黃芩苷通過(guò)抑制核因子-κB和激活核因子-E2相關(guān)因子2信號(hào)通路緩解脂多糖誘導(dǎo)的小鼠空腸炎癥和氧化應(yīng)激

鮑明隆 孫心怡 梁 梅 巨向紅 雍艷紅 馬興斌 于志超 郭依瑩 劉曉曦

(廣東海洋大學(xué)濱海農(nóng)業(yè)學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，湛江524000)

斷奶應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致仔豬出現(xiàn)腹瀉，影響其腸道健康和生長(zhǎng)性能，嚴(yán)重的甚至?xí)?dǎo)致仔豬死亡，對(duì)我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展有著重大影響[1]。仔豬斷奶應(yīng)激發(fā)生后常伴隨著腸道炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激，進(jìn)而引起腸道損傷[2-4]，而氧化平衡狀態(tài)對(duì)于維持腸道黏膜完整性、調(diào)節(jié)腸黏膜的再生修復(fù)有著重要作用[5]。研究顯示，核因子-κB(NF-κB)信號(hào)通絡(luò)的激活與炎癥反應(yīng)密不可分[6]，核因子-E2相關(guān)因子2(Nrf2)信號(hào)通路的激活可通過(guò)促進(jìn)機(jī)體抗氧化酶的表達(dá)發(fā)揮抗氧化作用[7]。因此，維持腸道結(jié)構(gòu)的完整性、降低腸道炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激，對(duì)防治仔豬斷奶應(yīng)激和保護(hù)機(jī)體健康起到了關(guān)鍵作用。

黃芩苷(baicalin，C21H18O11)是從黃芩的干燥根中提取的一種黃酮類化合物，其在治療雞的肝臟、肺臟損傷，小鼠的肺臟炎癥和輸卵管氧化應(yīng)激損傷等方面具有積極作用[8-9]。已知黃芩苷可通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路對(duì)急性胰腺炎模型大鼠發(fā)揮抗炎作用[10]，通過(guò)激活Nrf2信號(hào)通路對(duì)膽汁淤積小鼠發(fā)揮抗氧化作用[11]。黃芩水提取物對(duì)于小鼠空腸損傷具有治療效果[12]，但黃芩苷對(duì)腸炎模型小鼠空腸的調(diào)節(jié)作用及分子機(jī)制尚不明確。因此，本研究通過(guò)給空腸炎癥模型小鼠灌胃黃芩苷，從空腸組織形態(tài)、炎性因子表達(dá)、抗氧化酶活性、炎癥和氧化應(yīng)激相關(guān)信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)等方面，探討黃芩苷對(duì)于小鼠空腸炎癥的修復(fù)作用機(jī)制及黃芩苷的最佳劑量，為黃芩苷治療仔豬斷奶應(yīng)激提供相應(yīng)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

黃芩苷購(gòu)于湖北某生物科技有限公司，純度為85%；試驗(yàn)用小鼠為C57BL/6小鼠，購(gòu)于斯貝福(北京)生物技術(shù)有限公司；脂多糖(LPS)購(gòu)于Sigma公司(L2880)。

1.2 主要試劑

試驗(yàn)所用主要試劑見(jiàn)表1。

表1 主要試劑

ELISA：酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 enzyme-linked immunosorbent assay；IL-6：白細(xì)胞介素-6 interleukin-6；IL-1β；白細(xì)胞介素-1β interleukin-1β；TNF-α：腫瘤壞死因子-α tumor necrosis factor-α；ROS：活性氧 reactive oxygen species；SOD：超氧化物歧化酶 superoxide dismutase；MDA：丙二醛 malondialdehyde；BCA：二喹啉甲酸 bicinchoninic acid；SDS-PAGE：十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis；P-P65：磷酸化P65 phosphorylated P65；IκBα：核因子-κB抑制蛋白α inhibitor of nuclear factor-kappa Bα；P-IκBα：磷酸化核因子-κB抑制蛋白α phosphorylated inhibitor of nuclear factor-kappa Bα；Nrf2：核因子-E2相關(guān)因子2 nuclear factor E2-related factor 2；β-actin：β-肌動(dòng)蛋白；HO-1：血紅素氧合酶-1 heme oxygenase-1。

