槲皮素通過(guò)G3BP1調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路對(duì)前列腺癌細(xì)胞遷移、侵襲及上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響

賀 毅，楊 鑫，鄒安慶，古麗扎爾·伊里，阿力木·熱合曼，崔 濤，郜 樂，杜 恒，馬 彬

(新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院泌尿外科，新疆烏魯木齊 830063)

前列腺癌(prostate cancer，PCa)是發(fā)生在男性前列腺腺體的上皮性惡性腫瘤，已成為影響全球男性健康的重大難題之一[1-2]。當(dāng)前，PCa的治療方式有手術(shù)治療、內(nèi)分泌治療、放化療及局部治療等，但腫瘤細(xì)胞的持續(xù)增殖、遷移和轉(zhuǎn)移導(dǎo)致PCa臨床治療效果不佳，患者生存率下降[3-4]。因此，探尋抑制PCa轉(zhuǎn)移的新方法或者新靶點(diǎn)，對(duì)PCa的臨床治療具有重要意義。上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)是腫瘤細(xì)胞獲得侵襲、遷移能力的重要生物學(xué)過(guò)程，EMT可促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，增加腫瘤治療難度[5-6]。GTP酶激活蛋白-Src同源結(jié)構(gòu)域3-結(jié)合蛋白1(Ras-GTPase-activating protein SH3 domain binding protein，G3BP1)是一種SH3結(jié)構(gòu)域結(jié)合蛋白。已有文獻(xiàn)顯示 G3BP1 在腦部腫瘤、肺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌等多種癌癥中高表達(dá)，其可通過(guò)調(diào)節(jié)多種信號(hào)通路促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移及EMT過(guò)程[7-9]。因此，G3BP1可能是防治腫瘤細(xì)胞EMT過(guò)程、發(fā)生轉(zhuǎn)移的潛在靶點(diǎn)。槲皮素(Quercetin)是一種天然黃酮類化合物，具有抗菌、抗炎、抗腫瘤、降血壓等多種生物活性。近年來(lái)多項(xiàng)研究表明，槲皮素對(duì)肝癌、胃癌、乳腺癌等多種腫瘤細(xì)胞均有抑制作用，是頗具研究?jī)r(jià)值和應(yīng)用前景的抗癌藥物之一[10-11]。已有研究證實(shí)，槲皮素可增加人前列腺癌細(xì)胞-3(human prostate cancer cell，PC-3)對(duì)化療藥物的敏感性并逆轉(zhuǎn)其對(duì)化療藥的耐藥性。但槲皮素對(duì)PCa細(xì)胞遷移、侵襲及EMT的作用效果及機(jī)制尚未完全明確[12]。因此，本研究探討槲皮素對(duì)PCa細(xì)胞遷移、侵襲及EMT的影響，并探究其可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞株P(guān)C-3細(xì)胞株購(gòu)自上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司。

1.2 主要試劑與儀器主要試劑：槲皮素購(gòu)自成都德思特生物技術(shù)有限公司，純度≥98%；胎牛血清(Fetal bovine serum，F(xiàn)BS)購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；DMEM培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)艾德思公司；Transwell小室購(gòu)自Corning公司；Matrigel基質(zhì)膠購(gòu)自美國(guó)BD公司；胰蛋白酶、青霉素、鏈霉素、RIPA裂解液、蛋白質(zhì)提取試劑盒、二辛可寧酸(Bicinchoninic acid，BCA)試劑盒均購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)公司；LipofectamineTM2000購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；NC siRNA和G3BP1 siRNA購(gòu)自美國(guó)Origene公司；真核過(guò)表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-G3BP1及對(duì)照質(zhì)粒pcDNA3.1均購(gòu)自上海吉瑪制藥有限公司；G3BP1及內(nèi)參上下游引物均購(gòu)自上海生工公司；Trizol試劑盒、TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒、2×SYBR Premix Ex Taq試劑盒均購(gòu)自日本TaKaRa公司；G3BP1、E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、N-鈣黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、轉(zhuǎn)錄因子Snail、Wnt家族成員3A(Wnt family member 3A，Wnt3α)、β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶3β(Glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β)、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)等兔抗人單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司；小鼠抗人β-肌動(dòng)蛋白(β-actin)單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Abcam公司；辣根過(guò)氧化物酶(Horseradish peroxidase，HRP)標(biāo)記的山羊抗兔 IgG、HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG 購(gòu)自Sigma公司；電化學(xué)發(fā)光液購(gòu)自 Millipore 公司。

