• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    珠江口沉積物中重金屬和石油污染對微生物群落結(jié)構(gòu)的影響

    2022-03-07 12:18:28李純厚肖雅元謝雨芳
    海洋湖沼通報 2022年1期
    關(guān)鍵詞:珠江口菌門沉積物

    吳 鵬,劉 永,李純厚*,肖雅元,王 騰,林 琳,謝雨芳

    (1. 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部南海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點實驗室,中國水產(chǎn)科學研究院南海水產(chǎn)研究所,廣東 廣州,510300;2. 國家海洋局南海環(huán)境監(jiān)測中心,廣東 廣州,510300;3. 南方海洋科學與工程廣東省實驗室(廣州),廣東 廣州,511458;4.廣東省漁業(yè)生態(tài)環(huán)境重點實驗室,廣東 廣州,510300)

    引 言

    珠江口是粵港澳大灣區(qū)的核心區(qū)域,也是我國最重要的河口之一。珠江口自然條件優(yōu)越,水產(chǎn)資源十分豐富,對廣東省的經(jīng)濟發(fā)展起著重要作用。近40 a隨著珠江沿岸經(jīng)濟的迅速發(fā)展,珠江口海域不僅接納了大量毗鄰沿岸地區(qū)直接排放的污水,還接納了各種大小徑流攜帶和珠江口周邊大規(guī)模的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)排放的污染物。此外,珠江口各類船只較多,航運繁忙,也是污染物的重要來源[1]?!?018年中國海洋生態(tài)環(huán)境狀況報告》顯示,珠江口生態(tài)系統(tǒng)近年來處于亞健康狀態(tài),水體呈富營養(yǎng)化[2]。目前多種持久性有機污染物和重金屬在珠江口不同環(huán)境介質(zhì)中也被檢測到,而沉積物是持久性有機污染物和重金屬主要的“匯”[3-6]。珠江口生態(tài)環(huán)境區(qū)域性差異明顯,從珠江口上游的廣州河段到下游的外伶仃海域的水環(huán)境狀況、沉積物污染物含量、浮游生物和漁業(yè)資源等生物群落結(jié)構(gòu)具有區(qū)域分布的特征[3, 7-10]。在珠江口淡水和海水相互混合作用下,珠江口上游到下游水環(huán)境梯度變化下沉積物微生物分布特征還有待進一步研究。

    2004年,Wu等[11]利用末端限制性片段長度多態(tài)性分析方法(Terminal restriction fragment length polymorphism,T-RFLP)發(fā)現(xiàn)珠江口沉積物微生物有9個類群,并且主要以δ變形菌(Deltaproteobacteria)和厚壁菌門(Firmicutes)為主。而后,Sun等[12]基于16S rRNA基因的變形梯度凝膠電泳方法(Denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)發(fā)現(xiàn)珠江口沉積物優(yōu)勢菌群為α變形菌(Alphaproteobacteria),γ變形菌(Gammaproteobacteria),酸桿菌門(Acidobacteria)和放線細菌門(Actinobacteria)。隨著分子生物學技術(shù)的發(fā)展,16S rRNA基因擴增子的高通量測序方法被認為能更加全面而快捷地反映微生物組成[13]。然而,目前缺乏利用該技術(shù)探討珠江口沉積物微生物群落研究。微生物群落結(jié)構(gòu)也受外界環(huán)境因素的影響,環(huán)境的異質(zhì)性能形成微生物的區(qū)域-分類群單元[14]。針對珠江口沉積物環(huán)境,研究發(fā)現(xiàn)地理區(qū)域是影響珠江口厭氧氨氧化菌分布的關(guān)鍵因素,而季節(jié)性變化影響不大[15]。對于珠江口沉積物中的古菌,鹽度、氨氮和有機碳則發(fā)現(xiàn)是主要影響因素[16]。然而,Sun等[12]采用16S rRNA-DGGE方法發(fā)現(xiàn)總磷、銨鹽、pH和海水鹽度是影響珠江口沉積物微生物分布的主要因素。因此,沉積物營養(yǎng)鹽等環(huán)境因子可影響微生物組成。但是,珠江口沉積物中重金屬和石油類污染廣泛存在,并且這兩類污染物含量在珠江口上游相對高于下游,重金屬和石油類污染在珠江口也有明顯的區(qū)域差異分布特征[17, 18]。然而,重金屬和石油類等污染物對珠江口沉積物微生物變化的影響研究還少見報道。

