上皮細(xì)胞黏附分子在黏液表皮樣癌中的研究進展

聶宇 夏鵬 袁倩 吳發(fā)印

【摘要】 黏液表皮樣癌（MEC）是口腔頜面部常見的上皮性惡性腫瘤。由于黏液表皮樣癌具有高發(fā)病率和病死率，以及高轉(zhuǎn)移率和復(fù)發(fā)率，因此患者的生活質(zhì)量一直是治療和康復(fù)過程中的一個嚴(yán)重問題。上皮細(xì)胞黏附分子（EpCAM） 高表達于快速生長的上皮腫瘤中，與上皮性惡性腫瘤密切相關(guān)，參與上皮性惡性腫瘤細(xì)胞黏附、信號傳導(dǎo)、遷移和增殖，并與腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)。當(dāng)細(xì)胞與細(xì)胞間發(fā)生黏附作用時，EpCAM聚集于細(xì)胞膜表面，可改變細(xì)胞內(nèi)的微環(huán)境，影響MEC的預(yù)后及轉(zhuǎn)移。EpCAM參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，可為MEC的早期診斷及預(yù)后評估提供新的參考依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 黏液表皮樣癌;上皮細(xì)胞黏附分子;綜述

Research progress on epithelial cell adhesion molecules in mucoepidermoid carcinoma Nie Yu， Xia Peng， Yuan Qian， Wu Fayin. Department of Oral and Maxillofacial Surgery， the Fifth Affiliated Hospital （Zhuhai） of Zunyi Medical University， Zhuhai 519000， China

Corresponding author， Wu Fayin， E-mail： wufy0515@ 163.com

【Abstract】 Mucoepidermoid carcinoma （MEC） is a common epithelial malignant tumor in oral and maxillofacial region. Due to the high morbidity， mortality and metastasis rates， the quality of life of MEC patients has always been a serious problem in the process of treatment and rehabilitation. Epithelial cell adhesion molecule （EpCAM） is highly expressed in the fast-growing epithelial tumors， which is closely correlated with the epithelial malignant tumors. It is involved in the epithelial malignant tumor cell adhesion， signal transduction， migration and proliferation， and is intimately associated with the prognosis of tumors. When cell-to-cell adhesion occurs， EpCAM aggregates on the surface of cell membrane， which can change the intracellular microenvironment and affect the prognosis and metastasis of MEC. EpCAM is involved in the incidence and development of tumors， which can provide novel reference for the early diagnosis and prognostic assessment of MEC.

【Key words】 Mucoepidermoid carcinoma; Epithelial cell adhesion molecule; Review

黏液表皮樣癌（MEC）是口腔頜面部常見的涎腺惡性腫瘤，約占涎腺腫瘤總數(shù)的10%～15%，由黏液樣細(xì)胞、表皮樣細(xì)胞和中間細(xì)胞構(gòu)成[1]。根據(jù)細(xì)胞比例不同可分為高分化和低分化腫瘤，高分化腫瘤預(yù)后良好，較少發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移;而低分化腫瘤具有典型的惡性生物學(xué)特征，局部復(fù)發(fā)率高達78%，預(yù)后差，10年生存率僅為27%，目前MEC常規(guī)的治療方法以手術(shù)治療為主，術(shù)后輔予放射治療[2]。由于該腫瘤局部侵襲性強，界限不清楚，手術(shù)切除時難以獲得明確的邊界，術(shù)后常出現(xiàn)高復(fù)發(fā)率和遠處轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和生存率。而且因MEC的生物學(xué)、組織學(xué)結(jié)構(gòu)等存在多樣性，所以正確診斷及明確MEC分級存在一定困難。上皮細(xì)胞黏附分子（EpCAM）高表達于快速生長的上皮腫瘤中，是一種腫瘤相關(guān)抗原，對上皮組織的結(jié)構(gòu)完整性、黏附性以及與基膜的相互作用至關(guān)重要[3-4]。研究顯示EpCAM在上皮性惡性腫瘤中作為標(biāo)志物，不僅在診斷、預(yù)后及治療中發(fā)揮重要作用，而且以EpCAM為目標(biāo)的靶向治療正在進行臨床試驗[5-6]。因此EpCAM的表達情況對腫瘤組織病理分型和預(yù)后等方面均有較大的臨床指導(dǎo)意義。但目前國內(nèi)外關(guān)于EpCAM在MEC中的研究報道較少，現(xiàn)就 EpCAM在MEC中的研究進展予以綜述。

