基于基準(zhǔn)關(guān)聯(lián)度和AHP-熵權(quán)法綜合評價經(jīng)典名方小續(xù)命湯古今提取工藝

代 珊，李 帥，張愛軍*，毛九州，朱紅梅

基于基準(zhǔn)關(guān)聯(lián)度和AHP-熵權(quán)法綜合評價經(jīng)典名方小續(xù)命湯古今提取工藝

代 珊1, 2，李 帥2#，張愛軍1, 2*，毛九州2，朱紅梅2

1. 西南醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，四川 瀘州 646000 2. 四川省中醫(yī)藥科學(xué)院，四川 成都 610041

評價現(xiàn)代工藝與傳統(tǒng)工藝產(chǎn)品質(zhì)量的一致性，應(yīng)用基準(zhǔn)關(guān)聯(lián)度和層析分析法（AHP）-熵權(quán)法篩選小續(xù)命湯現(xiàn)代提取工藝參數(shù)。以小續(xù)命湯中鹽酸偽麻黃堿、黃芩苷、芍藥苷含量以及指紋圖譜相似度和出膏率為評價指標(biāo)，選取料液比、提取時間、提取次數(shù)為影響因素進(jìn)行正交試驗設(shè)計。首次引入基準(zhǔn)關(guān)聯(lián)度的概念，計算不同提取參數(shù)的各種評價指標(biāo)下各樣品與基準(zhǔn)樣品的基準(zhǔn)關(guān)聯(lián)度，采用AHP-熵權(quán)法確定各種評價指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)，進(jìn)行綜合評分?；鶞?zhǔn)關(guān)聯(lián)度結(jié)合AHP-熵權(quán)法篩選出的小續(xù)命湯現(xiàn)代提取工藝參數(shù)為全方藥材加12倍量的水提取1 h，6批驗證試驗綜合評分大于94.12，RSD為1.87%，且均符合基準(zhǔn)樣品質(zhì)量要求，該提取參數(shù)與最終大生產(chǎn)的參數(shù)具有一致性?；鶞?zhǔn)關(guān)聯(lián)度和AHP-熵權(quán)法用于篩選經(jīng)典名方小續(xù)命湯的現(xiàn)代提取工藝參數(shù)具有可行性，并能為其他經(jīng)典名方的現(xiàn)代提取研究提供理論依據(jù)。

基準(zhǔn)關(guān)聯(lián)度；層次分析法；信息熵權(quán)法；小續(xù)命湯；提取工藝；鹽酸偽麻黃堿；黃芩苷；芍藥苷

2018年國家中醫(yī)藥管理局發(fā)布了《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》[1]，經(jīng)典名方小續(xù)命湯也收載于其中，該方出自《備急千金要方》（唐·孫思邈），由麻黃、防己、人參、黃芩、桂心、甘草、芍藥、川芎、杏仁各1兩，附子1枚，防風(fēng)1兩半，生姜5兩組成。小續(xù)命湯主治卒中風(fēng)欲死、身體緩急、口目不正、舌強不能語、奄奄忽忽、神情悶亂，諸風(fēng)服之皆驗，不令人虛方。目前臨床上主要用于治療中風(fēng)及中風(fēng)后遺癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病周圍神經(jīng)性病變等疾病。

根據(jù)2021年8月國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心發(fā)布的《按古代經(jīng)典名方目錄管理的中藥復(fù)方制劑藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》[2]記載，基準(zhǔn)樣品是指按照國家發(fā)布的古代經(jīng)典名方關(guān)鍵信息及古籍記載，研究、制備而得。根據(jù)現(xiàn)有資料查閱，通過古今劑量換算，確定了方中1兩約等于13.80 g[3-4]，1斗為10升，1升為200 mL[5-6]，基本確定了經(jīng)典名方小續(xù)命湯的現(xiàn)代提取工藝的部分參數(shù)。但是由于經(jīng)典名方中藥復(fù)方制劑的開發(fā)要以遵古為基本原則，到了大生產(chǎn)上，由于提取容器、火力大小的變化而導(dǎo)致提取時間可能會發(fā)生巨大變化，從而導(dǎo)致中試產(chǎn)品與基準(zhǔn)樣品的質(zhì)量不一致，所以保證生產(chǎn)工藝與傳統(tǒng)工藝兩者的產(chǎn)品質(zhì)量一致是經(jīng)典名方研究成功的關(guān)鍵。但經(jīng)典名方要實現(xiàn)傳統(tǒng)制法與現(xiàn)代工藝生產(chǎn)的質(zhì)量一致性尚存在許多問題，比如提取、濃縮、干燥等工藝，其中的提取工藝是一大難點。目前中藥提取工藝研究方法常用正交試驗、均勻設(shè)計、Box-Behnken響應(yīng)面法等，但都是以最大限度提取出成分為目的對其進(jìn)行評價，這與經(jīng)典名方遵古的要求不符。

