農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)及關(guān)鍵環(huán)節(jié)控制探討

姜 琴

（翼城縣綜合檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山西 翼城 043500）

我國(guó)是人口大國(guó)，對(duì)農(nóng)業(yè)產(chǎn)品的需求量較多，為了全面提高農(nóng)業(yè)生產(chǎn)效率，我國(guó)加大投入力度，研制了先進(jìn)的生產(chǎn)技術(shù)，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，使用大量的農(nóng)藥，能有效地預(yù)防病蟲(chóng)害，但農(nóng)藥在使用中也存在一些問(wèn)題。如果不能科學(xué)地使用，會(huì)導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留超標(biāo)，人類(lèi)食用后會(huì)出現(xiàn)健康問(wèn)題。為了保證人們健康，需要科學(xué)用好檢測(cè)技術(shù)，有效進(jìn)行農(nóng)藥殘留問(wèn)題檢測(cè)，避免不合格農(nóng)產(chǎn)品流入市場(chǎng)。

1 農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用

1.1 農(nóng)藥殘留定性檢測(cè)技術(shù)

1.1.1 酶抑制率法

酶抑制率法主要是利用酶與農(nóng)藥能夠發(fā)生高效反應(yīng)的原理，通過(guò)出現(xiàn)的具體現(xiàn)象，判斷農(nóng)產(chǎn)品中是否有農(nóng)藥殘留。該技術(shù)操作簡(jiǎn)單便捷、靈敏、成本低，在對(duì)果蔬中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速定性初篩檢測(cè)中有著廣泛地應(yīng)用，并有著良好的效果[1]。但該技術(shù)對(duì)酶試劑要求高，必須要全面保證酶試劑活性達(dá)標(biāo)才能檢測(cè)出殘留情況，保證數(shù)據(jù)準(zhǔn)確真實(shí)。

1.1.2 膠體金免疫層析法

膠體金免疫層析法是利用膠體金免疫測(cè)試紙來(lái)完成的檢測(cè)技術(shù)，通過(guò)技術(shù)分析，能夠全面檢測(cè)出農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留物質(zhì)的成分與數(shù)量[2]。進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)人員要使用試紙，并對(duì)試紙抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行全面的分析，從而判斷用藥殘留的情況，得到相關(guān)的數(shù)據(jù)，以此評(píng)估農(nóng)業(yè)產(chǎn)品的質(zhì)量。這項(xiàng)技術(shù)操作簡(jiǎn)便，利用試紙進(jìn)行檢測(cè)，不需要復(fù)雜的設(shè)備與儀器，只需檢測(cè)人員將一部分農(nóng)產(chǎn)品樣品放到試紙中，待5min 后就能獲知該農(nóng)藥類(lèi)別與數(shù)量，有效提取殘留物情況。

1.2 農(nóng)藥殘留定量檢測(cè)技術(shù)

1.2.1 氣相色譜法

氣相色譜法是用氣體作為流動(dòng)相，利用物質(zhì)的沸點(diǎn)、極性及吸附性質(zhì)的差異來(lái)實(shí)現(xiàn)混合物的分離。根據(jù)出峰時(shí)間和順序，峰的高低和面積大小，可對(duì)化合物進(jìn)行定量分析。由于樣品在氣相中傳遞速度快，因此樣品組分在流動(dòng)相和固定相之間可以瞬間地達(dá)到平衡。氣相色譜法是一個(gè)分析速度快和分離效率高的分離分析方法。近年來(lái)采用高靈敏選擇性檢測(cè)器，使得它又具有分析靈敏度高、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，可進(jìn)行有機(jī)磷、有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥殘留分析，但一般不適用現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。

1.2.2 高效液相色譜法

高效液相色譜法以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析[3]。使用C18柱配合柱后衍生裝置可用于熱穩(wěn)定性較差的氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。