主要儀器：Forma370細(xì)胞培養(yǎng)箱(美國(guó)Thermo公司)；Varioskan LUX 多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo公司)；DYC-p32型電泳儀(上海巴玖實(shí)業(yè)有限公司)；實(shí)時(shí)定量PCR儀(美國(guó)Bio-Rad公司)；低溫高速離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司)；倒置熒光顯微鏡(日本Olympus公司)；FCM凝膠成像儀(美國(guó)Protein Simple公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1細(xì)胞培養(yǎng) 解凍、復(fù)蘇PC-3細(xì)胞，置于加有10% FBS、100 U/mL青霉素和100 μg/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基，37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)至80%～90%時(shí)，以0.25%的胰酶消化傳代，收集生長(zhǎng)狀態(tài)良好的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞制備單細(xì)胞懸液。

1.3.2細(xì)胞分組與處理 取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期PC-3細(xì)胞，分別用20、40、80 μmol/L濃度槲皮素處理48 h的PC-3細(xì)胞作為槲皮素低、中、高濃度組，并篩選出槲皮素適宜濃度用于后續(xù)研究；正常培養(yǎng)的PC-3細(xì)胞設(shè)為空白對(duì)照組；將稀釋的LipofectamineTM2000 和 G3BP1 siRNA干擾序列混合液轉(zhuǎn)染至PC-3細(xì)胞，培養(yǎng)6 h，然后用適宜濃度的槲皮素處理48 h，記為槲皮素+G3BP1 siRNA組，同時(shí)設(shè)置槲皮素+si-NC組；將稀釋的pcDNA3.1-G3BP1與LipofectamineTM2000混合液轉(zhuǎn)染至PC-3細(xì)胞，培養(yǎng)6 h，然后用適宜濃度的槲皮素處理48 h，記為槲皮素+pcDNA3.1-G3BP1組，同時(shí)設(shè)置槲皮素+pcDNA3.1組。

1.3.3細(xì)胞劃痕試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力 取各組PC-3細(xì)胞，經(jīng)胰酶消化后制成單細(xì)胞懸液，以5×105個(gè)/孔的接種密度均勻接種于6孔板進(jìn)行培養(yǎng)等待貼壁，每孔設(shè)6個(gè)復(fù)孔，細(xì)胞貼壁鋪滿孔板底部時(shí)棄去培養(yǎng)液，用高溫滅菌的20 μL移液槍頭勻速在6孔板內(nèi)垂直劃痕，用滅菌的磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered solution，PBS)小心沖洗3次，隨后加入無(wú)血清的DMEM培養(yǎng)基，將6孔板放于倒置顯微鏡下觀察拍照，標(biāo)記初始劃痕距離，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后顯微鏡下再次拍照，計(jì)算細(xì)胞遷移率，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。細(xì)胞遷移率(%)=(初始劃痕距離-24 h劃痕距離)/初始劃痕距離×100%。