1.3 動(dòng)物分組及處理、樣品采集

將36只C57BL/6雄性小鼠隨機(jī)分為6組，即對(duì)照組、陰性對(duì)照組、模型組以及黃芩苷低、中、高劑量組，每組6只。適應(yīng)性生長(zhǎng)7 d后開(kāi)始試驗(yàn)。對(duì)照組小鼠不作處理，陰性對(duì)照組和模型組小鼠每天灌胃0.2 mL磷酸鹽緩沖液(PBS)，黃芩苷組小鼠每天灌胃黃芩苷藥液0.2 mL(根據(jù)小鼠體重計(jì)算用藥量，低劑量組為100 mg/kg BW，中劑量組為200 mg/kg BW，高劑量組為400 mg/kg BW)，連續(xù)灌胃7 d，第7天對(duì)照組和陰性對(duì)照組小鼠不做其他處理，模型組、黃芩苷組小鼠腹腔注射0.2 mL LPS(3.5 mg/kg BW)。注射LPS 24 h后脫臼處死小鼠并剖檢，取空腸組織，分為3段，用生理鹽水洗凈后其中2段凍于液氮中，30 min后轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?，另一段空腸置于10 mL福爾馬林溶液中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 組織切片及蘇木精-伊紅(HE)染色

將置于福爾馬林溶液中的空腸固定72 h后，制作組織切片，HE染色，中性樹(shù)膠封片。光鏡下觀察各組小鼠空腸結(jié)構(gòu)形態(tài)的變化情況，觀察后用Olympus Image Analysis System圖像分析系統(tǒng)拍照，用Image-proplus6.0軟件測(cè)量視野內(nèi)空腸絨毛高度和隱窩深度，計(jì)算絨毛高度與隱窩深度的比值。

1.5 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)

每組空腸樣本切取相同重量的組織樣本，加入一定量的PBS(pH 7.4)用勻漿器將樣本充分勻漿，3 000 r/min離心20 min后收集上清。根據(jù)試劑盒廠商說(shuō)明書使用白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)ELISA試劑盒進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的測(cè)定。

1.6 RNA提取、反轉(zhuǎn)錄及實(shí)時(shí)熒光定量PCR

每組空腸樣本切取相同重量的組織樣本，根據(jù)廠商的說(shuō)明書使用Trizol試劑從腸道組織中提取RNA。使用EasyScript One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix將分離出的RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，使用EasyScript Green qPCR SuperMix和特異性引物擴(kuò)增cDNA。使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀通過(guò)其特異性引物擴(kuò)增目的基因mRNA(實(shí)時(shí)定量PCR引物序列如表2所示)。每個(gè)目的基因mRNA樣本利用β-肌動(dòng)蛋白(β-actin)作為其平行對(duì)照進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

表2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物

1.7 蛋白質(zhì)印跡(Western Blot)

空腸樣本切取相同重量的組織樣本，加入RIPA裂解液，根據(jù)廠商的說(shuō)明書提取組織全蛋白或組織胞漿胞核蛋白。蛋白提取后使用BCA試劑盒測(cè)定蛋白濃度，通過(guò)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離蛋白，經(jīng)轉(zhuǎn)膜儀轉(zhuǎn)移至0.22 μm聚偏氟乙烯(PVDF)膜上后用快速封閉液封閉。然后使用1∶1 000稀釋的一抗與膜孵育。TBST中洗滌，使用1∶1 000稀釋的辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記二抗與膜孵育，使用ECL檢測(cè)系統(tǒng)顯現(xiàn)印跡，并使用ChemiDoc XRS+圖像分析儀定量目的蛋白。

1.8 統(tǒng)計(jì)分析

使用SPSS 12.0軟件采用單因素方差分析(one-way ANOVA)程序?qū)?shù)據(jù)進(jìn)行分析，采用Tukey法進(jìn)行多重比較檢驗(yàn)，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 空腸形態(tài)學(xué)觀察

