雙氯芬酸鈉速緩雙釋口腔膜劑的制備及質(zhì)量評價(jià)

孫禮軒，朱全壘，鄭增娟*，甘 勇

（1.濰坊醫(yī)學(xué)院，山東 濰坊 261053；2.中國科學(xué)院上海藥物研究所，上海 201203）

復(fù)發(fā)性口腔潰瘍是常見的可能因情緒或壓力等問題導(dǎo)致的疾病之一，因發(fā)病時(shí)口腔患處疼痛難忍，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量[1]。口腔膜劑因具有體積小，起效迅速，劑量準(zhǔn)確，局部口腔給藥的良好順應(yīng)性等特點(diǎn)，在治療復(fù)發(fā)性口腔潰瘍方面有顯著優(yōu)勢[2-4]。目前市面上治療復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的口腔膜劑的釋藥特性以速釋型為主[5]，速釋型口腔膜劑可在短時(shí)間內(nèi)快速鎮(zhèn)痛。但對于大多數(shù)患者而言，可能需要的是更持久的鎮(zhèn)痛效果，但市面上緩釋型口腔膜劑甚至速緩雙釋型的口腔膜劑較少見。筆者認(rèn)為開發(fā)具有多功能釋藥行為的口腔膜劑，可更顯著地改善患者的治療效果。

在前期工作中，筆者以溶劑澆鑄法制備了雙氯芬酸鈉速釋口腔膜劑和緩釋口腔膜劑，單因素法篩選雙氯芬酸鈉速釋口腔膜劑與緩釋口腔膜劑的處方組成。為延長口腔膜劑治療潰瘍時(shí)的鎮(zhèn)痛效果，改善患者的生活質(zhì)量，本文以具有消炎鎮(zhèn)痛作用的雙氯芬酸鈉[6-7]為模型藥物，以優(yōu)化后速釋口腔膜劑和緩釋口腔膜劑處方，經(jīng)噴霧干燥方法，制備速緩雙釋的口腔膜劑，并對其外觀、厚度、藥物含量、耐折度和釋放度進(jìn)行評價(jià)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

TU-1900型雙光束紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用）；XS205型電子天平（梅特勒-托利多）；ME204型電子天平（梅特勒-托利多）；SK5210HP型超聲波清洗器（上海科導(dǎo)）；DHG9070A型鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏）；數(shù)顯游標(biāo)卡尺（上海美耐特）；ks 3000i型圓周振蕩搖床（廣州艾卡）；RH digital型磁力攪拌器（廣州艾卡）；Agilent 709-DS型溶出度儀（安捷倫）；CHC-38型高效包衣機(jī)（江蘇創(chuàng)志機(jī)電）。

1.2 試藥

雙氯芬酸鈉原料藥（鐵嶺天德制藥有限公司，批號：2020032）；羥丙基甲基纖維素 E5（hydroxypropyl methylcellulose,HPMC E5，安徽山河藥用輔料股份有限公司）；乙基纖維素（陶氏化學(xué)公司）；聚乙烯吡咯烷酮K30[polyvinylpyrrolidone K30,PVP K30，巴斯夫（中國）有限公司]；無水乙醇，甘油，丙二醇，磷酸二氫鉀，無水磷酸氫二鈉，鹽酸，氫氧化鈉（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；吐溫80（分析純，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司）；水為超純水（實(shí)驗(yàn)室自制）。

2 方法和結(jié)果

2.1 雙氯芬酸鈉口腔膜劑的紫外分光光度法藥物含量測定方法驗(yàn)證[8]

2.1.1 溶液的制備

2.1.1.1 PBS緩沖溶液（pH 6.8） 精密量取0.2 mo1/L磷酸二氫鉀溶液250 ml，再加入0.2 mo1/L氫氧化鈉溶液118 ml，用水稀釋至1000 ml，搖勻，即得。

2.1.1.2 雙氯芬酸鈉對照品儲備液 精密稱取干燥至恒重的雙氯芬酸鈉原料藥10 mg，置于100 ml量瓶中，加入適量PBS緩沖液（pH 6.8），溶解后，加入超純水定容至刻度，搖勻，即得濃度為0.1 mg/ml雙氯芬酸鈉對照品儲備液。

