重金屬鎘、鋅、鉻對(duì)翹嘴鲌幼魚急性與聯(lián)合毒性效應(yīng)試驗(yàn)

母紅霞，李 蕾

(遼寧工程技術(shù)大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院，遼寧 阜新123000)

重金屬鎘(Cd)、鋅(Zn)、鉻(Cr)是水環(huán)境中的廣泛污染物。這些重金屬的存在對(duì)環(huán)境和生物均具有巨大的風(fēng)險(xiǎn)和危害[1-4]。生物監(jiān)測(cè)能綜合反映環(huán)境污染狀況，可連續(xù)監(jiān)測(cè)、發(fā)現(xiàn)早期環(huán)境污染且靈敏度高，同時(shí)其結(jié)果還是檢驗(yàn)經(jīng)去污處理后的水體適宜水生物生存最直接和有效的指標(biāo)。魚類是水生態(tài)系統(tǒng)中的頂級(jí)捕食者，相比于其他低等水生生物，其對(duì)污染物毒性的富集更明顯。幼魚屬于魚類個(gè)體發(fā)育的早期階段，在這一階段中其對(duì)各種污染物的耐受力相對(duì)有限，因此將幼魚作為急性毒性試驗(yàn)動(dòng)物具有快速、靈敏、經(jīng)濟(jì)有效等特點(diǎn)，而急性毒性試驗(yàn)是生物測(cè)試保護(hù)天然水體的重要方法[5]。吳建紹等[6]利用高錳酸鉀等6種藥物對(duì)雙斑東方鲀(Fugubimaculatus)幼魚開展急性毒性試驗(yàn)，評(píng)價(jià)了幼魚藥物耐受能力的強(qiáng)弱，同時(shí)得到藥物安全使用的控制量值。

翹嘴鲌(CulteralburnusBasilewsky)是我國重要的經(jīng)濟(jì)魚類，地理分布廣泛，漁獲量大[7]。因此選擇翹嘴鲌進(jìn)行毒性試驗(yàn)，具有廣泛代表性，研究結(jié)果可以推廣至全國多數(shù)河流湖泊等水體。近年來，國內(nèi)外不少學(xué)者研究重金屬對(duì)水生生物的毒性作用，如賈秀英等[8]研究了Cd和鉻(Cr，VI)單一及復(fù)合污染對(duì)鯽(Carassiusauratus)機(jī)體組織過氫化物酶同工酶的影響；趙守城[9]研究了鎘離子(Cd2+)、鉻離子(Cr2+)對(duì)大型水蚤(Daphniamagna)毒性的協(xié)同作用；Xu X M等[10]研究了鉛和百草枯對(duì)金魚(Carassiusauratus)肝臟解毒酶的聯(lián)合毒性。關(guān)于重金屬對(duì)魚類的影響大多集中于重金屬在魚體內(nèi)的富集累積、遷移轉(zhuǎn)運(yùn)等方面，為更加完善地保護(hù)水域環(huán)境、治理水體污染、保證水產(chǎn)品質(zhì)量安全，仍需有針對(duì)性的毒性試驗(yàn)來進(jìn)行效應(yīng)評(píng)估。本文通過研究重金屬Cd、Zn、Cr對(duì)翹嘴鲌幼魚的單一及聯(lián)合毒性效應(yīng)，運(yùn)用生物監(jiān)測(cè)手段對(duì)水體的健康狀況進(jìn)行評(píng)價(jià)，以期得到水體廣泛污染物對(duì)主要經(jīng)濟(jì)魚類的安全濃度，為制定有害化學(xué)物質(zhì)在水中的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)及漁業(yè)用水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)提供量化依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用魚

以翹嘴鲌為受試生物，選取1 200尾幼魚[平均體長為(3.6±0.5)cm，體重(0.42±0.16)g]，在實(shí)驗(yàn)室水族箱中以試驗(yàn)條件馴養(yǎng)7 d，適當(dāng)投餌，并定期換水，保證水質(zhì)條件良好。馴養(yǎng)期間需保證翹嘴鲌幼魚活動(dòng)正常，體表無傷，死亡率低于5%。選用身體健康、反應(yīng)靈敏、大小基本一致的幼魚隨機(jī)分組，進(jìn)行毒性試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)條件

