滇產(chǎn)頭頂一顆珠化學(xué)成分研究

吳安超 丁 雄 劉 錄 彭海燕 周志宏 楊竹雅*

1. 云南中醫(yī)藥大學(xué) 云南省高校中藥飲片工程研究中心，云南 昆明 650500；2. 云南省中醫(yī)醫(yī)院，云南 昆明 650100

頭頂一顆珠又名芋兒七、佛手七等，為百合科(Liliaceae)植物延齡草(TrilliumtschonoskiiMaxim.)的根莖[1]，是土家族民間使用的四大神藥之一[2]。其性溫，味甘、微辛，具有鎮(zhèn)靜、止痛、活血、止血的功效，主要用于治療眩暈頭痛，神經(jīng)衰弱，腰腿疼痛，部分少數(shù)民族地區(qū)用于治療月經(jīng)不調(diào)等婦科血癥疾病[3]。

百合科延齡草屬植物富含甾體皂苷，全世界約有50種，我國(guó)有3種，即延齡草(T.tschonoskiiMaxim.)、吉林延齡草(T.kamtschaticumPal1.)和西藏延齡草(T.govanianumWal1.)[4-5]。文獻(xiàn)報(bào)道表明[6-9]，其主成分包括延齡草皂苷、偏諾皂苷、薯蕷皂苷和克里托皂苷，尤其以偏諾皂苷含最高，值得深入研究及開發(fā)利用。云南為頭頂一顆珠藥材主產(chǎn)區(qū)之一[10]，但尚未發(fā)現(xiàn)滇產(chǎn)頭頂一顆珠的化學(xué)成分和相關(guān)藥理學(xué)研究報(bào)道。本文首次對(duì)滇產(chǎn)頭頂一顆珠藥材開展系統(tǒng)化學(xué)成分研究，為開發(fā)利用滇產(chǎn)藥材資源提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Bruker AM-400/AM-500 Spectrometer核磁共振儀；VG Autospec 3000 system spectrometer質(zhì)譜儀；高效液相色譜儀。

1.2 材料 反相ODS填料(Merck公司)；薄層色譜硅膠 H 和薄層色譜用硅膠板GF254(青島海洋化工廠)；10%硫酸乙醇溶液；所用試劑均為分析純。 試驗(yàn)用樣品于2018年9月采自云南華坪縣(栽培品)，由云南省藥物研究所趙仁主任藥師鑒定為百合科延齡草屬植物延齡草TrilliumtschonoskiiMaxin的干燥根莖。

2 提取分離

取20 kg干燥延齡草，經(jīng)適當(dāng)粉碎，用10倍量70%乙醇冷浸提取5次，36、24、24、12、12 h/次，合并提取液，減壓回流得總浸膏；浸膏加水10L，攪拌，靜置，過濾，沉淀用5 L水洗滌，干燥，得690 g(F1段)；洗滌液與濾液合并，經(jīng)大孔吸附樹脂柱吸附，先用水洗脫，再用95%乙醇洗脫3倍柱體積，洗脫液壓濃縮，得120 g(F2段)。

F2段用經(jīng)硅膠柱色譜，以三氯甲烷-甲醇(7∶1～1∶1)為溶劑洗脫，合并后得到3個(gè)部分。第1部分經(jīng)硅膠柱色譜(三氯甲烷-丙酮)、MCI(水-甲醇)和Sephadex LH-20(甲醇)純化得化合物2(3.9 g)和化合物3(0.6 g)；第2部分經(jīng)硅膠柱色譜(三氯甲烷-甲醇)、ODS(30%甲醇)反復(fù)純化得化合物4(130 mg)、化合物5(100 mg)和化合物6(95 mg)；第3部分經(jīng)硅膠柱色譜(三氯甲烷-丙酮)、MCI(甲醇-水)、ODS和Sephadex LH-20(40%甲醇)反復(fù)分離純化得化合物1(2.4 g)、化合物7(180 mg)。

