組小鼠的所有臟器進(jìn)行病毒空斑滴定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)分離毒株LZ11能在攻毒組小鼠的肺臟和上鼻竇組織中進(jìn)行有效復(fù)制，其中攻毒后3 d的肺臟滴度較攻毒后5 d的高，滴度高達(dá)3.82 lg PFU/mL，上鼻竇的病毒滴度最高為5.98 lg PFU/mL（圖3-B）。說明分離毒株LZ11能較好地在哺乳動(dòng)物呼吸道復(fù)制。

圖3 小鼠致病性試驗(yàn)結(jié)果Fig.3 Test of pathogenicity in mice

3 討論

H9N2亞型AIV屬于低致病性流感病毒，在家禽中廣泛流行。隨著流感病毒在禽—犬間的不斷傳播，H9N2亞型AIV犬陽性血清不斷被檢出（楊新艷等，2012；Zhou et al.，2015；Saberi et al.，2019），但從犬體內(nèi)分離獲得H9N2亞型流感病毒并進(jìn)行致病性分析的研究相對較少。本研究從流浪犬中分離獲得毒株LZ11（A/canine/Guangxi/LZ11/2018）并進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析，結(jié)果表明，分離毒株LZ11的8個(gè)基因節(jié)段與A/chicken/Anhui/LH99/2017（H9N2）高度同源（99.53%～94.65%），且其基因型是我國當(dāng)前流行的S基因型（Gu et al.，2014），即分離毒株LZ11為犬源H9N2亞型流感病毒，且屬于近年流行的S基因型。研究發(fā)現(xiàn)，2013年感染人類的H7N9亞型AIV是由H9N2亞型AIV提供的內(nèi)部基因所形成，盡管供體的來源多樣，但均屬于S基因型（Gu et al.，2014；孔子榮等，2020）。值得注意的是，分離毒株LZ11與廣西早期犬源分離毒株A/canine/Guangxi/1/2011（H9N2）的基因型并不一致，A/canine/Guangxi/1/2011（H9N2）來自歐亞類禽譜系A(chǔ)IV的重組H9N2亞型流感病毒（Sun et al.，2013），而分離毒株LZ11是來源于3個(gè)譜系的三重組毒株。分離毒株LZ11的NA基因來源于BJ/94類譜系，而A/canine/Guangxi/1/2011（H9N2）來源于G9類譜系，但其余7個(gè)基因片段（HA、NS、PB2、M、PB1、PA和NP）的來源相同?？梢?，隨著H9N2亞型AIV在家禽中的不斷演化，其主要基因型（S型）正試圖感染新的宿主。犬不僅是流感病毒生態(tài)循環(huán)過程中的重要中間宿主，還在AIV從禽類跨種感染哺乳動(dòng)物的傳播過程中發(fā)揮重要作用。

為進(jìn)一步了解分離毒株LZ11的分子變異特征，將其關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)與H9N2亞型各譜系代表毒株及廣西早期犬源分離毒株A/canine/Guangxi/1/2011（H9N2）進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)分離毒株LZ11的HA蛋白出現(xiàn)226Q→L突變，具有增強(qiáng)人類SAα2,6Gal受體親和力的分子特征（Teng et al.，2013；Zhou et al.，2015），即具備與人源受體結(jié)合的能力。盡管分離毒株LZ11的PB2蛋白保持了627E和701D，但存在292I→V突變。292I→V突變能使病毒擁有更高的病毒聚合酶活性及更強(qiáng)的抑制IFN-β誘導(dǎo)能力，從而增強(qiáng)H9N2亞型流感病毒在哺乳動(dòng)物宿主體內(nèi)的復(fù)制能力（Gao et al.，2019）。同時(shí)有研究表明，PB2蛋白588A→V突變能增加H9N2亞型流感病毒對小鼠的毒力及其在小鼠體內(nèi)的復(fù)制能力（Xiao et al.，2016），但分離毒株LZ11的PB2蛋白588A→F突變是否起到與PB2蛋白588A→V突變相似的作用還有待進(jìn)一步探究。此外，2株犬源H9N2亞型流感病毒［分離毒株LZ11和A/canine/Guangxi/1/2011（H9N2）］的PB1蛋白均發(fā)生368I→V突變。盡管368I→V突變是H5N1亞型AIV在雪貂上的適應(yīng)性標(biāo)記，但研究發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)在H9N2亞型AIV中逐年增加，從1999年之前的2.8%增加至1999—2012年期間的21.0%，在2013—2019年期間已高達(dá)67.0%（Sun et al.，2020）。分離毒株LZ11的PA蛋白還存在356K→R突變，該位點(diǎn)的突變已被證實(shí)可提高病毒對小鼠的毒力及其在人類細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制能力（Xu et al.，2016）。綜上所述，這些哺乳動(dòng)物適應(yīng)性位點(diǎn)的突變暗示著犬源H9N2亞型流感病毒可能擁有更強(qiáng)的哺乳動(dòng)物適應(yīng)能力。

本研究的小鼠致病性試驗(yàn)再次驗(yàn)證了犬源H9N2亞型流感病毒對小鼠的適應(yīng)能力，雖然對小鼠的致病性不強(qiáng)，但可在小鼠體內(nèi)較好地復(fù)制。李三木等（2021）對廣西早期犬源H9N2亞型流感病毒進(jìn)行小鼠致病性評估，結(jié)果表明犬源H9N2亞型流感病毒對小鼠均未引起死亡，且僅有部分毒株能在小鼠體內(nèi)有效復(fù)制。本研究卻發(fā)現(xiàn)分離毒株LZ11感染小鼠3 d后，在肺臟和上鼻竇的病毒滴度分別為3.82和5.98 lg PFU/mL，即病毒復(fù)制能力強(qiáng)于廣西早期的犬源分離毒株。但也有研究發(fā)現(xiàn)從豬體內(nèi)分離獲得的H9N2亞型流感病毒可引起小鼠明顯的臨床癥狀，甚至造成死亡（Deng et al.，2010；Wei et al.，2012）。說明不同來源和不同宿主適應(yīng)后的H9N2亞型流感病毒對小鼠的致病性可能存在差異。對于H9N2亞型AIV跨種感染犬，可能會出現(xiàn)無癥狀感染現(xiàn)象而被忽視，促使其更易獲得適應(yīng)新宿主的機(jī)會，因今后有必要進(jìn)一步加強(qiáng)對犬源H9N2亞型流感病毒的監(jiān)測，及早切斷禽—犬傳播，為有效防控流感病毒犬—人跨種傳播打下基礎(chǔ)。

4 結(jié)論

分離獲得的犬源H9N2亞型流感病毒屬于近年流行的S基因型，其8個(gè)基因節(jié)段分屬于3種譜系（BJ/94類譜系、G1類譜系和F/98類譜系），且存在多個(gè)哺乳動(dòng)物適應(yīng)性相關(guān)氨基酸位點(diǎn)突變，具備感染哺乳動(dòng)物的分子特征，可在小鼠臟器內(nèi)有效復(fù)制。鑒于人類與犬的密切關(guān)系，今后應(yīng)加強(qiáng)對犬源H9N2亞型流感病毒的監(jiān)測與防控。