為了解決該問題，課題組首次提出了基準(zhǔn)關(guān)聯(lián)度（standard relation，SR）的概念，它可用于評價現(xiàn)代工藝與傳統(tǒng)工藝兩者產(chǎn)品的質(zhì)量是否一致，是評價不同樣品與基準(zhǔn)樣品間的相似度的關(guān)鍵參數(shù)，該數(shù)值越接近100%，則該樣品的現(xiàn)代工藝與傳統(tǒng)工藝最接近。本實驗采用層次分析法（analytic hierarchy process，AHP）-熵權(quán)法確定各個測定指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)，可將主觀賦權(quán)法和客觀賦權(quán)法結(jié)合，實現(xiàn)主客觀內(nèi)在統(tǒng)一，使評價結(jié)果真實、科學(xué)、可信，合理性較高。進(jìn)一步對不同評價指標(biāo)下的基準(zhǔn)關(guān)聯(lián)度進(jìn)行綜合評分，即可篩選出代替?zhèn)鹘y(tǒng)工藝的現(xiàn)代提取工藝參數(shù)，為后續(xù)經(jīng)典名方小續(xù)命湯的工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。本實驗建立的基準(zhǔn)關(guān)聯(lián)度結(jié)合AHP-熵權(quán)法的評價方法，也為后續(xù)如何保證中試工藝、工業(yè)生產(chǎn)與基準(zhǔn)樣品的質(zhì)量一致性提供了科學(xué)的評價依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1260高效液相色譜儀，美國Agilent公司；KQ-300B超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；Sorvau ST16R高速離心機，美國Thermo Scientific科技公司；AUW220D分析天平，日本島津公司；JY5002電子天平，上海良平儀器；DB207電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，成都電烘箱廠。

1.2 試劑

甲醇、乙腈，色譜純，美國天地公司；甲酸，色譜純，成都市科隆化工試劑廠；其余試劑均為分析純。

1.3 藥材

麻黃、防己、人參、黃芩、肉桂、甘草、白芍、川芎、苦杏仁、附子、防風(fēng)、生姜均由四川省中醫(yī)藥科學(xué)院方清茂研究員、張美副研究員、周先建副研究員鑒定，麻黃為麻黃科麻黃屬植物草麻黃Stapf，防己為防己科千金藤屬植物粉防己S. Moore的干燥根，人參五加科人參屬植物人參C. A. Mey.的干燥根和根莖，黃芩為唇形科黃芩屬植物黃芩Georgi的干燥根，肉桂為樟科樟屬植物肉桂Presl的干燥樹皮，甘草為豆科甘草屬植物甘草Fisch.干燥根和根莖，白芍為毛茛科芍藥屬植物芍藥Pall.的干燥根，川芎為傘形科藁本屬植物川芎Hort.的干燥根莖，苦杏仁為薔薇科杏屬植物山杏L. var.Maxim的干燥成熟種子，附子為毛茛科烏頭屬植物烏頭Debx.的子根的加工品，防風(fēng)為傘形科防風(fēng)屬植物防風(fēng)(Turcz.) Schischk.的干燥根，生姜為姜科姜屬植物姜Rose.的新鮮根莖。以上藥材均按照《中國藥典》2020年版方法炮制成符合要求的飲片。

2 方法與結(jié)果

2.1 出膏率的測定

精密量取小續(xù)命湯水煎液50 mL，置于已恒定質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于烘箱105 ℃干燥至恒定質(zhì)量（5 h），計算出膏率。

出膏率＝V/(50)

為50 mL提取液中干浸膏質(zhì)量，為總提取液體積，為投料飲片質(zhì)量

2.2 指紋圖譜的測定[7]

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Agilent C-18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脫：0～55 min，2%～15%乙腈；55～70 min，15%乙腈；70～75 min，15%～17%乙腈；75～95 min，17%～20%乙腈；95～110 min，20%乙腈；110～120 min，20%～25%乙腈；120～140 min，25%～40%乙腈；140～170 min，40%～60%乙腈；柱溫25℃；體積流量1mL/min；檢測波長203 nm；進(jìn)樣量10 μL。

2.2.2 供試品溶液的制備 稱取小續(xù)命湯提取物約1.4 g，精密加入25 mL50%甲醇，混勻，超聲20 min，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3 鹽酸偽麻黃堿的測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱為Sepax ME-Ephedrine（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇-0.092%磷酸水溶液（含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺）（1.5∶98.5）為流動相；體積流量1 mL/min；檢測波長210 nm；進(jìn)樣量10 μL。