1.3.4Transwell小室法測(cè)定細(xì)胞侵襲能力 各組PC-3細(xì)胞用無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基處理12 h后，重懸并調(diào)整細(xì)胞濃度約5×105/mL，取各組細(xì)胞懸液200 μL接種于Transwell小室的上室(Transwell小室基底膜預(yù)先使用1∶8的matrigel基質(zhì)膠包被)，下室加入含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基600 μL，每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，將Transwell小室置入37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)24 h，棄去培養(yǎng)液，無(wú)菌棉簽輕輕擦去上層未穿膜細(xì)胞，PBS洗滌3次，加入4%多聚甲醛固定20 min，室溫下用0.1%結(jié)晶紫染色30 min，棄去染液，PBS沖洗3次，自然晾干，于400倍倒置顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，結(jié)晶紫染色細(xì)胞數(shù)即為侵襲細(xì)胞數(shù)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3.5qRT-PCR檢測(cè)G3BP1 mRNA表達(dá)水平 收集各組細(xì)胞，采用Trizol法提取細(xì)胞中的總RNA，以酶標(biāo)儀檢測(cè)RNA濃度。根據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒將總RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。G3BP1上游引物5′-GTCGCCCAGTTGCAGTGCTG-3′，下游引物5′-CAGTCGGACCTGCTCAGCTG-3′；β-actin上游引物5′-TGCACCAGCTGCTCTTCAGC-3′，下游引物5′-AGCTGGACCTCGGATCAGCAG-3′。以cDNA為模板進(jìn)行qRT-PCR實(shí)驗(yàn)，反應(yīng)體系為：10 μmol/L的G3BP1及GAPDH上下游引物各0.5 μL，cDNA模板2 μL，2×SYBR Premix Ex Taq 12.5 μL，加滅菌蒸餾水至總反應(yīng)體系25 μL。反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性30 s，95 ℃預(yù)變性15 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共進(jìn)行40次循環(huán)。以β-actin為內(nèi)參，采用2-△△Ct法計(jì)算G3BP1 mRNA相對(duì)表達(dá)量。

1.3.6Western blot法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)G3BP1、EMT、Wnt/β-catenin相關(guān)蛋白表達(dá)水平 收集各組細(xì)胞，胰酶消化處理，加入RIPA細(xì)胞裂解液，冰上裂解30 min，12 000 r/min離心10 min，提取總蛋白，采用BCA法測(cè)定總蛋白濃度。聚丙烯酰氨凝膠電泳(Sodium salt-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)分離蛋白后濕轉(zhuǎn)至聚偏氟乙烯(Polyvinylidene Fluoride，PVDF)膜上，在含5% 脫脂奶粉的TBST緩沖液中室溫封閉2 h，分別加入G3BP1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail、Wnt3α、β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β、β-actin單克隆抗體，稀釋比均為1∶1 000)，4 ℃孵育過(guò)夜，TBST洗滌3次，每次10 min，對(duì)應(yīng)加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG和HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG 1∶2 000，室溫孵育1 h，TBST洗滌3次，每次10 min，滴加ECL試劑顯色，于暗室中曝光，采集圖像，分析各條帶灰度，計(jì)算目的蛋白表達(dá)水平。

2 結(jié) 果

2.1 槲皮素抑制PC-3細(xì)胞遷移、侵襲及EMT細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，槲皮素低、中、高濃度組PC-3細(xì)胞遷移能力均顯著下降(P<0.05)，且細(xì)胞遷移能力降低程度呈濃度依賴性(圖1A)；Transwell小室法實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，槲皮素低、中、高濃度組PC-3細(xì)胞侵襲能力均顯著下降(P<0.05)，且細(xì)胞侵襲能力降低程度呈濃度依賴性(圖1B)； Western blot法檢測(cè)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，槲皮素低、中、高濃度組PC-3細(xì)胞E-cadherin表達(dá)量均顯著上調(diào)(P<0.05)，N-cadherin、Vimentin、Snail表達(dá)量均顯著下調(diào)(P<0.05)，且上述蛋白表達(dá)量變化呈濃度依賴性(圖1C)。由于槲皮素對(duì)PC-3細(xì)胞的作用效果呈濃度依賴性，故本研究后續(xù)實(shí)驗(yàn)選用高濃度槲皮素處理PC-3細(xì)胞。

