毛葉山桐子果實(shí)化學(xué)成分及脂肪酸動(dòng)態(tài)分析與評(píng)價(jià)

聞樂(lè)嫣，毛建梅，安小風(fēng)，楊 兵，王智榮，闞建全,*

（1.西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，重慶 400715；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品貯藏保鮮質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（重慶），重慶 400715；3.中匈食品科學(xué)合作研究中心，重慶 400715；4.重慶山林源林業(yè)綜合開發(fā)有限公司，重慶 400800）

毛葉山桐子（Idesia polycarpavar.vestitaDiels）是楊柳科（Salicaceae）山桐子屬（Idesia）的木本油料植物，又稱油葡萄、水冬瓜，多為野生存在，果實(shí)富含油脂，含量最高可達(dá)40%，且油脂中含有較多的高級(jí)脂肪酸與多不飽和脂肪酸，其中亞油酸含量最豐富，約占油脂的60%[1]。亞油酸對(duì)人體健康有著重要的意義和價(jià)值，是人體不能合成的必需脂肪酸之一，也是γ-亞麻酸和花生四烯酸的合成前體物質(zhì)[2]，有助于降低人體血漿膽固醇和改變體內(nèi)膽固醇的分布，進(jìn)而預(yù)防心血管疾病的發(fā)生[3-4]。相關(guān)研究表明，毛葉山桐子油的亞油酸含量顯著高于花生油、橄欖油以及茶籽油[5-6]。因此，毛葉山桐子油逐漸受到消費(fèi)者的喜愛和青睞，在高品質(zhì)食用油及亞油酸相關(guān)產(chǎn)品方面具有極高的開發(fā)應(yīng)用前景。

目前，關(guān)于毛葉山桐子及其同屬植物的研究，主要集中在其油脂含量及脂肪酸組成[7-8]，對(duì)于果實(shí)中非油脂化學(xué)成分的研究則相對(duì)較少。相關(guān)研究表明，果實(shí)提取物中的酚類、生物堿等物質(zhì)，具有良好的緩蝕效果[9]；果實(shí)的乙酸乙酯提取物能夠通過(guò)調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝及炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，改善油酸誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞肝脂肪變性中脂質(zhì)代謝和炎癥的紊亂[10]；脫脂后的毛葉山桐子果渣經(jīng)過(guò)動(dòng)態(tài)發(fā)酵可獲得營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)合理的發(fā)酵飼料[11]；另外，從果實(shí)中分離出的Idescarpin物質(zhì)，能夠通過(guò)降低酪蛋白酶活性以抑制黑色素的生物合成[12]；Lee等[13]發(fā)現(xiàn)，毛葉山桐子的甲醇提取物對(duì)脂肪形成具有一定的抑制作用。由此可見，毛葉山桐子果實(shí)的其他化學(xué)成分具有多種生物活性，可作為其研究和發(fā)展的方向。因此，了解毛葉山桐子果實(shí)中其他化學(xué)物質(zhì)的含量、差異性及生長(zhǎng)規(guī)律性，對(duì)于毛葉山桐子在食品、化工、醫(yī)藥等領(lǐng)域的開發(fā)與利用具有潛在意義。

對(duì)毛葉山桐子果實(shí)中的非油脂基本化學(xué)組分以及油脂的脂肪酸組成在生長(zhǎng)過(guò)程中的變化情況鮮見研究。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)比較2個(gè)品種毛葉山桐子果實(shí)在生長(zhǎng)過(guò)程中，包括粗脂肪在內(nèi)的多種化學(xué)成分含量以及油脂脂肪酸組成的變化，探究不同部位間各化學(xué)成分含量的差異性，了解各基本組分在毛葉山桐子中的存在情況，明確其開發(fā)利用價(jià)值，并通過(guò)多個(gè)指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)不同品種不同生長(zhǎng)期的毛葉山桐子果實(shí)，得到毛葉山桐子果實(shí)作為油脂原料和綜合開發(fā)原料的最佳采收期，以期在高品質(zhì)食用油、動(dòng)物飼料、天然抗氧化劑、生物柴油、化工用油等方面的綜合利用提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