2.3.2 對照品溶液的制備 取鹽酸偽麻黃堿適量，精密稱定，加甲醇制成含鹽酸偽麻黃堿60 μg/mL的對照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 精密稱取小續(xù)命湯提取物約0.5 g，精密加入1.44%磷酸水溶液20 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用1.44%磷酸水溶液補足減失的質(zhì)量，搖勻，8000 r/min離心（離心半徑9.9 cm）5 min，取上清液，即得供試品溶液。

2.3.4 專屬性試驗 按照小續(xù)命湯處方，稱取除麻黃外的其余藥味，制備缺麻黃的麻黃陰性提取物，按“2.3.3”項下方法制備陰性供試品溶液。精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，按“2.3.1”項下色譜條件測定，結(jié)果如圖1所示。

2.3.5 線性關(guān)系考察 取“2.3.2”項下的對照品溶液，加甲醇稀釋成不同質(zhì)量濃度的對照品溶液，按“2.3.1”項下條件進(jìn)樣分析，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（，峰面積為縱坐標(biāo)（）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行線性回歸分析，計算線性回歸方程，結(jié)果鹽酸偽麻黃堿的線性方程為＝21.133 3＋1.895 2，＝0.999 9，線性范圍為2.13～171.86 μg/mL，結(jié)果表明鹽酸偽麻黃堿線性關(guān)系良好。

圖1 陰性樣品(A)、鹽酸偽麻黃堿對照品(B)和小續(xù)命湯樣品(C)的HPLC圖

2.3.6 精密度試驗 取同一份供試品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄鹽酸偽麻黃堿峰面積，計算其RSD值，結(jié)果峰面積RSD為0.50%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液，室溫放置，按“2.3.1”項下色譜條件，于0、2、4、6、12、24 h進(jìn)樣分析，記錄鹽酸偽麻黃堿峰面積，計算其RSD值，結(jié)果峰面積RSD為0.40%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.8 重復(fù)性試驗 取同一份小續(xù)命湯提取物，按“2.3.3”項下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄鹽酸偽麻黃堿峰面積，結(jié)果鹽酸偽麻黃堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)RSD為0.85%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.9 加樣回收試驗 取已知含量的同一份小續(xù)命湯提取物共9份，每份約0.25 g，分成3組，分別按已知質(zhì)量濃度的80%、100%、120% 3個水平加入各對照品溶液，按“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄鹽酸偽麻黃堿峰面積，計算加樣回收率。鹽酸偽麻黃堿的平均加樣回歸收率為88.2%，RSD值為3.95%，結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確度良好。

2.4 芍藥苷和黃芩苷的測定

2.4.1 色譜條件 色譜柱為Phenomenex C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇-甲酸（100∶ 0.05）溶液為流動相A，水-甲酸-乙二胺（100∶ 0.1∶0.1）溶液為流動相B，梯度洗脫：0～5 min，18% A；5～40 min，18%～40% A；40～50 min，40%～80% A；體積流量1 mL/min；檢測波長：0～25 min，230 nm（芍藥苷），25～50 min，280nm（黃芩苷）；進(jìn)樣量10 μL。

2.4.2 對照品溶液的制備 取芍藥苷和黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成分別含芍藥苷239.18 μg/mL、黃芩苷111.62 μg/mL的混合對照品溶液。

2.4.3 供試品溶液的制備 精密稱取小續(xù)命湯提取物約0.3 g，精密加入70%乙醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用70%乙醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，8000 r/min離心（離心半徑9.9 cm）5 min，取上清液，即得芍藥苷含量測定供試品溶液；芍藥苷供試品溶液稀釋10倍，即得黃芩苷含量測定供試品溶液。

2.4.4 專屬性試驗 按照小續(xù)命湯處方，稱取除白芍、黃芩外的其余藥味，制備缺白芍、黃芩的陰性提取物，按“2.4.3”項下方法制備陰性供試品溶液。精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，按“2.4.1”項下色譜條件測定，結(jié)果見圖2。

圖2 復(fù)方供試品(A)、缺白芍陰性(B)、缺黃芩陰性(C)和混合對照品(D)的HPLC圖

2.4.5 線性關(guān)系考察 取“2.4.2”項下的對照品溶液，加甲醇稀釋成不同質(zhì)量濃度的對照品溶液，按“2.4.1”項下條件進(jìn)樣分析，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），峰面積為縱坐標(biāo)（）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行線性回歸分析，計算線性回歸方程，結(jié)果芍藥苷的線性方程為＝13.490 8－1.284 8，＝0.999 8，線性范圍為4.78～239.18 μg/mL，黃芩苷的線性方程為＝33.282 4－15.844 5，＝0.999 7，結(jié)果表明芍藥苷、黃芩苷線性關(guān)系良好。