1.2.3 色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

質(zhì)譜是根據(jù)各組分電離生成的離子的荷質(zhì)比不同，而進(jìn)行分析確定物質(zhì)質(zhì)量的儀器方法。質(zhì)譜法已成為農(nóng)藥殘留分析的常用方法。目前，檢測(cè)機(jī)構(gòu)多是使用色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方式，有效發(fā)揮了色譜和質(zhì)譜雙重特性的優(yōu)勢(shì)，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析，大大提高了檢測(cè)的靈敏性和準(zhǔn)確性[4]。

2 農(nóng)藥殘留檢測(cè)樣品前處理過(guò)程控制

2.1 待測(cè)樣品的制備和保存

農(nóng)產(chǎn)品不能全部進(jìn)行檢測(cè)，要根據(jù)國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)取可食部位，切成小塊，充分混勻，采用四分法分取600g 左右樣品，放入粉碎機(jī)中粉碎。對(duì)于桃、杏等核果類(lèi)水果，稱(chēng)取樣品總質(zhì)量后，去除果核，并稱(chēng)取果核總質(zhì)量，果肉切成小塊混勻，四分法分取600g 左右樣品，放入粉碎機(jī)中粉碎，計(jì)算果肉率的公式為：果肉率=（樣品總質(zhì)量-果核總質(zhì)量）÷樣品總質(zhì)量。制備好的樣品按每份200g 左右，分裝入潔凈容器，密封并加以標(biāo)識(shí)。如果樣品是冷凍品，則需要重新打碎或等試樣完全融化充分?jǐn)噭蚝蟛拍芊Q(chēng)取，對(duì)于需要解凍的樣品要快速檢測(cè)，不能出現(xiàn)反復(fù)凍融的情況。為了保證檢測(cè)效果，每制備完一個(gè)樣品，應(yīng)及時(shí)清洗用于攪碎和切碎的工具，避免樣品污染。鮮樣制備后若當(dāng)日內(nèi)檢測(cè)，可冷藏保存。不能立即檢測(cè)的試樣應(yīng)置于-16℃～-20℃冷凍保存。

2.2 待測(cè)樣品的提取

實(shí)驗(yàn)室一般使用乙腈作為提取劑，采用勻漿法提取樣品。若使用高速勻漿機(jī)提取，提取2min 左右，此時(shí)提取液達(dá)到固液平衡狀態(tài)，若再延長(zhǎng)時(shí)間可能會(huì)加大色素、果膠等物質(zhì)的溶出，基質(zhì)效應(yīng)增大，影響檢測(cè)結(jié)果。應(yīng)同時(shí)進(jìn)行樣品空白、質(zhì)控樣品與樣品提取，按順序勻漿樣品空白、樣品和質(zhì)控樣品，其間一定要做好勻漿機(jī)的清理，避免交叉污染。過(guò)濾時(shí)，應(yīng)將濾紙和漏斗貼緊，用玻璃棒引流，確保濾液能順利收集。

2.3 鹽析

鹽析能促進(jìn)乙腈和水相的分離，提高提取效果。一定要確保氯化鈉是干燥的，氯化鈉的用量控制在5g～7g 之間，當(dāng)樣品水分少時(shí)加入5g 左右氯化鈉，樣品水分多時(shí)加入7g 左右，要保證能形成過(guò)飽和溶液。按照標(biāo)準(zhǔn)要求劇烈震搖1min，若振搖力度過(guò)小，乙腈與溶液分離效果不佳。振搖后，靜置30min 以上，使水相和乙腈相完全分開(kāi)。過(guò)短或過(guò)長(zhǎng)均影響回收率，如時(shí)間過(guò)短，提取樣里含有水分，恒溫氮吹過(guò)程中受到影響；若發(fā)生乳化現(xiàn)象，需進(jìn)行離心或加少量水靜置，確保乙腈和水相完全分離。此外要控制加鹽順序，一定要在加入乙腈充分勻漿后再添加干燥的氯化鈉。