毛葉山桐子新鮮樣品由重慶山林源林業(yè)綜合開發(fā)有限公司提供，重慶1號(hào)、重慶2號(hào)毛葉山桐子屬于重慶地區(qū)種植較廣泛的2個(gè)品種，于2019年9—12月，每月的 5日、20日采集。觀察果實(shí)形態(tài)，而后去除壞果、洗凈，50 ℃熱泵烘干箱中干制，干制后的整果分離得果肉及種子，將整果、果肉、種子分別粉碎后過(guò)40 目篩，并密封保存，備用。

37種脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥97%）、福林-酚試劑（分析純）、蘆?。ǚ治黾儯?北京索萊寶科技有限公司；沒(méi)食子酸（分析純）、正己烷（色譜純） 上海阿拉丁試劑公司；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

WB-KQ01型移動(dòng)熱泵烘干箱 廣州溫伴節(jié)能熱泵有限公司；7890A型氣相色譜儀 安捷倫科技（中國(guó)）有限公司；SH420F型石墨消解儀、K9840型自動(dòng)凱氏定氮儀 山東海能科學(xué)儀器股份有限公司；Epoch2型全自動(dòng)酶標(biāo)儀 美國(guó)伯騰儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 粗脂肪的提取

參考GB 5009.6—2016《食品中脂肪的測(cè)定》索氏抽提法[14]。稱取5 g（精確至0.1 mg）樣品粉末，濾紙包裹后，加入約300 mL石油醚（30～60 ℃）[6]，60 ℃水浴提取8 h，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，得到粗脂肪提取物，稱量，計(jì)算粗脂肪含量（以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示）。提取物于4 ℃保存，備用；濾紙包內(nèi)提取后粉末40 ℃烘干，常溫密封保存，備用。

1.3.2 果實(shí)百粒質(zhì)量、籽實(shí)比及成分指標(biāo)測(cè)定

隨機(jī)選取100 粒新鮮果實(shí)，105 ℃烘至絕干，測(cè)定干基百粒質(zhì)量，而后分離果肉和種子，計(jì)算籽實(shí)比。

水分含量：參考GB 5009.3—2016《食品中水分的測(cè)定》[15]；灰分含量：參考GB 5009.4—2016《食品中灰分的測(cè)定》[16]；蛋白質(zhì)含量：參考GB 5009.5—2016《食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定》[17]；粗纖維含量：采用差值法計(jì)算。

1.3.3 總糖含量測(cè)定

參考Dubois等[18]的方法，并進(jìn)行適當(dāng)修改。稱取0.1 g（精確至0.1 mg）樣品粉末，加10 mL 6 mol/L HCl溶液，沸水浴下水解約30 min，去離子水定容至25 mL。

取0.1 mL水解溶液加0.9 mL去離子水稀釋，加入1 mL 5%苯酚溶液和5 mL濃硫酸后，立即搖勻，反應(yīng)30 min后于490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。

用葡萄糖制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到葡萄糖質(zhì)量濃度（x，μg/mL）與吸光度（y）的標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.006 7x+ 0.003 4，R2=0.999 8。由此計(jì)算樣品中總糖含量，結(jié)果以每100 g干基樣品中含有相當(dāng)于葡萄糖的 質(zhì)量（g/100 g）表示。

1.3.4 總酚含量測(cè)定

采用福林-酚法測(cè)定[19-20]，酸性甲醇[21]作為提取劑，于765 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。

用沒(méi)食子酸制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到?jīng)]食子酸質(zhì)量濃度（x，μg/mL）與吸光度（y）的標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.060 1x+ 0.016 3，R2=0.999 1。由此計(jì)算樣品中總酚的含量，結(jié)果以每克干基樣品中含有相當(dāng)于沒(méi)食子酸的 質(zhì)量（mg/g）表示。

1.3.5 總黃酮含量測(cè)定

采用亞硝酸鈉法，乙醇作為提取劑，用蘆丁制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，于510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度[22-23]。

得到蘆丁質(zhì)量濃度（x，μg/mL）與吸光度（y）的標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.006x-0.002 9，R2=0.999 7。由此計(jì)算樣品中總黃酮的含量，結(jié)果以每克干基樣品中含有相當(dāng)于蘆丁的質(zhì)量（mg/g）表示。