試驗(yàn)用水為曝氣3 d以上的自來水，溶解氧(DO)大于7 mg/L，pH 6.7～8.5，水體總硬度為2.2度(德國度)。試驗(yàn)期間水溫保持(22±1)℃。試驗(yàn)容器為30 cm×25 cm×20 cm的玻璃水缸，試驗(yàn)缸中總水量為10 L，加水高度約為14.3 cm。每1個(gè)單一試驗(yàn)小組(最小單元)使用上述試驗(yàn)容器1套。

1.3 試驗(yàn)試劑

氯化鎘(CdCl2)、硫酸鋅(ZnSO4)、重鉻酸鉀(K2Cr2O7)均為分析純，分別為毒性試驗(yàn)提供重金屬離子Cd2+、鋅離子(Zn2+)和Cr6+。

1.4 單一急性毒性試驗(yàn)

采用靜水生物測(cè)試法[11]進(jìn)行單一急性毒性試驗(yàn)。為確定Cd2+、Zn2+和Cr6+對(duì)所選取的特定體長、體重的翹嘴鲌幼魚作用的適當(dāng)質(zhì)量濃度，先預(yù)試驗(yàn)，確定濃度范圍。當(dāng)觀察到魚體呈仰翻或側(cè)傾姿勢(shì)漂浮于水面，喪失主動(dòng)游動(dòng)能力，且針刺無反應(yīng)時(shí)，即判斷為魚體死亡[12]。

依據(jù)預(yù)試驗(yàn)的試驗(yàn)結(jié)果，單一急性毒性試驗(yàn)按等比級(jí)數(shù)設(shè)置系列質(zhì)量濃度組。其中，水體中的金屬離子濃度Cd2+為0、5.00、6.58、8.65、11.38、15.00 mg/L；Zn2+為0、20.00、25.20、31.70、39.90、50.00 mg/L；Cr6+為0、20.00、24.50、30.00、36.70、45.00 mg/L。濃度為0的組為空白對(duì)照組，每個(gè)質(zhì)量濃度組設(shè)3個(gè)平行[13]。每1個(gè)單一試驗(yàn)平行小組(最小單元)投放翹嘴鲌幼魚10尾，進(jìn)行毒性試驗(yàn)。在試驗(yàn)開始的0～8 h內(nèi)連續(xù)觀察翹嘴鲌幼魚的呼吸狀態(tài)、魚體傾角、游動(dòng)行為等反應(yīng)。記錄各組翹嘴鲌幼魚24 h、48 h、72 h和96 h的存活率，計(jì)算得到3種金屬離子對(duì)翹嘴鲌幼魚的半數(shù)致死濃度(LC50)和安全濃度。

1.5 聯(lián)合毒性作用試驗(yàn)

將3種金屬離子兩兩組合，進(jìn)行3組聯(lián)合毒性試驗(yàn)。關(guān)于聯(lián)合毒性藥物的配比方法，修瑞琴等[14]提出按單一毒性最終LC50值進(jìn)行毒性1∶1配比或質(zhì)量濃度1∶1配比。因此本試驗(yàn)的聯(lián)合毒性藥物采用單一毒性最終時(shí)長LC50進(jìn)行毒性1∶1配比，即每一種重金屬96 h LC50的1/16、1/8、1/4、1/2和1。

1.6 數(shù)據(jù)處理

1.6.1 半數(shù)致死濃度(LC50)

在試驗(yàn)毒物各濃度狀態(tài)下，將不同時(shí)長毒物處理后翹嘴鲌幼魚的剩余數(shù)量，轉(zhuǎn)換成存活率：

用24、48、72、96 h的試驗(yàn)魚存活率對(duì)濃度作圖，選用存活率50%相鄰的兩個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)應(yīng)用直線內(nèi)插法[11]，求出每種金屬離子在不同時(shí)間下的半數(shù)致死濃度(LC50)。

1.6.2 安全濃度

計(jì)算安全濃度(SC)的方法有兩種，分別是公式Ⅰ：SCⅠ=48 h LC50×0.3/(24 h LC50×48 h LC50)2和公式Ⅱ：SCⅡ=96 h LC50×0.1。這兩種計(jì)算安全濃度的方法都具有一定的科學(xué)依據(jù)，但在數(shù)值上，SCⅠ≈3×SCⅡ。相較于SCⅠ，SCⅡ在判定毒物的毒性上更為嚴(yán)格和安全。因此，本試驗(yàn)采取公式Ⅱ計(jì)算安全濃度。