一、EpCAM

1. EpCAM的生物學(xué)特性

EpCAM基因是40年前通過針對結(jié)腸直腸癌細(xì)胞衍生抗原的單克隆抗體篩選首次發(fā)現(xiàn)的[7]。人類EpCAM基因由9個外顯子組成，位于基因組區(qū)域約42 kb的2p21染色體上。該基因可翻譯成由314個氨基酸組成的分子量約為40 kDa 的EpCAM蛋白。EpCAM基因可產(chǎn)生6個轉(zhuǎn)錄物變體，包括EpCAM-201、EpCAM-202、EpCAM-203、EpCAM-204、EpCAM-205和EpCAM-206。大規(guī)模

癌癥轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究顯示EpCAM-201是主要的同工型[8]。EpCAM是一種1型跨膜糖蛋白，由大的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域（EPEX）、單個跨膜結(jié)構(gòu)域和短的細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域（EPICD）組成，EPEX部分中的3個獨立的糖基化位點決定了整個蛋白質(zhì)在細(xì)胞表面的穩(wěn)定性[9]。研究表明與自體正常黏膜比較，EpCAM在絕大多數(shù)頭頸部癌中顯示高糖基化，EpCAM的不同糖基化作用可以作為區(qū)分正常組織和惡性組織的手段[10]。在許多惡性腫瘤中經(jīng)常觀察到EpCAM的啟動子區(qū)DNA低甲基化，而EpCAM表達水平與EpCAM啟動子DNA甲基化狀態(tài)之間呈負(fù)相關(guān)，EpCAM啟動子可以驅(qū)動基因表達并賦予上皮特異性表達。此外，在卵巢癌細(xì)胞EpCAM基因調(diào)控元件上也發(fā)現(xiàn)了抑制性組蛋白標(biāo)志物，這些研究表明EpCAM在惡性腫瘤中的表達在表觀遺傳水平上受到調(diào)控[11]。

2. EpCAM的功能及作用機制

EpCAM的功能主要包括細(xì)胞-細(xì)胞相互作用、調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附分子、遷移、靶向治療、診斷和預(yù)后評估等。早期研究EpCAM功能報道成纖維細(xì)胞L929通常不參與細(xì)胞黏附，當(dāng)L929表達EpCAM時會形成細(xì)胞的多細(xì)胞聚集體，表明EpCAM參與同型細(xì)胞之間的相互作用[12]。EpCAM對于細(xì)胞連接至關(guān)重要，與幾種重要的細(xì)胞黏附分子（CAM）相互作用并調(diào)節(jié)細(xì)胞與細(xì)胞基質(zhì)之間的黏附結(jié)構(gòu)[13]。Eom等[14]收集了71例行根治性胃切除術(shù)并經(jīng)病理診斷為原發(fā)性腫瘤且轉(zhuǎn)移到淋巴結(jié)組織的患者，通過免疫組織化學(xué)法確定患者樣品中6種細(xì)胞膜蛋白的表達，其中包括EpCAM和E-鈣黏蛋白等，最終結(jié)果表明EpCAM和E-鈣黏蛋白是檢測早期胃癌患者轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的潛在分子標(biāo)記。在非小細(xì)胞肺癌和胃癌中均發(fā)現(xiàn)EpCAM陽性率與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示EpCAM與腫瘤分級、惡性程度有關(guān)[15-16]。EpCAM作為一種預(yù)后標(biāo)志物在許多種惡性腫瘤及其轉(zhuǎn)移灶中的表達較相同定位的正常上皮強，而且在許多腫瘤中，EpCAM的過表達與總體預(yù)后不良有關(guān)。Münz等[17]使用小干擾RNA（siRNA）技術(shù)沉默口腔癌患者的EpCAM過表達，并觀察到臨床癥狀的改善前景。因此，抑制EpCAM過表達可作為晚期口腔癌患者的一種有效治療策略。在人卵巢癌和乳腺癌中，與正常上皮組織相比，EpCAM顯示出明顯的過表達水平[18]。在手術(shù)過程中使用EpCAM特異性熒光劑標(biāo)志物可視化各種腫瘤的人體研究也有報道。通過EpCAM建立新型單克隆抗體EPAb2-6，結(jié)合到EpCAM的EGF-II / TY結(jié)構(gòu)域的Y95和D96位的EPAb2-6抑制EPICD的產(chǎn)生。從而減少其易位和隨后的信號激活，表明新型抗EpCAM mAb可以潛在地用于癌癥靶向治療[19]。