A：細(xì)胞劃痕試驗(yàn)檢測(cè)PC-3細(xì)胞遷移能力柱狀圖；B：Transwell小室法檢測(cè)PC-3細(xì)胞侵襲能力柱狀圖；C：Western blot法檢測(cè)EMT相關(guān)蛋白表達(dá)水平及柱狀圖。*與空白對(duì)照組比較，P<0.05；#與槲皮素低濃度組比較，P<0.05；&與槲皮素中濃度組比較，P<0.05。

2.2 槲皮素抑制PC-3細(xì)胞G3BP1 mRNA和蛋白表達(dá)與空白對(duì)照組相比，槲皮素低、中、高濃度組PC-3細(xì)胞G3BP1 mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著下降(P<0.05)，且G3BP1 mRNA和蛋白表達(dá)水平下降程度呈濃度依賴性(圖2)。圖2顯示W(wǎng)estern blot法檢測(cè)G3BP1、qRT-PCR法檢測(cè)G3BP1 mRNA表達(dá)水平電泳圖及柱狀圖。

* 與空白對(duì)照組比較，P<0.05；#與槲皮素低濃度組比較，P<0.05；&與槲皮素中濃度組比較，P<0.05。

2.3 沉默G3BP1聯(lián)合槲皮素抑制PC-3細(xì)胞遷移、侵襲及EMT槲皮素+G3BP1 siRNA組PC-3細(xì)胞內(nèi)G3BP1 mRNA表達(dá)水平顯著低于槲皮素+si-NC組和空白對(duì)照組(P<0.05)，槲皮素+si-NC組和空白對(duì)照組PC-3細(xì)胞內(nèi)G3BP1 mRNA表達(dá)水平無(wú)顯著性差異(P>0.05)，說(shuō)明G3BP1 siRNA轉(zhuǎn)染成功(圖3A)。與空白對(duì)照組比較，槲皮素+si-NC組和槲皮素+G3BP1 siRNA組PC-3細(xì)胞遷移、侵襲能力均顯著下降(P<0.05)(圖3B、C)；與槲皮素+si-NC組比較，槲皮素+G3BP1 siRNA組PC-3細(xì)胞遷移、侵襲能力均顯著下降(P<0.05)(圖3B、C)。Western blot法檢測(cè)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，槲皮素+si-NC組和槲皮素+G3BP1 siRNA組PC-3細(xì)胞E-cadherin表達(dá)量均顯著上調(diào)(P<0.05)，N-cadherin、Vimentin、Snail表達(dá)量均顯著下調(diào)(P<0.05)；與槲皮素+si-NC組比較，槲皮素+G3BP1 siRNA組PC-3細(xì)胞E-cadherin表達(dá)量顯著上調(diào)(P<0.05)，N-cadherin、Vimentin、Snail表達(dá)量均顯著下調(diào)(P<0.05)(圖3D)。

A：qRT-PCR法檢測(cè)G3BP1 mRNA表達(dá)水平柱狀圖；B：細(xì)胞劃痕試驗(yàn)檢測(cè)PC-3細(xì)胞遷移能力柱狀圖；C：Transwell小室法檢測(cè)PC-3細(xì)胞侵襲能力柱狀圖；D：Western blot法檢測(cè)EMT相關(guān)蛋白表達(dá)水平及柱狀圖。*與空白對(duì)照組比較，P<0.05；# 與槲皮素+si-NC組比較，P<0.05。