2.1.1.3 輔料溶液 按照雙氯芬酸鈉口腔膜劑處方比例稱取適量輔料溶解于100 ml PBS緩沖液（pH 6.8）中，超聲，搖勻，即得輔料溶液。

2.1.2 雙氯芬酸鈉檢測波長的選擇 精密量取雙氯芬酸鈉對照品儲備液0.2 ml置入10 ml量瓶，定容，搖勻，即得20 μg/ml雙氯芬酸鈉溶液，在200～500 nm波長范圍內(nèi)，以PBS緩沖液（pH 6.8）作為空白對照掃描其紫外吸收圖譜。雙氯芬酸鈉在276 nm處有最大吸收，與《中國藥典》（2020年版）二部附錄中標(biāo)準(zhǔn)一致，故選取276 nm作為雙氯芬酸鈉的檢測波長，用于雙氯芬酸鈉樣品的吸光度檢測。

2.1.3 專屬性實(shí)驗(yàn) 按照處方組成，配制空白輔料溶液，精密量取適量，配制成相當(dāng)于含20 μg/ml雙氯芬酸鈉的輔料溶液，在200～500 nm波長范圍內(nèi)，以PBS緩沖液（pH 6.8）作為空白對照掃描其紫外吸收圖譜?？瞻纵o料在276 nm處無紫外吸收，表明輔料對雙氯芬酸鈉的測定無干擾。

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密量取對照品儲備液2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0 ml，置入25 ml量瓶，以PBS緩沖液（pH 6.8）定容至刻度，即得濃度分別為8，12，16，20，24，28，32 μg/ml溶液，分別測定其在276 nm處的紫外吸光度值，以雙氯芬酸鈉濃度（C）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到回歸方程為A=0.0338C-0.0048，R2=0.9996，雙氯芬酸鈉在8～32 μg/ml濃度范圍內(nèi)與吸光度的線性關(guān)系良好。

2.2 雙氯芬酸鈉速緩雙釋口腔膜劑的制備工藝研究

為了能使口腔膜劑達(dá)到快速鎮(zhèn)痛、持續(xù)起效的預(yù)期目的，在雙氯芬酸鈉速釋口腔膜劑和緩釋口腔膜優(yōu)化后處方基礎(chǔ)上制備雙氯芬酸鈉速緩雙釋口腔膜劑。優(yōu)化后的雙氯芬酸鈉速釋膜劑各組分重量比為：雙氯芬酸鈉:HPMC E5[9]:甘油:吐溫80=5:70:20:5。雙氯芬酸鈉緩釋膜劑各組分的重量比為：雙氯芬酸鈉:乙基纖維素[10-11]:PVP K30[12-13]:丙二醇:吐溫80=5:61.75:3.25:25:5。

因該劑型同時(shí)具有速釋層和緩釋層，溶劑澆鑄法無法一次性制備速緩雙釋口腔膜劑。因此，采用高效自動包衣機(jī)通過噴霧干燥技術(shù)制備雙氯芬酸鈉口腔速緩雙釋膜劑，首先制備緩釋層，再將速釋層噴敷于緩釋層，制成同時(shí)具備速釋和緩釋藥物特性的雙層口腔膜劑，并對該劑型進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)。在制備雙氯芬酸鈉速緩雙釋口腔膜劑前，通過單因素考察法對制備工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，考察該因素對膜劑外觀和厚度的影響，篩選優(yōu)化后的制備工藝條件。

