飼養(yǎng)密度對網(wǎng)上墊料養(yǎng)殖番鴨血清生化指標(biāo)、抗氧化指標(biāo)及免疫相關(guān)指標(biāo)的影響

劉珍妮，雷小文*，劉瑞平，鐘云平，陳 強(qiáng)，謝華亮

（1.贛州市畜牧水產(chǎn)研究所，贛南科學(xué)院，江西贛州 341401；2.南康區(qū)畜牧水產(chǎn)局，江西贛州 341400）

我國番鴨養(yǎng)殖發(fā)展迅猛，自《畜禽規(guī)模養(yǎng)殖污染防治條例》《水污染防治行動計(jì)劃》實(shí)施后，番鴨養(yǎng)殖模式相應(yīng)地轉(zhuǎn)變?yōu)榫W(wǎng)上平養(yǎng)。然而，網(wǎng)上平養(yǎng)模式下番鴨糞便中有機(jī)物含量高，含水量大，無法及時(shí)清理。鴨糞中的有機(jī)質(zhì)變質(zhì)，孳生病菌，產(chǎn)生氨氣等有害氣體，易導(dǎo)致番鴨免疫力下降，誘發(fā)疾病。本研究中的網(wǎng)上墊料養(yǎng)殖模式是在塑料網(wǎng)上鋪設(shè)遮陽網(wǎng)，將墊料置于遮陽網(wǎng)上，利用木屑的吸水性和谷殼的透氣性，使過量的水分滲透至地面，停留在墊料上方的糞便保持干爽、透氣，進(jìn)而營造舒適的生活環(huán)境，這既能緩解目前養(yǎng)殖環(huán)保壓力，又保障了番鴨的健康福利，具有較好的研究與推廣價(jià)值。飼養(yǎng)密度一直是現(xiàn)代集約化養(yǎng)鴨生產(chǎn)關(guān)注的問題之一。Yang等報(bào)道，低密度飼養(yǎng)不利于禽舍設(shè)施的有效利用，高密度飼養(yǎng)雖然能夠提高禽肉產(chǎn)量，但對家禽福利、疫病防治等帶來諸多負(fù)面影響。張璐爽等研究表明，高密度養(yǎng)殖導(dǎo)致北京鴨出現(xiàn)免疫代償性反應(yīng)，還提高其氧化應(yīng)激反應(yīng)水平。為此，本研究首次探討了不同飼養(yǎng)密度對番鴨的血清生化指標(biāo)、抗氧化指標(biāo)及其他免疫相關(guān)指標(biāo)的影響，以期為合理制定網(wǎng)上墊料養(yǎng)殖番鴨方案與提高番鴨健康福利奠定理論和科學(xué)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 黑羽番鴨苗羽購自莆田溫氏家禽有限公司；墊料原料（木屑/谷殼=1/1）為贛州畜牧研究所制備和保存；華衛(wèi)德朗DR-200BS酶標(biāo)分析儀購于無錫華衛(wèi)德朗儀器有限公司；邁瑞B(yǎng)S-420全自動分析儀購于深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司。

1.2 試驗(yàn)鴨舍 鴨舍為封閉式，頂部起脊，屋面鋼構(gòu)、南北墻開窗，網(wǎng)床結(jié)構(gòu)，網(wǎng)床離地 1.0 m，是網(wǎng)眼大小為 2.0～2.2 cm的塑料網(wǎng)。在同一幢鴨舍內(nèi)按圖1（右側(cè)）設(shè)置圍欄，每個(gè)圈舍3 m，為1個(gè)重復(fù)，每組設(shè)6個(gè)重復(fù)，在網(wǎng)片上放置遮陽網(wǎng)，將墊料平鋪于遮陽網(wǎng)上。墊料為谷殼與木屑1:1均勻混合而組成，厚度為1.5～3.0 cm。具體的試驗(yàn)鴨舍示意結(jié)構(gòu)圖見圖1。

圖1 網(wǎng)上墊料養(yǎng)殖模式鴨舍立面結(jié)構(gòu)圖（左）和每組試驗(yàn)鴨舍舍內(nèi)分布（右）

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選取720只體重接近、健康狀態(tài)良好的14日齡番鴨，采取單因子設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，分為5組，分別為低密度I組、低密度II組、正常密度組、高密度I組以及高密度II組，這5組在3～6周齡的飼養(yǎng)密度分別為6、7、8、9、10羽/m，番鴨體積會隨日齡增長而呈現(xiàn)出大幅度增加，因此7～10周齡的飼養(yǎng)密度分別下調(diào)為2、3、4、5、6羽/m。每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)3 m。預(yù)試期1周，正試期7周。番鴨飼養(yǎng)至10周齡，利用促凝管從番鴨翅靜脈采血，將分離的血清儲存于4，以用于接下來的試驗(yàn)。

1.4 檢測指標(biāo)及方法

1.4.1 血清生化指標(biāo) 參照Zhang等的步驟和方法將分離的血清以日立7600全自動生化分析儀檢測。檢測指標(biāo)包括總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、白球比（A/G）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、AST/ALT，堿性磷酸酶（ALP）、尿素（UREA）、肌酐（CRE）、尿酸（UA）、乳酸脫氫酶（LDH）、甘油三酯（TG）、膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）。