    本研究從珠江口上游到下游選取了梯度環(huán)境變化下的調(diào)查站位14個,采用16S rRNA基因擴增子的高通量測序方法闡述了珠江口區(qū)域環(huán)境特征差異下微生物群落分布特征,著重探討了重金屬和石油類等理化因子對沉積物微生物分布的影響。研究結(jié)果為了解珠江口沉積物微生物的區(qū)域分布特征和生態(tài)功能提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和理論基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 樣品采集

    2015年8月從珠江口上游到下游布設(shè)了14個研究站點(圖1),采集了表層(0~5 cm)沉積物樣品。每個站點采集沉積物樣品3份,混勻后分裝成2份,于-20℃保存,分別用于沉積物理化因子和微生物群落分析。根據(jù)底層海水鹽度和站位區(qū)域位置,以S1—S4為珠江口上游區(qū)域(鹽度小于2‰),以S5—S9為珠江口中游區(qū)域(鹽度介于2‰和10‰),而珠江口下游區(qū)域以S10—S14站(鹽度大于12‰)。

    圖1 珠江口沉積物采樣站位

    1.2 沉積物理化因子分析

    參照海洋監(jiān)測規(guī)范第5部分:沉積物分析方法(GB17378.5-2007)[19],有機碳(TOC)含量采用重鉻酸鉀氧化-還原容量法測定;石油類(Oil)含量采用紫外分光光度法測定;重金屬總汞(Hg)和砷(As)含量采用原子熒光法測定,銅(Cu)、鉛(Pb)、鎘(Cd)、鋅(Zn)和總鉻(Cr)含量采用火焰原子吸收分光光度法測定;沉積物pH通過PHS-3C型精密pH計現(xiàn)場測定。

    1.3 宏基因組DNA提取與PCR擴增

    取1.0 g采集的沉積物按照PowerSoil?DNA Isolation Kit試劑盒(MOBIO,USA)操作方法提取沉積物宏基因組DNA。以提取的沉積物宏基因組DNA為模板,采用微生物16S rRNA基因V4~V5區(qū)的特異性引物515F(5'-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3')和907R(5'-CCGTCAATTCCTTTGAGTTT-3')進行PCR擴增[20]。PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)建庫檢測,將合格的文庫在Illumina HiSeq2500 PE250平臺進行高通量測序(北京諾禾致源生物信息科技有限公司)。

    1.4 高通量測序數(shù)據(jù)分析

    樣品下機測序序列截去Barcode和引物序列后,使用FLASH(V1.2.7)對樣品中的Reads進行拼接,得到Raw Tags[21]。拼接得到的Raw Tags經(jīng)過嚴格的過濾處理[22]得到高質(zhì)量的Tags數(shù)據(jù)(Clean Tags)。Clean Tags按照QIIME(V1.7.0)對Tags的質(zhì)量控制要求[23],進一步進行如下操作:a)Tags截取:將Raw Tags從連續(xù)低質(zhì)量值(默認質(zhì)量閾值為≤19)堿基數(shù)達到設(shè)定長度(默認長度值為3)的第一個低質(zhì)量堿基位點截斷;b)Tags長度過濾:Tags經(jīng)過截取后得到的Tags數(shù)據(jù)集,進一步過濾掉其中連續(xù)高質(zhì)量堿基長度小于Tags長度75%的Tags。經(jīng)過以上處理的Tags通過UCHIME Algorithm(http://www.drive5.com/usearch/manual/uchime_algo.html)與數(shù)據(jù)庫(Gold database,http://drive5.com/uchime/uchime_download.html)去除其中的嵌合體序,得到Effective Tags。Effective Tags利用Uparse(V7.0.1001)在97%水平上進行操作分類單元(Operational taxonomic unit,OTU)聚類分析[24]。選取代表性O(shè)TUs序列,用RDP Classifier方法[25]與SILVA數(shù)據(jù)庫[26]進行物種系統(tǒng)進化注釋分析。樣品數(shù)據(jù)均一化處理后,使用QIIME軟件(V1.7.0)計算樣品的香農(nóng)指數(shù)(Shannon),辛普森指數(shù)(Simpson),Chao1指數(shù)和覆蓋度(Coverage)[23]。