1.6.3 聯(lián)合毒性評(píng)價(jià)

運(yùn)用水生毒理聯(lián)合效應(yīng)Marking指數(shù)相加法[14]評(píng)價(jià)聯(lián)合毒性。

S=(AmBm/An)+(AmBm/Bn)

(1)

式(1)中：A、B 為二種不同毒物；An、Bn分別為A、B二種毒物單獨(dú)作用時(shí)的LC50值；AmBm為A、B二種毒物聯(lián)合作用時(shí)的LC50值。

用加和指數(shù)AI值判定多種毒物共同發(fā)揮作用時(shí)所產(chǎn)生的效應(yīng)。由毒物單獨(dú)作用、聯(lián)合作用時(shí)的LC50值，依式(1)計(jì)算得到S值。當(dāng)S≤1時(shí)，AI=1/S-1；當(dāng)S>1時(shí)，AI=1-S。由S值計(jì)算得到AI值，并依據(jù)AI值判定聯(lián)合毒性效應(yīng)。若AI>0，則表明多種毒物聯(lián)合的效應(yīng)為協(xié)同作用；AI<0時(shí)表明毒物聯(lián)合效應(yīng)為拮抗作用；AI=0則表明毒物聯(lián)合效應(yīng)為相加作用。

2 結(jié)果

2.1 單一急性毒性

2.1.1 幼魚中毒癥狀

圖1所示為翹嘴鲌幼魚受重金屬離子Cd2+、Zn2+、Cr6+脅迫中毒與自然死亡的癥狀對(duì)比。

如圖1所示，死亡魚體表面均有明顯傷口。體表傷口差別顯著：自然死亡的魚體傷口沒有顏色；鎘中毒死亡魚體體表傷口為黑色；鋅中毒死亡魚體全身白色且內(nèi)臟從傷口處可見；鉻中毒魚體傷口為紅色，全身部分充血。

1)鎘：Cd2+對(duì)翹嘴鲌幼魚的毒性作用較慢。當(dāng)幼魚放入試驗(yàn)水體時(shí)，其游動(dòng)速度略有加快；較短時(shí)間后濃度低于8.65 mg/L的3個(gè)試驗(yàn)組內(nèi)的幼魚活動(dòng)均趨于平靜。8 h后11.38 mg/L試驗(yàn)組中的幼魚開始出現(xiàn)不適癥狀，游動(dòng)失去平衡并且開始出現(xiàn)死亡。死亡個(gè)體體表出現(xiàn)較大區(qū)域破潰傷口，傷口顏色呈黑色，體表腐爛，附有白色沉淀物。

2)鋅：翹嘴鲌幼魚的Zn2+中毒癥狀，以濃度25.20 mg/L試驗(yàn)組為例：4 h后部分幼魚體表開始出現(xiàn)破潰星點(diǎn)，但仍可生存、無死亡。隨時(shí)間推移，幼魚出現(xiàn)興奮狀態(tài)，急躁不安，游動(dòng)加快，于上下不同水層之間急速竄動(dòng)，并且伴有撞壁和側(cè)翻表現(xiàn)；24 h后游動(dòng)十分緩慢，出現(xiàn)個(gè)體死亡；48 h后幼魚基本不游動(dòng)，80%試驗(yàn)幼魚體表分泌大量黏液，以魚鰭和魚尾最為嚴(yán)重，黏膜遭到破壞，鰓有腐蝕，體表附著棉絮狀白色物質(zhì)；96 h后絕大部分幼魚體表充血，并且水體表面附著油狀薄膜物質(zhì)，透明度降低，水體發(fā)臭。

3)鉻：Cr6+對(duì)翹嘴鲌幼魚的毒性作用較快，在濃度36.7 mg/L試驗(yàn)組中，處理20 min后部分幼魚體表分泌黏性物質(zhì)；而在最大濃度45.0 mg/L組內(nèi)的幼魚，初期即出現(xiàn)狂躁興奮、加速游動(dòng)等表現(xiàn)，短時(shí)間內(nèi)開始失去平衡、打轉(zhuǎn)、痙攣；Cr6+處理1 h開始出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，死亡個(gè)體頭部、尾部明顯發(fā)黑，呈現(xiàn)彎曲體狀。