2.4 過(guò)表達(dá)G3BP1拮抗槲皮素促進(jìn)PC-3細(xì)胞遷移、侵襲及EMT槲皮素+pcDNA3.1-G3BP1組PC-3細(xì)胞內(nèi)G3BP1 mRNA表達(dá)水平顯著高于槲皮素+pcDNA3.1組和空白對(duì)照組(P<0.05)，槲皮素+pcDNA3.1組和空白對(duì)照組PC-3細(xì)胞內(nèi)G3BP1 mRNA表達(dá)無(wú)顯著性差異(P>0.05)，說(shuō)明pcDNA3.1-G3BP1轉(zhuǎn)染成功(圖4A)。與空白對(duì)照組比較，槲皮素+pcDNA3.1組和槲皮素+pcDNA3.1-G3BP1組PC-3細(xì)胞遷移、侵襲能力均顯著下降(P<0.05)；與槲皮素+pcDNA3.1組比較，槲皮素+pcDNA3.1-G3BP1組PC-3細(xì)胞遷移、侵襲能力均顯著升高(P<0.05)(圖4B、C)。Western blot法結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，槲皮素+pcDNA3.1組和槲皮素+pcDNA3.1-G3BP1組PC-3細(xì)胞E-cadherin表達(dá)量均顯著上調(diào)(P<0.05)，N-cadherin、Vimentin、Snail表達(dá)量均顯著下調(diào)(P<0.05)；與槲皮素+pcDNA3.1組比較，槲皮素+pcDNA3.1-G3BP1組PC-3細(xì)胞E-cadherin表達(dá)量顯著下調(diào)(P<0.05)，N-cadherin、Vimentin、Snail表達(dá)量均顯著上調(diào)(P<0.05)(圖4D)。

2.5 沉默/過(guò)表達(dá)G3BP1聯(lián)合槲皮素影響PC-3細(xì)胞Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)Western blot法結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，槲皮素組、槲皮素+G3BP1 siRNA組、槲皮素+pcDNA3.1-G3BP1組PC-3細(xì)胞Wnt3α、β-catenin、p-GSK-3β表達(dá)量均顯著下調(diào)(P<0.05)，GSK-3β表達(dá)量顯著上調(diào)(P<0.05)；與槲皮素組比較，槲皮素+G3BP1 siRNA組PC-3細(xì)胞Wnt3α、β-catenin、p-GSK-3β表達(dá)量均顯著下調(diào)(P<0.05)，GSK-3β表達(dá)量顯著上調(diào)(P<0.05)，槲皮素+pcDNA3.1-G3BP1組PC-3細(xì)胞Wnt3α、β-catenin、p-GSK-3β表達(dá)量均顯著上調(diào)(P<0.05)，GSK-3β表達(dá)量顯著下調(diào)(P<0.05)(圖5)。

A:qRT-PCR法檢測(cè)G3BP1 mRNA表達(dá)水平柱狀圖；B:細(xì)胞劃痕試驗(yàn)檢測(cè)PC-3細(xì)胞遷移能力柱狀圖；C:Transwell小室法檢測(cè)PC-3細(xì)胞侵襲能力柱狀圖；D:Western blot法檢測(cè)EMT相關(guān)蛋白表達(dá)水平電脈圖及柱狀圖。*與空白對(duì)照組比較，P<0.05；#與槲皮素+si-NC組比較，P<0.05。

A:Western blot法檢測(cè)各組相關(guān)蛋白表達(dá)水平電泳圖;B：各組相關(guān)蛋白表達(dá)水平柱狀圖。*與空白對(duì)照組比較，P<0.05；△與槲皮素組比較，P<0.05。

3 討 論

PCa是常見且發(fā)病率高的男性惡性腫瘤之一，早期癥狀輕但卻易發(fā)生轉(zhuǎn)移，臨床確診時(shí)許多患者已處于晚期，雖然臨床上有手術(shù)、化療、內(nèi)分泌治療等手段可改善PCa患者生存率，然而腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移仍然是影響患者存活率和預(yù)后的主要不良因素[13]，因此，探究PCa發(fā)生、轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，尋找治療PCa的分子靶點(diǎn)極為必要。槲皮素是一種具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤等多種藥理作用的天然多醇羥基黃酮類化合物，大量的臨床研究證實(shí)槲皮素可抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移[14-15]。本研究考察槲皮素對(duì)PCa細(xì)胞侵襲、遷移的影響，結(jié)果顯示，槲皮素能顯著抑制PC-3細(xì)胞遷移、侵襲，并呈現(xiàn)濃度依賴性關(guān)系。