1.3.6 油脂脂肪酸組成測(cè)定

采用氣相色譜法測(cè)定[1]。稱取20 mg（精確至0.1 mg）油脂，溶解于2 mL正己烷中，加入1 mL 1 mol/L的KOH-甲醇溶液，渦旋10 s，60 ℃水浴反應(yīng)40 min，冷卻后加入5 mL飽和NaCl溶液，渦旋10 s后7 500 r/min離心10 min，取上層正己烷層經(jīng)0.22 μm有機(jī)濾膜過(guò)濾，所得樣品用于氣相色譜分析。

氣相色譜條件：色譜柱：DB-WAX毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；柱流量1 mL/min；不分流；進(jìn)樣量1 μL；進(jìn)樣口溫度240 ℃，檢測(cè)器溫度240 ℃；升溫程序：初始溫度80 ℃，保持3 min，以10 ℃/min升溫至150 ℃，保持3 min，再以10 ℃/min升溫至240 ℃，保持8 min。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用Excel 2013進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，并以±s（n=3）的形式表示，采用SPSS 18.0進(jìn)行主成分分析（principal component analysis，PCA）及單因素方差分析，Tukey檢驗(yàn)進(jìn)行差異性比較，OriginPro 2018作為繪圖工具。

2 結(jié)果與分析

2.1 果實(shí)形態(tài)學(xué)及鮮果含水量變化分析

2個(gè)品種的盛花期在4月21日左右，且在各個(gè)時(shí)期均存在果實(shí)大小不一的現(xiàn)象，采集前期更明顯。果實(shí)顏色均僅在采集的前2個(gè)月變化明顯（圖1），由青綠色逐漸轉(zhuǎn)為黃綠色、橙紅色，最終呈現(xiàn)鮮紅色；相比較而言，重慶1號(hào)毛葉山桐子果實(shí)顏色較重慶2號(hào)毛葉山桐子早半個(gè)月左右達(dá)到鮮紅狀態(tài)，但重慶2號(hào)毛葉山桐子果實(shí)顏色鮮紅后，蟲害現(xiàn)象較嚴(yán)重，后期果實(shí)掉落現(xiàn)象較嚴(yán)重。重慶1號(hào)毛葉山桐子果實(shí)百粒質(zhì)量由6.03 g上升至11.30 g，成熟后期質(zhì)量較前期增長(zhǎng)近1 倍，籽實(shí)比由1.18下降至0.80；重慶2號(hào)百粒質(zhì)量由8.17 g上升至10.84 g，籽實(shí)比由1.50下降至1.12，重慶1號(hào)毛葉山桐子果實(shí)中果肉成分占比更大，且在生長(zhǎng)過(guò)程中生物質(zhì)積累的程度要高于重慶2號(hào)。對(duì)于果實(shí)水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化，重慶1號(hào)毛葉山桐子為66%～70%，重慶2號(hào)毛葉山桐子為66%～71%，整個(gè)時(shí)期的變化差異不顯著（P＜0.05）。

圖1 不同時(shí)期2個(gè)品種果實(shí)形態(tài)變化Fig. 1 Changes in appearance of I. polycarpa var. vestita Diels fruit from two cultivars during different growth periods

2.2 粗脂肪含量分析

由圖2A可知，重慶1號(hào)毛葉山桐子果實(shí)不同部位的粗脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)在不同時(shí)期的變化顯著，約由11%增長(zhǎng)到16%，后續(xù)有稍許下降，可見，油脂在生長(zhǎng)過(guò)程中進(jìn)行了明顯的積累和消耗；相關(guān)性分析結(jié)果表明，整果與果肉粗脂肪含量變化趨勢(shì)表現(xiàn)出相關(guān)性（r=0.744，P＜0.05），說(shuō)明生長(zhǎng)過(guò)程中，整果的粗脂肪含量變化主要受果肉部分物質(zhì)含量變化的影響，該結(jié)論與Li Yu[1]和田瀟瀟[24]等的研究結(jié)論近似；另外，該品種在11月5日時(shí)粗脂肪含量達(dá)到最大值，隨后逐漸降低，且在此時(shí)果實(shí)已達(dá)到形態(tài)學(xué)成熟狀態(tài)，因此，選擇11月5日即盛花期后198 d左右作為該品種作為油脂原料的最佳采收期。由圖2B可知，重慶2號(hào)僅在采集前期不同部位的粗脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)發(fā)生了顯著增長(zhǎng)，由最初的13%到19%，后續(xù)生長(zhǎng)過(guò)程中變化不明顯，且在不同部位的差異性不大，由此推斷出，生長(zhǎng)過(guò)程中該品種脂肪進(jìn)行較微弱的消耗與積累；整果和果肉（r=0.779，P＜0.05）、整果和種子（r=0.968，P＜0.01）分別在不同水平上表呈現(xiàn)出相關(guān)性?？紤]到后續(xù)生長(zhǎng)過(guò)程中油脂含量變化不大，且落果現(xiàn)象愈加嚴(yán)重的情況，將10月20日即盛花期后182 d左右定為該品種作為油脂原料的最佳采收期。

