固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定斑馬魚暴露體系4 種雙酚類環(huán)境激素的研究

韓 瑩，費(fèi)雨萌，杜爾登，王明新*，薛銀剛，劉宇軒

1.常州大學(xué)環(huán)境與安全工程學(xué)院，江蘇 常州 213164

2.江蘇省石油化工安全與環(huán)保工程研究中心，江蘇 常州 213164

雙酚類化合物(bisphenol analogues，BPs)是一類與雙酚A(BPA)結(jié)構(gòu)相似，通過碳原子或者硫原子和氧原子將2 個(gè)羥苯基連接在一起的化合物，具有雌激素毒性、細(xì)胞毒性、基因毒性和生殖毒性等[1-3].隨著許多國(guó)家和地區(qū)出臺(tái)法規(guī)對(duì)BPA 加以限制，雙酚C(BPC)、雙酚F (BPF)、雙酚S (BPS)、雙酚Z (BPZ)等作為BPA 的潛在替代物相繼出現(xiàn)，并且生產(chǎn)和使用量逐步增大[4-5].雖然這些BPs 與BPA 的理化性質(zhì)相似，但其辛醇水分配系數(shù)更高，與BPA 相比具有類似或者更高的雌激素活性[6-8].目前這些BPs 已在多種環(huán)境介質(zhì)中被檢出，預(yù)計(jì)將有92%的BPs 主要存在于水體中[9-10].BPs 污染水體不僅影響魚類的生長(zhǎng)發(fā)育，而且有致畸、致癌、致突變作用，致使?jié)O業(yè)水域生態(tài)環(huán)境進(jìn)一步惡化[11-12].

近年來有關(guān)BPs 在環(huán)境水體和生物體中的檢出率及濃度的報(bào)道越來越多[13-14]，而環(huán)境樣品中BPs 的含量較低，并且污染物之間較大的濃度差異以及基質(zhì)效應(yīng)對(duì)雙酚類環(huán)境激素的前處理和檢測(cè)方法均提出了較高的要求.目前檢測(cè)雙酚類環(huán)境激素的方法主要包括高效液相色譜法(HPLC)[15]、液相色譜-質(zhì)譜法(LC-MS)[16]、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)[17].前處理技術(shù)主要有液液萃取[18]、分散液液微萃取[19]、微波輔助萃取[20]、固相萃取[21]、基質(zhì)分散固相萃取[22]等.傳統(tǒng)的液液萃取等技術(shù)時(shí)間、精力、溶劑消耗均較大，而固相萃取操作簡(jiǎn)單、吸附劑種類多樣、省時(shí)省力省溶劑，已被應(yīng)用于多種環(huán)境介質(zhì)的檢測(cè)領(lǐng)域[23-25].目前使用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行水及魚體中雙酚類環(huán)境激素定量分析的研究還相對(duì)較少[26].

該研究選擇4 種雙酚類環(huán)境激素(BPC、BPF、BPS、BPZ)為研究對(duì)象，以BPA-13C12和BPS-13C12為內(nèi)標(biāo)校正溶液中共存離子的基質(zhì)效應(yīng)[27-28]，建立固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(SPE-UPLC-MS/MS)的定量檢測(cè)方法，實(shí)現(xiàn)斑馬魚暴露水體中多種雙酚類環(huán)境激素的高效、快速測(cè)定，以期為生態(tài)系統(tǒng)中雙酚類環(huán)境激素的檢測(cè)及監(jiān)控提供科學(xué)參考和技術(shù)支持.

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

旋渦混合器〔MX-S 型，大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器(北京)股份公司〕主要用于快速攪拌；超聲波清洗機(jī)(UC-4600 型，深圳朗杰超聲電器有限公司)用于提取液體中雙酚雌激素；軌道式搖床(HT-20 式，上海滬析實(shí)業(yè)有限公司)用于混勻；高速離心機(jī)(LG20-W 型，北京京立離心機(jī)有限公司)用于超聲波提取物的離心；小型超低溫冰柜(DW-86W2 式，浙江捷盛制冷科技有限公司)用于低溫除脂；智能數(shù)控自動(dòng)固相萃取儀(YGC-8 型，鄭州寶晶電子科技有限公司)用于富集提純；水浴氮吹儀(CM-24 型，北京成萌偉業(yè)科技有限公司)用于加快蒸發(fā)甲醇洗脫液.