F1段經(jīng)薄層色譜(TLC)分析，其主要成分為化合物1、2和3。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色針晶。ESI-MSm/z：737 [M-H]-，提示相對(duì)分子量為738。結(jié)合碳譜確定分子式為C39H62O13。1H-NMR(C5D5N，500 MHz)δ：0.67(3H，d，J=5.8 Hz，H-27)，0.93(3H，s，H-18)，1.08(3H，s，H-19)，1.22(3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，5.26(1H，brd，J=5.0 Hz，H-6)，1.76(3H，d，J=6.2 Hz，2′-O-Rha-H-6)，4.98(1H，brd，Glc-H-1)，6.37(1H，brd，2′-O-Rha-H-1)。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，化合物1鑒定為(25S)-偏諾皂苷元-3-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物2：白色針晶。ESI-MSm/z：1030，結(jié)合碳譜確定分子式為C51H82O21。1H-NMR(C5D5N，500 MHz)δ：0.68(3H，d，J=5.4 Hz，H-27)，0.95(3H，s，H-18)，1.07(3H，s，H-19)，1.22(3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，5.29(1H，brd，J=3.8 Hz，H-6)，1.58(3H，d，J=5.6 Hz，4″-O-Rha-H-6)1.75(3H，d，J=6.2 Hz，2′-O-Rha-H-6)，1.61(3H，d，J=6.5 Hz，4′-O-Rha-H-6)，4.84(1H，brd，Glc-H-1)，5.82(1H，brd，2′-O-Rha-H-1)，6.38(1H，brd，4′-O-Rha-H-1)，7.05(1H，brd，4″-O-Rha-H-1)。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12-13]報(bào)道基本一致，化合物2鑒定為偏諾皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-O-α-L-吡喃鼠李糖基- [O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物3：白色針晶。ESI-MSm/z：883[M-H]-，提示相對(duì)分子量為884。結(jié)合碳譜確定分子式為C45H72O17。1H-NMR(C5D5N，500 MHz)δ：0.67(3H，d，J=5.3 Hz，H-27)，0.95(3H，s，H-18)，1.07(3H，s，H-19)，1.22(3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，5.28(1H，brd，J=4.2 Hz，H-6)，1.75(3H，d，J=6.1 Hz，2′-O-Rha-H-6)，1.62(3H，d，J=6.1 Hz，4′-O-Rha-H-6)，4.82(1H，brd，Glc-H-1)，5.85(1H，brd，2′-O-Rha-H-1)，6.39(1H，brd，4′-O-Rha-H-1)。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，化合物3鑒定為偏諾皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物4：白色針晶。ESI-MSm/z：899 [M-H]-，提示相對(duì)分子量為900。結(jié)合碳譜確定分子式為C45H72O18。1H-NMR(C5D5N，500 MHz)δ：0.68(3H，d，J=5.6 Hz，H-27)，0.94(3H，s，H-18)，1.07(3H，s，H-19)，1.22(3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，5.26(1H，brd，J=4.3 Hz，H-6)，1.76(3H，d，J=6.1 Hz，2′-O-Rha-H-6)，4.92(1H，brd，Glc-H-1)，6.32(1H，brd，2′-O-Rha-H-1)，5.05(1H，brd，6′-O-Glc-H-1)。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，化合物4鑒定為偏諾皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖基-(1→6)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物5：白色針晶。ESI-MSm/z：899 [M-H]-，提示相對(duì)分子量為900。結(jié)合碳譜確定分子式為C45H72O18。1H-NMR(C5D5N，500 MHz)δ：0.94(3H，s，H-18)，1.07(3H，s，H-19)，1.22(3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，5.30(1H，brs，H-6)，1.78(3H，m，2′-O-Rha-H-6)，1.57(3H，m，4′-O-Rha-H-6)，4.81(1H，brd，Glc-H-1)，5.83(1H，brd，2′-O-Rha-H-1)，6.37(1H，brd，4′-O-Rha-H-1)。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道基本一致，化合物5鑒定為27-羥基-偏諾皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物6：白色針晶。ESI-MSm/z：915[M-H]-，提示相對(duì)分子量為916。結(jié)合碳譜確定分子式為C45H72O19。1H-NMR(C5D5N，500 MHz)δ：0.95(3H，s，H-18)，1.06(3H，s，H-19)，1.27(3H，d，J=6.5 Hz，H-21)，5.28(1H，brs，H-6)，1.74(3H，d，J=5.2 Hz，2′-O-Rha-H-6)，1.62(3H，d，J=5.2 Hz，4′-O-Rha-H-6)，4.82(1H，brd，Glc-H-1)，5.85(1H，brd，2′-O-Rha-H-1)，6.38(1H，brd，4′-O-Rha-H-1)。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道基本一致，化合物6鑒定為(24S，25S)-23，27-二羥基-偏諾皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物7：白色針晶。ESI-MSm/z：915[M-H]-，提示相對(duì)分子量為916。結(jié)合碳譜確定分子式為C45H72O19。1H-NMR(C5D5N，500 MHz)δ：1.01(3H，s，H-18)，1.14(3H，s，H-19)，1.26(3H，d，J=7.3 Hz，H-21)，5.26(1H，brs，H-6)，1.74(3H，d，J=6.2 Hz，2′-O-Rha-H-6)，1.62(3H，d，J=6.1 Hz，4′-O-Rha-H-6)，4.82(1H，brd，Glc-H-1)，5.84(1H，brd，2′-O-Rha-H-1)，6.38(1H，brd，4′-O-Rha-H-1)。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道基本一致，化合物7鑒定為(24R，25R)-24，27-二羥基-偏諾皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷。

