遼藁本種子質(zhì)量分級標準研究

張?zhí)祆o，孫文松 ，李 旭

（遼寧省經(jīng)濟作物研究所，遼寧遼陽 111000）

遼藁本（LigusticumjeholenseNakai et Kitag.）為傘形科（Apiales）藁本 屬（Ligusticum）多年生草本植物 ，植株高 達80 cm，主要產(chǎn)在吉林、遼寧、河北等地，海拔1250～2 500 m林下、草甸及溝邊等陰濕處[1]。以干燥根及根莖入藥，具祛風(fēng)、散寒、除濕 、止痛 之功效，主治 風(fēng)寒感冒、頭巔頂痛、風(fēng)濕肢解痹痛等癥[2]。為我國傳統(tǒng)大宗藥材，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，被《中國藥典》收載，應(yīng)用歷史悠久，2018年農(nóng)業(yè)農(nóng) 村部 、國家 藥品監(jiān)督管理局、國家中 醫(yī)藥 管理局發(fā)布的 《全國道地藥 材生產(chǎn)基地規(guī)劃 （2018—2025 年）》中，將遼藁本納入東北道地藥材基地建設(shè)。

在人工栽培 過程 中，遼藁本種子以個體 農(nóng)戶 自留種為主，農(nóng)民缺乏專 業(yè)技術(shù)，導(dǎo)致種子質(zhì)量參差不齊，給 遼藁本的生產(chǎn)安全造成嚴重威脅。種子是中藥材質(zhì)量的決定因素，因此進行遼藁本種子標準研究，為其種子鑒定和種質(zhì)檢驗提供依據(jù)，對于推動遼藁本 GAP 基地建設(shè)、保護良種資源等諸多方面具有重要的意義。

1 材料

試驗材料選用 2020年10 月采自遼寧遼藁本種植基地的3年生遼藁本種子（表 1）。

表1 遼藁本種子材料采集信息

2 方法

2.1 種子外觀形態(tài)觀察

用 體視顯 微鏡 觀察記錄。

2.2 種子凈度分析與大小測定

試驗方法按 GB/T3543.3-1995《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程凈度分析》規(guī)定執(zhí)行[3]。每批次樣品種子稱取 50 g，重復(fù) 3次，種子均勻地攤放在白紙上，攤成正方形，然后用2根直尺從一側(cè)兩角對角線方向延伸交匯于中心點，往外將左側(cè) 1/4 的種子撥到另外一張紙上，同法將右側(cè) 1/4 的種子撥到另外一張紙上，將撥出的種子放入種子袋中，直至撥出的質(zhì)量約為 25g為止，稱重記為 W1，再將純凈種子和雜質(zhì)區(qū)分開，分別稱重，純凈種子記為 W2，雜質(zhì)記為W3，然后利用公式進行種子凈度計算，重復(fù)3次。每批種子試驗條件及方法均相同。計算公式如下：種子凈度=[W2/（W2+W3）]×100%

其中，W1：用四分法分離后的種子量（g）；W2：純凈種子量（g）；W3：雜質(zhì)量（g）；每粒種子的長度、寬度和厚度利用精確到 0.01 mm 的游標卡尺量取并記錄。

2.3 種子千粒重測定

試驗方法按 GB/T 3543.7-1995《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程其他項目檢驗》規(guī)定執(zhí)行。隨機數(shù)取凈種子1000 粒，3 次重復(fù)，分別稱重，計算3次重復(fù)的平均質(zhì)量及標準差。

2.4 種子含水量測定

試驗方法按 GB/T 3543.6-1995《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程水分測定》烘干減重法規(guī)定執(zhí)行。稱取各產(chǎn)地種子樣品5g置于烘至恒重的稱量瓶中，稱重 W1，130℃恒溫烘干3h，用坩堝鉗或戴上手套蓋好蓋（在箱內(nèi)加蓋），取出后 放入干燥器內(nèi)冷卻至室溫，稱重 W2，計算種子含水量。

種子含水量 =（烘前種子質(zhì)量-烘后種子質(zhì)量）/ 烘前

種子質(zhì)量×100%

2.5 種子發(fā)芽率測定

從充分混合的凈種子中，隨機數(shù)取新鮮種子，每重復(fù)100 粒種子，3 次重復(fù)。將各產(chǎn)地種子置于 90 mm、鋪有雙層濾紙的培養(yǎng)皿中，于發(fā)芽溫度為 15℃恒溫人工氣候箱中培養(yǎng)，種子開始萌發(fā)后每日統(tǒng)計發(fā)芽數(shù)（萌發(fā)以胚根突破種皮 1～2 mm 為標準），持續(xù)到不再有發(fā)芽數(shù)增加為止。最后測定種子的發(fā)芽率。

2.6 種子生活力測定

遼藁本種子活力測定隨機取凈種3個重復(fù)，每個重復(fù) 100 粒，按照氯化三苯基四氮唑法測定；將種子溫水浸種1h，沿種脊將種子切成兩半，使其露出胚乳。滴入濃度為 0.6%的 TTC 溶液浸沒種子，置于 45℃恒溫培養(yǎng)箱中避光染色4h；取出后迅速用自來水沖洗，至洗出的溶液為無色為止 。根據(jù) 種子染 色情況，記錄 有活力 及無 活力種子數(shù)量，并計 算種子 活力 。