圖2 不同時(shí)期2個(gè)品種不同部位粗脂肪含量變化Fig. 2 Changes in crude fat content in different parts of I. polycarpa var. vestita Diels fruit from two cultivars during different growth periods

2.3 其他化學(xué)成分含量變化分析

2.3.1 總糖含量分析

如圖3所示，重慶1號(hào)、2號(hào)毛葉山桐子果實(shí)的整果、果肉、種子部分的總糖含量分別為11～13、20～23、15～18 g/100 g，總糖含量整體表現(xiàn)為果肉＞整果＞種子，各部位的總糖含量差異性顯著；生長(zhǎng)過(guò)程中，整果與果肉中的總糖含量均有略微增長(zhǎng)的趨勢(shì)，而種子中的總糖略微下降；重慶2號(hào)毛葉山桐子果實(shí)中整果、果肉、種子3 部分的總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化分別為16～18、16～19、12～16 g/100 g，種子中的總糖含量總體最低，在多個(gè)時(shí)期總糖含量表現(xiàn)為果肉＞果實(shí)，不同部位總糖含量差異較顯著。植物細(xì)胞中脂肪的合成依賴于糖類，特別是糖類的糖酵解過(guò)程中產(chǎn)生的丙酮酸[25]，因此果實(shí)中糖的含量關(guān)乎脂肪的合成。對(duì)果實(shí)不同部位中總糖與脂肪在不同時(shí)期的含量進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)兩者間不存在相關(guān)性，由此可見，毛葉山桐子中脂肪含量不受總糖含量影響。另外，血橙果實(shí)中糖分（特別是果糖和葡萄糖）的積累有助于花色苷的合成[26]，重慶1號(hào)毛葉山桐子果實(shí)中糖含量的升高，可能是其更早達(dá)到形態(tài)學(xué)成熟的原因之一。本研究中僅測(cè)定了毛葉山桐子果實(shí)中總糖的含量，對(duì)其中糖的種類有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。

圖3 不同時(shí)期2個(gè)品種不同部位總糖含量變化Fig. 3 Changes in total sugar content in different parts of I. polycarpa var. vestita Diels fruit from two cultivars during different growth periods

2.3.2 蛋白質(zhì)含量分析

如圖4所示，2個(gè)品種在蛋白質(zhì)含量上表現(xiàn)出完全不同的規(guī)律性。在研究時(shí)期內(nèi)，果實(shí)生長(zhǎng)環(huán)境的溫度逐漸降低，重慶1號(hào)毛葉山桐子果實(shí)不同部位的蛋白質(zhì)含量整體呈現(xiàn)升高的趨勢(shì)，且蛋白質(zhì)含量果肉＞整果＞種子；有研究顯示[27]，三七葉片中的可溶性蛋白質(zhì)含量在5 ℃和10 ℃條件下，均表現(xiàn)出較25 ℃時(shí)更高的水平，進(jìn)而認(rèn)為三七的耐低溫性與可溶性蛋白含量相關(guān)，由此推測(cè)出，粗蛋白質(zhì)含量的升高，伴隨著可溶性蛋白含量的增加，使得重慶1號(hào)毛葉山桐子果實(shí)具有更佳的耐低溫性。重慶2號(hào)毛葉山桐子的整果、果肉中蛋白質(zhì)含量變化整體表現(xiàn)出下降趨勢(shì)，在多數(shù)時(shí)期蛋白質(zhì)含量種子＞整果＞果肉；溫度降低同樣使得植物體內(nèi)的控制蛋白質(zhì)合成的相應(yīng)酶活性降低，從而讓蛋白質(zhì)含量減低[28]。蛋白質(zhì)的降解產(chǎn)物氨基酸，可通過(guò)糖異生途徑而為種子萌發(fā)所利用[29-30]， 蛋白質(zhì)對(duì)于植物種子的萌發(fā)有著不可替代的作用，高蛋白質(zhì)含量有利于植物種子的迅速萌發(fā)[31]，因此，隨著果實(shí)的不斷成熟，2個(gè)品種的種子中蛋白質(zhì)含量會(huì)逐漸有所升高。

