一例多病毒混合感染引起犢牛腹瀉的診療

張玲會(huì)，楊斌

（1.行唐縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所玉亭分所，河北 石家莊 050600；2.行唐縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所余底分所，河北 石家莊 051600）

腹瀉是犢牛最常出現(xiàn)的消化道疾病癥狀，若初生犢牛發(fā)生腹瀉不能盡早做出診斷并進(jìn)行治療，經(jīng)常導(dǎo)致大批死亡。 近幾年來，隨著河北省奶牛養(yǎng)殖業(yè)規(guī)模擴(kuò)大， 犢牛腹瀉發(fā)病率也呈逐年上升趨勢(shì)，嚴(yán)重阻滯犢牛早期的生長(zhǎng)發(fā)育，死亡率可高達(dá)90%， 嚴(yán)重影響牛群的擴(kuò)增及奶牛養(yǎng)殖業(yè)的良性發(fā)展。 引起犢牛腹瀉的因素錯(cuò)綜復(fù)雜，其中傳染性病毒引起的腹瀉最為嚴(yán)重，且多呈混合性感染。 最常見的病原：牛病毒性腹瀉病毒 （Bovine viral diarrhoea virus，BVDV)、牛輪狀病毒（Bovine rotavirus，BRV）、 牛冠狀病毒（Bovine coronavirus，BCV）。 由于三種病原引起的犢牛傳染性腹瀉在河北省地區(qū)不斷暴發(fā)，而且犢牛腹瀉的臨床癥狀和病理變化有很多相似之處。 腹瀉犢牛大量體液?jiǎn)适?，?dǎo)致犢牛脫水、酸中毒，甚至引起死亡。 根據(jù)該患病犢牛臨床癥狀和實(shí)驗(yàn)室診斷確定病原， 為該場(chǎng)犢牛腹瀉的治療和防控提供了可靠的理論依據(jù)。

1 發(fā)病情況

駐場(chǎng)獸醫(yī)提供腹瀉犢牛的基本情況：10 日齡犢牛出現(xiàn)食欲減退，精神沉郁，消瘦，腹瀉次數(shù)增多，排黃棕色水樣糞便，氣味惡臭且便中帶血，混有氣泡，脫水嚴(yán)重。 采集患病犢牛的血液、新鮮腹瀉糞便，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

2 臨床診斷

采集樣品時(shí)進(jìn)行問診：犢牛發(fā)病日齡、糞便形態(tài)、有無集中發(fā)病、是否注射疫苗、飼養(yǎng)管理、環(huán)境因素等。 結(jié)合臨床癥狀，進(jìn)行初步診斷。 血常規(guī)檢查見表1，多項(xiàng)指標(biāo)出現(xiàn)異常，需要結(jié)合實(shí)驗(yàn)室診斷進(jìn)一步確診。

表1 全血常規(guī)檢查結(jié)果

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

根據(jù)GenBank 中公布參考株序列， 分別設(shè)計(jì)了3 對(duì)特異性引物擴(kuò)增BVDV E2 基因、BRV VP6 基因、BCV N 基因。 引物由北京生工生物工程有限公司合成，引物序列，如表2 所示。

表2 PCR 引物序列

按照病毒基因組RNA 提取試劑盒說明書提取病毒核酸， 將提取的核酸產(chǎn)物通過反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄， 獲得cDNA，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

分別以BVDV、BRV、BCV 基因組cDNA 為模板，用相應(yīng)引物進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。 多重PCR 的最佳反應(yīng)總體系為25 微升：2×EsTaqMasterMix 10 微升， 3 種病毒cDNA 各1.0 微升，3 對(duì)上下游引物各1.0 微升，ddH2O 6.0 微升。 反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃5 分鐘；94℃30 秒；55℃30 秒；72℃30 秒；72℃7 分 鐘終延伸； 共35 個(gè)循環(huán)。由圖可知，擴(kuò)增出的目的片段大小分別為 295 bp、146 bp、125 bp， 與預(yù)期結(jié)果一致。

圖 多重PCR 檢測(cè)結(jié)果

4 治療

目前對(duì)于犢牛病毒性腹瀉無特效的治療方法。 結(jié)合診斷結(jié)果， 可采用消化道收斂藥、 止血藥等靜脈輸入電解質(zhì)溶液，以消炎止瀉止血， 防止繼發(fā)感染。 加強(qiáng)患病犢牛護(hù)理， 增強(qiáng)其抵抗力， 促使患病牛盡早康復(fù)。

5 小結(jié)與分析

犢牛腹瀉在河北省部分地區(qū)非常普遍， 給奶牛業(yè)的發(fā)展帶來極大影響。 由于BVDV、BRV、BCV 混合感染后出現(xiàn)相似的臨床癥狀，病因復(fù)雜，對(duì)其進(jìn)行診斷較困難。因此，根據(jù)其病原學(xué)特征、臨床癥狀、病理變化，只能做出初步診斷，如進(jìn)一步確診還需要通過實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。 PCR 技術(shù)普遍應(yīng)用于臨床，可在短時(shí)間內(nèi)對(duì)感染的病原進(jìn)行檢測(cè)、確診。 這項(xiàng)技術(shù)為犢牛腹瀉早期診斷、 預(yù)防治療提供了簡(jiǎn)單快捷的方法。 根據(jù)臨床癥狀觀察和實(shí)驗(yàn)室診斷相結(jié)合對(duì)該病例進(jìn)行診斷。 據(jù)畜主描述及對(duì)該場(chǎng)了解， 排除了環(huán)境和飼養(yǎng)的非感染性因素， 臨床檢查和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果確認(rèn)該腹瀉犢牛致病病原是由多種病毒混合感染引起。由于引起犢牛腹瀉的多因素性質(zhì)，使得養(yǎng)牛業(yè)在群體管理、飼養(yǎng)和營(yíng)養(yǎng)、生物藥物方面取得了很大進(jìn)展。犢牛腹瀉的預(yù)防和控制還應(yīng)充分考慮疾病復(fù)雜性， 如環(huán)境因素、傳染性病原體，混合病因、飼養(yǎng)管理等。減少腹瀉發(fā)生主要采用防治結(jié)合的原則，血清制品或疫苗是防制犢牛發(fā)生腹瀉的主要措施；治療犢牛腹瀉應(yīng)采取標(biāo)本兼治，不僅對(duì)因與對(duì)癥雙管齊下，還要改善犢牛飼養(yǎng)環(huán)境、加強(qiáng)管理。

減少犢牛腹瀉主要防控措施：

一是堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，嚴(yán)格控制引進(jìn)外來品種，做好奶牛產(chǎn)犢前后的管理和護(hù)理工作，通過有計(jì)劃繁育，初產(chǎn)母牛優(yōu)先產(chǎn)仔，以減少對(duì)病原體的接觸， 避免接觸較易受病原體影響的新生犢牛。

二是通過縮短產(chǎn)犢季節(jié)，調(diào)整配種方案，減少病原體污染環(huán)境， 新生犢牛做好冬季防寒保暖措施，及早哺喂初乳。

三是保持清潔區(qū)域 （或無致病性區(qū)域），根據(jù)動(dòng)物的產(chǎn)犢日期將動(dòng)物分組， 上一個(gè)產(chǎn)犢后的產(chǎn)犢區(qū)域應(yīng)徹底消毒，保持清潔。 新生犢牛應(yīng)單圈飼養(yǎng)和管理，避免相互之間舐癖，以減少傳染性疾病的傳播。