雙酚類環(huán)境激素的檢測(cè)采用三重四極桿質(zhì)譜儀(TSQ Quantum Access MAX，美 國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司)配置雙三元高效液相色譜儀(Ultimate 3000 DGLC，美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司)；超純水機(jī)(UPR 臺(tái)上式)購(gòu)置于四川優(yōu)普超純科技有限公司；固相萃取柱(Generik H2P)〔200 mg/(6 mL)〕購(gòu)置于美國(guó)Sepax 公司.

甲醇、乙腈均購(gòu)置于美國(guó)Sigma 公司，均為色譜級(jí)，試驗(yàn)用水為超純水.

標(biāo)準(zhǔn)品：BPF (98.0%)購(gòu)置于上海麥克林生化科技有限公司；BPS (99.0%)、BPC (＞98.0%)、BPZ (98.0%)均購(gòu)置于上海阿拉丁試劑有限公司.同位素內(nèi)標(biāo)BPA-13C12(99.0%)和BPS-13C12(97.0%)均購(gòu)置于美國(guó)Achemtek 公司.

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

單標(biāo)貯備液：分別稱取0.1 g 的BPF、BPS、BPC和BPZ，用甲醇溶解并定容至100 mL，配制成1 g/L的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，于?20 ℃避光保存.

混標(biāo)貯備液：分別吸取1.0 mL BPF、BPS、BPC和BPZ 標(biāo)準(zhǔn)貯備液于10 mL 容量瓶中，用甲醇定容，配制成100 mg/L 混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液，于?20 ℃避光保存.使用前移取適量混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液，逐級(jí)稀釋得1 mg/L 混合標(biāo)準(zhǔn)使用液，再用甲醇稀釋成適當(dāng)濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液.

內(nèi)標(biāo)溶液：用甲醇稀釋BPA-13C12和BPS-13C12內(nèi)標(biāo)溶液配制成1 mg/L 的內(nèi)標(biāo)貯備液.分別取BPA-13C12和BPS-13C12內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，配成各物質(zhì)質(zhì)量濃度分別為1、2、5、10、50 μg/mL 的內(nèi)標(biāo)混合溶液，于4 ℃避光保存待用.

1.3 樣品制備

1.3.1 樣品采集

以斑馬魚為研究對(duì)象，BPF、BPS、BPC 和BPZ的半致死濃度(LC50)的1/100 和1/10 作為暴露濃度[29]，即BPS 濃度分別為15.55 和1.55 mg/L，BPF 濃度分別為0.80 和0.080 mg/L，BPC 和BPZ 濃度均分別為0.20 和0.020 mg/L.斑馬魚體長(zhǎng)(2.5±0.50)cm，體質(zhì)量為0.17～0.30 g.將斑馬魚體表消毒后置于曝氣72 h 的自來水〔pH 為7.74～7.83，硬度為91～108 mg/L(以CaCO3計(jì))，溶解氧濃度為7.45～7.60 mg/L，溫度為(25±0.5)℃，晝夜時(shí)間分配為14 h∶10 h〕中，每2 d 喂食1 次，喂食飼料購(gòu)置于濰坊意品寵物用品有限公司，屬即食脫殼豐年蝦卵，每天投喂魚體質(zhì)量1%～2%的餌料，喂食后1 h 內(nèi)手動(dòng)清除剩余的飼料和魚類排泄物.試驗(yàn)前馴化斑馬魚至少1 個(gè)月，保證自然死亡率小于5%.暴露試驗(yàn)在1 L 燒杯內(nèi)進(jìn)行.設(shè)置空白對(duì)照組和暴露試驗(yàn)組，每組2 個(gè)平行，每個(gè)燒杯放入5 條斑馬魚，暴露8 d，暴露期間不喂食，每天光照結(jié)束后2 h 換水，換水前采集水樣，同時(shí)測(cè)定換水前、后的溶解氧濃度、pH、溫度，保證溶解氧濃度不得小于80%空氣飽和值，溫度穩(wěn)定在控制范圍內(nèi).第8 天在每個(gè)燒杯中隨機(jī)各取3 條斑馬魚.