    1.5 數(shù)據(jù)分析

    根據(jù)所有樣品的OTU序列,將相同分類的OTUs信息合并處理后構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,并通過R軟件GUniFrac包來計算樣本間的Unweighted Unifrac距離,再結(jié)合OTU的豐度信息,進行主坐標分析(Principal coordinate analysis,PCoA)探討珠江口沉積物微生物組成差異。根據(jù)珠江口沉積物各屬微生物的相對豐度,選取相對豐度高的前30屬的微生物通過STAMP軟件繪制熱圖,而微生物在珠江口三個區(qū)域中的組成差異通過One-way ANOVA和Tukey-Kramer方法檢驗。通過R軟件采用典范對應(yīng)分析(Canonical correlation analysis,CCA)珠江口沉積物微生物組成與沉積物理化因子的關(guān)系。所有檢驗中,差異顯著為p≤0.05,差異極為顯著為p≤0.01。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 珠江口沉積物理化因子狀況

    沉積物pH值在S1站點最低為7.21,而S14站點的pH值最高為8.39,表現(xiàn)為珠江口從上游到下游呈現(xiàn)逐漸遞增的趨勢(表1)。相反,TOC含量在珠江口上游含量相對較高,其中S1站點的有機碳含量最高為1.10%,而靠近外海區(qū)域的S13站點有機碳含量最低為0.56%(表1)。珠江口沉積物中總汞、砷、銅、鉛、鎘、鋅和總鉻等七類重金屬平均含量分別為0.104,22.1,61.1,46.2,0.35,158和21.7 mg/kg;其分布規(guī)律總體表現(xiàn)為珠江口上游重金屬含量相對較高,而靠近外海區(qū)域中的重金屬含量較低。與劉解答等[18]的歷史調(diào)查相比較,本次調(diào)查的重金屬含量略低,但重金屬含量的區(qū)域變化一致,從珠江口上游到下游逐漸降低。珠江口沉積物石油類含量的變化范圍為25.9~541.0 mg/kg,平均值為183.8 mg/kg;珠江口上游S1—S4站點的石油類含量(379.0~541.0 mg/kg)相對高于下游的S10—S14站點(41.6~115.0 mg/kg)(表1)。吳玲玲等[17]調(diào)查發(fā)現(xiàn)2006年、2009年、2010年和2011年珠江口沉積物石油類平均含量分別為127.2,318.0,134.1和118.5 mg/kg。與以往調(diào)查結(jié)果相比較,本次調(diào)查珠江口沉積物中的石油類含量有一定程度的升高,但其分布規(guī)律基本一致,珠江口上游站點的石油類含量要高于珠江口下游。以往研究表明石油類和重金屬的污染水平受珠江口陸源輸入的影響比較大[17-18]。

    表1 珠江口沉積物理化因子狀況

    2.2 珠江口沉積物微生物群落組成

    珠江口沉積物的14個樣品中獲得Effective reads范圍在52565到66691之間,其中S10站點最少,而S3站點獲得數(shù)量最多。在97%的相似性水平上,各站點獲得的OTUs數(shù)量變化在4181到6787之間,其中S12站點最少,而S3站點最多(表2)。每個樣品保留45092條Effective reads,在97%的相似性水平上對OTUs數(shù)據(jù)進行均一化處理后進行Alpha多樣性指數(shù)分析,發(fā)現(xiàn)各樣品Shannon指數(shù)介于9.22和10.58之間,Chao1介于4128和7346之間,而Simpson指數(shù)基本在0.99以上。珠江口中游的Shannon指數(shù)平均值(10.20)相對高于上游(10.08)和下游(10.05)的區(qū)域。各站點樣品的Chao1指數(shù)基本和OTU數(shù)目相當,結(jié)合各樣品的Coverage均達到95%以上,表明本研究的高通量測序數(shù)據(jù)能全面反映珠江口沉積物微生物種類(表2)。

