厚積薄發(fā)破難攻堅(jiān) 匠心履職勇攀高峰
——訪河北省第二期現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系蛋肉雞創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)蛋雞疫病防控崗崗位專家李佩國

□本刊記者 張麗鳳

河北省是蛋雞養(yǎng)殖大省， 不僅養(yǎng)殖存欄量大，而且養(yǎng)殖品種豐富，既有優(yōu)質(zhì)的地方雞種，也有自主培育的高產(chǎn)配套系蛋雞。 然而在推進(jìn)蛋雞產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的進(jìn)程中， 疾病始終是不容忽視的制約因素。2018 年，李佩國教授受聘河北省第二期現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系蛋肉雞創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)蛋雞疫病防控崗崗位專家后， 帶領(lǐng)團(tuán)隊(duì)以護(hù)航蛋雞產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展為核心目標(biāo)， 通過整合院校、體系以及企業(yè)資源，凝聚各種社會力量，以科技創(chuàng)新為抓手，以服務(wù)養(yǎng)殖企業(yè)為主線，組織開展下基層做調(diào)研，挖問題找方案，攻難題推技術(shù)，做培訓(xùn)搞幫扶，用扎實(shí)的專業(yè)知識賦能疫病防控工作。 五年來，共舉辦蛋雞疫病防控技術(shù)培訓(xùn)12 次，團(tuán)隊(duì)成員講座20 人次，為蛋雞產(chǎn)業(yè)培訓(xùn)技術(shù)及管理人員1400 余人， 為30 個蛋雞場開展技術(shù)服務(wù)，到企業(yè)現(xiàn)場進(jìn)行技術(shù)指導(dǎo)100多次，真誠地服務(wù)每一家養(yǎng)殖企業(yè)，既提升了企業(yè)蛋雞養(yǎng)殖水平， 也為河北省蛋雞疾病防控奠定了基石。

科研攻關(guān)破難題 護(hù)航蛋雞健康養(yǎng)殖

丹心未泯創(chuàng)新愿， 白發(fā)猶殘求是輝。 五年來，李佩國帶領(lǐng)團(tuán)隊(duì)積極投身科研攻關(guān)工作中，發(fā)揚(yáng)求真務(wù)實(shí)的精神， 為蛋雞疫病防控工作保駕護(hù)航。

一是對種雞場垂直傳播疾病進(jìn)行系統(tǒng)研究

河北省種禽企業(yè)的規(guī)模及管理水平存在較大差距，一些垂直傳播疾病時(shí)有發(fā)生，尤其是地方品種的雞白痢和禽白血病等胚傳疾病的發(fā)病率較高，必須采取有效的凈化措施。 李佩國團(tuán)隊(duì)根據(jù)河北省種雞場的養(yǎng)殖現(xiàn)狀研究制訂了河北省地方標(biāo)準(zhǔn) “蛋種雞場禽白血病的凈化技術(shù)規(guī)程”、“種雞場雞白痢凈化技術(shù)規(guī)程”， 并在河北省不同地區(qū)的試驗(yàn)站進(jìn)行推廣。

禽白血病的防控除采取有效凈化外， 還要將生產(chǎn)系統(tǒng)中各環(huán)節(jié)有機(jī)結(jié)合起來， 構(gòu)建科學(xué)的防控體系， 其中開發(fā)針對該病毒的有效疫苗是避免禽白血病病毒早期感染， 加快禽白血病凈化進(jìn)程的有效途徑。 李佩國帶領(lǐng)團(tuán)隊(duì)以分離的禽白血病流行亞群ALV-J 為材料，進(jìn)行了“河北地區(qū)ALV-J gp85 原核、真核表達(dá)構(gòu)建及免疫保護(hù)力評價(jià)， 初步研發(fā)出具有一定免疫效果的禽白血病核酸疫苗， 為禽白血病核酸疫苗的開發(fā)與應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

