非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤組織中EGFR和KRAS基因突變及臨床意義

李寅

摘? 要：目的? 探討非小細(xì)胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）患者腫瘤組織中表皮生長(zhǎng)因子受體（Epidermal growth factor receptor，EGFR）和鼠類肉瘤病毒致癌基因（KRAS）基因突變及臨床意義。方法? 收集2019年1月～2021年8月南陽醫(yī)專第一附屬醫(yī)院病理科因活檢穿刺、手術(shù)切除和會(huì)診的NSCLC標(biāo)本128份。用熒光PCR檢測(cè)腫瘤組織中EGFR、KRAS基因突變情況，并分析EGFR、KRAS現(xiàn)狀以及與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果? 128例NSCLC患者中檢出KRAS基因突變3例（占2.34%），其中G12A突變、外顯子3Q61H和2 G12C突變各1例;檢出EGFR基因突變43例（占33.59%），其中外顯子19突變占比最高（13例，占30.23%），其次為外顯子18突變（12例，占27.91%）和外顯子 20突變（7例，占16.28%）。不同臨床病理特征患者NKRAS基因突變發(fā)生率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。EGFR基因突變中，腺癌基因突變率較非腺癌高，女性基因突變率較男性高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;其余病理特征與EGFR基因突變無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論? NSCLC患者腫瘤組織中KRAS基因突變率較低，EGFR基因突變率較高且與患者病理類型、性別無關(guān)。

關(guān)鍵詞：非小細(xì)胞肺癌;鼠Kirsten肉瘤病毒致癌基因;表皮生長(zhǎng)因子受體;基因突變

中圖分類號(hào)：R36? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? 文章編號(hào)：1009-8011（2022）-3-0121-03

非小細(xì)胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）是肺癌常見類型之一，早期缺乏特異性癥狀，約60%患者確診時(shí)病情已進(jìn)展為晚期，盡管放、化療等綜合治療手段明顯改進(jìn)，但5年生存率仍不足20%[1-2]。近年來，分子靶向藥逐漸應(yīng)用于臨床，患者生存時(shí)間可獲得一定的延長(zhǎng)。表皮生長(zhǎng)因子受體（Epidermal growth factor receptor，EGFR）上外顯子18、19位點(diǎn)突變會(huì)對(duì)其三磷酸結(jié)構(gòu)造成不良影響，致使EGFR受體結(jié)合能力進(jìn)一步提高，提高免疫靶向治療效果，而20位點(diǎn)的突變可造成ATP結(jié)合酶活性改變，影響癌細(xì)胞攝取分子靶向藥物的能力，相應(yīng)提高癌細(xì)胞抵抗EGFR絡(luò)氨酸激酶抑制劑（EGFR-TKIs）的能力[3]。鼠類肉瘤病毒致癌基因（KRAS）突變可對(duì)下游GTP酶結(jié)合能力造成一定影響，干擾腫瘤信號(hào)通路激活，上皮細(xì)胞增殖能力明顯提高，影響免疫靶向療效[4]。本研究分析NSCLC患者腫瘤組織中KRAS、EGFR基因突變及臨床意義，為臨床靶向治療提供參考。報(bào)告如下。

1? 資料與方法

1.1 一般資料

收集2019年1月～2021年8月南陽醫(yī)專第一附屬醫(yī)院病理科因活檢穿刺、手術(shù)切除和會(huì)診的NSCLC標(biāo)本128份。其中，男性78例，女性50例;年齡28～79歲，平均年齡（58.65±2.14）歲;非腺癌31例，腺癌97例;有吸煙史67例，無吸煙史61例。

1.2 方法

上皮細(xì)胞以組織研磨法獲取，加入的細(xì)胞裂解液TRIZOL（生產(chǎn)企業(yè)：上海聯(lián)邁生物工程有限公司，批號(hào)：20181221），用LD5-2A型臺(tái)式低速離心機(jī)（生產(chǎn)企業(yè)：北京醫(yī)用離心機(jī)廠）以10 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min獲取上清液。在1 mL TRIZOL試劑裂解樣品內(nèi)加入0.2 mL三氯甲烷，用無酶的RNA沖洗液在4 ℃環(huán)境下洗滌，以10 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，獲取RNA。將逆轉(zhuǎn)錄酶加入后，孵育60 min，溫度為37 ℃，生成cDNA。上述操作完成后，實(shí)施PCR產(chǎn)物擴(kuò)增，設(shè)置反應(yīng)：2 min 93 ℃、1 min 93 ℃、2 min 55 ℃，RT-PCR循環(huán)共40個(gè)。在相應(yīng)的位點(diǎn)用mtltipical檢測(cè)試劑盒實(shí)施單堿基的序列檢測(cè)，購買于南京博奧生物檢測(cè)公司。用 ABI1310實(shí)施PCR跑膠電泳，用GENEMAPPER軟件實(shí)施對(duì)比分析，兩者均購自美國Life Technologies公司。

1.3 觀察指標(biāo)

①統(tǒng)計(jì)NSCLC患者腫瘤組織中KRAS、EGFR基因突變現(xiàn)狀。②分析NSCLC患者的EGFR、KRAS基因突變與其大體類型、性別、腫瘤直徑、分化程度、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、吸煙史及年齡等臨床病理特征間的關(guān)系。

1.4? 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用（x±s）表示，用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2? 結(jié)果

2.1? EGFR、KRAS基因突變情況

128例NSCLC患者中檢出3例（占2.34%）KRAS基因突變，其中G12A突變、外顯子3Q61H和2G12C突變各1例;檢出EGFR基因突變43例（占33.59%），其中外顯子19突變占比最高（13例，占30.23%），其次為外顯子18突變（12例，占27.91%）和外顯子 20突變（7例，占16.28%）。見表1。