正常情況下，小鼠空腸絨毛結(jié)構(gòu)完整，排列有序，隱窩結(jié)構(gòu)正常(圖1-A和圖1-B)。與對(duì)照組相比，模型組小鼠空腸絨毛結(jié)構(gòu)受到嚴(yán)重破壞，絨毛從底部斷裂(圖1-C)，絨毛高度顯著降低(圖1-G，P<0.05)，絨毛高度與隱窩深度的比值顯著降低(圖1-I，P<0.05)，小鼠空腸固有層損傷明顯，提示炎癥模型構(gòu)建成功。與模型組相比，黃芩苷低劑量組小鼠空腸絨毛結(jié)構(gòu)仍然受到嚴(yán)重破壞(圖1-D)，絨毛高度與隱窩深度的比值并沒(méi)有顯著變化(圖1-I，P>0.05)；黃芩苷中劑量組小鼠空腸絨毛結(jié)構(gòu)相比于模型組有所修復(fù)，但仍有部分絨毛結(jié)構(gòu)受到明顯破壞(圖1-E)，而絨毛高度與隱窩深度的比值已經(jīng)有了顯著提高(圖1-I，P<0.05)；黃芩苷高劑量組小鼠空腸絨毛分布較為整齊，有絨毛包裹成團(tuán)脫落至腸腔，絨毛和隱窩結(jié)構(gòu)相比于模型組有明顯改善(圖1-E)，與模型組相比黃芩苷高劑量組的絨毛長(zhǎng)度與隱窩深度的比值顯著升高(圖1-G，P<0.05)，且未出現(xiàn)明顯病理?yè)p傷。

A～F分別為對(duì)照組、陰性對(duì)照組、模型組、黃芩苷低劑量組、黃芩苷中劑量組、黃芩苷高劑量組小鼠空腸形態(tài)。紅色箭頭為絨毛斷裂處，綠色箭頭為絨毛成團(tuán)脫落處。

2.2 空腸炎癥相關(guān)因子mRNA表達(dá)量和炎性因子含量變化

與對(duì)照組相比，模型組空腸中IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA表達(dá)量顯著提高(圖2-B、圖2-C、圖2-D，P<0.05)。與模型組相比，低、中、高劑量的黃芩苷可以顯著抑制空腸中因LPS刺激提高的IL-6和TNF-α的mRNA表達(dá)量(圖2-B和圖2-C，P<0.05)；與模型組相比，中和高劑量的黃芩苷可以顯著抑制空腸中因LPS刺激提高的IL-1β的mRNA表達(dá)量(圖2-D，P<0.05)。Toll樣受體4(TLR4)是細(xì)胞膜表面的重要受體，與炎癥反應(yīng)有著密切的關(guān)系。與對(duì)照組相比，模型組空腸中TLR4的mRNA表達(dá)量顯著升高(圖2-A，P<0.05)，而黃芩苷處理會(huì)逆轉(zhuǎn)這一趨勢(shì)，顯著抑制空腸中TLR4 mRNA的表達(dá)(P<0.05)，且呈現(xiàn)劑量依賴性(圖2-A)。

圖2 黃芩苷對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠空腸炎癥相關(guān)因子mRNA表達(dá)量的影響

與對(duì)照組相比，模型組空腸中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量顯著提高(圖3-A、圖3-B、圖3-C，P<0.05)。與模型組相比，中和高劑量的黃芩苷可以顯著降低空腸中因LPS誘導(dǎo)升高的IL-6和IL-1β含量(圖3-A和圖3-B，P<0.05)。與模型組相比，黃芩苷可以顯著降低空腸中因LPS誘導(dǎo)升高的TNF-α含量(P<0.05)，并呈現(xiàn)劑量依賴性(圖3-C)。

2.3 空腸抗氧化指標(biāo)變化

與對(duì)照組相比，模型組空腸中ROS和MDA的含量顯著提高(圖4-A和圖4-B，P<0.05)。與模型組相比，黃芩苷可以顯著抑制空腸中因LPS刺激而升高的ROS和MDA含量(P<0.05)，并呈現(xiàn)劑量依賴性(圖4-A和圖4-B)。與對(duì)照組相比，模型組空腸中SOD的活性顯著降低(圖4-C，P<0.05)。與模型組相比，高劑量的黃芩苷可以顯著升高空腸中因LPS刺激而降低的SOD活性(圖4-C，P<0.05)。

