13種呼吸道病原體核酸檢測(cè)在兒童呼吸道感染中的應(yīng)用效果研究

李偉生，謝敏靜

(珠海市人民醫(yī)院高欄港醫(yī)院，廣東 珠海 519050)

下呼吸道感染是兒科患者的常見病，高居5歲以下兒童死亡原因的第二位[1]。采用呼吸道感染患兒的病原檢測(cè)能識(shí)別呼吸道感染病原的流行現(xiàn)狀和分布特征，為臨床診斷和精準(zhǔn)治療提供科學(xué)依據(jù)。與傳統(tǒng)病原學(xué)、核酸分離培養(yǎng)檢測(cè)相比，基于液相芯片技術(shù)的核酸檢測(cè)具有效率高、通量大的優(yōu)勢(shì)[2]。本研究對(duì)我院收治的312例下呼吸道感染患兒采用液相芯片技術(shù)進(jìn)行13種呼吸道病原體核酸檢測(cè)，以期為呼吸道感染的臨床診斷提供科學(xué)參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年11月—2020年10月珠海市人民醫(yī)院高欄港醫(yī)院收治的312例下呼吸道感染患兒為研究對(duì)象，男176例，女136例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合下呼吸道感染診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)臨床檢查體內(nèi)炎性指標(biāo)升高，胸片顯示肺部病變；(3)患兒家屬知情同意。

排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)非感染原因致胸片顯示肺部病變；(2)肝腎功能不全；(3)合并其他嚴(yán)重器質(zhì)性病變。

1.2 檢測(cè)方法

入院當(dāng)日采集患兒咽拭子，置于2 mL保存液中4℃保存，于24 h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。用核酸提取試劑提取患兒的DNA和RNA，提取完成后，將待檢核酸與13項(xiàng)呼吸道病原體核酸檢測(cè)試劑盒(RNA/DNA)擴(kuò)增試劑混合后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，操作按照擴(kuò)增試劑盒說明書進(jìn)行。進(jìn)行DNA 檢測(cè)的病原體為：SP、CMV、博卡病毒(hBoV)、MC、Hi、ADV、MP、BP；進(jìn)行RNA檢測(cè)的病原體為：RSV、鼻病毒(HRV)、副流感病毒(HIV)、INF-A、乙型流感病毒(INF-B)。將已擴(kuò)增樣本進(jìn)行雜交檢測(cè)，開啟Luminex Magpix液相芯片檢測(cè)平臺(tái)，在核酸雜交試劑加入擴(kuò)增產(chǎn)物，通過PCR儀行雜交顯色反應(yīng)。顯色結(jié)束后，將樣品放入孔板加熱模塊，運(yùn)行待檢測(cè)批次并完成檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo)

將患兒按年齡劃分標(biāo)準(zhǔn)分為<1歲組、1～3歲組、3～5歲組和≥5歲組，比較13種呼吸道病原體的檢出情況、混合感染及不同年齡組間病原體的檢出情況。混合感染率=病原體檢出2種及以上病原體陽(yáng)性例數(shù)/該病原體檢出陽(yáng)性總數(shù)[3]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用例數(shù)(%)表示，行χ2或秩和檢驗(yàn)；P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 13種呼吸道病原體檢出情況

在312例患兒中，有215例患兒至少有一種呼吸道病原體檢測(cè)陽(yáng)性，陽(yáng)性檢出率為68.91%，其中檢出單一病原體陽(yáng)性患兒134例，占42.94%，檢出兩種及兩種以上病原體陽(yáng)性患兒81例，占25.96%。檢出率最高的3種病原體為SP、CMV和RSV。13種呼吸道病原體檢出中，混合感染率排名前5位的病原體為MP、BP、Hi、INF-A和MC，見表1。

表1 13種呼吸道病原體檢出情況 例

2.2 不同年齡組的病原體檢出情況

不同年齡組的SP、CMV、RSV、INF-A、ADV陽(yáng)性檢出率差異顯著(P<0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。低年齡段患兒常見的病原體為CMV、RSV，SP的檢出率隨患兒年齡的增長(zhǎng)而升高。高年齡段患兒常見的病原體為INF-A、ADV。不同年齡組間(<1歲組、1～3歲組、3～5歲組、≥5歲組)其他病原體的陽(yáng)性檢出率差異不顯著(P>0.05)，見表2。

表2 不同年齡組病的病原體檢出情況 例(%)

3 討論

建立一種能同時(shí)檢測(cè)多種呼吸道病原體的快速有效的檢測(cè)技術(shù)對(duì)兒童呼吸道感染的臨床診斷具有十分重要的臨床價(jià)值。本次檢測(cè)結(jié)果顯示，215例患兒中至少有一種呼吸道病原體檢測(cè)陽(yáng)性，陽(yáng)性檢出率為68.91%，說明基于液相芯片技術(shù)的核酸檢測(cè)具有較高的陽(yáng)性檢測(cè)率。SP、CMV和RSV是檢出率最高的3種病原體，提示細(xì)菌和病毒是本地區(qū)呼吸道感染患兒的主要病原體，臨床診斷應(yīng)在參照血常規(guī)、X線檢查的基礎(chǔ)上重視病原學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，科學(xué)合理使用抗生素[4]。檢出兩種及兩種以上病原體陽(yáng)性患兒81例，占25.96%，提示呼吸道感染患兒存在多重呼吸道病原體混合感染的情況。混合感染率排名前5位的病原體為MP、BP、Hi、INF-A和MC，可能是因?yàn)樵l(fā)病原體感染后損壞了呼吸道黏膜的防護(hù)屏障，其他病原體入侵更容易，或者是患兒感染后體質(zhì)變差，自身抵抗力下降。

不同年齡組間SP、CMV、RSV、INF-A、ADV的陽(yáng)性檢出率存在顯著差異。低年齡段患兒常見的病原體為CMV、RSV，可能與低年齡患兒自身免疫力相對(duì)較低有關(guān)[5]。SP的檢出率隨年齡增長(zhǎng)而升高，高年齡段患兒常見的病原體為INF-A、ADV，可能受機(jī)體呼吸道正常菌群建立過程的影響。

基于液相芯片技術(shù)的核酸檢測(cè)效率高、通量大，13種呼吸道病原體核酸檢測(cè)能快速有效地滿足呼吸道病原體檢測(cè)的需要，具有檢測(cè)簡(jiǎn)單、敏感度高等優(yōu)點(diǎn)，可用于輔助診斷兒童呼吸道感染的相關(guān)疾病。在臨床診斷時(shí)要注意不同年齡組間病原體的差異和多重病原體感染。