1.4.2 抗氧化指標(biāo)檢測 總抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、過氧化氫酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）均采用化學(xué)比色法進(jìn)行檢測，測定步驟均按試劑盒說明書進(jìn)行，試劑盒均購自北京華英生物有限公司，試驗(yàn)數(shù)據(jù)通過全自動生化儀讀取。

1.4.3 免疫相關(guān)指標(biāo)檢測 血清中IgM、IgG采用免疫比濁法測定，步驟均按試劑盒說明書進(jìn)行。白細(xì)胞介素2（IL-2）、白細(xì)胞介素6（IL-6）、腫瘤壞死因子（TNF-）、白細(xì)胞介素17（IL-17）采用酶聯(lián)免疫吸附測定試驗(yàn)。試劑盒均購自北京華英生物有限公司，試驗(yàn)數(shù)據(jù)通過酶標(biāo)分析儀讀取。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 采用Graphpad prism 6.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，用LSD多重比較法比較組間差異，結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。<0.05代表差異顯著，<0.01代表差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 飼養(yǎng)密度對網(wǎng)上墊料養(yǎng)殖番鴨血清生化指標(biāo)的影響如表1所示，高密度II組的CRE水平低于正常密度組和低密度II組（<0.05），其余血清生化指標(biāo)差異均不顯著。

表1 不同飼養(yǎng)密度組番鴨血清生化指標(biāo)的變化

2.2 飼養(yǎng)密度對網(wǎng)上墊料養(yǎng)殖番鴨抗氧化指標(biāo)的影響如表2所示，各試驗(yàn)組的T-AOC、CAT、GSH-Px水平隨著飼養(yǎng)密度的升高而降低，MDA水平隨著飼養(yǎng)密度的升高而升高。與正常密度組相比，低密度I組的CAT水平升高（<0.01），而高密度II組的SOD、CAT和GSH-Px水平降低（<0.01），低密度I組的MDA水平降低（<0.01），而高密度II組的MDA水平升高（<0.01）。

表2 不同飼養(yǎng)密度下番鴨抗氧化指標(biāo)的變化

2.3 飼養(yǎng)密度對網(wǎng)上墊料養(yǎng)殖番鴨免疫相關(guān)指標(biāo)的影響 如表3所示，各試驗(yàn)組的IgM和IgG水平隨飼養(yǎng)密度的升高而降低，IL-2、IL-6、TNF-α及IL-17水平隨著飼養(yǎng)密度的升高而升高。與正常密度組相比，低密度I組的IgM和IgG水平升高（<0.01），而高密度II組的IgM和IgG水平降低（<0.01）；低密度I組的IL-2、IL-6及TNF-α水平降低（<0.01），而高密度I組、高密度II組的IL-2、IL-6及TNF-α水平升高（<0.01），高密度II組的IL-17升高（<0.01）。

表3 不同飼養(yǎng)密度下番鴨免疫相關(guān)指標(biāo)的變化

3 討 論

3.1 飼養(yǎng)密度對番鴨血清生化指標(biāo)的影響 血液承擔(dān)著機(jī)體營養(yǎng)物質(zhì)及代謝產(chǎn)物的運(yùn)輸、維持機(jī)體內(nèi)外環(huán)境平衡以及免疫防御等功能，也是調(diào)節(jié)機(jī)體代謝的主要途徑，血液成份或循環(huán)出現(xiàn)問題時(shí)，可導(dǎo)致下游組織功能障礙，因此血液生化指標(biāo)的變化可以反映機(jī)體組織器官的生理病理狀態(tài)。肌肉中的肌酸主要通過不可逆的非酶脫水反應(yīng)緩緩地形成CRE，再釋放到血液中，隨尿排泄。因此，血清CRE水平降低可以用來預(yù)示體內(nèi)肌肉總量的下降。李娜等報(bào)道，高密度飼養(yǎng)降低了番鴨的胸肌重和腿肌重，影響了番鴨的產(chǎn)肉性能。本研究中高密度II組血清CRE水平的顯著下降與高飼養(yǎng)密度所導(dǎo)致的家禽產(chǎn)肉性能下降有著密切關(guān)系。由上可知，網(wǎng)上墊料養(yǎng)殖模式下，當(dāng)3～6周齡飼養(yǎng)密度為10羽/m，7～10周齡為6羽/m時(shí)，可能導(dǎo)致番鴨體內(nèi)肌肉總量下降，并引起CRE水平顯著下降，不適用于番鴨健康養(yǎng)殖，可選擇高密度I組（3～6周齡飼養(yǎng)密度為9羽/m，7～10周齡為5羽/m）用于網(wǎng)上墊料養(yǎng)殖。