白痢沙門菌為典型胞內(nèi)寄生菌， 機(jī)體清除其感染要同時(shí)依賴于細(xì)胞免疫和體液免疫，因此減毒弱疫苗白痢沙門菌疫苗是開發(fā)的主要方向。 李佩國團(tuán)隊(duì)借鑒醫(yī)學(xué)上傷寒沙門菌及其他病原菌疫苗開發(fā)經(jīng)驗(yàn)， 選取白痢沙門菌上重要的毒力相關(guān)基因cpxR、htrA 和wzxE 作為研究對象， 利用λ-同源重組技術(shù)對白痢沙門菌的cpxR、htrA 和wzxE 等基因進(jìn)行了敲除， 構(gòu)建出雞白痢沙門菌cpxR、htrA 和wzxE 等基因缺失菌株疫苗，并對其與細(xì)菌抗應(yīng)激、蛋清存活、LPS 合成及細(xì)菌致病力間的密切關(guān)系等方面進(jìn)行生物學(xué)特性進(jìn)行分析， 為開發(fā)安全有效的沙門菌疫苗奠定了基礎(chǔ)。

二是對新發(fā)病進(jìn)行系統(tǒng)研究

安卡拉病是由I 亞群血清4 型禽腺病毒引起的一種新型雞傳染病， 容易與其他疾病混合感染，臨床很難確診。 而實(shí)驗(yàn)室診斷大多操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)，不便于基層推廣應(yīng)用。 基于以上原因，李佩國團(tuán)隊(duì)選擇臨床采集的安卡拉陽性血清和實(shí)驗(yàn)室保存的SPF 陰性血清，利用純化的GSThexon 重組蛋白作為包被抗原，通過摸索抗原稀釋度、一抗血清稀釋度、包被條件、酶標(biāo)二抗稀釋度、避光顯色時(shí)間等條件，建立的安卡拉病毒Hexon 蛋白間接ELISA 檢測方法，具有很好的重復(fù)性、特異性、敏感性，作為快速診斷安卡拉病毒的重要手段，具有較好的應(yīng)用價(jià)值。

為了更好地對雞安卡拉病進(jìn)行防控， 李佩國團(tuán)隊(duì)還構(gòu)建了雞安卡拉病毒Hexon-Penton 串聯(lián)重組核酸疫苗，具有很好的免疫效果，為安卡拉病毒亞單位疫苗的應(yīng)用提供支撐。 同時(shí)選取了連翹、魚腥草、板藍(lán)根等8 種抗病毒中草藥進(jìn)行了體內(nèi)外抗FAdV-4 的研究， 通過CPE 觀察和CCK-8 檢測初步篩選出抗FAdV-4 的有效中草藥，選取3 種不同的作用方式（中草藥對病毒的直接殺傷、中草藥對病毒的吸附阻斷、中草藥對病毒的復(fù)制阻斷） 確定了中草藥抗病毒的有效抑制率，研究了中草藥在體外抗病毒的機(jī)制。團(tuán)隊(duì)在2019 年制定了河北省地方標(biāo)準(zhǔn)“雞安卡拉病防治技術(shù)規(guī)程”，并在河北省不同地區(qū)的試驗(yàn)站進(jìn)行推廣。

三是對蛋雞常發(fā)疾病進(jìn)行研究

針對河北省蛋雞多發(fā)的主要疫病雞傳染性支氣管炎，該病傳播速度快、發(fā)病率高，影響?zhàn)B禽業(yè)的健康發(fā)展。 傳染性支氣管炎病毒（IBV）的基因組易發(fā)生變異和重組， 導(dǎo)致其基因型和血清型眾多，且交叉保護(hù)力弱，不同地區(qū)或者同一地區(qū)的基因型都可能出現(xiàn)較大差別， 為了解河北省傳染性支氣管炎病毒流行毒株情況， 團(tuán)隊(duì)對不同地區(qū)進(jìn)行臨床樣本采集并檢測， 并分離毒株進(jìn)行全基因組測序，對IBV 的基因型、同源性進(jìn)行分析， 結(jié)果顯示， 我省IBV 流行毒株與LX4 型的QX 株相似性的最高。團(tuán)隊(duì)還檢測了河北省IBV 流行株的致病性， 并評估了常用商品疫苗H120、QX 和4/91 對我省IBV 流行毒株的保護(hù)效果， 為河北省蛋雞養(yǎng)殖企業(yè)選擇適合的疫苗提供幫助。