續(xù)表1

4 結(jié)論

本研究從滇產(chǎn)頭頂一顆珠藥材中分離得到了7個(gè)化合物，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為：偏諾皂苷元-3-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷(1)，偏諾皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-O-α-L-吡喃鼠李糖基- [O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷(2)，偏諾皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷(3)，偏諾皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖基-(1→6)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷(4)，27-羥基-偏諾皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷(5)，(24S，25S)-23，27-二羥基-偏諾皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷(6)，(24R，25R)-24，27-二羥基-偏諾皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷(7)，以上所有化合物均為偏諾甾體皂苷。

天然來源的甾體皂苷具有縮宮止血活性，常用于婦科血癥的治療。研究[15]表明，甾體皂苷中具縮宮止血藥效的主要為17位羥基取代的偏諾皂苷元類型皂苷。以重樓為原料制備的宮血寧膠囊主要有效成分就是偏諾皂苷。但重樓中的主成分為薯蕷皂苷元類型皂苷，偏諾皂苷含量并不高，同時(shí)，重樓生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，資源再生能力弱，價(jià)格逐年增加，成本問題嚴(yán)重制約了宮血寧膠囊市場(chǎng)應(yīng)用及推廣。目前從頭頂一顆珠中分離得到的化合物約90個(gè)，以甾體皂苷為主，包括延齡草皂苷、偏諾皂苷、薯蕷皂苷和克里托皂苷等，尤其以偏諾皂苷含最高，此外還含有黃酮苷、倍半萜苷、苯丙素苷、多糖等[2]，值得深入研究及開發(fā)利用。

云南為頭頂一顆珠主產(chǎn)區(qū)之一，本課題通過對(duì)滇產(chǎn)頭頂一顆珠的化學(xué)成分開展研究，發(fā)現(xiàn)其中所含甾體皂苷類化合物均為偏諾甾體皂苷，目前尚未分離得到其他類型甾體皂苷，這一研究結(jié)果為獲得高純度天然偏諾皂苷資源提供了簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的新途徑。