蒸參水中化學(xué)成分的含量測定

邊東,武子敬,劉雪坤,姚慧敏,劉成琳*

（通化師范學(xué)院·吉林通化·134002）

人參為五加科植物人參Panaxginsing C.A.Meyer的干燥根和根莖，主要分布在我國長白山地區(qū)，味甘、微苦、性平，歸脾、肺、心經(jīng)，具有大補(bǔ)元?dú)?、?fù)脈固脫、補(bǔ)脾益肺、生津養(yǎng)血、安神益智等功效，能治療勞傷虛損、食少、倦怠、虛咳喘促、自汗暴脫、久虛不復(fù)等一切氣血津液不足之證[1-3]。由于人參具有較好的補(bǔ)益和適原性作用，所以人們在日常生活使用頻率非常高，自古以來被人們稱為佳品，享有“百草之王”的美稱[2]。

近年來，人參的加工品也相繼的走進(jìn)了大眾視野。人參的加工品主要有紅參和黑參，與人參的功效性相比它們更側(cè)重于補(bǔ)益作用，臨床中，當(dāng)方劑中的人參側(cè)重補(bǔ)益作用時(shí)常常更換成紅參和黑參，而且可直接當(dāng)作保健品使用[4]。目前，紅參和黑參的加工方式常采用加水蒸制的方式，加工后蒸制人參的水（以下簡稱蒸參水）屬于副產(chǎn)物，長期一直被藥企以工業(yè)廢水直接處理[4-5]。但經(jīng)實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)蒸參水顏色呈暗黃色，渾濁、略粘稠，味道與人參水提取液較為相似，故推測蒸參水與人參成分相似[6]。查閱大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，人參中主要的化學(xué)成分為多糖和皂苷類，因此本次實(shí)驗(yàn)主要采用紫外分光光度法檢測蒸參水是否含有多糖與皂苷類成分，目前關(guān)于人參多糖、總皂苷的檢測大部分采用了高效液相色譜法進(jìn)行檢測，但此方法操作復(fù)雜，檢測時(shí)間較長，檢測成本也非常高，紫外可見分光光度計(jì)法測定法測定人參總皂苷含量分析最簡便，且重現(xiàn)性最好，因此，本次實(shí)驗(yàn)采用紫外可見分光度儀測定蒸參水中多糖和總皂苷的含量[7-9]。

我國為人參主產(chǎn)國，已有5000年以上的應(yīng)用史，人參已被列為國家一級保護(hù)植物，在長白山等自然保護(hù)區(qū)已進(jìn)行保護(hù)，為了能讓人參資源得到充分利用，在未來還需進(jìn)一步系統(tǒng)研究蒸參水中有效成分和含量以及進(jìn)行一系列的對比研究，借此研究還可能發(fā)現(xiàn)新的活性成分。擴(kuò)大人參資源的利用不但有理論意義而且還有重要的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益，其開發(fā)利用市場前景廣闊[2]。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器和試劑

1.1.1 材料

人參（Panaxginsing C.A.Meyer）；人參皂苷Rg1、Re、Rb1（均購買于四川維克生物科技有限公司）。

1.1.2 試劑

甲醇（色譜純）；乙腈（色譜純德國Merck公司）；磷酸（天津大茂化學(xué)試劑廠）娃哈哈純凈水。

1.1.3 儀器

島津LC-2010HT高效液相色譜儀，包含LCsolution化學(xué)工作站、VWD檢測器、自動進(jìn)樣器(日本島津有限公司)；精密電子天平(天津天馬恒基儀器有限公司)；SG3300H超聲波清洗器(上海冠特超聲儀器有限公司)；循環(huán)水式真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 對照品的制備

1.2.1.1 人參多糖的對照品制備

取適量葡萄糖置烘箱中105℃干燥，多次稱重直至恒重時(shí)取出。精密稱定1.09mg，用水定容至10 mL，即得無水葡萄糖溶液（0.109 mg·mL-1）。

1.2.1.2 人參總皂苷對照品制備

精密稱取對照品人參皂苷Re 10.09 mg，加甲醇并轉(zhuǎn)移10 mL容量瓶中定容至刻度，即得人參總皂苷對照品溶液（1.009mg·mL-1）。

1.2.2 樣品溶液的制備

1.2.2.1 蒸參水溶液的制備

精密稱取人參100g,放入蒸鍋中，加水量為5L,蒸制溫度為100攝氏度隔水蒸制6 h，將得到的蒸參水減壓濃縮后置容量瓶中，加水定容至50 mL，即得蒸參水溶液（1g·g-1生藥量）。