圖4 不同時(shí)期2個(gè)品種不同部位蛋白質(zhì)含量變化Fig. 4 Changes in protein content in different parts of I. polycarpa var. vestita Diels fruit from two cultivars during different growth periods

2.3.3 灰分、粗纖維含量分析

如圖5所示，重慶1號(hào)、2號(hào)毛葉山桐子果實(shí)在灰分含量上的變化趨勢(shì)，灰分含量整體均呈現(xiàn)出果肉＞ 整果＞種子，整果、果肉、種子灰分含量均呈上升趨勢(shì)。重慶1號(hào)毛葉山桐子果實(shí)中，果肉與果實(shí)（P＜0.05）、果肉與種子（P＜0.01）間灰分含量的變化存在不同水平的相關(guān)性，重慶2號(hào)毛葉山桐子果實(shí)中各部位間均未顯示出相關(guān)性。2個(gè)品種灰分質(zhì)量分?jǐn)?shù)，整果為5.0%～7.3%、果肉為8.3%～11.5%、種子為1.7%～3.0%。不同植物果實(shí)間灰分含量差異明顯，研究發(fā)現(xiàn)，秋葵果實(shí)的灰分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%～8%，與毛葉山桐子果實(shí)灰分含量相近[32]，而紅棗、枸杞果實(shí)灰分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%～4%[33-34]，桑椹果實(shí)灰分質(zhì)量分?jǐn)?shù)則低于0.1%[35]。文冠果種子中的灰分質(zhì)量分?jǐn)?shù)約為2%～3%[36]，與毛葉山桐子種子中灰分水平相當(dāng)。另外有研究顯示，藍(lán)莓果實(shí)中果皮部分的灰分含量 更高[37]，可解釋在毛葉山桐子果實(shí)中，果肉部分（本研究中將果皮歸入果肉部分）的灰分含量更高。

圖5 不同時(shí)期2個(gè)品種不同部位灰分含量變化Fig. 5 Changes in ash content in different parts of I. polycarpa var. vestita Diels fruit from two cultivars

如圖6所示，重慶1號(hào)、2號(hào)毛葉山桐子果實(shí)的粗纖維含量由差值法計(jì)算得出，其含量大小受其他成分含量影響較大。不同品種間及部位間存在差異，粗纖維含量均顯示出種子＞整果＞果肉，總體而言，重慶1號(hào)毛葉山桐子果實(shí)粗纖維質(zhì)量分?jǐn)?shù)，整果為51.1%～58.3%、果肉為37.8%～45.6%、種子為63.3%～74.6%，重慶2號(hào)毛葉山桐子粗纖維質(zhì)量分?jǐn)?shù)，整果為47.1%～52.2%、果肉為43.2%～48.0%、種子為53.9%～62.3%。研究發(fā)現(xiàn)，橄欖中的總膳食纖維質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)37%～51%[38]，毛葉山桐子鮮果中粗纖維相較之稍高；另外，橄欖中總膳食纖維含量受不溶性膳食纖維含量的影響，這一關(guān)系在毛葉山桐子果實(shí)中有待進(jìn)一步的研究驗(yàn)證。

圖6 不同時(shí)期2個(gè)品種不同部位粗纖維含量變化Fig. 6 Changes in crude fiber content in different parts of I. polycarpa var. vestita Diels fruit from two cultivars