2.4.6 精密度試驗 取同一份供試品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計算其RSD%，結(jié)果芍藥苷的峰面積RSD%為1.55%，黃芩苷峰面積RSD%為0.43%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.4.7 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液，室溫放置，按“2.4.1”項下色譜條件，于0、2、4、6、12、24、48 h進(jìn)樣分析，記錄峰面積，計算其RSD，結(jié)果芍藥苷的峰面積RSD為1.12%，黃芩苷峰面積RSD為0.43%，結(jié)果表明供試品溶液在48 h穩(wěn)定。

2.4.8 重復(fù)性試驗 取同一份小續(xù)命湯提取物，按“2.4.3”項下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積，結(jié)果芍藥苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)RSD為1.29%，黃芩苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)RSD為1.46%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.9 加樣回收試驗 取已知含量的同一份小續(xù)命湯提取物共9份，每份約0.15 g，分成3組，分別按已知質(zhì)量濃度的50%、100%、150% 3個水平加入各對照品溶液，按“2.4.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積，計算加樣回收率。芍藥苷的平均加樣回歸收率為92.44%，RSD為2.27%，黃芩苷的平均加樣回歸收率為103.78%，RSD為1.55%，結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確度良好。

2.5 古今提取工藝研究

2.5.1 古法煎煮（傳統(tǒng)工藝） 經(jīng)典名方小續(xù)命湯為《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》中的第32首方劑，其制法記載為右十二味，?咀，以水一斗二升，先煮麻黃三沸，去沫，內(nèi)諸藥，煮取三升。對現(xiàn)有文獻(xiàn)進(jìn)行查閱，“?咀”是指黃豆大小，所以小續(xù)命湯的古法煎煮方式為按處方量稱取同一批次的小續(xù)命湯12味藥材飲片，將其粉碎為粒徑小于2～6 mm大小的顆粒[8]，鍋中加水2400 mL，先將麻黃放入鍋中煮沸，麻黃三沸，去沫，放入其余藥材，煎至藥液體積約為600 mL即可，即得小續(xù)命湯基準(zhǔn)樣品，樣品檢測結(jié)果見表1。

2.5.2 正交試驗設(shè)計 稱取與傳統(tǒng)工藝相同處方量的同一批的藥材飲片，共9份，以料液比（A）、提取時間（B）、提取次數(shù)（C）3個因素為考察對象，以提取物中鹽酸偽麻黃堿、黃芩苷、芍藥苷含量，指紋圖譜相似度以及出膏率為評價指標(biāo)，按L9(34)正交表進(jìn)行提取，樣品檢測結(jié)果見表1。

2.6 基準(zhǔn)關(guān)聯(lián)度的原理方法

2.6.1 確定評價對象 基準(zhǔn)關(guān)聯(lián)度是評價某樣品與基準(zhǔn)樣品的相似度的關(guān)鍵參數(shù)，應(yīng)首先確定樣品評價的指標(biāo)數(shù)目和樣品數(shù)目。本方法的基本路線如圖3所示，本實驗將正交試樣9個樣品和基準(zhǔn)樣品進(jìn)行對比，以鹽酸偽麻黃堿、黃芩苷、芍藥苷的含量和指紋圖譜相似度以及出膏率5個指標(biāo)為評價指標(biāo)，以X,j、S為評價對象，X,j表示正交試驗的第（＝1，2，…，）個樣本的第（＝1，2，…，）個指標(biāo)下的測量值，S表示基準(zhǔn)樣品的第（＝1，2，…，）個指標(biāo)下的測量值。

表1 正交試驗與古法提取結(jié)果

Table 1 Results of orthogonal test and ancient extraction

試驗號AB/hC空白(D)質(zhì)量分?jǐn)?shù)/(mg?g?1)指紋圖譜相似度出膏率/%綜合評分 鹽酸偽麻黃堿黃芩苷芍藥苷 11∶8 (1)0.5 (1)1 (1)(1)4.0963.8718.280.99714.4891.78 21∶8 (1)1.0 (2)2 (2)(2)7.2898.8620.610.99521.1744.29 31∶8 (1)1.5 (3)3 (3)(3)9.00103.1623.690.99123.3214.63 41∶10 (2)0.5 (1)2 (2)(3)5.7491.5921.730.99718.8970.96 51∶10 (2)1.0 (2)3 (3)(1)10.48118.5023.120.13322.78?12.96 61∶10 (2)1.5 (3)1 (1)(2)6.2898.3317.980.99616.1864.70 71∶12 (3)0.5 (1)3 (3)(2)7.80108.3021.190.99621.4334.24 81∶12 (3)1.0 (2)1 (1)(3)4.1766.5514.270.99414.0893.14 91∶12 (3)1.5 (3)2 (2)(1)8.81104.3919.830.99120.8820.30 古法煎煮////4.4664.0512.991.00016.09