1.2.2.2 蒸參水中多糖供試品溶液的制備

取上述蒸參水溶液5 mL，加入乙醇使其含醇量達(dá)到80%，放4℃冰箱保存12 h，取出用布氏漏斗進(jìn)行抽濾，重復(fù)三次，將三次共得到的沉淀物放入烘箱中干燥，加適量水溶解，搖勻，置100 mL容量瓶中定容至刻度，備用，即得蒸參水多糖樣品溶液。

1.2.2.3 蒸參水中總皂苷供試品溶液的制備

將上述去除多糖后的濾液回收，減壓濃縮至50 mL，通過D101大孔吸附樹脂，水沖洗至無醇味，再用8倍量60%乙醇沖洗，收集流出液，揮干試劑并放入烘箱中干燥即得蒸參水中總皂苷。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取無水葡萄糖對照品溶液100、150、200、250和300μL、人參多糖樣品溶液1mL，置具塞試管中加蒸餾水至2 mL，加入1 mL 4%苯酚溶液，搖勻后加5 mL濃硫酸，不斷振搖，直到試管中溶液澄清不渾濁，迅速放入100℃沸水浴中10 min，取出放冰水中，冷卻至常溫。以相應(yīng)試劑作為空白，采用紫外-可見分光光度儀在484 nm處掃描，即可。

1.3.2 總皂苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取人參總皂苷對照品溶液100、140、180、220和260 μL和人參總皂苷樣品溶液500 μL，置具塞試管中，低溫?fù)]去溶劑后，加1%香草醛高氯酸溶液0.5 mL，置60℃恒溫水浴上充分混勻后加熱15 min，取出，立即將具塞試管放入冰水中2 min，最后加濃度為77%硫酸溶液5 mL，搖勻；消除氣泡后，以相應(yīng)的試劑作為空白，利用紫外-可見分光光度儀在480 nm處掃描，即可。

1.3.3 蒸參水中多糖溶液檢測

精密吸取蒸參水多糖溶液供試品溶液1mL，按“1.3.1”項(xiàng)下方法，在484 nm處測定吸光度。

1.3.4 蒸參水中皂苷的檢測

精密吸取蒸參水中總皂苷供試品溶液200μL，按“1.3.2”項(xiàng)下方法，在480 nm處測定吸光度。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2.1.1 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

以多糖對照品進(jìn)樣量(μg·ml-1)為橫坐標(biāo)(X)吸光度為做坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行回歸得到標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.1803X+0.0176，R2=0.9992，多糖濃度18.31-54.93 μg·ml-1處吸收良好，結(jié)果如圖1。

2.1.2 總皂苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

以人參皂苷Re進(jìn)樣量(μg·ml-1)為橫坐標(biāo)(X)吸光度為做坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行回歸得到標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.1803X+0.0176，R2=0.9998，總皂苷Re濃度在1.29-3.95 μg·ml-1處吸收良好，結(jié)果如圖2。

2.2 蒸參水中多糖的含量測定

經(jīng)“1.3.3”項(xiàng)下方法測定蒸參水多糖吸光度為0.56，表明蒸參水中含有多糖成分，經(jīng)人參多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算可得每毫升蒸參水中含有12.08 mg多糖。

2.3 蒸參水中皂苷類成分測定

經(jīng)“1.3.3”項(xiàng)下方法測定蒸參水皂苷樣品吸光度為0.47，表明蒸參水中含有皂苷類成分，經(jīng)人參總皂苷標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算可得每毫升蒸參水中含有2.77 mg的皂苷類成分。

3 討論

蒸參水的生產(chǎn)形成工藝特點(diǎn)決定其多為水溶性成分，因此針對其某些化學(xué)成分的分離制備存在一定的困難[11]。至今末見對其人參皂苷類單體成分分離制備方面的相關(guān)研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)收集蒸參水，減壓濃縮至一定濃度，加入適量乙醇得到沉淀的多糖部分，將蒸參水中乙醇揮發(fā)，并用水飽和正丁醇萃取得到皂苷部分，最后采用紫外可見分光光度法檢測多糖與皂苷類成分。通過上述方法成功分離測定出蒸參水中的多糖和皂苷類成分。蒸參水是人參加工過程中的副產(chǎn)品，含有人參中的活性成分。蒸參水的有效利用可以大大降低資源的浪費(fèi)，為人參擴(kuò)大用藥范圍提供證據(jù)，豐富了人參的用藥資源。