一種曬后修復(fù)組合物的研制

童 星 張 咪

江蘇雪豹日化有限公司，江蘇無錫，214400

紫外線（UV）屬于太陽光中的不可見光，根據(jù)波長不同，可以分為UVA、UVB、UVC、UVD四種，其中對皮膚有危害的紫外線輻射主要是UVA和UVB。

當(dāng)人體皮膚受到超過耐受量的UVA和UVB照射后，會促使細(xì)胞釋放多種炎癥介質(zhì)，導(dǎo)致真皮毛細(xì)血管擴(kuò)張充血、皮下組織水腫并激發(fā)炎癥，出現(xiàn)刺痛、紅斑、脫屑瘙癢等不適癥狀。此外，紫外線侵入皮膚后，還在表皮細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生大量氧自由基，造成角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞活動異常，引起皮膚光老化，使皮膚形成皺紋、失去彈性、色素改變等[1-2]。

在陽光強(qiáng)烈照射下，即使做了防曬工作，也無法完全避免紫外線的傷害，所以曬后對皮膚進(jìn)行修復(fù)也尤為重要。目前，市場上的曬后修復(fù)產(chǎn)品多以植物提取物中的功效成分對曬后受損的細(xì)胞進(jìn)行修復(fù)，如黃酮類化合物、苯丙素類化合物、多酚、類胡蘿卜素等，可以起到清除自由基、抑制黑色素生成與沉積、延緩老化等作用。

玫瑰茄花又名洛神花，含有花青素、多酚酸、有機(jī)酸、黃酮等成分，具有抗氧化、抗腫瘤、降血脂、降血壓等生物活性，黃瓊等研究發(fā)現(xiàn)，玫瑰茄多糖具有較好的還原能力，能夠有效清除?OH、O2-?和DPPH自由基[3]。金花葵是秋葵屬草本植物，具有抗氧化、鎮(zhèn)痛消炎、降血脂、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用，研究發(fā)現(xiàn)其富含的黃酮類化合物具有較強(qiáng)的抗氧化活性和良好的抗炎作用，對酪氨酸酶活性也有一定的抑制作用[4]。本研究以玫瑰茄花提取物、金花葵提取物為主要修復(fù)成分，研制了一種曬后修復(fù)組合物，通過自由基清除效果測試、曬后修復(fù)效果測試、皮膚刺激試驗(yàn)，對所研制樣品的曬后修復(fù)效果進(jìn)行功效評價(jià)。

1 實(shí)驗(yàn)試劑與設(shè)備

無水乙醇、鄰二氮菲、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、硫酸亞鐵、30%過氧化氫，分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；DPPH，優(yōu)級純，Sigma；2,4-二硝基氯苯，99%，Aldrich；組氨酸ELISA試劑盒，上海一研生物科技有限公司。

電子天平，上海天美天平儀器有限公司；水浴恒溫振蕩器，常州市億能實(shí)驗(yàn)儀器廠；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；數(shù)控超聲機(jī)，昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司；實(shí)驗(yàn)專用微波爐，南京杰全微波設(shè)備有限公司；紫外分光光度計(jì)，上海儀電分析儀器有限公司；真空冷凍干燥器，上海葉拓儀器儀表有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 玫瑰茄提取物的制備

將玫瑰茄花自然干燥，碾磨成粉，加入一定量75%乙醇，使玫瑰茄花粉和乙醇的重量比為1:50，300W微波處理5min，再500W超聲提取15min，過濾收集提取液，真空冷凍干燥過夜。

2.2 金花葵提取物的制備

將金花葵自然干燥，碾磨成粉，加入一定量水，使金花葵粉和水的重量比為1:20，加熱回流提取1.5 h后，再加入5倍重量的水，加熱回流提取1 h，過濾，合并收集兩次提取液，真空冷凍干燥過夜。

2.3 曬后修復(fù)組合物的制備

配制不同配比的曬后修復(fù)組合物，各組分及含量見表1，將不同配方的曬后修復(fù)組合物溶于水，制成5%的水溶液（w/w），作為待測樣品。

表1 曬后修復(fù)組合物配方

2.4 曬后修復(fù)組合物自由基清除效果測試

2.4.1 羥自由基清除試驗(yàn)

在具塞試管中，加入0.5 ml濃度為0.75 mmol/L的鄰二氮菲無水乙醇溶液，再分別加入2 ml濃度為0.2 mol/L的磷酸鹽緩沖液（pH=7.4）和1 ml待測樣品，充分混勻后加入0.5 ml濃度為0.75 mmol/L的FeSO4?7H2O溶液，再次混勻后加入0.5ml濃度為0.01%的H2O2（v/v），37℃水浴1h，測定536 nm處的吸光度值，按公式計(jì)算羥自由基清除率。

式中：Ax是待測樣品的吸光度值，Ab是以蒸餾水替代H2O2的損傷組的吸光度值，An是以蒸餾水為空白組的吸光度值。

2.4.2 DPPH自由基清除試驗(yàn)

在比色皿中加入3 ml濃度為0.2 mmol/L的DPPH無水乙醇溶液，再加入1ml待測樣品混勻，室溫避光反應(yīng)30 min，測定其在517 nm處的吸光度值，記為Ax；以3 ml無水乙醇和1 ml待測樣品作為空白對照，測定吸光度值，記為Ab；以3 ml DPPH無水乙醇溶液和1 ml無水乙醇溶液作為對照組，測定吸光度值，記為An，按公式計(jì)算DPPH自由基清除率。

