高效液相色譜法中丁氟螨酯溶液的穩(wěn)定性分析

舒恒杰，段習亮

華南中科分析技術(shù)（廣東）有限公司，廣東佛山 528200

丁氟螨酯英文通用名稱為Cyflumetofen，CAS登錄號為400882-07-7?；瘜W名稱為2-甲氧乙基-（R,S）-2-（4-叔丁基苯基）-2-氰基-3-氧代-3-（α,α,α-三氟鄰甲苯基）丙酸酯，其結(jié)構(gòu)式見圖1。丁氟螨酯在弱酸性介質(zhì)中穩(wěn)定，但在堿性介質(zhì)中不穩(wěn)定，25℃下，其在pH=4、pH=7和pH=9的 水 中DT50分 別為9 d、5 h和12 min[1]。

圖1 丁氟螨酯結(jié)構(gòu)式

丁氟螨酯較易水解，因此其持效期較短，檢測過程也需注意丁氟螨酯因水解而影響結(jié)果的準確性。經(jīng)文獻檢索，國內(nèi)已有關(guān)于丁氟螨酯分析方法研究的相關(guān)報道，但僅關(guān)于乙腈體系的報道，還沒有關(guān)于丁氟螨酯在甲醇體系的分析方法研究，本研究建立了一種甲醇體系的高效液相色譜法對丁氟螨酯制劑進行定量分析，并研究了懸浮劑中丁氟螨酯在不同溶劑中的穩(wěn)定性，以期為企業(yè)產(chǎn)品和第三方檢測機構(gòu)在方法優(yōu)化上提供參考[2-3]。

1 材料與方法

1.1 試劑和樣品

（1）甲醇（美國天地）：色譜純；（2）磷酸（科密歐）：色譜純；（3）水（超純水）：電阻率≥18.2 MΩ ·cm；（4）丁氟螨酯標樣（德國LGC提供）：97.7%；（5）參照物標樣（上海市農(nóng)藥研究所有限公司提供）：99.3%；（6）試樣（由佛山盈輝作物科學有限公司提供）：參照物與丁氟螨酯配制的懸浮劑。

1.2 儀器

（1）高 效 液 相 色 譜 儀（Agilent 1260型，VWD/DAD檢 測 器、7129自動進樣器）；（2）萬分之一電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司ML204T/02型，精確至0.000 1 g）；（3）色 譜 柱（Agilent 5 poroshell TC-C18 250 mm× 4.6 mm×5 μm）（或具等同效果的色譜柱）；（4）過濾器（津騰，孔徑為0.45 μm的有機系濾膜）；（5）超聲波清洗機（深圳市潔盟清洗設(shè)備有限公司JP-040S型）。

1.3 液相色譜操作條件

（1）流動相：甲醇+0.1%磷酸水溶液=77+23（體積比），經(jīng)過濾器過濾后，超聲波清洗機超聲脫氣20 min；（2）流速：1.0 mL/min；（3）柱溫：35℃；（4）檢測波長：220 nm；（5）進樣體積：5 μL；（6）保留時間：參照物約為5.9 min，丁氟螨酯約為12.5 min。

1.4 測定步驟

1.4.1 標樣溶液的制備準確稱取丁氟螨酯標樣和參照物標樣分別約為0.06 g、0.1 g（精確至0.000 1 g），置于不同的50 mL容量瓶，分別加入約40 mL流動相，在超聲波清洗機上超聲溶解約20 min，取出，確保溶解完全后，冷卻至室溫，最后用流動相稀釋至刻度，搖勻，分別得A、B溶液，備用。

準確移取A、B溶液各2 mL于同一25 mL容量瓶中，用流動相定容至刻度后搖勻后，過濾器過濾，待測。

1.4.2 試樣溶液的制備準確稱取0.4 g（精確至0.000 1 g）的試樣于50 mL容量瓶中，加入約40 mL流動相，在超聲波清洗機上超聲溶解約20 min，取出，確保溶解完全后，冷卻至室溫，最后用流動相稀釋至刻度，搖勻，備用。

準確移取2 mL上述溶液于25 mL容量瓶中，用流動相定容至刻度后搖勻后，過濾器過濾，待測。

1.4.3 測定在上述色譜操作條件下，待儀器運行1 h基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，直至相鄰2針丁氟螨酯峰面積相對變化小于0.8%后，按照標樣、試樣、試樣、標樣溶液的順序進行進樣測定。

1.5 計算

將測得的2針試樣溶液及前后2針標樣溶液中丁氟螨酯峰面積分別進行平均。試樣中丁氟螨酯的質(zhì)量分數(shù)X（%）按式（1）計算：

式（1）中：A1為標樣溶液中丁氟螨酯峰面積的平均值；A2為試樣溶液中丁氟螨酯峰面積的平均值；m1為丁氟螨酯標準物質(zhì)的質(zhì)量，單位為克（g）；m2為試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；P為標樣中丁氟螨酯的質(zhì)量分數(shù)，以%表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 丁氟螨酯HPLC測定方法的建立