    表2 珠江口沉積物微生物的測序信息和多樣性分析

    基于微生物門分類水平分析發(fā)現(xiàn)珠江口沉積物微生物均以變形菌門(Proteobacteria)和綠彎菌門(Chloroflexi)兩類為主,該兩類群相對豐度之和均占總豐度的50%以上。綠彎菌門相對豐度在S1站點和S7站點要高于變形菌門,而其余站點的變形菌門相對豐度要高于綠彎菌門。浮霉菌門(Planctomycetes)和擬桿菌門(Bacteroidetes)類群在各站點中的相對豐度也較高,分布范圍分別為2.8%~8.5%和1.5%~7.4%。另外,有些微生物類群在特定站點所占比例也較高,S2站點中藍細菌門(Cyanobacteria)相對豐度較高為15.3%,S7站點中泉古菌門(Crenarchaeota)相對豐度為11.0%(圖2)。分析變形菌門類群中各綱微生物組成發(fā)現(xiàn),沉積物中以δ變形菌(Deltaproteobacteria)的相對豐度較高,其次為γ變形菌(Gammaproteobacteria),但β變形菌(Betaproteobacteria)相對豐度在珠江口上游的S2—S4站點要明顯高于其余站位(圖2)。本研究采用的高通量測序方法反映的珠江口沉積物微生物群落結(jié)構(gòu),與已報到的DGGE的測序方法結(jié)果有所不同。16S rRNA-DGGE方法發(fā)現(xiàn)珠江口沉積物微生物種類以酸桿菌門(Acidobacteria)和變形菌門占優(yōu)勢,而變形菌門類群中以γ變形菌和α變形菌為主,δ變形菌未檢出[12]。珠江口水體和沉積物中微生物群落也具有較大差別,盡管均采用高通量測序方法。Mai等[10]發(fā)現(xiàn)珠江口水體生物膜上的微生物以變形菌門類群為主(56.6%),其中又以α變形菌和γ變形菌為主;隨著海水鹽度的增加,水體環(huán)境中α變形菌相對豐度增加,而γ變形菌減少。然而,本研究發(fā)現(xiàn)隨著海水鹽度的增加沉積物環(huán)境中γ變形菌相對豐度增加,而δ變形菌減少。

    圖2 門和PROTEOBACTERIA綱分類水平下珠江口沉積物微生物類群相對豐度組成變化

    Unweighted Unifrac PCoA分析發(fā)現(xiàn)位于珠江口上游S1—S4站點的沉積物微生物群落主要聚為一類,位于珠江口中游的S5—S9站點的沉積物微生物群落聚為另一類,其余位于珠江口下游站點的沉積物微生物聚為第三類,PCoA分析可以發(fā)現(xiàn)珠江口沉積物微生物群落分布具有明顯的區(qū)域性(圖3)。珠江口沉積物微生物具有區(qū)域性分布的特征,這與水環(huán)境狀況、沉積物污染物含量、浮游生物和漁業(yè)資源等生物群落結(jié)構(gòu)在珠江口分布呈現(xiàn)區(qū)域性差異的特征相類似[3, 7-10]。因此,有必要加強珠江口沉積物微生物組成的區(qū)域比較研究。

    圖3 Unweighted Unifrac PCoA分析珠江口沉積物微生物群落

    將珠江口沉積物微生物分為三組(上游、中游和下游),選取相對豐度高的前30屬微生物進行分析,發(fā)現(xiàn)三個區(qū)域中硝化螺旋菌(Nitrospira)、脫硫球菌(Desulfococcus)、厭氧粘細菌(Anaeromyxobacter)、厭氧繩菌(Anaerolinea)、4-29和LCP-26組成差異極為顯著(p<0.01),而CandidatusPortiera、BD2-6、脫氯單胞菌(Dechloromonas)、GOUTA19、HTCC、Nitrosopumilus和硫桿菌(Thiobacillus)微生物組成差異有顯著性(p<0.05)。此外,珠江口上游沉積物中硝化螺旋菌、厭氧繩菌、4-29和厭氧粘細菌相對豐度較高,而珠江口中游沉積物中LCP-26相對豐度較高,珠江口下游以脫硫球菌相對豐度較高。硝化螺旋菌是硝化作用/反硝化作用過程中的關(guān)鍵菌群,厭氧粘細菌在沉積物Fe和S循環(huán)中發(fā)揮重要作用,在厭氧條件下厭氧繩菌能降解大量的碳水化合物[27-28]。脫硫球菌是硫酸鹽還原菌的重要類群,并介導有機污染物的降解[29-30]??梢?,珠江口沉積物微生物在沉積物營養(yǎng)物質(zhì)循環(huán)和污染物降解等方面發(fā)揮重要作用。

    圖4 珠江口沉積物中前30屬微生物組成

    2.3 珠江口沉積物狀況對微生物群落的影響

    典范對應(yīng)分析發(fā)現(xiàn)沉積物中Cd和TOC含量對沉積物微生物影響不明顯(p≥0.05),珠江口上游沉積物微生物受重金屬(Zn、Hg、Cr、Pb和As等)和石油類含量的影響較大(p<0.05),而珠江口中游和下游受pH的影響尤為明顯(p<0.05)(圖5)。Sun等[12]也發(fā)現(xiàn)pH是影響珠江口沉積物微生物分布的重要因素之一。pH可直接影響微生物組成,或者通過影響沉積物中重金屬溶解性、有機碳含量和電導率等理化因子從而間接影響微生物組成[12, 31, 32]。珠江口上游沉積物微生物受重金屬和石油類的影響較大,可能由于沉積物環(huán)境中重金屬和石油類污染程度相對較高,造成參與相應(yīng)污染物代謝的微生物種類增多有關(guān)。筆者曾發(fā)現(xiàn)多環(huán)芳烴污染在珠江口上游相對較高,導致相應(yīng)的微生物代謝功能基因也增高[34]。進一步分析珠江口沉積物中微生物代謝基因的分布情況,可更好地闡述重金屬和石油類污染物對微生物群落結(jié)果的影響。