二、EpCAM在MEC中的研究進展

1. EpCAM調(diào)節(jié)MEC黏附、遷移作用

EpCAM是腫瘤相關(guān)抗原中表達最頻繁、強度最高的抗原之一，其在癌細(xì)胞中的黏附和遷移作用也廣泛報道，Yang等[20]首先篩選了2個高表達EpCAM的腫瘤細(xì)胞系大腸癌CW-2和表皮樣癌A431細(xì)胞，為了評估EpCAM表達在細(xì)胞黏附和遷移中的生物學(xué)功能，通過建立2種癌細(xì)胞中EpCAM基因的敲除（KO），EpCAM-KO細(xì)胞由細(xì)長的細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)閳A形，這些細(xì)胞的增殖和向細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的遷移減少，而且生長和集落形成能力明顯下降。重要的是，免疫共沉淀分析表明，EpCAM與整聯(lián)蛋白β1相關(guān)，EpCAM與整聯(lián)蛋白β1結(jié)合，通過細(xì)胞外基質(zhì)黏附來調(diào)節(jié)FAK / ERK信號通路，從而控制細(xì)胞黏附、遷移和增殖，這為EpCAM介導(dǎo)的生物學(xué)功能和癌癥表型提供了新的機制。整聯(lián)蛋白β1是異二聚體細(xì)胞表面受體，通過促進上皮細(xì)胞與基底膜的黏附來介導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)中的細(xì)胞黏附，這些受體也有助于腫瘤細(xì)胞的遷移、增殖和存活[21]。而早期研究關(guān)于整合素族細(xì)胞在一系列涎腺腺瘤和腫瘤中的分布，以確定惡性表型是否與這些受體的表達改變有關(guān)，結(jié)果表明整聯(lián)蛋白α鏈在多數(shù)涎腺惡行腫瘤中得到廣泛表達[22]。目前關(guān)于EpCAM與MEC遷移、黏附相應(yīng)報道較少。朱云娜等[23]探討唾液腺MEC中EpCAM 和β-catenin蛋白表達與臨床病理意義。通過免疫組織化學(xué)法檢測57例MEC和20例正常唾液腺組織中EpCAM和β-catenin的表達。結(jié)果顯示EpCAM、 β-catenin的陽性率在MEC中高于正常組織（P = 0.002、0.001），EpCAM 在高、中、低分化MEC中陽性率分別為36.36%、61.11%、82.35%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P = 0.015）。EpCAM陽性率在低分化的MEC中表達最高，而沈莎莎等[24]通過比較不同來源及不同組織學(xué)分級的頭頸部MEC的CT特征結(jié)果表明，低分化MEC表現(xiàn)為實體性結(jié)節(jié)或腫塊，影像學(xué)分析低分化MEC可看到癌細(xì)胞向周圍組織浸潤，低分化MEC黏附和遷移能力更強。

2. EpCAM與MEC的預(yù)后

雖然MEC不同的預(yù)后因素與患者的臨床結(jié)果相關(guān)，并影響治療方式，但其預(yù)后較差的因素主要還是包括高組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移等。EpCAM不僅在癌細(xì)胞中發(fā)揮黏附和遷移作用，也有大量研究證實其與腫瘤的預(yù)后相關(guān)。Zhou等[25]通過比較EpCAM在2488例肝細(xì)胞癌（HCC）患者的表達水平，證實EpCAM的過表達是HCC患者預(yù)后總體生存期和無病生存期較短的不利預(yù)測指標(biāo)。Lee等[26] 收集了83例經(jīng)手術(shù)切除的腺樣囊性癌，使用組織芯片和antiEpCAM抗體進行了免疫組織化學(xué)染色。通過強度評分和免疫染色評分分析EpCAM的表達，結(jié)果表明較高的組織學(xué)等級顯示出EpCAM高表達，而高表達的EpCAM與遠處轉(zhuǎn)移和較差的腺樣囊性癌預(yù)后相關(guān)。Sen等[27]通過免疫組織化學(xué)法研究EpCAM在60例經(jīng)組織學(xué)證實的口腔鱗狀細(xì)胞癌（OSCC）中的表達，采用標(biāo)記鏈霉親和素生物素法檢測EpCAM的表達，并以染色百分率、染色強度和總?cè)旧俜致蔬M行半定量評價，發(fā)現(xiàn)正?？谇火つぶ胁淮嬖贓pCAM表達。然而在60例OSCC病例中有51例出現(xiàn)陽性染色，而11例標(biāo)本中有EpCAM過表達，表明EpCAM可作為具有預(yù)后意義的潛在生物標(biāo)志物，可用于識別高風(fēng)險患者并預(yù)測患者的生存質(zhì)量。Somasundaram等[28]對115例口腔鱗癌、97例口腔異型增生和105例正?？谇唤M織進行了胞核和EpCAM的EPICD免疫組織化學(xué)分析，并與口腔異型增生和口腔鱗癌患者60個月的臨床病理參數(shù)和疾病轉(zhuǎn)歸進行了比較，最后證明EpCAM的EPICD可以預(yù)測口腔異型增生患者的癌癥發(fā)展和口腔鱗癌患者的復(fù)發(fā)率，表明EpCAM的表達在口腔鱗癌患者的治療中，對癌癥進展和預(yù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險的評估具有潛在的實用價值。在MEC方面，Phattarataratip等[29]通過免疫組織化學(xué)法研究20例MEC患者EpCAM的表達，發(fā)現(xiàn)EpCAM表達的降低與顯微鏡下囊性成分的減少和高分化的MEC顯著相關(guān)。而高分化的MEC一般預(yù)后良好，結(jié)果表明EpCAM的低表達與MEC預(yù)后良好密切相關(guān)。組織病理學(xué)分級常認(rèn)為其是指導(dǎo)治療決策的重要預(yù)后指標(biāo)，Kamal等[30] 收集48例涎腺組織標(biāo)本（12例正常涎腺組織和36例MEC），采用免疫組織化學(xué)法檢測EpCAM膜蛋白的表達，評估EpCAM過表達與組織學(xué)分級之間的關(guān)系，結(jié)果表明EpCAM的表達越顯著，MEC分化越低，而且還發(fā)現(xiàn)EpCAM促進了腫瘤的增殖和進展，并增加了腫瘤細(xì)胞的侵襲力和遷移能力。這些研究表明，EpCAM在MEC向更具侵略性的形式轉(zhuǎn)變過程中發(fā)揮作用。