2.2? NSCLC患者各臨床病理特征與EGFR、KRAS基因突變關(guān)系分析

不同臨床病理特征患者NKRAS基因突變發(fā)生率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。EGFR基因突變中，腺癌基因突變率較非腺癌高，女性基因突變率較男性高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;其余病理特征與EGFR基因突變無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

3? 討論

NSCLC發(fā)病率會(huì)受到多種病理因素影響，促使肺泡上皮細(xì)胞異常分裂而明顯升高，此類患者預(yù)后較差，5年生存率低[5]。目前，靶向性藥物逐漸被應(yīng)用于NSCLC的治療中，其與靶向性受體相結(jié)合而拮抗腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)增或增殖，使癌細(xì)胞DNA復(fù)制速度下降，提高整體治療效果[6]。但EGFR-TKIs治療后仍有部分患者會(huì)出現(xiàn)耐藥的情況，而EGFR外顯子基因突變直接影響其免疫靶向治療效果[7]。

EGFR屬于跨膜蛋白，當(dāng)其結(jié)合配體后會(huì)引起重要的構(gòu)象變化，受體內(nèi)的二聚環(huán)結(jié)構(gòu)顯露，引起自身磷酸化而對(duì)下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，影響癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移等病理過程[8]。EGFR突變點(diǎn)多位于細(xì)胞內(nèi)核轉(zhuǎn)錄區(qū)域的外顯子上，多位于18～24外顯子間，故EGFR的激活與耐藥突變也集中于該區(qū)域內(nèi)。本研究檢出43例EGFR基因突變，其中外顯子19突變占比最高，其次為外顯子18、20突變，提示對(duì)于此類患者使用免疫靶向治療敏感性較高;EGFR基因突變中，腺癌基因突變率較非腺癌高，女性基因突變率較男性高，提示女性、腺癌會(huì)影響EGFR基因，可能與女性體內(nèi)性激素、腺體內(nèi)細(xì)胞EGFR基因保守程度低有關(guān)，具體機(jī)制不十分清楚，仍需深入研究。

KRAS基因突變以位移突變和點(diǎn)突變有關(guān)，相應(yīng)突變位點(diǎn)改變會(huì)干擾GTP酶的結(jié)合，激活癌細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，降低靶向性藥物治療抵抗性[9]。本研究中，128例NSCLC患者中檢出KRAS基因突變3例，其中G12A突變、外顯子3Q61H和2G12C突變各1例，提示上述突變點(diǎn)可能會(huì)影響NSCLC病情。KRAS基因突變會(huì)影響腫瘤細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄基因活性，致使其自我擴(kuò)增干細(xì)胞特性改變，改變患者臨床結(jié)局。G12A或G12C改變可激活腫瘤細(xì)胞內(nèi)GTP依賴性蛋白激酶，進(jìn)一步提升三磷酸腺苷激活程度，增加癌細(xì)胞增殖與擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)，影響患者臨床結(jié)局。本研究結(jié)果顯示，KRAS基因突變與NSCLC患者各臨床病理特征無關(guān)，提示KRAS基因突變與患者臨床特征并無關(guān)系。

綜上所述，NSCLC患者腫瘤組織中KRAS基因突變率較低，EGFR基因突變率較高，且與患者病理類型、性別無關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1]王兆峰，許春偉，呂鏜烽，等.二代測(cè)序檢測(cè)在非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤組織中的分析應(yīng)用[J].臨床肺科雜志，2018，23（11）：1981-1984.

[2]胥京京，馮靖，曹潔.利用NSCLC患者ROSE細(xì)胞學(xué)制片進(jìn)行EGFR、KRAS、PIK3CA基因檢測(cè)可行性的研究[J].天津醫(yī)藥，2018，46（3）：268-272.

[3]王宇，于麗艷，方楠，等.中國人群非小細(xì)胞肺癌的基因突變情況及其靶向藥物的應(yīng)用[J].中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，2019，36（5）：424-428.

[4]潘長(zhǎng)芳，趙勝科，李洋，等.非小細(xì)胞肺癌藥物靶向位點(diǎn)的相關(guān)基因突變研究[J].海南醫(yī)學(xué)，2018，29（19）：2696-2698.

[5]王也，楊磊，于芳，等.非小細(xì)胞肺癌罕見驅(qū)動(dòng)基因突變特點(diǎn)及其與臨床病理特征的相關(guān)性[J].中日友好醫(yī)院學(xué)報(bào)，2020，34（4）：209-213，192.

[6]眭玉霞，鄧曉宇，伍錚，等.非小細(xì)胞肺癌驅(qū)動(dòng)基因突變與臨床病理特征的關(guān)系[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2020，36（9）：1023-1028.

[7]成瑤.NSCLC患者EGFR、ALK基因突變狀態(tài)、病理特征及與病情轉(zhuǎn)歸的關(guān)系分析[J].臨床研究，2021，29（5）：16-18.

[8]黃暉，李麗華，萬敏娜，等.非小細(xì)胞肺癌化療敏感性與EML4-ALK，EGFR，KRAS，c-MET基因狀態(tài)的關(guān)系[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2019，29（5）：59-64.

[9]高歌，鄧立力.非小細(xì)胞肺癌EGFR、KRAS、ALK基因突變與不同轉(zhuǎn)移器官分布的相關(guān)性研究進(jìn)展[J].中國肺癌雜志，2018，21（7）：536-542.