超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定醬腌菜中紐甜

楊燕紅，王雪蓉，楊 麗，楊金川，馬義虔

(貴州省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)院，貴州 貴陽(yáng) 550016)

紐甜，又叫尼爾甜，是一種白色結(jié)晶粉末狀的功能性甜味劑。因其具有甜味協(xié)和、口感純正、無(wú)能量、無(wú)毒害、安全性較高、甜度比蔗糖甜7000～13000倍，比阿斯巴甜甜30～60倍成本也比其他的甜味劑低，并因其能改善食品的風(fēng)味與口感，而深受生產(chǎn)者歡迎，被廣泛用于食品行業(yè)中[1]。

目前，隨著生活水平的提高，人們對(duì)健康也是越來(lái)越注重，因此國(guó)家對(duì)甜味劑使用要求越來(lái)越嚴(yán)格，其允許添加量也在不斷地降低。經(jīng)查閱國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)與相關(guān)文獻(xiàn)，主要采用的檢測(cè)方法是(GB5009.247-2016)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中紐甜的測(cè)定》，該標(biāo)準(zhǔn)中的方法前處理步驟相對(duì)復(fù)雜、耗時(shí)較長(zhǎng)，且在進(jìn)入液相色譜分析的過(guò)程中，會(huì)出現(xiàn)較多干擾物，并因紐甜的甜度較高，添加的量較少，用高效液相色譜法判斷食品中是否添加紐甜較困難，故開(kāi)發(fā)出更為簡(jiǎn)單快速、靈敏度高的檢測(cè)方法十分必要。本方法在GB5009.247-2016的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，建立了超高效液相色譜-離子質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定醬腌菜中紐甜的方法。該方法降低了實(shí)驗(yàn)室的成本，簡(jiǎn)化了樣品的前處理過(guò)程，縮短了樣品檢測(cè)時(shí)間，提高了檢測(cè)的靈敏度，干擾物少，對(duì)樣品中是否添加紐甜能準(zhǔn)確地進(jìn)行判斷[4-5]。本人對(duì)食品中紐甜含量檢測(cè)的國(guó)標(biāo)方法進(jìn)行優(yōu)化，旨在提高紐甜檢測(cè)水平。

1 儀器與試藥

1.1 儀 器

QTRAP 5500液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，AB SCIEX公司；H1850臺(tái)式高速離心機(jī)，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司；MultiReax渦旋振蕩器，Heielolph公司；AL204電子天平，德國(guó)梅特勒有限公司；Chorusl超純水系統(tǒng)，英國(guó)Elga公司。

1.2 材料與試劑

乙腈、NaCl均購(gòu)置于Sigma公司；紐甜標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于北京海岸鴻蒙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)有限責(zé)任公司。

市售醬腌菜樣品：高山細(xì)筍、糖醋大蒜、姜蒜糟辣椒、節(jié)節(jié)泡椒、爽口下飯菜，經(jīng)粉碎機(jī)粉碎后保存于4 ℃冰箱中，待測(cè)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 樣品提取、凈化

準(zhǔn)確稱(chēng)取2.0 g(精確至0.01 g)樣品于50 mL離心管中，加入10 mL水和10 mL乙腈，渦旋振蕩30 min，加入2.0～3.0 g NaCl，渦旋振蕩5 min，然后以8000 r/min離心5 min[5]。

取2 mL的上清液于10 mL的離心管中，加入100 mg(Bondesil-C18，40 μm，100 gm)凈化劑，渦旋振蕩2 min，經(jīng)0.22 μm有機(jī)濾膜超濾后上機(jī)測(cè)定。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱(chēng)取0.010 g紐甜標(biāo)準(zhǔn)品置于10 mL容量瓶中，用超純水溶解并定容，配制成 1000 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液；逐級(jí)稀釋?zhuān)渲埔幌盗匈|(zhì)量濃度為1、10、20、50、100 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3 加標(biāo)回收試驗(yàn)