    圖5 珠江口沉積物微生物與沉積物理化因子的變化關(guān)系

    3 結(jié)論

    (1)珠江口上游沉積物重金屬和石油類污染相對較高。珠江口上游沉積物重金屬(總汞、砷、銅、鉛、鎘、鋅和總鉻)含量要高于珠江口下游和中游,石油類含量在珠江口的分布規(guī)律與重金屬分布趨勢相一致;石油類和重金屬的污染水平受陸源輸入的影響比較大。

    (2)珠江口沉積物微生物多樣性豐富。珠江口沉積物中微生物Effective reads變化范圍為52565~66691,而Shannon指數(shù)為9.22~10.58;珠江口沉積物微生物以變形菌門和綠彎菌門兩類為主,其次為浮霉菌門和擬桿菌門;在變形菌門類群中,沉積物以δ變形菌相對豐度最高,γ變形菌次之;沉積物中存在大量的微生物參與營養(yǎng)物質(zhì)循環(huán)和污染物降解等過程。

    (3)珠江口沉積物微生物區(qū)域分布具有差異性。珠江口中游沉積物微生物Shannon指數(shù)相對高于珠江口其余兩區(qū)域;珠江口上游的β變形菌相對豐度要高于珠江口下游區(qū)域,而γ變形菌相對豐度反之;珠江口上游沉積物中硝化螺旋菌屬、厭氧繩菌屬、4-29和厭氧粘細菌屬相對豐度較高,而珠江口中游沉積物中LCP-26相對豐度較高,珠江口下游以脫硫球菌屬相對豐度較高。