1.3.2 樣品前處理

水樣前處理：取500 mL水樣加入40 μL 500 ng/mL 的內(nèi)標(biāo)混合液中.將固相萃取柱依次用10 mL甲醇和10 mL 超純水活化，將樣品過柱，用10 mL 含10%的甲醇水溶液(V/V)淋洗去除雜質(zhì)，用真空泵將柱中的殘余水分抽干，再用10 mL 甲醇溶液洗脫目標(biāo)化合物，洗脫液用氮?dú)獯蹈?最后用V甲醇:V水=1∶1的混合液復(fù)溶至1 mL，過膜后轉(zhuǎn)移到2 mL 進(jìn)樣小瓶中，供UPLC-MS/MS 分析.

斑馬魚前處理：準(zhǔn)確稱取0.1 g 凍干樣品，加入100 μL 500 ng/mL 的內(nèi)標(biāo)混合液.用6 mL 乙腈勻漿，超聲萃取30 min，振蕩混合30 min，8 000 r/min 下離心10 min，重復(fù)2 次，合并提取液置于?80 ℃除脂48 h.去除脂肪層，將提取液過濾并用超純水稀釋至500 mL過固相萃取柱，后續(xù)同水樣前處理.

1.4 儀器條件

1.4.1 色譜條件

色譜柱為Waters Atlantis T3 Column 色譜柱(2.1 mm×50 mm，3 μm)；柱溫為25 ℃；進(jìn)樣量為10 μL；流速為0.2 mL/min；流動(dòng)相A 為水，B 為甲醇.梯度洗脫程序：0～0.3 min，85%流動(dòng)相A，15%流動(dòng)相B；0.5～9 min，5%～85%流動(dòng)相A，15%～95%流動(dòng)相B；9～15 min，5%～85%流動(dòng)相A，15%～95%流動(dòng)相B.

1.4.2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源(ESI)，掃描方式為負(fù)離子掃描，選擇反應(yīng)監(jiān)控(SRM)；離子源溫度為350 ℃.

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

分 別對(duì)BPF、BPS、BPC、BPZ、BPA-13C12和BPS-13C12標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，確定它們的分子離子峰(m/z)分別為198.7、248.5、254.7、266.9、238.6 和260.3.在較低的能量下對(duì)各分子離子進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜掃描，確定特征離子峰.采用選擇反應(yīng)監(jiān)控(SRM)模式進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，具體參數(shù)見表1，標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見圖1.

圖1 6 種目標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)色譜圖Fig.1 Standard chromatograms of the six analytes

表1 4 種雙酚類環(huán)境激素及同位素內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜參數(shù)Table 1 MS parameters of the four BPs and isotopes

2.2 色譜柱及流動(dòng)相的選擇

采用Thermo Fisher Accucore? aQ C18 色譜柱(50 mm×2.1 mm，2.6 μm)和 Waters Atlantis T3 Column色譜柱(2.1 mm×50 mm，3 μm)進(jìn)行試驗(yàn)[30]，發(fā)現(xiàn)C18色譜柱對(duì)BPs 的分離效果較差，而Waters Atlantis T3 Column 色譜柱可將6 種物質(zhì)完全分離，所以最終選用Waters Atlantis T3 Column 色譜柱.