G3BP1是一種RNA結(jié)合蛋白，具有調(diào)節(jié)壓力顆粒形成和mRNA代謝及穩(wěn)定性等多種生物學(xué)功能。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究證據(jù)表明G3BP1可以參與腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移[21]。但G3BP1在PCa中的功能作用尚不清楚。本研究采用qRT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)G3BP1 mRNA和蛋白表達(dá)水平，結(jié)果顯示槲皮素處理PC-3細(xì)胞后，PC-3細(xì)胞中G3BP1 mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯降低，提示G3BP1可能參與了槲皮素抗PCa的過(guò)程。為進(jìn)一步明確G3BP1在槲皮素治療PCa中的功能作用，本研究通過(guò)沉默和過(guò)表達(dá)G3BP1，分析G3BP1對(duì)PC-3細(xì)胞遷移、侵襲及EMT的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，沉默G3BP1能夠增強(qiáng)槲皮素對(duì)PC-3細(xì)胞遷移、侵襲及EMT的抑制效果，過(guò)表達(dá)G3BP1能夠逆轉(zhuǎn)槲皮素對(duì)PC-3細(xì)胞遷移、侵襲及EMT的抑制效果。該結(jié)果表明槲皮素可通過(guò)靶向G3BP1抑制PC-3細(xì)胞遷移、侵襲及EMT進(jìn)程。

Wnt/β-catenin信號(hào)通路是一條高度保守的信號(hào)通路，參與正常干細(xì)胞的增殖、凋亡與遷移。當(dāng)Wnt/β-catenin信號(hào)通路被異常激活時(shí)，Wnt3α作為一種激活Wnt/β-catenin通路的Wnt同源物，可促進(jìn)一系列蛋白活化，導(dǎo)致GSK3β磷酸化失活和β-catenin蛋白聚積。胞內(nèi)大量聚積的β-catenin轉(zhuǎn)移進(jìn)入細(xì)胞核中會(huì)激活轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄活性，促進(jìn)靶基因轉(zhuǎn)錄，從而調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生理活動(dòng)[22-23]。大量臨床研究證實(shí)Wnt/β-catenin信號(hào)通路在PCa的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用[24-25]。WEI等[26]報(bào)道漢黃芩苷通過(guò)調(diào)節(jié) Wnt/β-catenin 通路和EMT抑制PCa細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。WU等[27]研究表明2’-羥基黃酮通過(guò)抑制 Wnt/β-catenin信號(hào)通路進(jìn)而抑制PCa細(xì)胞EMT過(guò)程和細(xì)胞遷移、侵襲。LI等[28]研究報(bào)道，過(guò)表達(dá)G3BP1通過(guò)激活 β 連環(huán)蛋白信號(hào)通路促進(jìn)結(jié)腸癌的進(jìn)展。ZHANG等[29]研究發(fā)現(xiàn)G3BP1基因沉默通過(guò)抑制 Wnt/β-catenin 和 PI3K/AKT 信號(hào)通路抑制食管癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，而G3BP1基因過(guò)表達(dá)則對(duì)食管癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移產(chǎn)生相反作用。本研究探究槲皮素、G3BP1與Wnt/β-catenin通路的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，槲皮素能夠顯著下調(diào)PC-3細(xì)胞Wnt3α、β-catenin、p-GSK-3β表達(dá)量，上調(diào)PC-3細(xì)胞GSK-3β表達(dá)量；沉默G3BP1能夠增強(qiáng)槲皮素對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白的調(diào)控作用，過(guò)表達(dá)G3BP1可逆轉(zhuǎn)槲皮素對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白的調(diào)控作用。該結(jié)果提示槲皮素通過(guò)G3BP1調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路發(fā)揮抗PCa的作用。

綜上所述，槲皮素能夠抑制PCa細(xì)胞EMT進(jìn)程，進(jìn)而抑制PCa細(xì)胞侵襲、遷移，槲皮素抑制EMT的作用機(jī)制可能與靶向G3BP1調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)。本研究為PCa的治療提供了潛在的靶點(diǎn)和候選藥物。