    (4)珠江口上游沉積物微生物群落受重金屬(鋅、總汞、總鉻、鉛和砷)和石油類的影響較大,而下游的微生物受pH影響更明顯。

    猜你喜歡
    珠江口菌門沉積物
    晚更新世以來南黃海陸架沉積物源分析
    海洋通報(2022年2期)2022-06-30 06:07:04
    珠江口地區(qū)巖土層工程地質(zhì)特征及物理力學性質(zhì)研究
    渤海油田某FPSO污水艙沉積物的分散處理
    海洋石油(2021年3期)2021-11-05 07:43:12
    水體表層沉積物對磷的吸收及釋放研究進展
    野生樹鼩與人工飼養(yǎng)樹鼩消化道不同部位微生物組成的比較研究
    饑餓與重攝食對河蟹腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響
    昆蟲體內(nèi)微生物多樣性的影響因素研究進展
    妊娠期糖尿病腸道菌群變化及臨床價值分析
    從珠江口到大嶼山
    生活污水對珠江口漁業(yè)水域環(huán)境的影響評價
    国产精品98久久久久久宅男小说| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲激情在线av| av有码第一页| 69av精品久久久久久| 国产一区二区在线av高清观看| 午夜福利免费观看在线| 亚洲成人国产一区在线观看| 亚洲成人久久性| 天堂俺去俺来也www色官网| 久久婷婷成人综合色麻豆| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲成a人片在线一区二区| 99久久综合精品五月天人人| 国产精品永久免费网站| 天堂影院成人在线观看| 免费观看精品视频网站| 午夜日韩欧美国产| 在线观看免费高清a一片| 性少妇av在线| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 久久精品91无色码中文字幕| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 99re在线观看精品视频| 99久久人妻综合| 精品电影一区二区在线| 欧美成人午夜精品| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 亚洲av成人av| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 欧美性长视频在线观看| 在线观看舔阴道视频| 亚洲专区国产一区二区| 欧美黑人精品巨大| 久久亚洲真实| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 欧美精品亚洲一区二区| 日本欧美视频一区| 免费观看人在逋| 99在线视频只有这里精品首页| 精品久久久久久成人av| 亚洲国产精品合色在线| 99久久人妻综合| 欧美黑人欧美精品刺激| 日韩高清综合在线| 在线播放国产精品三级| 欧美不卡视频在线免费观看 | 久久草成人影院| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲色图av天堂| 91成人精品电影| 午夜福利,免费看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 黄频高清免费视频| 宅男免费午夜| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 精品国内亚洲2022精品成人| 又黄又粗又硬又大视频| 悠悠久久av| 久久亚洲精品不卡| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 色综合站精品国产| 免费人成视频x8x8入口观看| 91av网站免费观看| 亚洲第一青青草原| 国产一区二区在线av高清观看| 成在线人永久免费视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产成人精品无人区| 高清毛片免费观看视频网站 | 午夜成年电影在线免费观看| 久久影院123| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲 欧美一区二区三区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产午夜精品久久久久久| 亚洲人成77777在线视频| 91av网站免费观看| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲国产欧美一区二区综合| 大香蕉久久成人网| 夫妻午夜视频| 99国产精品99久久久久| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 悠悠久久av| 久久狼人影院| 久久久久久大精品| 午夜福利在线观看吧| 性少妇av在线| av天堂久久9| 欧美人与性动交α欧美软件| 久久久久久免费高清国产稀缺| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 色精品久久人妻99蜜桃| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产精品亚洲av一区麻豆| 欧美久久黑人一区二区| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 高潮久久久久久久久久久不卡| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 少妇粗大呻吟视频| 亚洲伊人色综图| 免费少妇av软件| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 国产三级黄色录像| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 国产成人一区二区三区免费视频网站| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 1024视频免费在线观看| 国产精品久久视频播放| 久久精品成人免费网站| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产成人啪精品午夜网站| 欧美久久黑人一区二区| 国产1区2区3区精品| 色综合婷婷激情| 亚洲色图av天堂| 午夜精品国产一区二区电影| 一级a爱片免费观看的视频| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 欧美乱色亚洲激情| 999精品在线视频| 波多野结衣高清无吗| 国产91精品成人一区二区三区| 免费观看人在逋| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 黄色片一级片一级黄色片| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 免费在线观看日本一区| 国产伦一二天堂av在线观看| 欧美日韩av久久| 国产成人欧美| 国产又爽黄色视频| 女性生殖器流出的白浆| 性色av乱码一区二区三区2| 1024视频免费在线观看| 一级作爱视频免费观看| 久久久国产成人精品二区 | 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产xxxxx性猛交| 日韩视频一区二区在线观看| 国产97色在线日韩免费| 九色亚洲精品在线播放| 国产精品一区二区三区四区久久 | 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产有黄有色有爽视频| 日韩人妻精品一区2区三区| 操出白浆在线播放| 多毛熟女@视频| 精品久久久久久成人av| 国产高清国产精品国产三级| 高潮久久久久久久久久久不卡| 美女福利国产在线| www日本在线高清视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久国产乱子伦精品免费另类| 91精品三级在线观看| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 一边摸一边抽搐一进一小说| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产人伦9x9x在线观看| 国产精品久久久久成人av| 悠悠久久av| 黄色女人牲交| 久久久国产精品麻豆| 夜夜爽天天搞| 精品久久久久久电影网| 两个人看的免费小视频| 不卡av一区二区三区| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲成人免费av在线播放| 国产亚洲精品久久久久5区| 一级片'在线观看视频| 少妇 在线观看| 