2.4 總酚及總黃酮含量分析

2.4.1 總酚含量分析

酚類化合物在油脂中的溶解度較低，故對(duì)脫脂后殘?jiān)M(jìn)行測(cè)定[39]，并結(jié)合粗脂肪含量計(jì)算出總酚含量。酚類化合物具有抗炎、抗氧化、抗動(dòng)脈粥樣硬化等功效，它的存在對(duì)人體的健康很重要[40-41]。由表1可知，2個(gè)品種總酚含量均表現(xiàn)為種子＞整果＞果肉，在酚類化合物生物活性開發(fā)利用方面，種子部分要優(yōu)于果肉部分。重慶1號(hào)在多數(shù)生長(zhǎng)時(shí)期不同部位間的總酚含量差異顯著，果實(shí)和果肉中的含量表現(xiàn)出略微下降趨勢(shì)，其余均表現(xiàn)出不同程度的上升。有研究發(fā)現(xiàn)，核桃多酚的含量與組成主要取決于溫度和降水等自然因素，以及成熟期和貯藏時(shí)間[42-43]，推測(cè)毛葉山桐子中總酚含量與環(huán)境溫度間存在一定的關(guān)聯(lián)，溫度的升高和降低使得不同品種、不同部位呈現(xiàn)出不同的規(guī)律性。

表1 2個(gè)品種不同部位干基總酚含量 Table 1 Total phenols contents in different parts of I. polycarpa var. vestita Diels fruit from two cultivars (on a dry basis)mg/g

2.4.2 總黃酮含量分析

由表2可知，2個(gè)品種在總黃酮含量上表現(xiàn)出不同的規(guī)律性。在重慶1號(hào)中，多個(gè)時(shí)期總黃酮含量表現(xiàn)為整果＞種子＞果肉，在生長(zhǎng)過(guò)程中呈波動(dòng)狀態(tài)，果實(shí)中整體含量呈下降趨勢(shì)；重慶2號(hào)表現(xiàn)為果肉＞整果＞種子，整果和種子中總黃酮含量基本保持上升趨勢(shì)，果肉中含量則在生長(zhǎng)中期達(dá)到最大值36.90 mg/g，后續(xù)逐漸下降，含量總體趨勢(shì)為上升。對(duì)于黃酮類化合物，不同品種間存在不同的含量和規(guī)律性差異。徐宏化等[44]對(duì)不同種質(zhì)的美國(guó)山核桃脫脂種仁進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，其中的總多酚含量為11～48 mg/g，總黃酮含量為3～22 mg/g，毛葉山桐子果實(shí)在二者上均表現(xiàn)出更高的水平。另外有研究發(fā)現(xiàn)，蓮子胚、柑橘等[22,45]中大量的黃酮類C-糖苷、柚皮苷等黃酮類化合物構(gòu)成了其中的苦味因素，推斷毛葉山桐子果實(shí)中所帶有的苦味成分極大程度上還與其中含有的黃酮類化合物有關(guān)，但毛葉山桐子果實(shí)的苦味程度是否隨會(huì)總黃酮含量的上升有所增加，有待進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

表2 2個(gè)品種不同部位干基總黃酮含量 Table 2 Total flavonoids contents in different parts of I. polycarpa var. vestita Diels fruit from two cultivars (on a dry basis)mg/g

2.5 脂肪酸組成與相對(duì)含量變化分析

在研究的整個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)，各部位油脂的脂肪酸相對(duì)含量變化表現(xiàn)出相同的規(guī)律性，各種脂肪酸相對(duì)含量隨時(shí)間的變化程度相對(duì)較小。表3顯示，每月20日采集的2個(gè)品種，整果油脂中的脂肪酸組成及相對(duì)含量，以對(duì)整體變化趨勢(shì)進(jìn)行分析。以11月20日采集的2個(gè)品種，在不同部位油脂的脂肪酸組成為例，比較不同果實(shí)部位間的差異性，結(jié)果見表4。

表4 2個(gè)品種不同部位脂肪酸相對(duì)含量Table 4 Fatty acid composition in different fruit parts of two cultivars%