2.1.2 系列濃度下的幼魚存活率

由系列濃度在不同時(shí)間下的存活率結(jié)果如圖2～4所示。由圖2可知，當(dāng)Cd2+為5.00 mg/L時(shí)，各個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)幼魚總體維持較高的存活率，均≥70%；隨著試驗(yàn)濃度的逐步提高，濃度自6.58 mg/L 升至11.38 mg/L區(qū)間范圍，試驗(yàn)幼魚存活率開始呈現(xiàn)急速下降；當(dāng)Cd2+達(dá)到15.0 mg/L時(shí)，24 h和48 h時(shí)幼魚存活率已分別降至20%和10%的極低水平，72 h時(shí)全部死亡。

注：0為對(duì)照組。下圖同此。Notes：0 was control group.The same as below.

從圖3可見，當(dāng)Zn2+為低濃度20.00 mg/L時(shí)，各個(gè)時(shí)間點(diǎn)存活率相對(duì)較高，均≥65%；在20.20 mg/L、31.70 mg/L兩濃度組區(qū)間，24 h和48 h的存活率下降較平緩，而毒物脅迫時(shí)長在72 h及以上時(shí)出現(xiàn)陡降。在Zn2+為50.00 mg/L時(shí)，試驗(yàn)開始短時(shí)間內(nèi)即出現(xiàn)大量死亡；未達(dá)72 h已無一存活。

圖4所示，當(dāng)Cr6+為20.00 mg/L時(shí)，試驗(yàn)全程至96 h均有絕大多數(shù)的幼魚存活，存活率≥85%；隨著試驗(yàn)濃度的逐步提高，在24.50 ～36.70 mg/L濃度范圍內(nèi)試驗(yàn)幼魚存活率驟降，其中以30.00 mg/L、36.70 mg/L兩組表現(xiàn)最為劇烈；當(dāng)Cr6+達(dá)到45.00 mg/L時(shí)，24 h和48 h時(shí)幼魚存活率已分別降至20%、5%，未及72 h存活率均為0%。

2.1.3 LC50及安全濃度

使用直線內(nèi)插法，分別計(jì)算單一急性毒性3種金屬離子對(duì)翹嘴鲌幼魚的24 h、48 h、72 h和96 h的半數(shù)致死濃度(LC50)，再用公式Ⅱ：SC=96 h LC50×0.1計(jì)算出安全濃度，結(jié)果如表1所示。由圖2～4及表1可得，Cd2+的24 h、48 h、72 h和96 h的LC50分別為12.29、9.56、7.41、6.05 mg/L；Zn2+的24 h、48 h、72 h和96 h的LC50分別為41.92、34.43、27.37、22.23 mg/L；Cr6+的24 h、48 h、72 h和96 h的LC50分別為39.47、32.68、27.25、25.72 mg/L。3種重金屬對(duì)翹嘴鲌幼魚的安全濃度分別為0.605、2.223、2.572 mg/L。

表1 Cd2+，Zn2+和Cr6+對(duì)翹嘴鲌單一毒性試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Single toxicity experiment results of Cd2+，Zn2+and Cr6+

2.2 聯(lián)合毒性

2.2.1 過程觀察

觀察聯(lián)合毒性試驗(yàn)過程，在Cd2+/Zn2+、Zn2+/Cr6+、Cd2+/Cr6+三種組合的毒物脅迫條件下，毒物處理4 h后，[Cd2+(1.51 mg/L)/Zn2+(5.56 mg/L)]共同作用下的翹嘴鲌幼魚開始出現(xiàn)死亡；在連續(xù)觀察8 h后， [Zn2+(2.78 mg/L)/ Cr6+(3.22 mg/L)]、[Cd2+(1.51 mg/L)/ Cr6+(6.43 mg/L)]試驗(yàn)組中的翹嘴鲌幼魚也開始出現(xiàn)死亡。而脅迫濃度較低的[Cd2+(0.38 mg/L)/Zn2+(1.39 mg/L)]、[Cd2+(0.76 mg/L)/Zn2+(2.78 mg/L)]、[Zn2+(1.39 mg/L)/ Cr6+(1.61 mg/L)]、[Cd2+(0.38 mg/L)/ Cr6+(1.61 mg/L)]、[Cd2+(0.76 mg/L)/ Cr6+(3.22 mg/L)]試驗(yàn)組幼魚在經(jīng)20 h以上毒物聯(lián)合作用后開始表現(xiàn)出身體傾斜、游動(dòng)失去平衡等中毒現(xiàn)象，但存活率普遍維持在較高水平，均高于60%。