免费在线观看完整版高清| 久久精品亚洲av国产电影网| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产av一区二区精品久久| 高清毛片免费观看视频网站 | 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产一区二区在线av高清观看| 热99re8久久精品国产| 超碰成人久久| 精品国产一区二区三区四区第35| 高清黄色对白视频在线免费看| 成人三级做爰电影| 一级黄色大片毛片| 亚洲av美国av| 狂野欧美激情性xxxx| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲欧美激情综合另类| 国产乱人伦免费视频| 免费在线观看完整版高清| 麻豆国产av国片精品| 麻豆一二三区av精品| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 精品第一国产精品| 男女午夜视频在线观看| 日韩高清综合在线| 99久久99久久久精品蜜桃| 搡老岳熟女国产| 久久精品成人免费网站| 久久 成人 亚洲| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 日日干狠狠操夜夜爽| 色综合欧美亚洲国产小说| 精品国产国语对白av| 亚洲欧美激情在线| 国产在线观看jvid| 亚洲性夜色夜夜综合| 视频在线观看一区二区三区| 久久久国产成人免费| 黄色丝袜av网址大全| 91在线观看av| 999久久久精品免费观看国产| 欧美av亚洲av综合av国产av| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产xxxxx性猛交| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 亚洲精品久久午夜乱码| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产在线观看jvid| 久久中文看片网| 精品国产乱码久久久久久男人| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| av福利片在线| av国产精品久久久久影院| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲欧美一区二区三区久久| 热99re8久久精品国产| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 黄色a级毛片大全视频| 免费在线观看日本一区| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 久热爱精品视频在线9| 好男人电影高清在线观看| 久久亚洲精品不卡| 淫秽高清视频在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 中国美女看黄片| 无人区码免费观看不卡| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产1区2区3区精品| 少妇 在线观看| 国产真人三级小视频在线观看| 国产精品日韩av在线免费观看 | 亚洲久久久国产精品| 99国产精品一区二区蜜桃av| 女警被强在线播放| 少妇的丰满在线观看| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲专区字幕在线| 一级a爱视频在线免费观看| 美女午夜性视频免费| 久久久久久久午夜电影 | 9热在线视频观看99| 亚洲精品在线观看二区| 免费在线观看完整版高清| 69av精品久久久久久| 亚洲免费av在线视频| 国产av一区在线观看免费| av电影中文网址| 日韩免费av在线播放| 亚洲,欧美精品.| 亚洲五月天丁香| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产精品久久久久成人av| 国产成+人综合+亚洲专区| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲精品一二三| 18禁美女被吸乳视频| 视频区图区小说| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 午夜两性在线视频| 亚洲,欧美精品.| 一级片免费观看大全| 国产av又大| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产成人av激情在线播放| 不卡一级毛片| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲一码二码三码区别大吗| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 一进一出好大好爽视频| 51午夜福利影视在线观看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 80岁老熟妇乱子伦牲交| 深夜精品福利| 中亚洲国语对白在线视频| 校园春色视频在线观看| 热99国产精品久久久久久7| 涩涩av久久男人的天堂| 一个人免费在线观看的高清视频| 日本vs欧美在线观看视频| 亚洲av片天天在线观看| 嫩草影视91久久| 国产精品二区激情视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产熟女午夜一区二区三区| 黄色a级毛片大全视频| 12—13女人毛片做爰片一| 99精品欧美一区二区三区四区| 国产av又大| 丁香六月欧美| 亚洲一区二区三区色噜噜 | 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 欧美国产精品va在线观看不卡| 精品久久久久久,| 黄色视频,在线免费观看| 三级毛片av免费| 精品国产国语对白av| 亚洲成人免费av在线播放| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 91麻豆av在线| 欧美成人午夜精品| 亚洲久久久国产精品| 一进一出抽搐动态| 国产精品野战在线观看 | 一进一出抽搐动态| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲精品一区av在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 成人国语在线视频| 欧美性长视频在线观看| 成人三级黄色视频| 精品福利永久在线观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产精品1区2区在线观看.| 国产精品国产av在线观看| 久久亚洲真实| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲av五月六月丁香网| 国产免费av片在线观看野外av| 亚洲男人天堂网一区| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 性少妇av在线| 成人永久免费在线观看视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| 日韩欧美免费精品| aaaaa片日本免费| 韩国av一区二区三区四区| 国产亚洲精品第一综合不卡| 日本免费a在线| 狂野欧美激情性xxxx| 国产亚洲精品一区二区www| 悠悠久久av| 日韩欧美三级三区| 最近最新免费中文字幕在线| 丰满迷人的少妇在线观看| www.