三、小結(jié)與展望

通過大量學(xué)者對EpCAM的研究發(fā)現(xiàn)，EpCAM過表達可加速腫瘤的發(fā)展，增強腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。因此EpCAM的表達與腫瘤的發(fā)生、進展及生物學(xué)特征密切相關(guān)。EpCAM對MEC的病理分型、侵襲轉(zhuǎn)移和腫瘤預(yù)后等方面均有較大的臨床指導(dǎo)意義。臨床上MEC的局部侵襲性強且界限不清，術(shù)后復(fù)發(fā)率極高，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，但目前國內(nèi)外關(guān)于EpCAM對MEC黏附、遷移和預(yù)后的相關(guān)作用機制的研究有限，文獻報道較少，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展以及EpCAM研究的逐步深入，EpCAM可能成為評估腫瘤進展和預(yù)后的分子標(biāo)志物，為MEC的早期診斷和靶向治療開辟新的方案。

參 考 文 獻

[1] Xu W， Wang Y， Qi X， et al. Prognostic factors of palatal mucoepidermoid carcinoma： a retrospective analysis based on a double-center study. Sci Rep， 2017， 7： 43907.

[2] Janet-Ofelia G C， Rafael M V， Guillermo G A， et al. Mucoepidermoid carcinoma of the salivary glands： survival and prognostic factors. J Maxillofac Oral Surg， 2017， 16（4）： 431-437.

[3] Huang L， Yang Y， Yang F， et al. Functions of EpCAM in physiological processes and diseases （Review）. Int J Mol Med， 2018， 42（4）： 1771-1785.

[4] Lei Z， Maeda T， Tamura A， et al. EpCAM contributes to formation of functional tight junction in the intestinal epithelium by recruiting claudin proteins. Dev Biol， 2012， 371（2）： 136-145.

[5] Murakami N， Mori T， Nakamura S， et al. Prognostic value of the expression of epithelial cell adhesion molecules in head and neck squamous cell carcinoma treated by definitive radiotherapy. J Radiat Res， 2019， 60（6）： 803-811.

[6] Kaplon H， Reichert J M. Antibodies to watch in 2019. MAbs， 2019， 11（2）： 219-238.

[7] Herlyn M， Steplewski Z， Herlyn D， et al. Colorectal carcinoma-specific antigen： detection by means of monoclonal antibodies. Proc Natl Acad Sci U S A， 1979， 76（3）： 1438-1442.

[8] Mohtar M A， Syafruddin S E， Nasir S N， et al. Revisiting the roles of pro-metastatic EpCAM in cancer. Biomolecules， 2020， 10（2）：255.

[9] Imrich S， Hachmeister M， Gires O. EpCAM and its potential role in tumor-initiating cells. Cell Adh Migr， 2012， 6（1）： 30-38.