3.2 飼養(yǎng)密度對番鴨抗氧化指標(biāo)的影響 T-AOC水平下降表明機(jī)體整體抗氧化能力降低。機(jī)體總抗氧化能力降低常常導(dǎo)致各種疾病的產(chǎn)生。本試驗(yàn)中，當(dāng)3～6周齡飼養(yǎng)密度從8羽/m上升為9、10羽/m，而7～10周齡從4羽/m上升為5、6羽/m時(shí)，番鴨的T-AOC水平降低，但差異不顯著，表明網(wǎng)上墊料養(yǎng)殖模式下，一定范圍內(nèi)提高飼養(yǎng)密度不會導(dǎo)致番鴨的氧化應(yīng)激，對其機(jī)體健康有一定的保障作用。MDA是脂質(zhì)過氧化終末產(chǎn)物，MDA含量可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化自由基的存在及細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化的程度，間接反映出細(xì)胞損傷的程度。邢媛媛等研究報(bào)道，高密度飼養(yǎng)容易導(dǎo)致氧化應(yīng)激和細(xì)胞損傷。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常密度組（3～6周齡密度為8羽/m，7～10周齡為4羽/m）相比，高密度II組的MDA水平極顯著升高，導(dǎo)致番鴨體內(nèi)細(xì)胞損傷，與上述報(bào)道研究結(jié)果一致。這可能是由于過高密度養(yǎng)殖限制了畜禽活動空間，增加了畜禽氧化應(yīng)激等問題，最終影響畜禽機(jī)體健康。

SOD是動物體內(nèi)清除自由基的第一道防線，其能將超氧陰離子自由基O快速轉(zhuǎn)化為分子氧和過氧化氫；GSH-Px和CAT是動物體內(nèi)清除自由基的第二道防線，過氧化氫在其作用下轉(zhuǎn)化為水和氧氣。劉硯涵等研究表明，高飼養(yǎng)密度會降低肉禽血清SOD、CAT和GSH-Px活性，與本試驗(yàn)結(jié)果一致。本試驗(yàn)中，高密度II組的SOD、CAT和GSH-Px水平極顯著低于正常密度組。該結(jié)果說明飼養(yǎng)密度增大刺激了番鴨間的斗爭行為或熱應(yīng)激，導(dǎo)致番鴨產(chǎn)生過多的自由基消耗，進(jìn)而降低番鴨體內(nèi)抗氧保護(hù)機(jī)制，使其抗氧化能力受到抑制。同時(shí)，高密度飼養(yǎng)勢必會引起欄舍內(nèi)二氧化碳、氨氣等有害氣體濃度的升高，進(jìn)而使機(jī)體中活性氧（ROS）和活性氮（RNS）等活性分子過度生成或清除減少，致使機(jī)體氧化還原態(tài)遭到破壞，機(jī)體的抗氧化能力受到破壞。

3.3 飼養(yǎng)密度對番鴨免疫相關(guān)指標(biāo)的影響 IgM和IgG是體液免疫的主要物質(zhì)，其在血清中的濃度可衡量機(jī)體的免疫功能。本研究結(jié)果顯示，飼養(yǎng)密度升高導(dǎo)致IgM和IgG濃度降低，且高密度II組的IgM和IgG濃度顯著低于正常密度組。由此可知，當(dāng)3～6周齡飼養(yǎng)密度為10羽/m，3～7周齡為6羽/m時(shí)，番鴨免疫力顯著下降，該飼養(yǎng)密度不利于番鴨的健康與福利。此外，高密度飼養(yǎng)會增加家禽間的爭斗，容易造成應(yīng)激。而氧化應(yīng)激產(chǎn)生的ROS和RNS信號分子能激活NF-B通路。NF-B通路既可調(diào)控免疫相關(guān)基因的表達(dá)，也能調(diào)控IL-2、IL-6、TNF-和IL-17等促炎因子，這些因子既可以介導(dǎo)應(yīng)激性損傷，也會隨著其分泌量的增加，加速機(jī)體炎癥反應(yīng)的發(fā)生，最終損傷組織。凡文磊等研究表明，高密度飼養(yǎng)引起的環(huán)境應(yīng)激可以誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，進(jìn)而引起促炎性因子分泌增加。本試驗(yàn)結(jié)果也顯示，隨著飼養(yǎng)密度升高，血清IL-2、IL-6、TNF-和IL-17濃度逐步上升，且高密度II組均極顯著高于正常密度組。高密度II組的促炎細(xì)胞因子濃度過高可能會引起番鴨發(fā)熱、炎癥、組織損傷、休克甚至死亡等，這可能是本研究中番鴨血清IgM和IgG濃度降低引起番鴨免疫功能下降的原因之一。綜上，高密度飼養(yǎng)導(dǎo)致番鴨免疫功能降低，炎癥水平升高，影響番鴨生長。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在網(wǎng)上墊料養(yǎng)殖模式下，飼養(yǎng)密度升高一定程度上會降低番鴨的抗氧化能力和免疫水平。然而，當(dāng)3～6周齡飼養(yǎng)密度提高至9羽/m，7～10周齡提高至5羽/m時(shí)，番鴨抗氧化能力不受影響，保持較好的健康水平，經(jīng)濟(jì)效益和番鴨福利得到一定保障；而3～6 周齡飼養(yǎng)密度提高至10羽/m，7～10周齡提高至6羽/m時(shí)，則影響番鴨抗氧化能力和免疫水平，不利于番鴨健康。