2.5 曬后修復(fù)效果測試

選取體重300～350 g的SD大鼠，雌雄各半。將SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、實(shí)驗(yàn)組，每組20只。試驗(yàn)前24 h將大鼠背部去毛，面積約為3 cm×3 cm，除空白組外，其余各組用2,4-二硝基氯苯在大鼠背部皮膚造模，并用紫外線照射12 h，在造模成功后（皮膚表現(xiàn)為干燥、脫屑、燒灼、刺痛、腫脹、紅斑等癥狀）的0 h、8 h，實(shí)驗(yàn)組取按配方1～8制備的待測樣品0.5 ml，涂抹大鼠背部的脫毛區(qū)，涂抹范圍約2.5 cm×2.5 cm，空白組、模型組用去離子水涂抹，每天給藥一次，連續(xù)給藥14 d，于第15天觀察各組大鼠背部皮膚情況，按照表2的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行記錄，并檢測各組大鼠樣品中的血清組氨酸（HIS）濃度。

表2 皮膚情況評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

2.6 多次皮膚刺激性試驗(yàn)

選取體重2.5～3 kg的健康兔子，雌雄各半，試驗(yàn)前將兔子背部脊柱兩側(cè)被毛剪掉，去毛范圍為3 cm×3 cm，涂抹面積2.5 cm×2.5 cm。取按配方1～8制備的樣品約0.5 ml，涂抹在兔子一側(cè)皮膚上，另一側(cè)以去離子水作為對照，每天涂抹1次，連續(xù)涂抹14 d。從第2天開始，每次涂抹前應(yīng)剪毛，用水清除殘留受試物，1 h后觀察結(jié)果，按表3進(jìn)行評分，對照區(qū)和試驗(yàn)區(qū)同樣處理。按公式計(jì)算每天每只動物平均積分，以表4判定皮膚刺激強(qiáng)度。

表3 皮膚刺激反應(yīng)評分

表4 皮膚刺激強(qiáng)度分級

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 自由基清除效果

由表5可見，按配方1～3制備的曬后修復(fù)組合物樣品均含有玫瑰茄花提取物、金花葵提取物，對羥自由基和DPPH自由基的清除率均在80%以上，配方4和配方5所制備樣品含單一的玫瑰茄花提取物或金花葵提取物，自由基清除率都低于50%，表明玫瑰茄花提取物和金花葵提取物具有一定的自由基清除效果，且兩者組合使用效果更強(qiáng)；配方6以等量的金縷梅提取物代替了金花葵提取物，自由基清除率都低于60%，表明金花葵提取物的自由基清除效果優(yōu)于金縷梅提取物；與配方1相比，配方7和配方8不含酪朊酸鈉，其所制備樣品的自由基清除率低于60%，表明酪朊酸鈉可以增強(qiáng)玫瑰茄花提取物和金花葵提取物的相容性，提高組合物的自由基清除效果。

表5 曬后修復(fù)組合物自由基清除效果

3.2 組合物曬后修復(fù)效果

由表6可見，配方1～3制備的曬后修復(fù)組合物樣品，涂抹在造模成功后0 h的受損皮膚上，可以顯著降低血清組氨酸（HIS）濃度，減輕炎癥反應(yīng)，顯著改善受損皮膚的干燥、脫屑、腫脹、紅斑等癥狀；配方4～8制備所得組合物樣品對炎癥和皮膚情況也有一定的改善效果，但改善效果明顯低于配方1～3制備所得樣品。

表6 造模成功后0 h修復(fù)效果

由表7可見，配方1～3制備的曬后修復(fù)組合物樣品，涂抹在造模成功后8 h的受損皮膚上，仍然可以顯著降低HIS濃度，減輕炎癥反應(yīng)，顯著改善受損皮膚的干燥、脫屑、腫脹、紅斑等癥狀；配方4～8制備所得組合物樣品，對HIS濃度沒有顯著的影響，對皮膚的改善效果也較差。

表7 造模成功后8 h修復(fù)效果

3.3 多次皮膚刺激試驗(yàn)結(jié)果

由表8可見，配方1～3制備的曬后修復(fù)組合物樣品，在觀察期內(nèi)，受試兔子皮膚未見紅斑、水腫等異常反應(yīng)，未出現(xiàn)其他不良反應(yīng)癥狀，表明所制備樣品對皮膚無刺激性；配方4～8所制備的樣品，在涂抹1 h后有輕度紅斑和水腫癥狀，24 h后可以消除。

表8 皮膚刺激試驗(yàn)結(jié)果

4 結(jié)語

本研究研制了一種曬后修復(fù)組合物，以玫瑰茄花提取物、金花葵提取物和酪朊酸鈉為修復(fù)成分，通過自由基清除效果測試、曬后修復(fù)效果測試、皮膚刺激試驗(yàn)，對所研制樣品的曬后修復(fù)效果進(jìn)行相關(guān)功效評價(jià)。結(jié)果顯示，含玫瑰茄花提取物、金花葵提取物和酪朊酸鈉的5%組合物水溶液，對羥自由基和DPPH自由基的清除率均在80%以上；酪朊酸鈉與單一玫瑰茄花提取物或單一金花葵提取物的組合物，其5%組合物水溶液對羥自由基和DPPH自由基的清除率均低于50%，表明玫瑰茄花提取物和金花葵提取物具有一定的自由基清除效果，且兩者組合使用效果更強(qiáng)；當(dāng)組合物中不含酪朊酸鈉時，其自由基清除率有所下降，表明酪朊酸鈉可以增強(qiáng)玫瑰茄花提取物和金花葵提取物的相容性，提高組合物的自由基清除效果；組合物中三者協(xié)同作用，在曬后8h使用仍具有顯著的修復(fù)效果，可以起到長效的抗炎、消腫、清除自由基作用，對皮膚無刺激，作為功效成分添加于曬后修復(fù)化妝品中，具有廣闊的應(yīng)用前景。