[10] Munz M， Fellinger K， Hofmann T， et al. Glycosylation is crucial for stability of tumour and cancer stem cell antigen EpCAM. Front Biosci， 2008， 13： 5195-5201.

[11] van der Gun B T， de Groote M L， Kazemier H G， et al. Transcription factors and molecular epigenetic marks underlying EpCAM overexpression in ovarian cancer. Br J Cancer， 2011， 105（2）： 312-319.

[12] Litvinov S V， Velders M P， Bakker H A， et al. Ep-CAM： a human epithelial antigen is a homophilic cell-cell adhesion molecule. J Cell Biol， 1994， 125（2）： 437-446.

[13] Zhang C， Liu L W， Sun W J， et al. Expressions of E-cadherin， p120ctn， β-catenin and NF-κB in ulcerative colitis. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci， 2015， 35（3）： 368-373.

[14] Eom B W， Won Ryu K， Man Yoon H， et al. Predictive value of E-cadherin and EpCAM for detection of metastatic lymph node in early gastric cancer. Chin J Cancer Res， 2020， 32（5）： 614-620.

[15] 毛建英，馮建中，盛陳卓婭，等.上皮細(xì)胞黏附分子在非小細(xì)胞肺癌組織中表達及其臨床意義. 中華實驗外科雜志， 2016， 33（11）： 2576-2579.

[16] Kroepil F， Dulian A， Vallb?hmer D， et al. High EpCAM expression is linked to proliferation and lauren classification in gastric cancer. BMC Res Notes， 2013， 6： 253.

[17] Münz M， Murr A， Kvesic M， et al. Side-by-side analysis of five clinically tested anti-EpCAM monoclonal antibodies. Cancer Cell Int， 2010， 10： 44.

[18] Alshaer W， Ababneh N， Hatmal M， et al. Selection and targeting of EpCAM protein by ssDNA aptamer. PLoS One， 2017， 12（12）： e0189558.

[19] Liao M Y， Lai J K， Kuo M Y， et al. An anti-EpCAM antibody EpAb2-6 for the treatment of colon cancer. Oncotarget， 2015， 6（28）： 24947-24968.

[20] Yang J， Isaji T， Zhang G， et al. EpCAM associates with integrin and regulates cell adhesion in cancer cells. Biochem Biophys Res Commun， 2020， 522（4）： 903-909.

[21] Desgrosellier J S， Cheresh D A. Integrins in cancer： biological implications and therapeutic opportunities. Nat Rev Cancer， 2010， 10（1）： 9-22.

[22] Franchi A， Santoro R， Paglierani M， et al. Comparison of integrin alpha chain expression in benign and malignant salivary gland tumors. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod， 1997， 83（5）： 588-595.

[23] 朱云娜，鄭繪霞，肖虹，等. EpCAM和β-catenin在唾液腺黏液表皮樣癌中的表達及意義. 口腔醫(yī)學(xué)研究， 2020， 36（5）： 433-436.

[24] 沈莎莎，韓丹，李浚利，等.不同來源及組織學(xué)分級的頭頸部黏液表皮樣癌CT特征比較. 中華放射學(xué)雜志， 2020， 54（12）： 1162-1166.

[25] Zhou L， Zhu Y. The EpCAM overexpression is associated with clinicopathological significance and prognosis in hepatocellular carcinoma patients： a systematic review and meta-analysis. Int J Surg， 2018， 56： 274-280.

[26] Lee S J， Chung K Y， Kwon J E， et al. Expression of EpCAM in adenoid cystic carcinoma. Pathology， 2018， 50（7）： 737-741.

[27] Sen S， Carnelio S. Expression of epithelial cell adhesion molecule （EpCAM） in oral squamous cell carcinoma. Histopathology， 2016， 68（6）： 897-904.

[28] Somasundaram R T， Kaur J， Leong I， et al. Subcellular differential expression of Ep-ICD in oral dysplasia and cancer is associated with disease progression and prognosis. BMC Cancer， 2016， 16： 486.

[29] Phattarataratip E， Masorn M， Jarupoonphol W， et al. Differential expression of epithelial cell adhesion molecule in salivary gland neoplasms. Ann Diagn Pathol， 2016， 24： 62-67.

[30] Kamal N M， Salem H M， Dahmoush H M. Immunohistochemical expression of epithelial cell adhesion molecule （EpCAM） in mucoepidermoid carcinoma compared to normal salivary gland tissues. Arch Oral Biol， 2017， 79： 87-94.

（收稿日期：2021-05-21）

（本文編輯：鄭巧蘭）