2.1.1 檢測波長的選擇根據(jù)Agilent 1260 DAD的紫外波長掃描圖（圖3），可以看到丁氟螨酯特征吸收波長位于約198 nm處，但在198 nm左右波長，受溶劑和雜質(zhì)的影響較大，對于方法的精密度、檢測限等有較大影響；因此根據(jù)紫外吸收強度和靈敏度要求，發(fā)現(xiàn)220 nm波長處干擾相對較少，故最終將丁氟螨酯的檢測波長選擇為220 nm。

圖2 參照物和丁氟螨酯的高效液相色譜圖

圖3 丁氟螨酯紫外光譜全掃描圖

2.1.2 流動相的選擇色譜柱選擇常規(guī)的poroshell TC-C18為填料的色譜柱。根據(jù)丁氟螨酯的物理化學性質(zhì)和劑型的特殊性，選擇流動相（甲醇+0.1%磷酸水溶液）作為溶解樣品的溶劑；根據(jù)甲醇和0.1%磷酸水溶液的不同比例，在色譜柱上的峰形及分離效果，最終確定（甲醇+0.1%磷酸水溶液）=77+23（v/v），流速1.0 mL/min時，丁氟螨酯、參照物、雜質(zhì)得到很好的分離，峰形對稱性良好，基線平穩(wěn)。

2.1.3 特異性試驗采用HPLC-DAD峰純度分析法鑒別丁氟螨酯。從圖4可以看出，試樣中的丁氟螨酯峰純度為999.672，大于990，說明丁氟螨酯處基本無雜質(zhì)干擾，可準確測定丁氟螨酯。

圖4 丁氟螨酯HPLC-DAD峰純度色譜圖

2.1.4 線性關(guān)系試驗準確稱取一定質(zhì)量的丁氟螨酯標樣，按1.4.1進行配制，分別得到質(zhì)量濃度為0.009 629 312、0.038 517 248、0.096 293 12、0.144 439 68、0.192 586 24 mg/mL的丁氟螨酯標準溶液。過濾，按試驗部分色譜條件進樣，以丁氟螨酯峰面積y對濃度x繪制標準曲線（表1、圖5），回歸方程為y=8273.8314x+5.3650，相關(guān)系數(shù)r=0.999 97（n=5）?？梢姸》ベ|(zhì)量濃度在0.009 631 2～0.192 58 mg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好的線性相關(guān)性。

圖5 丁氟螨酯線性關(guān)系曲線

表1 丁氟螨酯線性關(guān)系

2.1.5 方法精密度試驗選擇1個有代表性的試樣，從稱樣開始，按試驗部分中的操作測定5次，測定結(jié)果見表2。從表2可以看出，丁氟螨酯標準偏差0.045，變異系數(shù)為0.30；依據(jù)Horwits公式計算可知變異系數(shù)符合要求，說明本方法精密度滿足丁氟螨酯的分析要求。

表2 方法精密度（重復性）試驗結(jié)果

2.1.6 方法準確度試驗按1.4.2稱取5份試樣（稱樣量減半），分別準確添加一定量的標樣（按1.4.1中的稱樣量減半），在試驗部分進行分析，待測組分丁氟螨酯的平均回收率為99.42 %，說明本方法準確度良好（表3）。

表3 方法準確度（回收率）試驗結(jié)果

2.2 不同溶劑對丁氟螨酯穩(wěn)定性的影響

丁氟螨酯在弱酸性條件下穩(wěn)定，但在堿性介質(zhì)中不穩(wěn)定；用乙腈或乙腈+水（0.3%冰乙酸）=80+20（v/v）作為定容溶劑，短時間內(nèi)（14 d）在冷藏或室溫條件下對丁氟螨酯原藥含量檢測沒有明顯的影響。因此為了驗證丁氟螨酯在不同溶劑中的穩(wěn)定性，測試了丁氟螨酯在甲醇、甲醇+水、甲醇+0.1%磷酸水中的穩(wěn)定性。

按1.4.2配制3份試樣溶液，溶劑分別用甲醇、甲醇+水、甲醇+0.1%磷酸水，在上述色譜操作條件下測得不同時間點丁氟螨酯濃度（表4）。

表4 不同溶劑對丁氟螨酯穩(wěn)定性影響 mg/mL

3 結(jié)論

利用高效液相色譜法研究丁氟螨酯在甲醇體系中的穩(wěn)定性，經(jīng)過對不同溶劑的對比結(jié)果表明，丁氟螨酯在含有甲醇的體系中，只有在酸性條件下才會具有很好的穩(wěn)定性，方法的準確度、精密度、線性關(guān)系才符合要求。此方法拓展了丁氟螨酯在高效液相色譜法的溶劑選擇范圍。