四平地區(qū)鵝致病性大腸桿菌實(shí)驗(yàn)室耐藥性分析

吳丹丹

吉林省梨樹縣獸醫(yī)服務(wù)中心，吉林梨樹 136500

近年來，由于肉鵝、蛋鵝市場(chǎng)行情較好，養(yǎng)殖前期投入不高，門檻較低，農(nóng)民養(yǎng)殖的積極性較高，四平地區(qū)商品鵝養(yǎng)殖量大幅增加。隨著養(yǎng)殖密度和養(yǎng)殖量的增加，傳染病的發(fā)生成為制約養(yǎng)鵝發(fā)展的一個(gè)主要因素。本地農(nóng)民養(yǎng)鵝的一個(gè)主要特點(diǎn)就是養(yǎng)殖圈舍簡(jiǎn)陋，養(yǎng)殖環(huán)境較差，養(yǎng)殖密度較大，導(dǎo)致傳染病不斷發(fā)生，增加養(yǎng)殖成本和養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)。大腸桿菌病是近幾年在本地區(qū)流行較嚴(yán)重的傳染病，各種日齡的鵝都有發(fā)生，20日齡以內(nèi)發(fā)病較嚴(yán)重，死亡較大，成年鵝也有發(fā)生，一般為零星死亡或和其它傳染病繼發(fā)。臨床中，同一抗菌藥物對(duì)不同種類的病原菌敏感性不同，同一種病原菌的不同菌株對(duì)藥物的敏感性各不相同，藥敏試驗(yàn)是在實(shí)驗(yàn)室中篩選對(duì)致病菌敏感的抗菌藥物的一種體外抑菌實(shí)驗(yàn)，臨床中可以指導(dǎo)實(shí)踐用藥。筆者通過對(duì)四平地區(qū)鵝致病性大腸桿菌實(shí)驗(yàn)室耐藥性分析，總結(jié)出其耐藥規(guī)律和用藥防治措施，指導(dǎo)實(shí)踐。

1 樣品采集

臨床剖檢過程中，無(wú)菌采集病死鵝肝臟、心臟，置于自封采樣袋中，按采集先后順序標(biāo)號(hào)，備注采樣時(shí)間和地點(diǎn)，當(dāng)天不能送檢的要至于-15 ℃冰箱冷凍保存，采樣要求嚴(yán)格按照無(wú)菌操作進(jìn)行。筆者在臨床中采集樣品65份，各地區(qū)比例見表1。

表1 各縣區(qū)采樣數(shù)量表

2 實(shí)驗(yàn)材料

普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、酒精燈、接種環(huán)、打孔器、廣口瓶、定性濾紙。

3 實(shí)驗(yàn)步驟

3.1 藥敏片的制備

用打孔器將定性濾紙打成直徑為6 mm左右的圓形紙片，將打好的藥敏片進(jìn)行篩選，保留完整的，棄掉殘次品，將挑選好的藥敏片裝入廣口瓶，用牛皮紙封口扎緊，放入烘干箱中烘干消毒。

3.2 藥物溶液配制

選擇正規(guī)廠家有批準(zhǔn)文號(hào)的獸藥產(chǎn)品，安普霉素、金霉素、阿莫西林、新霉素、粘桿菌素、氨芐西林、氟苯尼考、恩諾沙星、磺胺間甲氧嘧啶鈉、鹽酸多西環(huán)素、林可大觀霉素，上述藥物按照治療濃度配置藥物溶液。配好后裝入事先準(zhǔn)備好刷洗干凈的青霉素小藥瓶中備用，瓶身貼好防水標(biāo)簽，標(biāo)明藥物名稱、含量、配置時(shí)間。

3.3 培養(yǎng)基的制備

在化學(xué)試劑商店購(gòu)買成品普通瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基原料，按照說明操作，在培養(yǎng)皿中制成培養(yǎng)基。

3.4 細(xì)菌培養(yǎng)