2.2.2 存活率

隨著各金屬離子濃度的升高和重金屬脅迫時(shí)間的不斷推移，每二者組合對(duì)翹嘴鲌幼魚的聯(lián)合毒性逐漸增強(qiáng)，尤以Zn2+/Cr6+聯(lián)合中的兩高濃度組[Zn2+(11.12 mg/L)/ Cr6+(12.86 mg/L)]、[Zn2+(22.23 mg/L)/ Cr6+(25.72 mg/L)]和Cd2+/Zn2+聯(lián)合中的最高濃度組 [Cd2+(6.05 mg/L)/Zn2+(22.23 mg/L)]最為劇烈；這一規(guī)律可以從幼魚存活率顯著降低得到直觀表現(xiàn)(表2)。

表2 Cd2+，Zn2+和Cr6+對(duì)翹嘴鲌聯(lián)合毒性下的存活率Tab.2 Survival rate of larva under the Cd2+，Zn2+and Cr6+ joint toxicity

2.2.3 半數(shù)致死濃度(LC50)

隨著聯(lián)合試驗(yàn)時(shí)間的延長，各組合的聯(lián)合毒性不斷增強(qiáng)，LC50下降趨勢(shì)明顯(表3)。 Cd2+/Zn2+聯(lián)合作用時(shí)，自24 h至48 h，LC50微幅下降；48 h至96 h之間，LC50表現(xiàn)出規(guī)律性的近半跌幅。Zn2+/Cr6+聯(lián)合作用時(shí)，自24 h至72 h，LC50呈現(xiàn)出隨時(shí)間推移的均勻降低；72 h至96 h，降幅趨緩，變動(dòng)不大。Cd2+/Cr6+聯(lián)合作用下，自24 h至48 h，LC50出現(xiàn)接近減半的陡降；自48 h至72 h，LC50降幅極小；而自72 h至96 h，LC50值再次出現(xiàn)降幅超過一半的大幅降低。

表3 聯(lián)合毒性半數(shù)致死濃度Tab.3 Each LC50 of Cd2+，Zn2+，Cr6+ in joint toxicity test

2.2.4 聯(lián)合作用

根據(jù)表2、表3數(shù)據(jù)，運(yùn)用水生毒理聯(lián)合效應(yīng)Marking指數(shù)相加法[14]，進(jìn)行3種重金屬兩兩組合的聯(lián)合毒性效應(yīng)評(píng)價(jià)(表4)。由表4可知，Cd2+/Zn2+、Zn2+/Cr6+、Cd2+/Cr6+共存24 h、48 h、72 h、96 h的AI值均大于0，指征各組合的聯(lián)合毒性均表現(xiàn)為協(xié)同作用，即2種重金屬離子共存時(shí)毒性明顯加強(qiáng)。該結(jié)論不僅從計(jì)算出的AI值上得以判斷，而且對(duì)比表1與表3中的LC50也可知，在聯(lián)合作用下每種金屬離子的LC50相較于單獨(dú)毒性均出現(xiàn)大幅下降。毒物水平遠(yuǎn)低于單一脅迫時(shí)的 LC50(表1)即導(dǎo)致試驗(yàn)幼魚半數(shù)死亡，表明聯(lián)合毒性增強(qiáng)。

表4 三種重金屬兩兩聯(lián)合毒性評(píng)價(jià)Tab.4 Joint toxicity effect of the Cd2+/Zn2+/Cr6+

3 討論

3.1 單一急性毒性

根據(jù)魚類急性中毒試驗(yàn)的96 h LC50，可以將有毒物質(zhì)對(duì)魚類的毒性作用分為4級(jí)[11]，分別為劇毒(有毒物質(zhì)的質(zhì)量濃度< 0.1 mg/L)、高毒(0.1～1.0 mg/L)、中毒(1.0～10.0 mg/L)、低毒(>10.0 mg/L)。我國GB 11607—1989《漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)》對(duì)Cd、Zn、Cr的最高容許質(zhì)量濃度分別為0.005 mg/L、0.1 mg/L、0.1 mg/L。