2.2.1 雙氯芬酸鈉速緩雙釋口腔膜劑的制備方法

2.2.1.1 速釋層膜劑溶液與緩釋層膜劑溶液的制備取一500 ml燒杯，加入400 ml無水乙醇溶液，再依次加入處方量乙基纖維素、雙氯芬酸鈉、丙二醇和吐溫80，物料溶液常溫下500 r/min攪拌至所有物料完全溶解，膜劑溶液超聲10 min以上至溶液無氣泡，密封保存，即得固含量4 %的雙氯芬酸鈉速緩雙釋口腔膜劑緩釋層溶液。

取一500 ml燒杯，加入400 ml超純水，再依次加入處方量HPMC E5、雙氯芬酸鈉、甘油和吐溫80，物料溶液常溫下500 r/min攪拌至所有物料完全溶解，膜劑溶液超聲10 min以上至溶液無氣泡，密封保存，即得固含量5 %的雙氯芬酸鈉速緩雙釋口腔膜劑速釋層溶液。

2.2.1.2 雙氯芬酸鈉速緩雙釋口腔膜劑的制備工藝取4個(gè)20 ml透明空西林瓶，封蓋密封并稱重每個(gè)西林瓶的重量。在包衣鍋中加入約450 g素片作為包衣片床，將西林瓶置入包衣鍋中，啟動包衣鍋，使西林瓶隨片床一起均勻滾動，鍋體預(yù)熱10 min，設(shè)置工藝條件，啟動噴槍制備膜劑，每隔20 min暫停制備，觀察膜劑外觀，并稱重西林瓶。噴霧完后，西林瓶稱重并置于常溫陰涼處干燥10 min，待制備速釋層。

取制備好緩釋層的西林瓶，稱重每個(gè)西林瓶的重量。在包衣鍋中重新加入約450 g素片作為包衣片床，將西林瓶置入包衣鍋中，啟動包衣鍋，使西林瓶隨片床一起均勻滾動，鍋體預(yù)熱10 min，設(shè)置工藝條件，啟動噴槍制備膜劑，每隔30 min暫停制備，觀察西林瓶表面膜劑外觀，并稱重西林瓶。噴霧完成后，西林瓶稱重并置于常溫陰涼處干燥至完全成膜。將干燥后的雙氯芬酸鈉速緩雙釋口腔膜劑從西林瓶上完整剝離，將膜劑裁剪為5 cm×2 cm的長方形薄片，每片膜劑約含2.5 mg雙氯芬酸鈉。保存于封口膜中，25 ℃干燥柜中保存等待進(jìn)一步表征。

2.2.2 單因素考察 通過預(yù)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)對膜劑質(zhì)量有影響的主要因素為膜劑溶液固含量、儀器進(jìn)風(fēng)溫度、鍋體轉(zhuǎn)速、噴霧速度、霧化壓力和吹扁壓力。設(shè)定雙氯芬酸鈉速緩雙釋口腔膜劑的緩釋層噴霧干燥條件為進(jìn)風(fēng)溫度40 ℃，鍋體轉(zhuǎn)速10 r/min，噴霧速度15 r/min，霧化壓力0.08 bar，吹扁壓力0.10 bar。在相同時(shí)間內(nèi)制備不同溶液固含量膜劑的緩釋層，平行制備3批次?？疾觳煌芤汗毯繉δ┚忈寣拥耐庥^、藥物含量和厚度的影響，根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果選定較優(yōu)的溶液固含量范圍。同樣地，控制5個(gè)工藝條件不變，改變1個(gè)工藝條件，根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果選定緩釋層較優(yōu)的工藝條件范圍。

