無核棗愈傷組織誘導(dǎo)初報(bào)

豆玉娟 ，孫洪強(qiáng) ，代麗，楊越，付慶新 ，黃立華 ，朱虹

（1.遼寧省旱地農(nóng)林研究所，遼寧朝陽 122000 2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)中國棗研究中心，河北保定 071000）

棗為鼠李 科（Rhamnaleae）棗屬（Zizyphus）植物，原產(chǎn)于中國，由于其耐旱、耐瘠薄的特點(diǎn)，兼具經(jīng)濟(jì)、生態(tài)和社會(huì)等多重效益[1-2]，適宜遼寧朝陽 地區(qū)坡地 、山坡地栽植。近年來在遼寧西部朝陽地區(qū)發(fā)現(xiàn)一個(gè)無核棗資源，經(jīng)多年觀察性狀穩(wěn)定，平均 單果重為6g，可食率達(dá)到100%，鮮食、加工均可[3]。由于大棗實(shí)生繁殖難以保持品種的優(yōu)良特性，主要采用嫁接 繁殖[4]，大棗組織培養(yǎng)技術(shù)日益成熟，不僅有利于繁殖、增殖和保存，而且利用帶芽莖段誘導(dǎo)愈傷組織及叢生芽具有穩(wěn)定的遺傳性[5]。該試驗(yàn)以朝陽地區(qū)無核棗為試材，采集帶芽莖段建立脫菌苗，誘導(dǎo)愈傷組織萌發(fā)不定芽，力求實(shí)現(xiàn)無核棗的不定芽高效誘導(dǎo)，為建立高效穩(wěn)定的植株再生體系提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

早春無核棗棗頭長至 15～20 cm 時(shí)，選晴天采集未木質(zhì)化帶芽莖段，朝陽地區(qū)5月中上旬取樣最好。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1培養(yǎng)基配置。選用 MS 基本培養(yǎng)基為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，含瓊脂條 8～8.5 g/L，蔗糖 30 g/L，pH 5.8～6.0，按常規(guī)方法配置，121℃滅菌 20 min，避光保存?zhèn)溆肹5-6]。

1.2.2外植體處理。采集無核棗新生帶芽莖段，用自來水沖洗干凈，浸泡2h 后，用 0.1%升汞（HgCl2）消毒8min，無菌水沖洗 3～5 次后，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。溫度為 24℃，弱光下培養(yǎng)[5-6]。

1.2.3基本培養(yǎng)基的篩選。將誘導(dǎo)出的愈傷組織分別接種到3種基本培養(yǎng)基中，分別是 1/2 MS、MS和3/2 MS 培養(yǎng)基，觀察并統(tǒng)計(jì)愈傷組織的培養(yǎng)結(jié)果，篩選最適基本培養(yǎng)基。

1.2.4不同植物生長調(diào)節(jié)劑組合。在篩選出的基本培養(yǎng)基中分別添加不同濃度的植物生長調(diào)節(jié) 劑（6-BA、IBA、NAA），濃度分別為 0.2、0.5、1.0、2.0、3.0 mg/L，以及不同植物生長調(diào)節(jié)劑組合（6-BA、TDZ和NAA，如表 1），觀察記錄愈傷組織和不定芽的誘導(dǎo)結(jié)果，在一部分培養(yǎng)基中添加不同濃度（10、20 mg/L）的 AgNO3，觀察其誘導(dǎo)效果。

表1 不同植物生長調(diào)節(jié)劑組合 mg/L

2 結(jié)果與分析

2.1 基本培養(yǎng)基的篩選

從圖1可以看出，平頂棗和無核棗愈傷組織在3種培養(yǎng)基上培養(yǎng) 25d后，在 MS和3/2MS 培養(yǎng)基上的愈傷組織均產(chǎn)生了大量的綠色圓球形顆粒，其中 3/2MS 培養(yǎng)的愈傷組織較為松散。經(jīng)過連續(xù)繼代培養(yǎng)，由于 MS 培養(yǎng)基增殖率高，愈傷組織形態(tài)色澤正常，選其作為基本培養(yǎng)基。

圖1 不同培養(yǎng)基愈傷生長情況（A：1/2MS 培養(yǎng)基；B：MS 培養(yǎng)基；C：3/2MS 培養(yǎng)基）

2.2 愈傷組織的培養(yǎng)及不定芽的誘導(dǎo)

2.2.1不同濃度植物生長調(diào)節(jié)劑對愈傷組織的影響。多數(shù)研究表明，單一的植物生長 調(diào)節(jié)劑有利 于胚 狀體發(fā)生[4，7-9]。以 MS 為基本培養(yǎng)基，研究不同濃度的 IBA、NAA對愈傷組織顆粒的影響，結(jié)果表明低濃度的生長素能夠促進(jìn)無核棗愈傷組織顆粒增殖（表 2）。

表2 不同植物生長調(diào)節(jié)劑種類及其濃度對愈傷組織的影響

2.2.2不同植物生長調(diào)節(jié)劑組合對愈傷組織不定芽的誘導(dǎo)。把愈傷組織顆粒接種到含有不同激素組合培養(yǎng)基中，培養(yǎng) 28d后，組合 I、II、III、VIII 可見不定芽，連續(xù)培養(yǎng) 3個(gè)月后，愈傷組織及不定芽生長情況見表3和圖 2。

表3 不同植物生長調(diào)節(jié)劑組合對愈傷組織的影響

圖2 不同植物生長調(diào)節(jié)劑對不定芽的誘導(dǎo)

3 小結(jié)與討論

研究表明，植物愈傷組織增殖與分化出不定芽受細(xì)胞內(nèi)外多重因素影響[10]，適 宜的生長素和細(xì)胞分裂 素組 合可有效誘導(dǎo)植物外植體分化與生長[11]。該試驗(yàn)以朝陽地區(qū)無核棗帶芽莖段為試材誘導(dǎo)愈傷組織，篩選出 MS 為最適基本培養(yǎng)基。通過比較，MS 中加入低濃度（0.2～1.0 mg/L）植物生長調(diào)節(jié)劑（IBA和NAA）和不同配比植物生長調(diào)節(jié)劑（TDZ、6-BA、NAA）促進(jìn)愈傷組織增殖，其中愈傷組織增殖的最佳激素組合為 MS+0.5 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA，誘導(dǎo)愈傷組織形成不定芽的最佳組合為MS+1.0 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA，不定芽誘導(dǎo)率為 52.5%。

有學(xué)者認(rèn)為，培養(yǎng)基中添加 AgNO3、ABA、GA3等會(huì)提高胚狀體發(fā)生率[4]，該試驗(yàn)在一部分培養(yǎng)基中添加不同濃度（10、20 mg/L）的 AgNO3，未發(fā)現(xiàn)對愈傷組織增殖與不定芽形成有明顯影響。實(shí)踐證明，誘導(dǎo)愈傷組織增殖和胚狀體發(fā)生的因素眾多，其作用也不盡相同，具體效果尚需設(shè)計(jì)試驗(yàn)進(jìn)行進(jìn)一步研究。