圖3 方法流程圖

2.6.2 計算相對偏差（relative deviation，RD,j）值 其基本計算原理源于《按古代經(jīng)典名方目錄管理的中藥復(fù)方制劑藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》文件要求，基準(zhǔn)樣品處在均值的70%～130%，都是符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的。所以本研究通過公式（1）計算X,j相對于S的RD,j值，更科學(xué)全面地分析了不同樣品與基準(zhǔn)樣品的相似度。RD,j表示第（＝1，2，…，）個樣本的第（＝1，2，…，）個指標(biāo)下的相對偏差。計算結(jié)果見表2，RD,j越小，代表X,j相對于S的偏差越小，即該樣品與基準(zhǔn)樣品相似度越高。結(jié)果表明，當(dāng)以鹽酸偽麻黃堿和芍藥苷含量為評價指標(biāo)，與古法接近的試驗號為8，以黃芩苷和指紋圖譜相似度為評價指標(biāo)，與古法接近的試驗號為1，以出膏率為評價指標(biāo)，與古法接近的試驗號為6，因此需進(jìn)行綜合評分后才確定相關(guān)提取工藝參數(shù)。

表2 正交試驗的RDi,j

Table 2 RDi,j of orthogonal test

試驗號RDi,j 鹽酸偽麻黃堿黃芩苷芍藥苷指紋圖譜相似度出膏率 10.080.000.410.000.10 20.630.540.590.010.32 31.020.610.820.010.45 40.290.430.670.000.17 5 1.350.850.780.870.42 60.410.540.380.000.01 70.750.690.630.000.33 80.060.040.100.010.12 90.980.630.530.010.30

RD,j＝|X,j－S|/S（1）

2.6.3 定義并計算基準(zhǔn)關(guān)聯(lián)度（standard relation，SR,j） 由于RD,j無法進(jìn)行綜合評分，于是課題組采用了一種方法給予每個評價對象1個評價值，即SR,j。該方法是根據(jù)表2中各指標(biāo)下正交試驗各樣品與基準(zhǔn)樣品的RD,j，然后根據(jù)公式（2）計算SR,j即可。SR,j表示第（＝1，2，…，）個樣本的第（＝1，2，…，）個指標(biāo)下的基準(zhǔn)關(guān)聯(lián)度。因此最終課題組將基準(zhǔn)關(guān)聯(lián)度定義為以按古籍記載內(nèi)容制備的基準(zhǔn)樣品質(zhì)量為標(biāo)準(zhǔn)值（），以現(xiàn)代工藝參數(shù)制得的樣品質(zhì)量為測得值（），以不同的指標(biāo)為評價指標(biāo)，按公式（3）計算所得數(shù)值，稱為基準(zhǔn)關(guān)聯(lián)度，此數(shù)值越接近100%說明在該指標(biāo)下的現(xiàn)代工藝參數(shù)制得的樣品與基準(zhǔn)樣品相似度越高。計算結(jié)果見表3，因此下一步即可采用AHP-熵權(quán)法確定各指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)，進(jìn)行綜合評分。

SR,j＝1－RD,j（2）

SR,j＝1－|X,j－S|/S（3）

表3 正交試驗的SRi,j

Table 3 SRi,j of orthogonal test

試驗號SRi,j 鹽酸偽麻黃堿黃芩苷芍藥苷指紋圖譜相似度出膏率 191.7499.7159.3699.7089.99 236.5645.6641.3699.5068.43 3?2.0238.9417.6799.1055.07 471.1157.0132.7599.7082.60 5?35.2015.0022.0413.3058.42 659.0846.4961.6699.6099.44 724.8530.9136.9699.6066.81 893.6296.1090.2199.4087.51 92.2837.0347.3699.1070.23