2.4 空腸Nrf2信號(hào)通路關(guān)鍵因子mRNA表達(dá)量變化

與對(duì)照組相比，模型組空腸中HO-1和醌氧化還原酶-1(NQO-1)的mRNA表達(dá)量無(wú)顯著變化(圖5-A和圖5-B，P>0.05)。與模型組相比，中和高劑量的黃芩苷可以顯著增加空腸中HO-1的mRNA表達(dá)量(P<0.05)，同時(shí)黃芩苷還可以顯著增加空腸中NQO-1的mRNA表達(dá)量(P<0.05)，且呈現(xiàn)劑量依賴性(圖5-A和圖5-B)。

2.5 空腸NF-κB信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)量變化

與對(duì)照組相比，LPS刺激對(duì)于空腸中IκBα和P65的蛋白表達(dá)量并沒(méi)有顯著影響(圖6-B和圖6-E，P>0.05)。與對(duì)照組相比，模型組空腸中P-IκBα和P-P65的蛋白表達(dá)量顯著提高(圖6-C和圖6-F，P<0.05)；與模型組相比，低、中、高劑量的黃芩苷可以顯著抑制空腸中因LPS刺激而升高的P-IκBα和P-P65蛋白表達(dá)量(圖6-C和圖6-F，P<0.05)。與對(duì)照組相比，模型組小鼠空腸中P-IκBα/IκBα比值顯著升高(圖6-D，P<0.05)；與模型組相比，低、中、高劑量的黃芩苷可以顯著抑制這一比值的升高(圖6-D，P<0.05)。與對(duì)照組相比，模型組空腸中P-P65/P65比值顯著升高(圖6-G，P<0.05)；與模型組相比，黃芩苷顯著降低這一比值(P<0.05)，且呈現(xiàn)劑量依賴性(圖6-G)。

圖3 黃芩苷對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠空腸炎性因子含量的影響

圖5 黃芩苷對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠空腸Nrf2信號(hào)通路關(guān)鍵因子mRNA表達(dá)量的影響

IκBα：核因子-κB抑制蛋白α inhibitor of nuclear factor-kappa Bα；P-IκBα：磷酸化核因子-κB抑制蛋白α phosphorylated inhibitor of nuclear factor-kappa Bα；P-P65：磷酸化P65 phosphorylated P65；β-actin：β-肌動(dòng)蛋白；protein expression level：蛋白表達(dá)量。

2.6 空腸Nrf2/HO-1信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)量變化

與對(duì)照組相比，模型組空腸中HO-1的蛋白表達(dá)量顯著降低(圖7-B，P<0.05)；與模型組相比，中、高劑量的黃芩苷會(huì)顯著提高空腸中HO-1的蛋白表達(dá)量(圖7-B，P<0.05)。與對(duì)照組相比，模型組空腸中胞漿Nrf2的蛋白表達(dá)量無(wú)顯著變化(圖7-C，P>0.05)，空腸中胞核Nrf2的蛋白表達(dá)量也沒(méi)有顯著變化(圖7-D，P>0.05)；但是與模型組相比，低、中、高劑量的黃芩苷會(huì)顯著提高空腸中胞核Nrf2的蛋白表達(dá)量(圖7-D，P<0.05)。

圖7 黃芩苷對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠空腸Nrf2/HO-1信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)量的影響