2.2.2.1 工藝條件對口腔膜劑緩釋層質(zhì)量的影響 結(jié)果見表1～表6。

表1 不同溶液固含量緩釋層的評價(jià)結(jié)果（n=3）

表2 不同進(jìn)風(fēng)溫度緩釋層的評價(jià)結(jié)果（n=3）

表3 不同鍋體轉(zhuǎn)速緩釋層的評價(jià)結(jié)果（n=3）

表4 不同噴霧速度緩釋層的評價(jià)結(jié)果（n=3）

表5 不同霧化壓力緩釋層的評價(jià)結(jié)果（n=3）

表6 不同吹扁壓力緩釋層的評價(jià)結(jié)果（n=3）

2.2.2.2 各工藝條件對口腔膜劑質(zhì)量的影響 以2.2.2.1項(xiàng)處方工藝優(yōu)化結(jié)果，制備口腔膜劑緩釋層，然后，設(shè)定速釋層噴霧干燥條件為進(jìn)風(fēng)溫度55 ℃，鍋體轉(zhuǎn)速12 r/min，噴霧速度4 r/min，霧化壓力0.12 bar，吹扁壓力0.12 bar。在相同時(shí)間內(nèi)制備不同溶液固含量膜劑的速釋層，平行制備3批次?？疾觳煌芤汗毯繉φw膜劑的外觀、藥物含量和厚度的影響，根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果選定較優(yōu)的溶液固含量范圍。同樣的，控制5個(gè)工藝條件不變，改變1個(gè)工藝條件，根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果選定較優(yōu)的工藝條件范圍。結(jié)果見表7～表12。

表7 不同速釋層溶液固含量口腔膜劑的評價(jià)結(jié)果（n=3）

表8 不同速釋層進(jìn)風(fēng)溫度口腔膜劑的評價(jià)結(jié)果（n=3）

表9 不同速釋層鍋體轉(zhuǎn)速口腔膜劑的評價(jià)結(jié)果（n=3）

表10 不同速釋層噴霧速度口腔膜劑的評價(jià)結(jié)果（n=3）

表11 不同速釋層霧化壓力口腔膜劑的評價(jià)結(jié)果（n=3）

表12 不同速釋層吹扁壓力口腔膜劑的評價(jià)結(jié)果（n=3）

由表2和表8可見，當(dāng)進(jìn)風(fēng)溫度過低時(shí)，膜溶液干燥速度慢而與片床黏連，產(chǎn)生破損；過高時(shí)，溶劑揮發(fā)快，導(dǎo)致膜溶液在容器表面留存大量氣泡。由表3和表9可見，當(dāng)鍋體轉(zhuǎn)速過低時(shí)，膜溶液干燥速度減慢，易與片床黏連。而鍋體轉(zhuǎn)速過高時(shí)，膜劑與鍋體碰撞程度過于劇烈，導(dǎo)致膜劑整體破損。由表4和表10可見，當(dāng)噴霧速度過高時(shí)，膜劑因單位時(shí)間噴敷于容器表面的溶液質(zhì)量過大而使容器表面物料分布不均導(dǎo)致破損和渾濁。由表5和表11可見，當(dāng)霧化壓力過低時(shí)，容器或膜劑表面因噴霧液滴粒徑較大而發(fā)生物料分布不均，最終導(dǎo)致膜劑破損現(xiàn)象；當(dāng)霧化壓力過高時(shí)，噴霧液滴較小，溶劑揮發(fā)速度較快，而使膜劑表面有少量氣泡。由表6和表12可見，吹扁壓力過低時(shí)，噴霧面積過大，單位時(shí)間噴敷在容器表面的溶液過多，易造成膜溶液輔料分布不均，導(dǎo)致膜表面渾濁；但當(dāng)吹扁壓力提高時(shí)，噴霧面積會隨之減小，單位時(shí)間噴敷在容器表面的溶液減少，噴霧效率降低，為了提高效率，選取能保證膜劑質(zhì)量且較低的吹扁壓力作為雙氯芬酸鈉速緩雙釋口腔膜劑吹扁壓力優(yōu)化結(jié)果。

綜上，得出優(yōu)化后制備工藝條件，見表13。

表13 雙氯芬酸鈉速緩雙釋口腔膜劑制備工藝條件

2.2.3 雙氯芬酸鈉速緩雙釋口腔膜劑的質(zhì)量評價(jià) 依照表13優(yōu)化后制備工藝條件制備雙氯芬酸鈉速緩雙釋口腔膜劑，進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)。