2.7 AHP-熵權(quán)法組合權(quán)重的計算

2.7.1 AHP主觀賦權(quán)[9]

（1）構(gòu)建判斷矩陣：主要根據(jù)君臣佐使原則[10]，小續(xù)命湯方中麻黃為君藥，具有祛風(fēng)寒邪，發(fā)汗解表的作用，與防風(fēng)、川芎、桂枝、防己、附子辛以散風(fēng)，諸藥合用，辛散之性強烈，故佐以黃芩之苦，人參、白芍之甘，既能防止辛散之品傷津耗氣，又能益氣養(yǎng)血，扶正以達(dá)邪[11-13]。故此，本研究結(jié)合《中藥新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》要求[14]，根據(jù)小續(xù)命湯的處方組成，首選君藥中的有效成分為含量測定指標(biāo)，同時考慮到與制備工藝、穩(wěn)定性的相關(guān)性，有針對性地選擇并確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制指標(biāo)，故測定了麻黃中的鹽酸偽麻黃堿、黃芩中的黃芩苷、白芍中的芍藥苷，同時輔以指紋圖譜和出膏率作為質(zhì)量控制手段，雖然指紋圖譜能反映小分子成分輪廓和定性特質(zhì)，但與含量測定的指標(biāo)成分相比，其所包含的質(zhì)量信息仍較少[15]，故其將其重要程度與出膏率視為同等重要。故按照鹽酸偽麻黃堿＞黃芩苷＞芍藥苷＞指紋圖譜相似度≈出膏率的順序，然后根據(jù)AHP理論判斷矩陣1～9標(biāo)度法，按同一層次內(nèi)個指標(biāo)的相對重要程度進(jìn)行打分，參照表4進(jìn)行。鹽酸偽麻黃堿為處方中的君藥的主要藥效成分，相對于黃芩中的黃芩苷較明顯重要，故標(biāo)為4，相對芍藥中的芍藥苷明顯重要，標(biāo)為5，相對于指紋圖譜相似度和出膏率明顯更為重要，標(biāo)為6，以此類推，根據(jù)公式（4）構(gòu)建判斷矩陣，數(shù)據(jù)見表5，用a表示因素相對于因素的比較結(jié)果。

（4）

表4 AHP構(gòu)建判斷矩陣的標(biāo)準(zhǔn)

Table 4 Criterion of constructing judgment matrix of AHP

標(biāo)度含義 1表示2個因素相比，具有相同重要性 3表示2個因素相比，前者比后者稍重要 5表示2個因素相比，前者比后者明顯重要 7表示2個因素相比，前者比后者強烈重要 9表示2個因素相比，前者比后者極端重要 2、4、6、8表示上述相鄰判斷的中間值 倒數(shù)若因素e與因素f的重要性之比為aef，那么因素f與因素e重要性之比為afe=1/aef

表5 指標(biāo)成對比較的判斷優(yōu)先矩陣

Table 5 Decision matrix of paired comparison on indexes

評價指標(biāo)鹽酸偽麻黃堿黃芩苷芍藥苷指紋圖譜相似度出膏率 鹽酸偽麻黃堿14566 黃芩苷1/41344 芍藥苷1/51/3122 指紋圖譜相似度1/61/41/211 出膏率1/61/41/211

（2）計算權(quán)重：首先對判斷矩陣進(jìn)行幾何平均（方根法），按公式（5）計算得到初始權(quán)重系數(shù)W′，a表示表示第（＝1，2，…，）個指標(biāo)因素對第（＝1，2，…，）個指標(biāo)因素的比較結(jié)果，然后按照公式（6）計算歸一化權(quán)重系數(shù)W，得到5個指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)依次為0.53、0.23、0.10、0.07、0.07。

W′＝(a1a2…a)1/n（5）

W＝W′/W′ （6）

（3）一致性檢驗：得到權(quán)重系數(shù)后需對矩陣進(jìn)行一致性檢驗，計算一致性指標(biāo)（consistency Index，CI）和一致性比例（consistency ratio，CR）。首先根據(jù)公式（7）計算最大特征根max，然后根據(jù)公式（8）計算CI，得到一致性指標(biāo)CI為0.04，一致性比例CR（CR＝CI/RI，在這里，RI是自由度指標(biāo)）為0.03，均小于0.1，表明該矩陣具有一致性。

max＝[(aW′/W′)]/（7）

CI＝(max－)/(－1) （8）

2.7.2 信息熵客觀賦權(quán)

（1）建立正交試驗原始數(shù)據(jù)矩陣：現(xiàn)有個樣本，個評價指標(biāo)，原始數(shù)據(jù)矩陣=(X)×n，根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)報道的方法[16-17]，以鹽酸偽麻黃堿、黃芩苷、芍藥苷含量，指紋圖譜相似度以及出膏率5個指標(biāo)為評價指標(biāo)，建立原始數(shù)據(jù)矩陣。

（2）將原始數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為概率矩陣：根據(jù)公式（9）將原始數(shù)據(jù)矩陣轉(zhuǎn)化為概率矩陣，P,j表示在第個指標(biāo)下第個樣本的概率。

P＝X/X（9）

2.7.3 計算各指標(biāo)的信息熵和權(quán)重系數(shù) 按照公式（10）計算各指標(biāo)的信息熵（H）依次為0.979 9、0.991 9、0.995 6、0.969 0、0.993 0，H越小代表指標(biāo)下的數(shù)據(jù)離散程度較高，那么其所提供的信息量就越大，按照公式（11）計算各指標(biāo)權(quán)重系數(shù)（WO）依次為0.29、0.11、0.06、0.44、0.10。

H＝?PlnP，＝1/ln（10）

WO＝(1－H)/(1－H) （11）

（3）組合權(quán)重的確定：采用AHP得到主觀權(quán)重系數(shù)，熵權(quán)法得到客觀權(quán)重系數(shù)，根據(jù)公式（12）計算各指標(biāo)組合權(quán)重系數(shù)，結(jié)果見表6。