選擇甲醇-水、甲醇-甲酸銨和甲醇-氨水作為流動(dòng)相按不同比例進(jìn)行等度洗脫和梯度洗脫，發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相為70%甲醇-甲酸銨時(shí)BPS 不出峰〔見圖2(a)〕，流動(dòng)相為70%甲醇-氨水時(shí)BPS 不出峰且部分物質(zhì)的色譜峰拖尾嚴(yán)重〔見圖2(b)〕，當(dāng)流動(dòng)相為70%甲醇-水溶液時(shí)，6 種待測(cè)物得到有效分離，但存在拖尾現(xiàn)象〔見圖2(c)〕.將甲醇在流動(dòng)相中的初始占比降至15%，發(fā)現(xiàn)峰形變好，拖尾情況有所改善(見圖1)，這可能是甲醇的容積效應(yīng)引起.

圖2 流動(dòng)相分別為甲醇-甲酸銨、甲醇-氨水、甲醇-水時(shí)6 種待測(cè)物的色譜圖Fig.2 Chromatograms of the six analytes for methanol-ammonium format,methanol-ammonia water,methanol-water as mobile phases

2.3 前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

2.3.1 固相萃取柱的選擇

該試驗(yàn)探究C18 柱(RNSC500X6X-C18)、Florisil弗羅里硅土柱、親水親脂柱(Waters HLB 柱、Generik H2P SPE 柱)的萃取及回收效果[31-32].由圖3 可知，親水親脂柱對(duì)4 種BPs 的萃取效率均較好(69.2%～102.7%).而Florisil 弗羅里硅土柱的萃取效率僅為31.0%～60.16%，C18 柱的萃取效率也僅為53.26%～79.28%.綜合考慮萃取效率和萃取柱使用成本，選取Generik H2P SPE 柱用于BPs 的分離提取.

圖3 不同固相萃取柱對(duì)4 種BPs 的回收率對(duì)比Fig.3 Recovery performance comparisons of various SPE cartridges for four BPs

2.3.2 洗脫提取溶劑的選擇

BPs 的環(huán)境水平較低，需經(jīng)過濃縮處理來進(jìn)行測(cè)定.該試驗(yàn)選取甲醇和乙腈進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)2 種洗脫溶劑的回收率均高于75%，甲醇對(duì)BPS、BPC 和BPF 的洗脫效果優(yōu)于乙腈，乙腈對(duì)BPZ 的洗脫效果略優(yōu)于甲醇，但無明顯差異(見圖4).綜合考慮環(huán)境二次污染和試劑成本，選用甲醇作為洗脫溶劑.

圖4 不同洗脫溶劑對(duì)4 種BPs 的回收率對(duì)比Fig.4 Recovery performance comparisons of various extraction solvents for four BPs

2.3.3 提取溶劑體積的選擇

前處理過程中，提取溶劑體積對(duì)提取效率影響較大，該研究比較了3 種不同提取溶劑體積(3、6、10 mL)的洗脫效果，發(fā)現(xiàn)當(dāng)提取溶劑體積為3 mL 時(shí)，對(duì)BPZ 和BPF 的提取效率較低；當(dāng)提取溶劑體積為6 mL 時(shí)，對(duì)BPZ 和BPC 的提取效率較低；當(dāng)提取溶劑體積為10 mL 時(shí)，4 種BPs 的回收率均在90%以上(見圖5).綜合考慮試劑成本和提取效率，提取溶劑體積選擇10 mL.

圖5 不同提取溶劑體積對(duì)4 種BPs 的回收率對(duì)比Fig.5 Recovery performance comparisons of various extraction solvent volumes for four BPs

2.4 基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)是指樣品中除分析物以外的組分在樣品分析過程中會(huì)產(chǎn)生顯著干擾，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性.基質(zhì)效應(yīng)(matrix effect,ME)=[(基質(zhì)匹配校準(zhǔn)曲線斜率/純?nèi)軇?biāo)準(zhǔn)曲線斜率)?1]×100%[33-34].|ME|<20%為弱基質(zhì)效應(yīng)，可忽略，無需采取補(bǔ)償措施；20%≤|ME|≤50%為中等程度基質(zhì)效應(yīng)，需采取補(bǔ)償措施；|ME|>50%為強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)，也須采取補(bǔ)償措施.按照1.2 節(jié)方法配制空白基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，以50%甲醇為溶劑配制同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述公式計(jì)算ME，BPF、BPS、BPC 和BPZ 的ME 值分別為5.6%、1.5%、15.3%和13.7%，均低于20%，說明該試驗(yàn)的基質(zhì)效應(yīng)基本可以忽略，凈化效果和質(zhì)譜條件較為合理，有利于準(zhǔn)確定量分析.