2.2.3.1 外觀 肉眼觀察膜的均勻性、顏色、透明度和表面性質(zhì)。要求：制備的膜無裂痕，厚度一致，顏色均勻等。速緩雙釋口腔膜劑外觀見圖1，由圖可見，雙氯芬酸鈉速緩雙釋口腔膜劑外觀光滑透明，無明顯氣泡。

圖1 工藝優(yōu)化后同一批次5 cm×2 cm雙氯芬酸鈉速緩雙釋口腔膜劑外觀圖

2.2.3.2 厚度 用游標(biāo)卡尺卡住剪裁好的膜劑的上下端，在膜劑的5個(gè)不同的位置（中心和4個(gè)角）測量其厚度，每個(gè)處方的膜劑平行測量3次，取平均值。平均厚度范圍應(yīng)在0.05～0.10 mm。結(jié)果表明，速緩雙釋口腔膜劑厚度為0.09±0.01 mm，符合要求。

2.2.3.3 耐折度 對所制備的膜劑進(jìn)行手動測量。在膜的同一地方反復(fù)折疊，直到斷裂；薄膜的折疊次數(shù)，可表示為薄膜的耐折強(qiáng)度。每個(gè)處方的膜劑平行測量3次，取平均值。平均耐折度超過100次，表明薄膜韌性良好。結(jié)果表明，速緩雙釋口腔膜劑的平均耐折度為54次，可能因本劑型為雙層膜劑，不同成膜材料結(jié)合在一起時(shí)導(dǎo)致膜劑耐折度降低。

2.2.3.4 含量均勻度 取10片自制雙氯芬酸鈉口腔膜劑，分別置入100 ml量瓶，以PBS緩沖液（pH 6.8）溶解并稀釋至刻度，取10 ml樣品溶液于 15 ml離心管中，3000 r/min 離心10 min 后，取上清，紫外分光光度計(jì)法測定溶液吸光度，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算得每片口腔膜劑中的雙氯芬酸鈉含藥量為4931.50±1.80 μg，約為理論含藥量（5 mg，速釋層與緩釋層的理論含藥量皆為2.5 mg）的 98.63 %。根據(jù)《中國藥典》2020年版四部“0941 含量均勻度檢查法”計(jì)算得知，A+2.2 S＜L（L=15），表明口腔膜劑的含量均勻度符合要求。

2.2.3.5 釋放度實(shí)驗(yàn) 按《中國藥典》2020版四部通則（0931）釋放度測定方法，采用第四法槳碟法。取同一批制備的雙氯芬酸鈉口腔膜劑裁剪為5 cm×2 cm的長方形薄片，將其速釋層朝上固定在兩個(gè)網(wǎng)碟之間，放于溶出杯底部。精密加入1000 ml 37 ℃磷酸鹽緩沖液（pH 6.8），在水浴中保持37 ℃恒溫，在有機(jī)玻璃蓋孔中通過攪拌槳，與網(wǎng)碟間隔25±2 mm，轉(zhuǎn)速50 r/min，蓋上杯蓋防止水分蒸發(fā)。分別于1，3，5，7，10，30，60和90 min時(shí)取10 ml溶液，取樣后同時(shí)補(bǔ)充等溫等量的釋放介質(zhì)，通過0.45 μm的膜濾器過濾收集的樣品。以相同重量空白膜劑的磷酸鹽緩沖液（pH 6.8）為空白對照，在276 nm處采用紫外分光光度法測定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程得出每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的藥物濃度，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，累積釋放百分比為縱坐標(biāo)，繪制雙氯芬酸鈉速釋口腔膜劑的累積釋放曲線。每批口腔膜劑的釋放度實(shí)驗(yàn)平行試驗(yàn)3次，累積釋放度結(jié)果取平均值。

釋放度結(jié)果見圖2，由圖2可見，雙氯芬酸鈉速緩雙釋口腔膜劑可在10 min內(nèi)釋出52 %的藥物，與速釋層2.5 mg標(biāo)示量接近，并在3 h內(nèi)緩慢釋放剩余藥物。