團(tuán)隊(duì)還通過河北地區(qū)蛋雞IBV 流行毒株建立了IBV 的ELISA 檢測方法， 可作為快速診斷和免疫檢測IBV 的重要手段， 具有較好的應(yīng)用價(jià)值。

團(tuán)隊(duì)利用河北地區(qū)蛋雞IBV 流行毒株研發(fā)了滅活疫苗，經(jīng)測定安全無毒性，穩(wěn)定性好，免疫攻毒試驗(yàn)顯示，IBV 滅活疫苗免疫后可產(chǎn)生較高的抗體水平，且對同株產(chǎn)生很好的保護(hù)效果，將為河北省蛋雞傳染性支氣管炎的防控提供幫助。

同時(shí)建立了細(xì)胞病變模型， 以原代雞胚腎（CEK） 細(xì)胞為宿主， 通過觀察細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）、細(xì)胞計(jì)數(shù)（CCK-8）計(jì)算有效抑制率，再結(jié)合實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR 法檢測IBV 核衣殼蛋白（N）基因的mRNA 相對表達(dá)量，三者方法結(jié)合起來，根據(jù)結(jié)果評估藥物體外抗IBV 效果，研究結(jié)果表明連翹酯苷A 抗河北QX 型IBV 的效果良好，為開發(fā)新型、有效的抗IBV 中藥藥物奠定基礎(chǔ)。

針對河北省蛋雞多發(fā)的主要疫病雞大腸桿菌病， 團(tuán)隊(duì)每年都從不同地區(qū)進(jìn)行臨床樣本采集并分離菌株，并進(jìn)行了系統(tǒng)研究，通過對分離菌株進(jìn)行血清型、致病力、耐藥性、耐藥基因、毒力基因等檢測，摸清了優(yōu)勢菌株流行規(guī)律，掌握不同地區(qū)大腸桿菌的耐藥譜及耐藥變化情況，為不同地區(qū)防控雞大腸桿菌病提夠幫助。

同時(shí)， 團(tuán)隊(duì)還進(jìn)行了防治雞大腸桿菌復(fù)方中草藥的篩選，通過人工感染動物試驗(yàn)，篩選出了具有一定防治效果的復(fù)方中草藥超微粉，并在一些蛋雞場進(jìn)行應(yīng)用， 在一定階段可作為抗生素的替代品，減少抗生素的使用。

雞球蟲病是一種嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)的主要寄生蟲病，該病分布廣泛，感染率、死亡率高，病愈后雛雞生長長期受阻，產(chǎn)蛋性能下降，給養(yǎng)雞業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。 防止球蟲病最常用的是藥物防治和活疫苗， 但是兩者都伴隨著一定的風(fēng)險(xiǎn)與局限性。 為此李佩國團(tuán)隊(duì)研發(fā)出了雞球蟲新型核酸疫苗。 一是構(gòu)建了柔嫩艾美耳球蟲（E.tenella）河北株卡介苗活載體疫苗。 二是研發(fā)柔嫩艾美耳球蟲AMA-1、SO7 基因疫苗。研究克隆了E.tenella HB 株AMA-1 基因與SO7 基因分別與IL-2 和pPIC9 串聯(lián)， 構(gòu)建了免疫調(diào)節(jié)型真核表達(dá)載體GS115-pPIC9-IL-2-AMA-1、GS115-pPIC9-IL-2-SO7 并進(jìn)行蛋白表達(dá)，用純化后的重組蛋白IL-2-AMA-1 及IL-2-SO7 對進(jìn)行免疫保護(hù)性試驗(yàn)， 均達(dá)到了良好的抗球蟲效果，綜合評價(jià)其抗球蟲效果、免疫原性和抗氧化能力， 為柔嫩艾美耳球蟲核酸疫苗的應(yīng)用提供依據(jù)。