2.5 方法驗(yàn)證

2.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

配制0.5～100 μg/L 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述色譜條件和質(zhì)譜條件下進(jìn)行測(cè)定.以待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)物定量離子峰面積之比為縱坐標(biāo)，樣品中待測(cè)物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.其中，BPF、BPC 和BPZ 以BPA-13C12為內(nèi)標(biāo)，BPS 以BPS-13C12為內(nèi)標(biāo)，內(nèi)標(biāo)添加量均為50 ng.采用空白樣品中添加目標(biāo)物的方法，確定檢出限(LOD)和定量限(LOQ).由表2 可知：BPF、BPC 和BPZ 在1～100 μg/L 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān) 系數(shù)R2>0.998 0，LOD 為0.12～0.60 μg/L，LOQ 為0.38～1.89 μg /L；BPS 在0.5～100 μg/L 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2為0.999 0，LOD 為0.019 μg/L，LOQ 為0.06 μg/L.

表2 4 種BPs 的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限Table 2 Linear ranges,linear equations,correlation coefficient (R2),LOD and LOQ of the four BPs

2.5.2 回收率和精密度

準(zhǔn)確稱取0.1 g 魚樣(500 mL 水樣)，加入50 ng(20 ng)內(nèi)標(biāo)混合物，分別進(jìn)行1.5、4.5、15 μg/L BPs下的加標(biāo)回收試驗(yàn).同時(shí)做空白對(duì)照，每個(gè)濃度平行測(cè)定6 次，按照1.4.3 節(jié)操作步驟對(duì)魚樣和水樣進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，結(jié)果如表3 所示.魚樣(水樣)中BPs 的回收率范圍在85.95%～97.45%(91.45%～102.91%)之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在4.63%～16.36%(1.47%～11.04%)之間，證明該方法對(duì)魚樣(水樣)中BPs 的檢測(cè)有較好的重復(fù)性和準(zhǔn)確性，能夠滿足魚樣(水樣)中BPs 的測(cè)定.

表3 斑馬魚及養(yǎng)殖水體中BPs 的加標(biāo)回收率及精密度(n=6)Table 3 Spiked recoveries and RSDs of the BPs in zebrafish and cultured water (n=6)

2.5.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

將15 μg/L 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液在常溫下避光保存，每隔2 h 測(cè)定其濃度.結(jié)果表明，BPF、BPS、BPC 和BPZ 峰面積的RSD(n=13)分別為1.24%、1.08%、0.43%和1.21%，說明在24 h 內(nèi)溶液濃度無明顯變化.

2.5.4 方法學(xué)比較

與其他已有文獻(xiàn)數(shù)據(jù)相比，固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法有效降低了物質(zhì)檢出限水平，檢測(cè)線性范圍較寬，回收率和精密度較高.如張卓娜等[35]使用固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定尿液中6 種雙酚類及烷基酚類物質(zhì)，結(jié)果顯示，該方法檢出限為0.05～0.60 μg/L，加標(biāo)回收率為81.4%～112%；吳春英等[36]使用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)檢測(cè)環(huán)境水體中27 種環(huán)境內(nèi)分泌干擾物，結(jié)果顯示，BPC、BPF、BPS 的檢出限分別為0.18、0.17、0.26 μg/L，超純水中BPC、BPF、BPS 的回收率分別為87.9%、98.2%、99.2%；華永有等[37]使用全自動(dòng)固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定江水中8種酚類內(nèi)分泌干擾物，結(jié)果顯示，加標(biāo)回收率為80.8%～91.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.9%～12%.該研究中的4 種BPs 檢出限為0.019～0.60 ng/L，魚樣(水樣)中BPs 的回收率為85.95%～97.45%(91.45%～102.91%)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.63%～16.36%(1.47%～11.04%)，說明固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)于環(huán)境水體中BPs 的檢測(cè)及控制研究具有重要意義.