2.4 濃縮

提取完成后，需要進(jìn)一步濃縮。也可以使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法來(lái)進(jìn)行濃縮。準(zhǔn)確吸取一定體積的乙腈溶液，若用氮?dú)猓諝猓┝鞔嫡魰r(shí)，水浴溫度應(yīng)保持在45℃以下，氮吹管不能太靠近液面，氮?dú)饬鞑豢商?，以液面微微抖?dòng)為宜，不可吹干，否則農(nóng)藥易分解，造成回收率偏低。吹至近干后從水浴鍋取出，自然晾干。能看到燒杯底部濕潤(rùn)但無(wú)液體流動(dòng)便是盡干狀態(tài)；使用旋轉(zhuǎn)蒸儀濃縮時(shí)，液體體積應(yīng)小于濃縮瓶體積的1/3，防止產(chǎn)生爆沸，水浴溫度應(yīng)在40℃左右，同時(shí)配合使用冷凝回流裝置，以減少濃縮過(guò)程的損失。將吹至近干的樣品加入正己烷或乙酸乙酯后混勻，待凈化。

2.5 凈化

濃縮后的有機(jī)磷樣品過(guò)0.2μm 的濾膜后即可上機(jī)檢測(cè)，而有機(jī)氯類(lèi)樣品還需要進(jìn)一步通過(guò)弗羅里矽柱進(jìn)行凈化。凈化可以除去樣品基質(zhì)的雜質(zhì)，減少基質(zhì)效應(yīng)。弗羅里矽柱應(yīng)先用乙酸乙酯和正己烷的混合液預(yù)淋洗，當(dāng)淋洗液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即倒入待凈化溶液，流速控制在50 滴/min 為宜，當(dāng)待凈化液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，及時(shí)用乙酸乙酯和正己烷的混合液洗脫弗羅里矽柱，整個(gè)過(guò)程要防止出現(xiàn)干柱現(xiàn)象，否則會(huì)降低回收率；如果出現(xiàn)干柱現(xiàn)象，應(yīng)進(jìn)行重新凈化。也可以選擇QuEChERS 提取法，購(gòu)買(mǎi)針對(duì)不同基質(zhì)的凈化包，更便捷，效率更高[5]。凈化完成后，用45℃氮吹至近干，正己烷定容混勻后，即可上機(jī)檢測(cè)。

3 農(nóng)藥殘留檢測(cè)環(huán)節(jié)控制和優(yōu)化

3.1 基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)對(duì)檢測(cè)過(guò)程有顯著的干擾，并影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。在氣相色譜分析中，大多數(shù)農(nóng)藥表現(xiàn)出不同程度的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。而在液質(zhì)分析中，常見(jiàn)的是離子減弱效應(yīng)，因此在檢測(cè)過(guò)程中，應(yīng)關(guān)注基質(zhì)效應(yīng)。有的樣品如韭菜在勻漿提取過(guò)程中，其特有的蒜氨酸、酶會(huì)發(fā)生變化產(chǎn)生與目標(biāo)農(nóng)藥相似的物質(zhì)，而十字花科類(lèi)如結(jié)球甘藍(lán)等含有的硫氰化合物與部分有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥也容易產(chǎn)生基質(zhì)干擾，依靠?jī)艋ê茈y除去，容易產(chǎn)生回收率高甚至超標(biāo)的風(fēng)險(xiǎn)。要消除基質(zhì)效應(yīng)，應(yīng)使用不含待測(cè)物的基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液來(lái)進(jìn)行校準(zhǔn)，使標(biāo)樣中的基質(zhì)環(huán)境與樣品中的相同或相近。建議對(duì)果蔬產(chǎn)品分類(lèi)檢測(cè)，每類(lèi)一個(gè)基質(zhì)標(biāo)樣。

3.2 試劑耗材

嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)的要求購(gòu)置試劑耗材，檢測(cè)使用相關(guān)試劑應(yīng)符合要求，重要的試劑要進(jìn)行實(shí)際驗(yàn)證，證明其不影響檢測(cè)結(jié)果后方可投入使用。試劑配制過(guò)程中所使用的移液槍、移液管都應(yīng)檢定校準(zhǔn)合格后，方可使用，并且要及時(shí)更換槍頭，清潔移液管和相關(guān)器皿，防止造成交叉污染。