除了針對主要疾病進(jìn)行研究， 在指導(dǎo)蛋雞用藥安全與免疫操作技術(shù)規(guī)程上， 李佩國團(tuán)隊(duì)也做了深入的分析與研究。 養(yǎng)殖生產(chǎn)中，存在藥物品種、劑量和使用療程的盲目性，造成藥物用量大、防治效果差，污染環(huán)境。 也存在免疫程序不科學(xué)，疫苗使用呈現(xiàn)“三多一大”現(xiàn)象，致使蛋雞長期處于應(yīng)激狀態(tài)，免疫器官不堪重負(fù)，產(chǎn)生免疫抑制或麻痹，導(dǎo)致免疫無應(yīng)答。 為了有效防治細(xì)菌性和支原體疾病，規(guī)范免疫程序，保證畜產(chǎn)品安全，團(tuán)隊(duì)組織編寫了蛋雞安全用藥手冊，制定并頒布實(shí)施了河北省地方標(biāo)準(zhǔn) “雞免疫操作技術(shù)規(guī)程”，并在沿海、冀東等試驗(yàn)站30 個養(yǎng)雞場推廣應(yīng)用。

四是建立了蛋雞痛風(fēng)快速診斷方法

雞痛風(fēng)病主要是通過臨床表現(xiàn)和病理剖檢變化進(jìn)行初步診斷，不能對其進(jìn)行早期診斷，為此， 本研究通過使用雙氯芬酸鈉藥物建立成年蛋雞的痛風(fēng)病理模型， 確定發(fā)生雞痛風(fēng)時(shí)的尿酸臨界值，借助人痛風(fēng)病快速診斷原理，通過尿酸干化學(xué)試驗(yàn)， 研發(fā)出可以快速準(zhǔn)確診斷雞痛風(fēng)病的尿酸干化學(xué)試紙條，具有較好的特異性、重復(fù)性、敏感性，可在臨床上推廣及應(yīng)用。

推廣創(chuàng)新成果 助推蛋雞產(chǎn)業(yè)發(fā)展

五年期間， 李佩國率領(lǐng)團(tuán)隊(duì)在河北省不同地區(qū)試驗(yàn)站的示范場積極開展蛋雞疫病檢測與防控技術(shù)的推廣工作。 “任何科技創(chuàng)新成果只有落地實(shí)施推廣應(yīng)用并產(chǎn)生作用， 才能真正展現(xiàn)價(jià)值。 ” 李佩國告訴記者，“我們的科研創(chuàng)新成果——種雞場雞白痢和禽白血病的凈化技術(shù)、建立的診斷方法、 雞場用藥和免疫操作技術(shù)規(guī)程都得到了不同程度地推廣應(yīng)用， 并取得了良好的效果。 ”

據(jù)李佩國介紹， 其團(tuán)隊(duì)先后對秦皇島都山金牧種禽科技有限公司、 張家口市綠色田園禽業(yè)科技有限公司、 贊皇縣天然農(nóng)產(chǎn)品開發(fā)有限公司、河北大午農(nóng)牧集團(tuán)種禽科技有限公司、天凱牧業(yè)種禽有限公司、 來源六旺川養(yǎng)殖有限公司、石家莊寶豐種雞場、河北灤平華都食品有限公司種雞場、河北三興家禽育種有限公司、河北華裕家禽育種公司、滄州志華種雞場等11 個種雞場調(diào)研， 選擇了6 個示范場開展種雞雞白痢與禽白血病的檢測與凈化技術(shù)的推廣， 涉及種雞100 萬套，五年來，對6 個示范場采集蛋清或肛拭子樣本共8862 份，進(jìn)行ALV-P27 抗原和雞白痢的檢測。 發(fā)現(xiàn)國外引進(jìn)品種海蘭褐和國內(nèi)自主培育的大午金鳳、大午小金鳳、京白939、農(nóng)大3 號、北農(nóng)1 號、農(nóng)大3 號等品種的雞白痢和禽白血病的檢出率均較低，其中雞白痢的年檢出率為0～0.32%， 禽白血病的年檢出率為0～1.25%， 其中大午家禽育種公司種對雞禽白血病和雞白痢凈化保持較好；而地方品種太行雞和壩上長尾雞的雞白痢和禽白血病的檢出率相對較高，且逐年下降。