2.7 分級標準制定

應(yīng)用 SPSS16.0 統(tǒng)計分析軟件進行聚類分析，得出遼藁本種子質(zhì)量分級標準。

3 結(jié)果與分析

3.1 遼藁本種子形態(tài)觀察

遼藁本種子外觀長橢圓形，表面灰棕色或黃灰色，頂端有突起的花柱基，基部具果柄痕或殘存的果柄。果背面隆起，具5條明顯隆起的肋線，腹面成彎弧形凹陷，中央為一白色隆起肋線，各肋線間具油管1條，腹面具油管2條，含種子1枚，長約 3.8 mm，寬約 1.5 mm。種子橫切面略呈半月形，胚乳白色，含油分。

3.2 各項指標測定結(jié)果

結(jié)果表明，7 份產(chǎn)地遼藁本種子千粒重在 1.732～2.142 g，其中5號產(chǎn)地遼藁本種子千粒重最高，1 號和2號產(chǎn)地遼藁本種子千粒重最低。不同產(chǎn) 地遼藁 本種子含水量在12.553%～13.461%，1 號、6 號和7號含水量超過 13%，其他4個產(chǎn)地種子含水量低于 13%。不同產(chǎn)地遼藁本種子發(fā)芽率差異較大，在 80%～93%之間，其中4號和7號產(chǎn)地種子發(fā)芽率均超過 90%，其他主產(chǎn)區(qū)種子發(fā)芽率均超過80%。7 個產(chǎn)區(qū)種子生活力在 81%～95%之間，7 號產(chǎn)區(qū)種子生活力達到 95%。除7號產(chǎn)區(qū)外，其余產(chǎn)區(qū)種子凈度均超過 80%，6 號產(chǎn)區(qū)種子凈度最高，超過 90%。

表2 遼藁本不同產(chǎn)地種子質(zhì)量分析

3.3 相關(guān)性分析

相關(guān)性分析是指對2個或多個具備相關(guān)性的變量元素進行分析，從而衡量2個或2個以上變量的相關(guān)密切程度[4]。應(yīng)用 SPSS16.0 統(tǒng)計分析軟件的“數(shù)據(jù)分析／相關(guān)性／兩個變量間的相關(guān)性分析”對上述遼藁本種子的種子長、寬、厚、千粒重、含水量、生活力和發(fā)芽率7個指標進行分析。從表3可以看出，種子發(fā)芽率和生活力相關(guān)系數(shù)為0.978，極顯著相關(guān)。

4 討論

在種子分級指標中，發(fā)芽率可直接反映種子田間出苗率[5-7]，由于發(fā)芽率測定至少需要3周時間，不利于快速判斷，而活力鑒定方便快捷，可滿足種子質(zhì)量的快速鑒定。因此在制定遼藁本種子質(zhì)量標準時，可舍去發(fā)芽率指標，對凈度、千粒重、含水量和生活力等4個質(zhì)量分級指標進行 修約。在評價指標中 ，千粒重反映 種子的飽滿度、成熟度；生活力可直接 反映發(fā) 芽率和田間 出苗 率；凈度 反映種子的種用價值和品質(zhì)。因此，研究選擇凈度、千粒重、含水量 和生 活力作為遼藁本種 子分 級標準指標 。根據(jù)該研究試驗數(shù)據(jù)，初步將遼藁本種子質(zhì)量分為3個等級（表4）。

表3 遼藁本種子7個指標簡單相關(guān)系數(shù)矩陣

表4 遼藁本種子質(zhì)量分級標準

中藥材質(zhì)量穩(wěn)定需要中藥材生產(chǎn)的規(guī)范化，而中藥材生產(chǎn)規(guī)范化首先是中藥材種子種苗生產(chǎn)的標準化[8]，包括中藥 材良種生產(chǎn)、種子種苗生產(chǎn)、種子種苗質(zhì)量分級、檢驗方法規(guī)程、種子包裝、運輸、貯存等一系列內(nèi)容，其中種子種苗質(zhì)量鑒定分級是基礎(chǔ)[9]。目前，大多數(shù)中藥材種子質(zhì)量分級標準還處于缺失狀態(tài)，導(dǎo)致用其生產(chǎn)出中藥材質(zhì)量和療效難以保證，因此，推出中藥材種子質(zhì)量分級標準是勢在必行的首要任務(wù)[10-11]。該試驗對遼寧7個遼藁本主產(chǎn)區(qū)收集到的種子，嚴格依據(jù) 《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程》中各個質(zhì)量指標進行檢測，并對數(shù)據(jù) 加以整理分析，初步制定遼藁本種子質(zhì)量分級標準，從源頭保障遼藁本質(zhì)量 ，促 進遼 藁本產(chǎn) 業(yè)健 康發(fā) 展。