3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液和校準(zhǔn)曲線

對(duì)于農(nóng)藥殘留檢測(cè)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。要嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，使用有證且在有效期內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，進(jìn)行逐級(jí)稀釋配制。為了保證使用效果，配制好的標(biāo)準(zhǔn)溶液要在使用前查看有效期，確保所使用的標(biāo)準(zhǔn)溶液符合要求。對(duì)于新配置的標(biāo)準(zhǔn)溶液要對(duì)首次測(cè)定圖譜進(jìn)行保存，按期對(duì)其進(jìn)行期間核查，在相同條件下與原圖譜進(jìn)行比較，若圖譜響應(yīng)值偏差超過(guò)20%，應(yīng)重新配制新的標(biāo)準(zhǔn)溶液。上機(jī)的標(biāo)準(zhǔn)工作液應(yīng)臨用現(xiàn)配，以確保濃度的準(zhǔn)確性。在使用基質(zhì)標(biāo)進(jìn)行單點(diǎn)定量時(shí)，基質(zhì)標(biāo)濃度一定要和樣品濃度相差不超過(guò)20%，否則重新配制基質(zhì)標(biāo)液進(jìn)行檢測(cè)。若樣品濃度是未檢出時(shí)，基質(zhì)標(biāo)濃度應(yīng)在定量限附近，建議選用1.2 倍定量限。使用標(biāo)準(zhǔn)曲線校正時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液應(yīng)臨配現(xiàn)用，至少包含2 個(gè)數(shù)量級(jí)，5 個(gè)濃度點(diǎn)，其中應(yīng)包含定量限和限量值，樣品濃度最好能落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的中間部位，相關(guān)系數(shù)r 值應(yīng)大于0.995。

3.4 儀器條件和樣品檢測(cè)

農(nóng)藥殘留檢測(cè)時(shí)，要提前開(kāi)機(jī)平衡，監(jiān)測(cè)基線，一般要求ECD 基線值應(yīng)小于5kHz/min，F(xiàn)PD 基線值應(yīng)小于30PA/min。優(yōu)化儀器條件如柱溫的升溫程序，建立適合實(shí)驗(yàn)室實(shí)際的儀器方法，對(duì)于穩(wěn)定性差、易分解的農(nóng)藥，對(duì)柱溫或流動(dòng)相進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)，有效保證檢測(cè)的效果。調(diào)整儀器狀態(tài)，檢查氣壓和色譜柱是否符合要求。準(zhǔn)備就緒后，應(yīng)先進(jìn)行1 針試劑空白，以確認(rèn)儀器狀態(tài)是否正常，所用溶劑是否影響檢測(cè)。按順序進(jìn)樣品空白，消除基質(zhì)干擾，質(zhì)控樣品，根據(jù)回收率判斷檢測(cè)結(jié)果是否正常，基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，樣品溶液，每隔10 個(gè)樣品進(jìn)1 針質(zhì)控樣品，以確保檢測(cè)過(guò)程處于可控狀態(tài)，質(zhì)控樣品的加標(biāo)濃度以定量限的2 倍為宜，當(dāng)質(zhì)控樣品的回收率不符合相關(guān)規(guī)定范圍時(shí)，應(yīng)停止檢測(cè)，查找原因。每2 針檢測(cè)之間加入洗針進(jìn)樣程序，避免交叉污染。