W＝WSWO/WSWO（12）

表6 組合權(quán)重

Table 6 Weight value of indices

評價指標(biāo)WjSWjOWj 鹽酸偽麻黃堿0.530.290.68 黃芩苷0.230.110.12 芍藥苷0.110.060.03 指紋圖譜相似度0.070.440.14 出膏率0.070.100.03

2.8 綜合評分

通過AHP-熵權(quán)法得到的綜合權(quán)重系數(shù)可知，鹽酸偽麻黃堿指標(biāo)占比68%，黃芩苷占比12%，指紋圖譜相似度占比14%，芍藥苷和出膏率均占比3%，因此根據(jù)公式（13）計算綜合評分，結(jié)果見表1。由表1中結(jié)果可知，試驗8綜合評分最高，結(jié)果表示與古法最相似的現(xiàn)代工藝參數(shù)為A3B2C1，即以12倍量的水煎煮1 h得到的樣品與基準(zhǔn)樣品的質(zhì)量最為一致。

綜合評分＝SR,鹽酸偽麻黃堿×68%＋SR,黃芩苷×12%＋SR,芍藥苷×3%＋SR,出膏率×3%＋SR,指紋圖譜相似度×14% （13）

2.9 驗證試驗

根據(jù)最終確定的提取工藝參數(shù)進(jìn)行6批現(xiàn)代工藝參數(shù)與傳統(tǒng)工藝參數(shù)的驗證試驗，測定鹽酸偽麻黃堿、黃芩苷、芍藥苷的含量，指紋圖譜相似度及出膏率，6批傳統(tǒng)工藝所得基準(zhǔn)樣品的測得值以平均值表示，計算綜合評分，結(jié)果見表7，可見6批樣品綜合評分的RSD值均在5%以內(nèi)，表明所確定的提取工藝穩(wěn)定可行，重復(fù)性高。

表7 驗證試驗結(jié)果

Table 7 Results of verification test

序號質(zhì)量分?jǐn)?shù)/(mg?g?1)指紋圖譜相似度出膏率綜合評分RSD/% 鹽酸偽麻黃堿黃芩苷芍藥苷 14.2366.8014.000.99415.2398.721.87 24.4864.8413.350.99615.1494.12 34.3265.6914.690.99614.6697.02 44.3166.7014.510.99715.8397.31 54.0168.4114.340.99515.3497.27 64.1767.9113.740.99614.9499.40 基準(zhǔn)樣品4.1666.9514.731.00015.0914.37/

3 討論

對《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》中的100首經(jīng)典名方的制法及劑型進(jìn)行分析，對比分析了現(xiàn)代工藝與傳統(tǒng)工藝在提取方式、提取時間、投料方式、煎煮容器4個方面的主要區(qū)別，結(jié)果如表8所示。在100首經(jīng)典名方中，共有湯劑73首，煮散劑23首，散劑3首，膏劑1首，其中共有55首湯劑和19首煮散劑記載了傳統(tǒng)工藝制法[1]。因此當(dāng)經(jīng)典名方在確定了關(guān)鍵信息后，嚴(yán)格按照傳統(tǒng)制法制備而得的基準(zhǔn)樣品的質(zhì)量是衡量中試產(chǎn)品以及商業(yè)化規(guī)模產(chǎn)品質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)。經(jīng)典名方小續(xù)命湯的煎煮方法按照古籍記載，藥材飲片需?咀，即粉碎成一定大小的顆粒，以水為提取溶劑，最終根據(jù)失水量來確定提取時間，而現(xiàn)代工藝大多是以飲片投料，提取方式大多為“封閉性”的回流提取方式，與工業(yè)生產(chǎn)的實際不符。因此傳統(tǒng)工藝應(yīng)與工業(yè)生產(chǎn)的實際進(jìn)行充分對比，以基準(zhǔn)樣品的質(zhì)量為指標(biāo)整體評價提取工藝，對提取時間、提取次數(shù)、加水量深入進(jìn)行考察，確定與傳統(tǒng)工藝基本一致的現(xiàn)代提取工藝參數(shù)。

表8 現(xiàn)代工藝與傳統(tǒng)工藝的特點

Table 8 Characteristics of modern and traditional process

考察對象現(xiàn)代工藝傳統(tǒng)工藝 提取方式煎煮法、浸漬法、滲漉法、超聲波提取法等煎煮法 煎煮時間以小續(xù)命湯為例，1 h；煎煮時間易控制以小續(xù)命湯為例，約2.5 h；以煎煮水量來判定煎煮時間，難易控制 投料方式飲片直接投料經(jīng)典名方100首中有共有30首涉及“?咀”“粗末”“細(xì)末”“銼散”等前處理過程[18]，共有26首無詳細(xì)工藝制法的表述 提取容器不銹鋼鍋砂鍋、煎藥壺