3 討論

在通過噴霧干燥法制備雙氯芬酸鈉速緩雙釋口腔膜劑的過程中發(fā)現(xiàn)：（1）溶液固含量的大小主要影響膜劑溶液的黏度。若溶液黏度過大，將以大液滴形式從噴槍噴出，噴敷在容器表面，形成大小不均一的點(diǎn)，最終使口腔膜劑外觀凹凸不平。而當(dāng)溶液固含量低黏度小時(shí)，此時(shí)溶液呈現(xiàn)濃度較低的水溶液或醇溶液形式，在相同噴霧速度下，難以在容器表面迅速干燥，導(dǎo)致容器表面的膜劑與片床黏連，最終膜劑破損。因此，需要控制膜劑溶液固含量大小，使其在適宜的黏度范圍，膜劑溶液能以均勻大小的液滴噴敷于容器表面。（2）進(jìn)風(fēng)溫度主要影響膜劑溶液的干燥速度。進(jìn)風(fēng)溫度越高，干燥速度越快，先噴敷于容器表面的膜劑溶液干燥完全時(shí)，后噴敷于容器表面的溶液還未形成薄膜黏附于容器表面，這就導(dǎo)致膜劑將不再是均勻的整體，因此，從外觀上看，是差異明顯的多層結(jié)構(gòu)。相反，進(jìn)風(fēng)溫度越低，干燥速度越慢，會導(dǎo)致膜劑溶液與片床發(fā)生黏連，膜劑破損。因此，要控制進(jìn)風(fēng)溫度的大小，使容器表面的溶液在短時(shí)間實(shí)現(xiàn)整體干燥，呈現(xiàn)膜狀。（3）鍋體轉(zhuǎn)速直接影響噴槍在單位時(shí)間內(nèi)噴敷于容器表面的溶液質(zhì)量的多少，片床與容器表面膜劑的磨損程度。轉(zhuǎn)速過快，干燥過快，膜劑表面與片床碰撞過于劇烈，易造成膜劑破損。但轉(zhuǎn)速過慢，干燥過慢，片床與膜劑易黏連。（4）噴霧速度直接影響噴槍噴出溶液的流量，流量過大，單位時(shí)間內(nèi)噴敷溶液的質(zhì)量過多，膜劑干燥后厚度不一致；但是，轉(zhuǎn)速過慢，噴霧效率過低。（5）霧化壓力的作用是使溶液呈霧狀噴出，其大小直接影響噴霧液滴的大小。溶液液滴粒徑與霧化壓力呈正比，但在高溫下，干燥程度過于劇烈，膜劑表面分層明顯，難以形成完整的條狀膜劑。因此，霧化壓力不宜過高，同時(shí)限制噴霧液滴粒徑大小，使液滴盡可能均勻噴敷在容器表面，干燥后形成完整的薄膜狀。（6）吹扁壓力的作用是使噴霧呈扁平狀噴敷容器表面，吹扁壓力越大，溶液噴射的形狀越為扁平，促使噴霧更加均勻，但制備效率過低，因此，吹扁壓力也不宜過高。由此可見，雙氯芬酸鈉速緩雙釋口腔膜劑的質(zhì)量是受上述制備工藝互相影響的綜合結(jié)果。

以噴霧干燥法制備的雙氯芬酸鈉口腔速緩雙釋膜劑，外觀光滑透明，無明顯氣泡，厚度均勻，含量均勻度符合要求，同時(shí)具備速釋與緩釋藥物的功能。本研究制備的雙氯芬酸鈉口腔速緩雙釋膜，為口腔潰瘍的治療，提供了一種新的遞藥方式，預(yù)期能起到快速鎮(zhèn)痛并持續(xù)緩解疼痛的臨床效果，顯著提高患者的用藥順應(yīng)性和生活質(zhì)量。后期，筆者將通過動物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探究該劑型對于口腔潰瘍的治療效果。