鎘：Cd是一種對(duì)動(dòng)物體毒性較強(qiáng)的重金屬。關(guān)于其強(qiáng)毒機(jī)理，Pragati N K等[15]的最新動(dòng)物試驗(yàn)表明，膳食鎘通過誘導(dǎo)生物體血細(xì)胞凋亡，從而降低血細(xì)胞水平。本試驗(yàn)測(cè)得Cd2+的24 h、48 h、72 h和96 h的LC50分別為12.29、9.56、7.41、6.05 mg/L；安全質(zhì)量濃度為0.605 mg/L，高于我國漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)毒性標(biāo)準(zhǔn)，判斷Cd2+對(duì)于翹嘴鲌幼魚屬中毒物質(zhì)。根據(jù)曾艷藝等[16]開展的Cd2+對(duì)珠江水域天然仔魚及幼魚的毒性效應(yīng)及其潛在生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，Cd2+對(duì)赤眼鱒(Squaliobarbuscurriculus)仔魚(48 h)、鲴(Xenocyprissp.)仔魚(48 h)、廣東魴(Megalobramaterminalis)幼魚(96 h)的LC50分別為1.29、0.83、3.20 mg/L，安全濃度分別為0.163、0.077、0.320 mg/L，均顯著低于本試驗(yàn)得到的LC50和安全濃度，說明受試對(duì)象翹嘴鲌幼魚相較于廣東魴幼魚等對(duì)Cd2+的耐受能力更強(qiáng)。

鋅：Zn是動(dòng)物體的必需微量元素，但過量的鋅則會(huì)對(duì)機(jī)體造成危害。為探究Zn對(duì)魚類的致毒機(jī)理，Si L F等[17]研究環(huán)境中Zn2+對(duì)斑馬魚的非免疫性滯后影響，揭示出Zn2+通過參與酶組成以及改變非酶分子的形態(tài)作用于魚體免疫代謝。本試驗(yàn)得到Zn2+的24 h、48 h、72 h和96 h的LC50分別為41.92、34.43、27.37、22.23 mg/L，判定為低毒物質(zhì)，翹嘴鲌幼魚對(duì)Zn2+的耐受性較強(qiáng)，安全濃度為2.223 mg/L，高于我國漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)。王瑞龍等[18]在對(duì)唐魚(Tanichthysalbonubes)的急性毒性及安全濃度評(píng)價(jià)研究中，得到Zn2+對(duì)唐魚的24、48、72、96 h的LC50分別為35.43、26.53、20.66、16.30 mg/L，低于本試驗(yàn)得到的LC50，可見翹嘴鲌對(duì)Zn2+擁有更高的耐受性。

鉻：本研究中，Cr6+中毒死亡幼魚普遍呈現(xiàn)魚體彎曲、頭尾發(fā)黑明顯。這一突出現(xiàn)象與陳細(xì)香等[19]解剖Cr6+中毒死亡的黃鱔(MonopterusalbusZuieuw)所述現(xiàn)象一致，該研究發(fā)現(xiàn)遍布魚體最突出的癥狀表現(xiàn)為淤血，集中部位包括鰓絲、各鰭、腸壁和內(nèi)臟。 目前普遍認(rèn)為Cr6+引起其他生物中毒的機(jī)制是導(dǎo)致蛋白變性，使酶失活，從而干擾代謝[20]。Elena V N等[21]通過對(duì)廢水營養(yǎng)物質(zhì)回收流入海水養(yǎng)殖設(shè)施的試驗(yàn)，證實(shí)Cr6+對(duì)水生生物的毒性普遍較小。這與本試驗(yàn)所得翹嘴鲌對(duì)Cr6+的耐受性較高的結(jié)論相符合。本試驗(yàn)中Cr6+的24 h、48 h、72 h和96 h的LC50分別為39.47、32.68、27.25、25.72 mg/L，安全濃度達(dá)2.572 mg/L，高于我國漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)。吳賢漢等[22]對(duì)青島文昌魚(Branchiostomatsingdauertse)進(jìn)行毒性與生長關(guān)系的研究，發(fā)現(xiàn)微量的Cr6+能夠促進(jìn)魚類的生長發(fā)育。劉銀華等[23]的研究也表明，Cr6+對(duì)黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)屬低毒物質(zhì)，黃顙魚“全雄1號(hào)”苗種24、48、72、96 h的 LC50分別為168.71、84.85、52.23、34.46 mg/L，安全濃度達(dá)3.446 mg/L，其耐受性高于本試驗(yàn)受試對(duì)象翹嘴鲌幼魚。