3.5 檢測(cè)結(jié)果的控制

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果如實(shí)填寫(xiě)原始記錄，認(rèn)真詳細(xì)地記錄樣品信息、環(huán)境條件、儀器設(shè)備、檢測(cè)方法等，數(shù)據(jù)處理應(yīng)符合修約規(guī)則。所有檢測(cè)參數(shù)應(yīng)備注檢出限。當(dāng)檢測(cè)結(jié)果小于檢出限時(shí)，報(bào)“未檢出”，并注明檢出限數(shù)值；當(dāng)檢測(cè)結(jié)果大于等于檢出限但小于定量限時(shí)，報(bào)“＜定量限”，并注明定量限數(shù)值；當(dāng)檢測(cè)結(jié)果大于等于定量限時(shí)，報(bào)檢測(cè)數(shù)值。所有檢測(cè)數(shù)據(jù)都應(yīng)定期進(jìn)行備份保存，以防發(fā)生數(shù)據(jù)丟失，無(wú)法溯源。當(dāng)檢測(cè)結(jié)果不合格時(shí)，應(yīng)安排不同人員或儀器進(jìn)行復(fù)檢。當(dāng)檢測(cè)值接近限量值時(shí)，應(yīng)進(jìn)行復(fù)檢。復(fù)檢后仍是臨界值時(shí)，可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)，當(dāng)結(jié)果相似時(shí)，以本實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢結(jié)果報(bào)出，并給出本實(shí)驗(yàn)室的不確定度。

4 提高農(nóng)藥殘留檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的措施

4.1 規(guī)范檢測(cè)流程

要嚴(yán)格依照檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，制定出符合實(shí)際的切實(shí)可行的作業(yè)指導(dǎo)書(shū)，規(guī)范抽樣、發(fā)樣、檢測(cè)、數(shù)據(jù)處理、編制報(bào)告等整個(gè)檢驗(yàn)檢測(cè)過(guò)程。并安排質(zhì)量監(jiān)督員對(duì)整個(gè)檢驗(yàn)檢測(cè)過(guò)程進(jìn)行全面監(jiān)控管理，使檢測(cè)流程統(tǒng)一化、標(biāo)準(zhǔn)化，確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

4.2 嚴(yán)格管控檢測(cè)環(huán)境

檢測(cè)環(huán)境是影響檢測(cè)結(jié)果的重要因素，檢測(cè)人員要嚴(yán)格監(jiān)測(cè)記錄環(huán)境數(shù)據(jù)，確保環(huán)境符合樣品和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的儲(chǔ)存配制、樣品前處理的要求，符合儀器設(shè)備能安全平穩(wěn)運(yùn)行的要求，同時(shí)環(huán)境條件必須能保護(hù)人身安全，這樣才能使檢測(cè)結(jié)果精準(zhǔn)有效。檢測(cè)儀器設(shè)備要做好日常的維護(hù)，定期進(jìn)行檢定校準(zhǔn)和期間核查，保證儀器設(shè)備性能良好，這樣得到的檢測(cè)結(jié)果才更加準(zhǔn)確可信。

4.3 提高檢測(cè)人員專(zhuān)業(yè)能力

農(nóng)藥殘留檢測(cè)是一項(xiàng)專(zhuān)業(yè)性較強(qiáng)的工作，對(duì)檢測(cè)人員的能力素質(zhì)要求較高，要通過(guò)人員比對(duì)、參加能力驗(yàn)證或進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)等方式監(jiān)控和評(píng)價(jià)檢測(cè)人員能力保持情況。加強(qiáng)培訓(xùn)教育，定期組織檢測(cè)人員學(xué)習(xí)新型檢測(cè)技術(shù)，掌握新型檢測(cè)設(shè)備操作，不斷提高業(yè)務(wù)能力與個(gè)人素質(zhì)，在工作中加強(qiáng)責(zé)任心教育與引導(dǎo)，進(jìn)一步強(qiáng)化檢測(cè)人員責(zé)任意識(shí)，全面培養(yǎng)出一支德才兼?zhèn)涞膶?zhuān)業(yè)技能的檢測(cè)隊(duì)伍，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

5 結(jié)束語(yǔ)

綜上所述，農(nóng)產(chǎn)品關(guān)系到國(guó)計(jì)民生。民以食為天，食以安全為先，只有不斷提高農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)能力，提高農(nóng)藥檢測(cè)準(zhǔn)確性靈敏度，把好農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)質(zhì)量關(guān)，從源頭解決好農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全問(wèn)題，才能更好地保護(hù)人民的生命健康。只有全面保障農(nóng)產(chǎn)品安全，才能更好地推動(dòng)經(jīng)濟(jì)發(fā)展。