稱(chēng)取2.0 g醬腌菜于50 mL離心管中，加入 10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液50 μL(添加水平為50 ng/mL)，分別測(cè)定含量并計(jì)算加標(biāo)回收率。

2.4 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜條件

2.4.1 液相條件

色譜柱：Agilent C18色譜柱(2.1 mm×100 mm，1.8 μm)，流動(dòng)相A為水，流動(dòng)相B為甲醇，進(jìn)樣量5 μL。梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 紐甜的流動(dòng)相梯度洗脫表

2.4.2 質(zhì)譜條件

電離模式：電噴霧負(fù)離子(ESI-)；掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；電噴霧電壓：-4500 V，離子源溫度：550 ℃，氣簾氣壓力：0.088 MPa；霧化氣壓力：0.21 MPa，輔助氣：0.062 MPa。

3 結(jié)果與討論

3.1 線性方程和檢出限

按照“2.4”方法進(jìn)行測(cè)定紐甜，以1、10、20、50、100 ng/mL的紐甜標(biāo)準(zhǔn)溶液為橫坐標(biāo)，定量離子對(duì)峰面積值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性方程為Y=4.94×103X-2.18×104，相關(guān)系數(shù)R2=0.9974，表明紐甜在0～100 ng/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。色譜圖見(jiàn)圖1。

在陰性醬腌菜樣品中添加目標(biāo)化合物的方法，按取樣量2.0 g，試樣定容體積10 mL，0.001 μg/mL作為最低檢測(cè)濃度計(jì)算，得到該方法的檢出限為1.0 μg/kg。

圖1 濃度為100 ng/mL紐甜的色譜圖

3.2 凈化方式的優(yōu)化

加入C18凈化劑20 mg、50 mg、100 mg、150 mg、200 mg，考察凈化達(dá)最佳效果時(shí)的凈化劑含量。當(dāng)凈化劑為20 mg、50 mg時(shí)，目標(biāo)物雖然能檢出，但回收率為60.1%、65.4%，干擾峰較多；凈化劑為100 mg、150 mg時(shí)，色譜圖峰型較好，回收率為93.5%、93.9%，干擾干擾峰少；凈化劑為200 mg時(shí)，回收率下降；綜合成本和試驗(yàn)結(jié)果，最佳凈化劑用量為100 mg，見(jiàn)表2。

表2 凈化劑選擇的結(jié)果

3.3 方法準(zhǔn)確度和精密度

用加標(biāo)回收試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確度。重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定5次，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 醬腌菜基質(zhì)中紐甜加標(biāo)回收率結(jié)果

由表3可知，該方法測(cè)定醬腌菜中紐甜的回收率為93.2%～97.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2.01%，表明該方法準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性良好，符合實(shí)驗(yàn)分析方法要求。

3.4 樣品測(cè)定結(jié)果

從市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)的5份醬腌菜樣品進(jìn)行測(cè)定。由表4可知，5份醬腌菜中均未檢測(cè)出紐甜。

表4 醬腌菜樣品中紐甜的含量

4 結(jié) 論

采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定 5 份醬腌菜中紐甜的含量，用凈化劑C18粉末凈化樣品，加標(biāo)回收率為93.2%～97.6%，RSD為2.01%，線性關(guān)系良好(相關(guān)系數(shù) R2>0.997)，與標(biāo)準(zhǔn)(GB5009.247-2016)相比，縮短了前處理和檢測(cè)時(shí)間，成本較低，靈敏度更高，能夠更快速、更準(zhǔn)確地判斷醬腌菜中是否添加甜味劑紐甜。結(jié)果表明5 份醬腌菜中均未檢測(cè)出紐甜。消費(fèi)者可能對(duì)醬腌菜風(fēng)味的追求多數(shù)注重酸的口感，因此，市場(chǎng)上售賣(mài)的醬腌菜未添加紐甜。