自偷自拍.com| 香蕉丝袜av| 中出人妻视频一区二区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产一区二区三区综合在线观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 午夜老司机福利片| 亚洲欧美一区二区三区久久| 亚洲精品中文字幕在线视频| 成年人免费黄色播放视频| 欧美丝袜亚洲另类 | 激情在线观看视频在线高清| 国产精品久久久av美女十八| 欧美激情高清一区二区三区| 成年女人毛片免费观看观看9| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国产在线观看jvid| 99国产精品一区二区蜜桃av| 多毛熟女@视频| 水蜜桃什么品种好| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 18美女黄网站色大片免费观看| 91老司机精品| 成人特级黄色片久久久久久久| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 男人操女人黄网站| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产男靠女视频免费网站| 日日干狠狠操夜夜爽| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 日韩成人在线观看一区二区三区| 黄频高清免费视频| 中出人妻视频一区二区| 国产熟女xx| 在线观看一区二区三区激情| 人成视频在线观看免费观看| 国产高清videossex| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产麻豆69| 热re99久久国产66热| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 午夜亚洲福利在线播放| 大码成人一级视频| 黄色成人免费大全| 91精品三级在线观看| 国产成人av教育| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 巨乳人妻的诱惑在线观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 嫩草影视91久久| 黑丝袜美女国产一区| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产精品成人在线| 亚洲精品久久午夜乱码| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 日本vs欧美在线观看视频| 热re99久久国产66热| 国产野战对白在线观看| 性色av乱码一区二区三区2| 国产亚洲欧美精品永久| 精品国产亚洲在线| 黄频高清免费视频| 午夜免费鲁丝| 精品国产一区二区三区四区第35| 欧美日韩福利视频一区二区| 9热在线视频观看99| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产色视频综合| 9191精品国产免费久久| 日韩成人在线观看一区二区三区| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲黑人精品在线| av网站在线播放免费| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 精品一区二区三卡| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 欧美午夜高清在线| 中文欧美无线码| 精品国产乱子伦一区二区三区| ponron亚洲| 亚洲av电影在线进入| 免费不卡黄色视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 大码成人一级视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 性色av乱码一区二区三区2| 午夜福利在线观看吧| 窝窝影院91人妻| 国产在线观看jvid| 国产av又大| av电影中文网址| 午夜免费观看网址| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产极品粉嫩免费观看在线| 美国免费a级毛片| 久久亚洲精品不卡| 在线观看免费日韩欧美大片| 亚洲av片天天在线观看| 波多野结衣av一区二区av| 1024视频免费在线观看| 真人做人爱边吃奶动态| 国产精品久久久av美女十八| 桃红色精品国产亚洲av| 国产熟女xx| 亚洲视频免费观看视频| 三级毛片av免费| 在线观看66精品国产| 88av欧美| 久久这里只有精品19| 国产精品99久久99久久久不卡| 老汉色av国产亚洲站长工具| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产精品永久免费网站| 国产精品综合久久久久久久免费 | 黄色 视频免费看| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产成人av激情在线播放| 国产xxxxx性猛交| 国产色视频综合| 国产熟女xx| 国产欧美日韩精品亚洲av| svipshipincom国产片| 天天影视国产精品| 午夜老司机福利片| 亚洲色图av天堂| 久久精品人人爽人人爽视色| 成年女人毛片免费观看观看9| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产av精品麻豆| 国产精品一区二区在线不卡| 美女大奶头视频| 制服诱惑二区| 欧美日韩精品网址| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产一卡二卡三卡精品| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产精品99久久99久久久不卡| 精品福利永久在线观看| 女性被躁到高潮视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产aⅴ精品一区二区三区波| avwww免费| 欧美一级毛片孕妇| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 制服诱惑二区| 精品国产乱子伦一区二区三区| 啦啦啦在线免费观看视频4| 久久国产乱子伦精品免费另类| 超色免费av| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲人成77777在线视频| 黄色丝袜av网址大全| 国产一区在线观看成人免费| 久久这里只有精品19| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 成在线人永久免费视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产精品影院久久| 久久精品91无色码中文字幕| 热re99久久国产66热| 亚洲视频免费观看视频| 狂野欧美激情性xxxx| 黄色 视频免费看| 免费人成视频x8x8入口观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 99国产精品免费福利视频| 久久伊人香网站| 在线视频色国产色| 国产亚洲欧美98| 12—13女人毛片做爰片一| 午夜免费激情av| 国产成+人综合+亚洲专区| 99国产精品免费福利视频| 久久久国产一区二区| 国产精品综合久久久久久久免费 | 一二三四在线观看免费中文在| 免费高清视频大片| 国产成人啪精品午夜网站| 97碰自拍视频| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲国产精品合色在线| 国产午夜精品久久久久久| 日韩欧美在线二视频| 精品久久久久久,| 国产成人av教育| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲人成电影观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产成人精品无人区| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 91av网站免费观看| 在线国产一区二区在线| 亚洲av成人av| 黄色丝袜av网址大全| 美女午夜性视频免费| 99久久精品国产亚洲精品| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 这个男人来自地球电影免费观看| 日韩国内少妇激情av| 黑丝袜美女国产一区| 美女福利国产在线| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲国产看品久久| 中出人妻视频一区二区| 美女大奶头视频| 国产97色在线日韩免费| 日韩免费av在线播放| 制服诱惑二区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 日韩高清综合在线| 精品福利观看| 欧美成人性av电影在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 欧美激情极品国产一区二区三区| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 免费少妇av软件| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 大型黄色视频在线免费观看| 中国美女看黄片| av网站在线播放免费| 成人三级黄色视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 91字幕亚洲| 在线观看免费午夜福利视频| 老司机靠b影院| 欧美色视频一区免费| 中文亚洲av片在线观看爽| 电影成人av| 色老头精品视频在线观看| 中文字幕人妻丝袜制服| 在线观看舔阴道视频| 中文字幕人妻丝袜制服| 高清欧美精品videossex|