建立的禽傳染性支氣管炎和雞安卡拉病的ELISA 檢測方法及禽痛風(fēng)快速診斷方法在秦皇島、唐山、滄州、石家莊等地區(qū)30 個商品蛋雞場推廣應(yīng)用， 三種方法具有很好的特異性、 重復(fù)性、敏感性，提高了疾病診斷水平。

編制的蛋雞安全用藥手冊和雞免疫操作技術(shù)規(guī)程在秦皇島、唐山、滄州、石家莊等地區(qū)30個商品蛋雞場推廣應(yīng)用， 指導(dǎo)養(yǎng)雞場正確使用藥物，進(jìn)一步提升了雞場免疫操作的技術(shù)水平，提高雞只免疫效果， 對養(yǎng)雞業(yè)健康發(fā)展起到積極的推動作用。

發(fā)揮技術(shù)優(yōu)勢 著力提升產(chǎn)業(yè)脫貧實(shí)效

脫貧攻堅(jiān)戰(zhàn)全面勝利后， 做好鞏固拓展脫貧攻堅(jiān)成果同鄉(xiāng)村振興有效銜接， 是習(xí)近平總書記做出的重大決策部署。 為此，團(tuán)隊(duì)成員持續(xù)深入青龍縣、淶源縣、南皮縣開展產(chǎn)業(yè)技術(shù)扶貧工作，通過實(shí)地調(diào)研指導(dǎo)、電話咨詢、舉辦培訓(xùn)會、 贈送獸藥等方式， 協(xié)調(diào)青龍前嶺養(yǎng)殖合作社、秦皇島都山金牧種禽科技有限公司、來源六旺川養(yǎng)殖合作社和滄州市澤豐禽業(yè)有限公司解決貧困戶的就業(yè)問題， 為貧困戶脫貧提供基礎(chǔ)保障。 另一方面，就當(dāng)?shù)氐半u養(yǎng)殖戶，通過建立聯(lián)合體，為養(yǎng)殖戶提供優(yōu)質(zhì)雞苗、飼料和相關(guān)技術(shù)，并在雞舍建設(shè)上提供方案，大大降低了養(yǎng)殖戶的風(fēng)險(xiǎn)，使養(yǎng)戶達(dá)到少投入，多獲利的目的，做到了真正的精準(zhǔn)扶貧，直接帶動1000 余貧困戶增收。 此外，李佩國團(tuán)隊(duì)常年為秦皇島、唐山及周邊地區(qū)進(jìn)行疾病檢測與技術(shù)服務(wù)， 為養(yǎng)雞場提供藥物敏感檢測和禽流感H5、H7、H9 和新城疫抗體效價(jià)的監(jiān)測服務(wù)，五年來，共進(jìn)行藥敏檢測950 次，抗體檢測10500 份，解決了蛋雞養(yǎng)殖企業(yè)疫病診斷、免疫、用藥等生產(chǎn)實(shí)際問題。

厚積薄發(fā)破難攻堅(jiān)，匠心履職勇攀高峰。 五年來， 李佩國帶領(lǐng)團(tuán)隊(duì)始終立足于蛋雞養(yǎng)殖企業(yè)，致力于維護(hù)蛋雞產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展，孜孜不倦地奮斗在蛋雞疫病防控路上，初心不悔，矢志不渝……