由表3可知，毛葉山桐子油脂中的多不飽和脂肪酸主要為亞油酸和亞麻酸，亞麻酸以γ-亞麻酸為主，亞油酸為油脂中的優(yōu)勢(shì)脂肪酸，其含量與葵花籽油接近[46]。重慶 1號(hào)毛葉山桐子果實(shí)中亞油酸呈現(xiàn)升高的趨勢(shì)，重慶2號(hào)毛葉山桐子果實(shí)則在亞油酸有些許升高后逐漸下降，已有研究證明，十八碳脂肪酸與棕櫚酸間存在一定的對(duì)應(yīng)關(guān)系，十六碳脂肪酸烷鏈會(huì)被拉伸和去飽和而合成十八碳脂肪酸，而這一過(guò)程的缺乏或不足將導(dǎo)致十八碳脂肪酸減少，十六碳脂肪酸含量升高[47]，這可能是生長(zhǎng)中后期重慶2號(hào)果實(shí)油脂中，棕櫚酸、棕櫚烯酸含量升高而亞油酸、多不飽和脂肪酸含量減少的原因。重慶2號(hào)整果中，亞油酸、不飽和脂肪酸相對(duì)含量水平整體較重慶 1號(hào)高。另外，溫度會(huì)影響植物體內(nèi)去脂肪酸飽和酶的活性，進(jìn)而調(diào)節(jié)油脂中的脂肪酸組成[48]。隨著溫度的降低和生長(zhǎng)時(shí)期的延長(zhǎng)，重慶1號(hào)果實(shí)油脂中不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸含量不斷增加，表明油脂的品質(zhì)在不斷提高，且低溫促進(jìn)了不飽和脂肪酸的積累。但高不飽和脂肪酸含量會(huì)對(duì)后續(xù)油脂的貯藏產(chǎn)生隱患，故注重毛葉山桐子油脂的貯藏環(huán)境尤為關(guān)鍵。

表3 2個(gè)品種在不同階段果實(shí)油脂脂肪酸相對(duì)含量Table 3 Fatty acid composition in whole fruit oils of two cultivars at different growth stages%

不同部位油脂的脂肪酸組成氣相色譜圖及相對(duì)含量見圖7、表4。由表4可知，種子與果肉部分油脂中的各脂肪酸含量差異顯著，種子油中的亞油酸、總不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸含量均顯著高于果肉油；α-亞麻酸僅存在于果肉油中，種子油中未檢測(cè)出該種成分。種子油中總不飽和脂肪酸含量可達(dá)85%，多不飽和脂肪酸含量可達(dá)77%；另外，種子油中十六碳脂肪酸（特別是棕櫚酸）的相對(duì)含量較果肉油低，十八碳脂肪酸（除亞麻酸外）的相對(duì)含量則較果肉油高，花生酸相對(duì)含量則在2個(gè)品種中表現(xiàn)出不同的規(guī)律。

圖7 脂肪酸組成氣相色譜圖Fig. 7 Gas chromatograms of fatty acid composition in whole fruit, pulp and seed oils

2.6 PCA與綜合評(píng)價(jià)

在對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行KMO（Kaiser-Meyer-Olkin）及Bartlett檢驗(yàn)的基礎(chǔ)上，運(yùn)用PCA法對(duì)2個(gè)品種毛葉山桐子果不同時(shí)期、不同部位（整果、果肉和種子）的化學(xué)成分（粗脂肪、總糖、蛋白質(zhì)、灰分、粗纖維含量）、活性成分（總酚及總黃酮）、油脂脂肪酸組成（亞油酸、總不飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸）等參數(shù)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

PCA結(jié)果（表5）顯示，共提取出了4個(gè)PC，相對(duì)應(yīng)的特征值均大于1，累計(jì)貢獻(xiàn)率為84.726%，說(shuō)明4個(gè)PC能夠反映不同品種、不同生長(zhǎng)期、不同部位毛葉山桐子原料的絕大部分信息，因此，可選取前4個(gè)PC作為綜合性變量代替原有的11個(gè)參數(shù)變量值，對(duì)毛葉山桐子原料進(jìn)行全面、綜合的評(píng)價(jià)。前4個(gè)PC中，決定PC1大小的指標(biāo)主要是總糖、灰分、總酚含量、亞油酸相對(duì)含量、多不飽和脂肪酸含量，貢獻(xiàn)率達(dá)47.716%，對(duì)毛葉山桐子綜合評(píng)價(jià)的影響最大；PC2貢獻(xiàn)率為16.553%，主要指標(biāo)是粗脂肪、粗纖維含量，對(duì)綜合評(píng)價(jià)的影響相對(duì)較高；PC3貢獻(xiàn)率為10.750%，決定指標(biāo)為總黃酮、蛋白質(zhì)含量；PC4決定指標(biāo)為不飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸相對(duì)含量，貢獻(xiàn)率為9.707%，PC3、PC4顯示出一定程度的影響。