在無(wú)菌操作臺(tái)中，取小塊病料，用手術(shù)剪剪開組織切面，用鑷子夾住病料，均勻涂于麥康凱培養(yǎng)基表面，注意不要戳破培養(yǎng)基表面。放入37 ℃溫箱，培養(yǎng)24 h，取出后可見培養(yǎng)基上長(zhǎng)出粉紅色圓形不規(guī)則菌落。在無(wú)菌操作臺(tái)中，用酒精燈火焰消毒接種環(huán)，然后在麥康凱培養(yǎng)基上挑取適量菌落，以劃線方式將細(xì)菌涂布到普通瓊脂培養(yǎng)基上，直至細(xì)菌均勻密布于平皿。

3.5 放入藥敏片

將烘干好的濾紙片浸入藥物溶液中，完全浸透后用鑷子輕輕貼于培養(yǎng)基表面，藥敏片按梅花形擺放，外圍6個(gè)，中間1個(gè)，每個(gè)藥敏片的間距要相等，在培養(yǎng)皿外做好標(biāo)記，記錄好每個(gè)藥敏片所代表的藥物。上述步驟操作好后至于37 ℃溫箱培養(yǎng)24 h。

3.6 結(jié)果判定

24 h后取出觀察結(jié)果，按照抑菌環(huán)大小判斷藥物敏感性，具體可以用尺子測(cè)量抑菌環(huán)大小，具體情況見表2。

表2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 單位：mm

4 結(jié)果分析

對(duì)上面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，得出安普霉素、粘桿菌素、氟苯尼考、磺胺間甲氧嘧啶鈉、林可大觀霉素幾種藥物對(duì)近段時(shí)間四平地區(qū)鵝大腸桿菌敏感，臨床治療效果較好，建議臨床中使用上述幾種高敏藥物。

5 討論

藥敏試驗(yàn)是獸醫(yī)臨床中應(yīng)用較為廣泛的一種實(shí)驗(yàn)室輔助手段，可以為臨床獸醫(yī)提供較為準(zhǔn)確的用藥指導(dǎo)。但是由于操作手法和實(shí)驗(yàn)中的一些不確定因素，導(dǎo)致藥敏試驗(yàn)也存在一定誤差和弊端。一是實(shí)驗(yàn)過程是在動(dòng)物體外的一種抑菌實(shí)驗(yàn)，所以受藥物的吸收途徑、藥物在體內(nèi)的利用率等因素影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在一定的誤差；二是實(shí)驗(yàn)中藥物溶液的配置時(shí)間也可影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果；三是藥敏試驗(yàn)需要一定的時(shí)間才能完成，所以在臨床中不能完全依靠實(shí)驗(yàn)結(jié)果指導(dǎo)用藥，要根據(jù)動(dòng)物的發(fā)病情況，考慮邊治療邊等結(jié)果的方式進(jìn)行，防止病情發(fā)展造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

目前市場(chǎng)上在售的抗生素類藥物種類較多，如果沒有藥敏試驗(yàn)，可能會(huì)憑獸醫(yī)或養(yǎng)殖戶的經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行投藥治療，治療效果不能很好保障。藥敏試驗(yàn)的應(yīng)用和普及，為臨床治療提供了用藥選擇，減少了治療藥物投入，為養(yǎng)殖提高利潤(rùn)，增加了農(nóng)民收入，是一項(xiàng)實(shí)用技術(shù)。規(guī)?；B(yǎng)殖集團(tuán)可以自建獸醫(yī)室開展藥敏試驗(yàn)，散養(yǎng)戶可以委托鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)站或縣級(jí)疫控中心等單位開展藥敏試驗(yàn)，指導(dǎo)臨床用藥。臨床中還出現(xiàn)過藥敏試驗(yàn)結(jié)果沒有高敏藥物的現(xiàn)象，一般可以選擇兩種或兩種以上中敏藥物聯(lián)合用藥，聯(lián)合用藥一定要遵循聯(lián)合用藥規(guī)則，否則可能引起用藥效果減弱或藥物出現(xiàn)拮抗現(xiàn)象，臨床中一定要避免此類現(xiàn)象的出現(xiàn)。聯(lián)合用藥可以起到一加一大于二的效果，兩種藥物相互增效，使藥物殺菌效果達(dá)到最大。