本試驗(yàn)的3種重金屬中，Cd2+對(duì)翹嘴鲌的致死毒性最大，毒性大小順序依次為Cd2+> Zn2+> Cr6+。吳賢漢等[22]、李健[24]的研究證明，該毒性規(guī)律也出現(xiàn)于青島文昌魚、南方鲇(SilurusmeridionalisChen)中。同時(shí)，也有研究表明，魚類在不同生長階段對(duì)重金屬的毒性反應(yīng)并不一致。如吳玉霖等[25]證明重金屬對(duì)牙鲆胚胎毒性順序依次為Cu2+> Zn2+> Cd2+> Cr6+，對(duì)牙鲆幼魚毒性大小的順序?yàn)镃u2+> Cd2+> Zn2+> Cr6。

3.2 聯(lián)合毒性評(píng)價(jià)

Zn2+/Cr6+共存時(shí)的AI值大于Cd2+/Zn2+共存、Cd2+/Cr6+共存，說明Zn2+/Cr6+共存時(shí)的協(xié)同作用較其他兩組更加明顯。這一點(diǎn)從該組試驗(yàn)魚存活率較之另兩組明顯下降中得到直觀驗(yàn)證。張?jiān)讫埖萚26]對(duì)鯽仔魚的研究得出同樣的結(jié)論，Zn2+/Cr6+二種離子共存時(shí)毒性明顯加強(qiáng)。Cd2+/Cr6+共存時(shí)的AI值大于0，聯(lián)合毒性表現(xiàn)為協(xié)同作用，這與王少博等[27]對(duì)草魚苗的毒性試驗(yàn)結(jié)論相同，即Cd2+/Cr6+共同作用比二者各自毒性的簡(jiǎn)單加和更強(qiáng)烈。

關(guān)于如何評(píng)價(jià)混合物質(zhì)的聯(lián)合毒性，Eaton J G[28]在1973年利用Cd與Zn的混合溶液進(jìn)行毒性試驗(yàn)，提出多種毒物共存的聯(lián)合毒性作用復(fù)雜，不能采用單獨(dú)毒性直接加和的方法評(píng)價(jià)。Speher R L等[29]通過對(duì)美國旗魚(Jordanellafloridiae)的研究，進(jìn)一步證實(shí)Cd、Zn共同作用下的聯(lián)合毒性遠(yuǎn)大于二者單獨(dú)毒性的相加之和。陳亮等[30]經(jīng)過研究也得到重金屬在聯(lián)合作用時(shí)能夠表現(xiàn)出不同的毒性影響的結(jié)論。而國際上并沒有統(tǒng)一的聯(lián)合毒性藥物的配比方法標(biāo)準(zhǔn)，修瑞琴等[14]提出按單一毒性最終時(shí)長LC50值進(jìn)行毒性1∶1或質(zhì)量濃度1∶1最為簡(jiǎn)便，這亦是本試驗(yàn)所采用的毒性1∶1的試驗(yàn)方法。

本試驗(yàn)研究結(jié)果對(duì)漁業(yè)用水水質(zhì)環(huán)境中廣布類重金屬的安全性評(píng)價(jià)具有一定的指導(dǎo)意義，同時(shí)也可為毒理學(xué)研究提供基礎(chǔ)依據(jù)。毒性效應(yīng)影響因素多，包括溫度、鹽度、pH值、有機(jī)質(zhì)等理化因素，而在實(shí)際魚類生存環(huán)境評(píng)價(jià)中更需要綜合考慮影響因素，并科學(xué)合理地制定相關(guān)建議方法。加之多種物質(zhì)混合后的機(jī)理復(fù)雜，往往呈現(xiàn)出多元綜合效應(yīng)，這為今后進(jìn)一步探究提供新方向。