3 討 論

空腸是哺乳動(dòng)物體內(nèi)重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收器官，腸道炎癥和氧化應(yīng)激的發(fā)生會(huì)導(dǎo)致腸道屏障功能惡化，可能會(huì)使得有害物質(zhì)或病原進(jìn)入血液，導(dǎo)致消化系統(tǒng)的疾病[13]。LPS是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的成分，可以誘導(dǎo)腸道的炎癥反應(yīng)[14]，用LPS注射小鼠腹腔后還能誘導(dǎo)空腸發(fā)生損傷[15]。黃芩苷對(duì)于LPS誘導(dǎo)的多器官急性損傷、肝臟細(xì)胞和H9c2細(xì)胞的炎癥反應(yīng)有較好的治療效果[16-18]。因此，本文采用腹腔注射LPS構(gòu)建小鼠空腸炎癥模型，使用黃芩苷預(yù)處理作為治療組。本研究中陰性對(duì)照組與對(duì)照組基本無(wú)顯著差異，故不單獨(dú)討論陰性對(duì)照組情況。與對(duì)照組相比，模型組小鼠空腸組織結(jié)構(gòu)炎癥受損，這與前人研究結(jié)果[19]一致，表明空腸炎癥反應(yīng)誘發(fā)了結(jié)構(gòu)損傷。相對(duì)于模型組，低、中、高劑量黃芩苷組小鼠空腸結(jié)構(gòu)得到改善，尤其是高劑量黃芩苷組的小鼠空腸絨毛結(jié)構(gòu)趨于完整，表明黃芩苷對(duì)于LPS誘導(dǎo)的小鼠空腸組織損傷具有保護(hù)作用。黃芩苷可以促進(jìn)豬腸上皮細(xì)胞的增殖[20-21]，這可能是黃芩苷維持小鼠空腸結(jié)構(gòu)完整性的潛在作用機(jī)制。

IL-6、IL-1β、TNF-α是重要的細(xì)胞炎性因子，在小鼠腸道炎癥反應(yīng)中起著關(guān)鍵作用。TLR4-NF-κB信號(hào)通路是重要的炎癥反應(yīng)通路[22]，也是IL-6、IL-1β和TNF-α等炎性因子的上游通路，其中TLR4是細(xì)胞膜表面重要的識(shí)別受體[23]。一般情況下，非活化NF-κB復(fù)合物(包括功能性亞基P65和抑制性亞基IκBα)位于細(xì)胞質(zhì)中[24]，當(dāng)TLR4受到外源刺激時(shí)，抑制性亞基IκBα發(fā)生磷酸化，與功能性亞基P65解離[25]，解離的功能性亞基P65磷酸化后進(jìn)入細(xì)胞核誘導(dǎo)炎性因子IL-6、IL-1β和TNF-α等分泌[26]，進(jìn)而導(dǎo)致組織的炎癥反應(yīng)。結(jié)果顯示，相對(duì)于對(duì)照組，模型組小鼠空腸中炎性因子在mRNA和蛋白水平的表達(dá)量均顯著升高，這表明LPS刺激使小鼠空腸發(fā)生炎癥反應(yīng)。相比于對(duì)照組，模型組小鼠空腸NF-κB信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白的表達(dá)量顯著升高；相比于模型組，中、高劑量的黃芩苷顯著抑制了小鼠空腸NF-κB信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白的表達(dá)量，與感染產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)的豬腸道上皮細(xì)胞的反應(yīng)[27]相一致，以上結(jié)果表明黃芩苷通過(guò)阻斷LPS激活的NF-κB信號(hào)通路降低炎癥反應(yīng)。王歡[28]研究發(fā)現(xiàn)，小鼠空腸NF-κB信號(hào)通路激活后會(huì)誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的產(chǎn)生，進(jìn)而破壞空腸腸道黏膜屏障的完整性。因此，黃芩苷通過(guò)發(fā)揮抗炎作用有助于維持小鼠空腸黏膜屏障的完整性。