2.5.5 實(shí)際樣品的測(cè)定

將斑馬魚暴露于4 種不同濃度BPs 的溶液中，8 d 后對(duì)斑馬魚體內(nèi)的雙酚類環(huán)境激素殘留進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如表4 所示.由表4 可見：斑馬魚暴露在0.08 和0.79 mg/L 的BPF 溶液中，檢測(cè)到魚體內(nèi)BPF 濃度分別為1.27 和12.52 mg/kg；在1.55 和15.56 mg/L 的BPS 溶液中，魚體內(nèi)BPS 濃度分別為6.03 和62.33 mg/kg；在0.02 和0.21 mg/L 的BPC 溶液中，魚體內(nèi)BPC 濃度分別為3.99 和26.44 mg/kg；在0.02 和0.20 mg/L BPZ 的溶液中，魚體內(nèi)BPZ 濃度分別為20.47和257.65 mg/kg.這4 種BPs 都在短時(shí)間內(nèi)在斑馬魚體內(nèi)產(chǎn)生富集，并且濃度越高，富集越強(qiáng)，在暴露濃度較大的介質(zhì)中，魚體內(nèi)檢測(cè)出更高濃度的BPs，并且斑馬魚體內(nèi)檢測(cè)出的BPF、BPS、BPC 在高濃度暴露組基本是低濃度暴露組的10 倍，與暴露濃度呈正相關(guān).因此，有必要圍繞BPs 在水環(huán)境中的富集作用及毒性機(jī)制開展深入研究.由于每天換水，養(yǎng)殖水體中4 種BPs 的濃度與本體濃度基本相同.該研究與已有文獻(xiàn)報(bào)道相比，富集程度略有不同，可能是暴露溶液濃度或者是模式生物的不同所引起的[38].

表4 暴露8 d 后養(yǎng)殖水體和斑馬魚體內(nèi)4 種BPs 的濃度Table 4 Concentrations of the four BPs in cultured water and zebrafish after exposure 8 d

此外，將固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行檢測(cè)驗(yàn)證，分別采集兩類實(shí)際景觀水體樣品，在進(jìn)行1.3.2 節(jié)步驟前，所采水樣經(jīng)0.45 μm 玻璃纖維濾膜過濾[39].試驗(yàn)設(shè)3 組平行，分別測(cè)定4 種BPs 濃度，檢測(cè)結(jié)果取平均值.景觀水體一中檢測(cè)出BPF(1.38 ng/L)和BPS(19.76 ng/L)，BPZ 和BPC 未被檢出；景觀水體二中檢測(cè)出BPF(9.70 ng/L)、BPS(58.04 ng/L)、BPZ(2.23 ng/L)，BPC 未被檢出.目前，GB 3838?2002《地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中對(duì)于BPS 還沒有明確的限值要求，參考GB 5749?2006《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》[40]，認(rèn)為雖然固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)出的景觀水體中BPS 低于標(biāo)準(zhǔn)限值 (0.01 mg/L)，但仍需要引起重視.

3 結(jié)論

a)該研究建立了固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，并用于檢測(cè)斑馬魚暴露體系中的BPC、BPF、BPS 和BPZ.

b)固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的LOD 為0.019～0.60 μg/L，LOQ 為0.06～1.89 μg/L，BPS在0.5～100 μg/L 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，BPZ、BPF 和BPC 在1～100 μg/L 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好.

c)固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的加標(biāo)回收率為85.95%～102.91%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.47%～16.36%，適用于水環(huán)境暴露體系雙酚類環(huán)境激素殘留的測(cè)定技術(shù)需求，其檢出限低，靈敏度高，重現(xiàn)性好，具有較好的實(shí)用性.