豬弓形蟲病診斷技術的研究進展

袁英，劉艷成，李廣東，張濤，柴衛(wèi)華，王騰，張良

（1.邯鄲市動物疫病預防控制中心，河北邯鄲 056000；2.興安盟動物疫病預防控制中心；3.河北省畜牧總站，河北石家莊 050000；4.邯鄲市飼料工業(yè)辦公室，河北邯鄲 056000）

關鍵字：龔地弓形蟲；豬弓形蟲??；診斷技術

1 概述

龔地弓形蟲又稱為弓形體，屬于頂器門、真球蟲目、肉孢子蟲科、弓形蟲屬。 龔地弓形蟲是一種具有較大公共安全危害的寄生蟲， 在世界范圍內廣泛分布。 貓科動物為龔地弓形蟲的唯一終末宿主， 人及許多脊椎動物是龔地弓形蟲的中間宿主。

貓科動物感染弓形蟲后， 可以通過糞便排出弓形蟲的卵囊， 卵囊在適宜的外界環(huán)境中進行孢子化，從而具有感染力。 中間宿主感染弓形蟲的主要途徑為經口感染。 在中間宿主體內，弓形蟲主要以速殖子和緩殖子兩種形式存在，其中緩殖子可以在中間宿主的體內形成組織包囊。

龔地弓形蟲于1908 年由法國學者Nicolle及Maneeaux 首次發(fā)現。 在我國，弓形蟲病的危害僅次于瘧疾和血吸蟲病。 弓形蟲是一種機會性致病病原體， 弓形蟲感染免疫功能正常的成年人后會呈現隱性感染， 而對于免疫功能低下人群，弓形蟲病是重要并發(fā)癥之一，甚至可以成為致死的病因。 據相關報道， 在全世界成年人中，弓形蟲的感染率約為33%，家畜的感染率可以達到10%～50%。 孕婦感染弓形蟲后，會造成流產、早產、死胎、畸形胎以及嬰兒先天性弓形蟲病，嚴重妨礙了優(yōu)生優(yōu)育。

在畜牧業(yè)養(yǎng)殖中，弓形蟲也是豬、牛和羊的重要寄生蟲之一，其中以豬的感染率較高。 母豬感染弓形蟲后，可能出現流產或早產癥狀；仔豬感染弓形蟲后，會影響其生長發(fā)育，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了較大的經濟損失。 由于弓形蟲病會引起相關的公共衛(wèi)生問題，因此，需要對弓形蟲病進行相關的研究。 而臨床上通常有以下幾種檢測方法。

2 臨床檢測方法

2.1 組織學診斷

可以采用病畜的體液(羊水、腦脊液或腹水等)進行涂片或做病理組織切片對弓形蟲速殖子進行顯微鏡檢查，用來診斷弓形蟲的急性感染。但是， 因受體液或組織內弓形蟲速殖子含量多少的影響， 此項診斷方法存在有查找速殖子較為困難的問題。

2.2 酶聯免疫吸附試驗(ELISA)

ELISA 法在臨床上有著相對經濟，安全性和特異性好，并且易于自動化和標準化的優(yōu)點。 根據包被的抗原不同， 可以根據檢測的需要進行選擇，對不同的弓形蟲抗體（IgM、IgA 和IgG 等）進行針對性檢測。而ELIASA 法診斷弓形蟲因具有易于重復、 自動化和標準化的優(yōu)點在臨床上應用較為廣泛。

2.3 western 印跡法

Western 印跡法是一種將獲得的蛋白質樣品通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后，轉移到硝酸纖維濾膜上， 用酶標記的特異抗體檢測相應抗原的方法。 Western 印跡法主要針對弓形蟲病IgM 或IgA 抗體進行檢測，具有靈敏度高，特異性強的優(yōu)點，但因Western 印跡法檢測耗時較長， 操作較為復雜不太適用于進行弓形蟲病的臨床診斷。

2.4 PCR 檢測法

PCR 檢測法已經被廣泛應用于動物及人類的各項疾病的檢測， 人及動物弓形蟲病的診斷也同樣可以應用PCR 檢測法。 PCR 檢測法自1985 年被發(fā)明出來，技術水平已經非常成熟。因PCR 檢測法具有靈敏度高， 特異性強等優(yōu)點而易于向臨床檢測推廣，所以應用也較為廣泛。

2.5 實時熒光定量PCR 檢測法

實時熒光定量PCR 檢測法可以稱為PCR檢測技術的飛躍性進展， 實現了在擴增定性的同時對核酸進行定性及定量。 通過定量分析樣本中核酸的拷貝數， 可以準確得到樣本中的基因數量， 這一點對于減少假陽性的發(fā)生具有重大意義。 而且實時熒光定量PCR 檢測法不存在如PCR 檢測法進行開蓋處理擴增產物的過程，從源頭上避免了PCR 檢測法進行產物分析時易造成氣溶膠產生的一大問題。 因實時熒光定量PCR 檢測法存在儀器較為昂貴， 操作較為復雜的不足， 不易于向基層臨床進行廣泛推廣和應用。

3 總結

近些年來，通過各項實驗研究，豬弓形蟲病的診斷技術已經取得了較大的研究進展。 而對于臨床檢測， 我們需要根據應用場所及檢測目的的不同， 合理選擇相適應的豬弓形蟲病診斷方法進行檢測。 在眾多的豬弓形蟲病的診斷檢測方法中，病原學診斷因高特異性、高靈敏度仍然是最為可靠的檢測方法。

通過上述了解， 我們可以發(fā)現豬弓形蟲病的檢測方法已經非常成熟，但是，可以應用于現場， 進行快速檢測的商品化檢測試劑盒仍然較少。 并且現有的快速檢測試劑盒存在著檢出率較低的不足之處。 因此，盡快為豬弓形蟲病的臨床檢測建立一種靈敏度高，特異性強，檢測方法較為便捷，易于攜帶的試劑盒，應用于臨床豬弓形蟲病的檢測便凸顯出來。 可以預見，隨著時代的進步，科技的發(fā)展及應用，將會給豬弓形蟲病的臨床檢測帶來質的飛躍。