表5 PC的特征向量及總方差解釋Table 5 Eigenvectors of principal components and their contribution to total variance

各個(gè)PC能夠從不同方面體現(xiàn)毛葉山桐子的質(zhì)量水平，但某一PC得分無(wú)法完全反映原料的整體情況，故需將各PC進(jìn)行結(jié)合，以各PC對(duì)應(yīng)的方差相對(duì)貢獻(xiàn)率為權(quán)重，計(jì)算出各原料的綜合得分，結(jié)果如表6所示。

表6 不同時(shí)期2個(gè)品種不同部位的PC得分及綜合得分Table 6 Principal component scores and comprehensive scores of different fruit parts of two cultivars at different growth periods

為更直觀比較2個(gè)品種毛葉山桐子在不同時(shí)期、不同部位的得分情況，將綜合評(píng)價(jià)結(jié)果繪制成熱圖，并進(jìn)行聚類分析，結(jié)果如圖8所示。結(jié)果顯示：綜合評(píng)價(jià)的最佳結(jié)果為重慶2號(hào)毛葉山桐子在12月20日采集果實(shí)的種子部分，說(shuō)明該部分具有更高的綜合利用潛質(zhì)；而重慶1號(hào)果肉部分在整個(gè)生長(zhǎng)期均表現(xiàn)出較低的綜合得分，利用潛質(zhì)最低；總體而言，2個(gè)品種在各個(gè)時(shí)期的種子部分評(píng)分更高，更加具有研究與利用潛質(zhì)。另外，聚類分析將2個(gè)品種的種子部分綜合評(píng)分聚為一組，說(shuō)明2個(gè)品種在種子部分具有相似的得分結(jié)果與利用潛質(zhì)。

3 結(jié) 論

不同品種毛葉山桐子果實(shí)的基本化學(xué)成分、油脂脂肪酸組成及其相對(duì)含量存在差異。2個(gè)品種毛葉山桐子果實(shí)具有不同的形態(tài)學(xué)成熟期。果肉部分中的粗脂肪、總糖、灰分、總黃酮等含量高于種子部分，而粗纖維、總酚等的含量，種子部分高于果肉部分。毛葉山桐子果實(shí)是良好的油脂來(lái)源，2個(gè)品種整體粗脂肪水平在11%～20%之間，整果與果肉粗脂肪含量間具有顯著相關(guān)性。重慶1號(hào)毛葉山桐子果實(shí)中各部位干基粗脂肪含量差異性顯著（P＜0.05），重慶2號(hào)整體差異不顯著，分別將盛花期后198、182 d左右作為油料的最佳采收期。不同品種毛葉山桐子果實(shí)油脂中脂肪酸組成基本一致，以棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸和花生酸為主。種子較果肉油脂中亞油酸、多不飽和脂肪酸相對(duì)含量及綜合評(píng)分更高，可根據(jù)需要選擇不同品種及部位的原料。

實(shí)驗(yàn)對(duì)考察的11個(gè)指標(biāo)進(jìn)行PCA，提取出4個(gè)PC，累計(jì)貢獻(xiàn)率達(dá)84.726%，能夠很好地反映出所有毛葉山桐子原料的綜合情況。以4個(gè)PC各自的方差貢獻(xiàn)率建立了綜合評(píng)價(jià)模型，計(jì)算出各毛葉山桐子原料的綜合得分，得到綜合利用潛質(zhì)最佳的結(jié)果，為12月20日采集的重慶2號(hào)果實(shí)的種子部分；2個(gè)品種在各部位的綜合得分差異顯著（P＜0.05），不同品種間種子部分的利用價(jià)值相似、各個(gè)時(shí)期種子部分均顯示出更高的利用潛質(zhì)。