HPLC同時測定女金片中3種成分的含量

李 佳，金 華，王 玉

（淮安市食品藥品檢驗(yàn)所，江蘇 淮安 223300）

女金片由鹿角霜、陳皮、當(dāng)歸、白芷、川芎、延胡索、甘草、牡丹皮、黃芩、阿膠、益母草等23味中藥按照一定制法制成，有調(diào)經(jīng)養(yǎng)血，順氣化瘀的功效，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)號為WS3-B-3534-98[1]。女金片是一種婦科常用藥物，成分復(fù)雜，但是現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)僅包含性狀和片劑通則項(xiàng)目的檢查，檢測項(xiàng)目專屬性及準(zhǔn)確性很低，無法完全滿足女金片的質(zhì)量控制要求。且已有的報(bào)道多以單一指標(biāo)的含量控制女金片的質(zhì)量[2-5]，而女金片處方中藥味眾多，成分復(fù)雜，君臣佐使不同藥味均發(fā)揮著不可替代的作用，以單一指標(biāo)是無法準(zhǔn)確有效地反映女金片的內(nèi)在質(zhì)量狀況，故本文研究建立了HPLC法同時測定芍藥苷、橙皮苷和黃芩苷3種成分的含量，為提高和完善女金片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)[6～8]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

CAMAG TLC Visualizer 2（瑞士卡瑪公司）；UltiMate 3000型高效液相色譜儀（DIONEX公司）；XS205-DU型電子天平（Mettler公司）；XP-6型電子分析天平（Mettler公司）。

1.2 試藥

女金片（批號為20201101，20200104，20181001，吉林華僑藥業(yè)）；芍藥苷對照品（批號為110736-201943；含量95.1 %）、橙皮苷對照品（批號為110721-201818；含量96.2 %）、黃芩苷對照品（批號為110715-201821；含量95.4 %），均購自中國食品藥品檢定研究院；陰性對照制劑均為自制。乙腈為色譜純，磷酸為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[9-12]

色譜柱：Eclipse Plus C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）；檢測波長：芍藥苷（230 nm）、橙皮苷、黃芩苷（280 nm）；流動相：以乙腈為流動相A，0.05 %磷酸為流動相B，按表1進(jìn)行梯度洗脫。柱溫：30 ℃；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣體積：10 μl。

2.2 溶液的制備

對照品貯備液：精密稱取芍藥苷對照品6.312 mg、橙皮苷對照品6.066 mg、黃芩苷對照品11.838 mg，置入同一50 ml量瓶中，用稀乙醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。

對照品溶液：精密吸取對照品貯備溶液15 ml，置入50 ml容量瓶中，用稀乙醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液：取樣品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取1 g，置入20 ml容量瓶中，加稀乙醇適量，超聲處理30 min，放冷，稀乙醇定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

陰性對照溶液：取處方量的1/10（缺黃芩、陳皮、白芍），按女金片工藝及供試品溶液的制備方法，制備陰性對照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性考察：取對照品溶液、陰性對照溶液以及供試品溶液，按擬定色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。陰性對照溶液在與芍藥苷、橙皮苷和黃芩苷對照品相同保留時間處未檢出色譜峰，表明陰性無干擾。見圖1～3。

圖2 供試品溶液的HPLC色譜圖

圖3 陰性對照溶液的HPLC色譜圖

線性關(guān)系考察：精密吸取對照品貯備溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，10.0ml，置入10 ml量瓶，用甲醇定容，搖勻，按擬定色譜條件進(jìn)樣測定，記錄各色譜峰峰面積。以濃度（μg/ml）為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見表2，表明各濃度范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

表2 各成分回歸方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍

精密度試驗(yàn)：取對照品溶液，按擬定色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次測定，記錄峰面積。結(jié)果見表3，表明該方法具有良好的精密度。

表3 精密度試驗(yàn)結(jié)果

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，在室溫下放置0，2，4，8，12，24 h后，按擬定色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果見表4，表明該溶液24 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批號供試品6份，按擬定含量測定方法測定各成分含量。結(jié)果見表5，表明該方法具有良好的重復(fù)性。

表5 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

加樣回收率試驗(yàn)：取已知含量的供試品6份，分別加入適量的芍藥苷、橙皮苷和黃芩苷對照品，按擬定的含量測定方法測定各成分含量，計(jì)算加樣回收率。

表6 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.4 樣品含量測定

取3批供試品按上述含量測定方法測定供試品中芍藥苷、橙皮苷及黃芩苷的含量，結(jié)果見表7。

表7 女金片各成分的含量測定結(jié)果/mg·片-1（n=2）

3 討論

3.1 色譜條件的選擇

在流動相比例選擇時，由于3種成分的極性差異明顯，若選用乙腈-0.05 %磷酸等度洗脫，出峰時間過長或分離度達(dá)不到要求，故試驗(yàn)經(jīng)摸索確定了梯度洗脫程序。在檢測波長的選擇時，試驗(yàn)過程中采用DAD檢測器對待測組分的紫外光譜進(jìn)行了檢測，發(fā)現(xiàn)230 nm作為檢測波長時，芍藥苷吸收較好，但黃芩苷的吸收很差，而在280 nm波長檢測時，可兼顧橙皮苷和黃芩苷均有較好的紫外吸收，但此波長下芍藥苷幾乎沒有吸收，故試驗(yàn)選擇雙波長對樣品進(jìn)行檢測。

3.2 供試品提取溶劑的選擇

采用甲醇、稀乙醇以及50 %甲醇3種溶劑提取女金片，結(jié)果見表8。由表8 可見，甲醇的提取效果最差，50 %甲醇和稀乙醇提取效果相當(dāng)；但是50 %甲醇作為溶劑時，有雜質(zhì)峰干擾，會影響主峰峰面積的準(zhǔn)確性，所以最終選擇用稀乙醇作為供試品的提取溶劑。

表8 不同溶劑對女金片的提取結(jié)果（n=2）

3.3 小結(jié)

女金片可改善微循環(huán)，改善女性內(nèi)分泌水平，與低劑量米非司酮聯(lián)用對圍絕經(jīng)期功血有良好的治療效果，且有助于大量失血后的女性患者，是一種婦科常用藥物[12-15]。其方中的白芍具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗之功效；陳皮可理氣健脾、燥濕化痰；黃芩能清熱瀉火解毒、止血、安胎；芍藥苷、橙皮苷和黃芩苷分別為這3味藥的主要有效成分，本研究所建立的HPLC法可同時檢測女金片中3種成分的含量，克服了檢測單一組分的局限性，能更加全面準(zhǔn)確地反映該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，為保證婦科用藥的安全有效提供更多的科學(xué)依據(jù)。