健康狀態(tài)的組織處于ROS和抗氧化酶之間的平衡狀態(tài)，而當(dāng)這一平衡狀態(tài)被打破時(shí)，過(guò)量的ROS及抗氧化酶活性或表達(dá)量降低會(huì)導(dǎo)致組織氧化應(yīng)激的發(fā)生[29]。氧化應(yīng)激會(huì)引起細(xì)胞發(fā)生死亡和不可修復(fù)的氧化損傷[30]。本研究中，LPS誘導(dǎo)小鼠空腸TLR4的mRNA表達(dá)量顯著升高，并誘導(dǎo)空腸發(fā)生炎癥反應(yīng)。TLR4的激活可以誘導(dǎo)過(guò)量的ROS產(chǎn)生[31]，LPS刺激雞HD11巨噬細(xì)胞也能產(chǎn)生過(guò)量的ROS，發(fā)生氧化應(yīng)激[32]。腎炎模型小鼠中因炎癥反應(yīng)產(chǎn)生的炎性因子會(huì)破壞細(xì)胞內(nèi)氧化還原的平衡狀態(tài)，誘導(dǎo)產(chǎn)生氧化應(yīng)激[33]，炎癥反應(yīng)活化中性粒細(xì)胞會(huì)持續(xù)產(chǎn)生過(guò)量的ROS。因此作者推測(cè)，LPS會(huì)誘導(dǎo)小鼠空腸產(chǎn)生過(guò)量的ROS，誘發(fā)氧化應(yīng)激。SOD是一種重要的抗氧化酶，其對(duì)于維持氧化還原平衡有著重要的意義[34]，當(dāng)SOD活性異常降低時(shí)組織可能會(huì)發(fā)生氧化應(yīng)激。本研究中，LPS抑制了抗氧化酶的表達(dá)量，提高了ROS和MDA的含量，表明LPS刺激引起小鼠空腸組織的氧化應(yīng)激。正常情況下Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白-1(Keap1)與Nrf2形成復(fù)合體處于細(xì)胞質(zhì)中，當(dāng)發(fā)生氧化應(yīng)激時(shí)，Keap1與Nrf2解離，Nrf2進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)與DNA上相應(yīng)靶位點(diǎn)相結(jié)合，誘導(dǎo)相應(yīng)的解毒酶和抗氧化酶的合成[35]，而HO-1和NQO-1是Nrf2信號(hào)通路所激活的重要抗氧化酶，HO-1和NQO-1的活性對(duì)于維持氧化平衡狀態(tài)有著重要意義[36]。在雞的支原體病毒感染過(guò)程中，黃芩苷也可以激活脾臟的Nrf2信號(hào)通路及其下游蛋白的表達(dá)[37]。本試驗(yàn)中，黃芩苷通過(guò)激活小鼠空腸的Nrf2信號(hào)通路促進(jìn)抗氧化酶HO-1和NQO-1 mRNA的表達(dá)以抑制氧化應(yīng)激，避免了氧化應(yīng)激造成的結(jié)構(gòu)損傷。

藥物的治療效果與劑量有關(guān)[38]。本試驗(yàn)中黃芩苷在反映抗炎、抗氧化效果的各項(xiàng)指標(biāo)如炎性因子、抗氧化酶表達(dá)等上均表現(xiàn)出劑量依賴性。中和高劑量的黃芩苷都可提高空腸絨毛高度和隱窩深度的比值，但高劑量的黃芩苷提高的更為顯著。P-P65蛋白與IL-6、IL-1βmRNA的表達(dá)量結(jié)果都顯示中劑量黃芩苷組和高劑量黃芩苷組較模型組有顯著降低，且2組間差異不顯著。在氧化應(yīng)激中空腸SOD的活性只有高劑量黃芩苷組相比于模型組有顯著提高，其余氧化因子及Nrf2信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白的表達(dá)量都呈現(xiàn)劑量依賴性。小鼠在灌胃200和400 mg/kg BW黃芩苷后炎癥和氧化應(yīng)激等各項(xiàng)指標(biāo)得到顯著改善。綜合考慮作為飼料添加劑的成本問(wèn)題，黃芩苷的推薦劑量是200 mg/kg BW。LPS刺激斷奶仔豬后，血清中炎性因子IL-6、IL-8和ROS的含量升高，表明機(jī)體產(chǎn)生了較強(qiáng)的應(yīng)激反應(yīng)[39]，小鼠腹腔注射LPS后其空腸也發(fā)生了炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激，所以小鼠空腸炎癥模型可模擬仔豬的斷奶應(yīng)激反應(yīng)。本研究證實(shí)黃芩苷對(duì)空腸炎癥小鼠可以通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路發(fā)揮抗炎癥作用，通過(guò)激活Nrf2信號(hào)通路發(fā)揮抗氧化作用，因此，黃芩苷可作為斷奶仔豬應(yīng)激綜合征的潛在治療藥物。

4 結(jié) 論

在腹腔注射LPS構(gòu)建的小鼠空腸炎癥模型中，黃芩苷在適宜劑量?jī)?nèi)可以通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路發(fā)揮抗炎癥作用，通過(guò)激活Nrf2信號(hào)通路發(fā)揮抗氧化作用，推薦劑量是200 mg/kg BW。