本研究以小續(xù)命湯為對象進(jìn)行的傳統(tǒng)工藝與現(xiàn)代工藝的對比研究，選用了現(xiàn)代中藥提取研究常用的正交試驗，大大節(jié)省了時間，提高了工作效率。本研究首次提出了基準(zhǔn)關(guān)聯(lián)度的概念，按照該方法將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為可以進(jìn)行綜合評價的最優(yōu)向量即基準(zhǔn)關(guān)聯(lián)度，建立了傳統(tǒng)工藝與現(xiàn)代工藝之間的關(guān)鍵評價參數(shù)。該方法簡單易懂，為傳統(tǒng)工藝向現(xiàn)代工藝的轉(zhuǎn)化搭建了橋梁，實現(xiàn)經(jīng)典名方向現(xiàn)代工藝生產(chǎn)轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵一步。

AHP是一種主觀賦權(quán)法，是人為的確定評價指標(biāo)的重要程度，但不同的人可能會有不同的觀點，所以人為影響因素較大；熵權(quán)法是一種客觀賦權(quán)法，它是根據(jù)數(shù)據(jù)的變化規(guī)律得出最終的權(quán)重系數(shù)，但是不能體現(xiàn)中藥的君臣佐使關(guān)系。本研究采用的AHP-熵權(quán)法是將主觀賦權(quán)法與客觀賦權(quán)法結(jié)合，綜合確定權(quán)重系數(shù)，所得數(shù)據(jù)具備系統(tǒng)性和全面性，目前已廣泛應(yīng)用于藥品[19]、農(nóng)業(yè)[20]、電力[21]、軍 事[22]等方面。通過AHP-熵權(quán)法對質(zhì)量評價指標(biāo)進(jìn)行賦權(quán)，科學(xué)地處理了5個指標(biāo)在質(zhì)量控制體系中的所占比重，即可通過綜合評分確定與古法最接近的現(xiàn)代提取工藝參數(shù)，由此確定了小續(xù)命湯的現(xiàn)代工藝生產(chǎn)參數(shù)。

基于基準(zhǔn)關(guān)聯(lián)度和AHP-熵權(quán)法的綜合評價方法，是以歷代醫(yī)籍記載為依據(jù)，按照國家發(fā)布的古代經(jīng)典名方關(guān)鍵信息及古籍記載，確定了藥材基原、藥用部位、炮制規(guī)格、折算劑量，研究、制備了小續(xù)命湯基準(zhǔn)樣品。并基于遵古而不泥古的原則，以現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范為參照，銜接古籍記載和現(xiàn)行規(guī)范[23]，建立了以鹽酸偽麻黃堿、黃芩苷、芍藥苷、指紋圖譜和出膏率為主的質(zhì)量控制體系。以此得出的小續(xù)命湯現(xiàn)代提取工藝參數(shù)，符合經(jīng)典名方“傳承精華、古為今用、古今銜接”的基本研究原則，不僅能指導(dǎo)小續(xù)命湯的現(xiàn)代工藝大生產(chǎn)，并能為其它經(jīng)典名方尤其是以湯劑和煮散劑為代表的經(jīng)典名方的現(xiàn)代提取研究提供理論依據(jù)。同時也為目前工業(yè)生產(chǎn)中如何保證所制備的中間體或?qū)?yīng)實物與基準(zhǔn)樣品間的一致性以及經(jīng)典名方的制劑研究與基準(zhǔn)樣品間的一致性提供了評價方法[18]。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 國家中醫(yī)藥管理局. 關(guān)于發(fā)布《古代經(jīng)典名方目錄(第一批)》的通知[EB/OL]. (2018-04-17) [2021-11-04]. http://kjs.satcm.gov.cn/zhengcewenjian/2018-04-16/7107. html.

[2] 國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心. 《按古代經(jīng)典名方目錄管理的中藥復(fù)方制劑藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)》[EB/OL]. (2021-08-31) [2021-11-04]. https://www. cde.org.cn/main/news/viewInfoCommon/1c18dd163e7c9221786e5469889367d0. html.

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Comprehensive evaluation of ancient and modern extraction process of classic prescription Xiaoxuming Decoction based on standard relation and analytic hierarchy process combined with entropy method

DAI Shan1, 2, LI Shuai2, ZHANG Ai-jun1, 2, MAO Jiu-zhou2, ZHU Hong-mei2

1. School of Pharmacy, Southwest Medical University, Luzhou 646000, China 2. Sichuan Academy of Chinese Medicine Science, Chengdu 610041, China

To evaluate the consistency of product quality between modern technology and traditional technology, to screen the modern extraction process parameters of Xiaoxuming Decoction (XXMD, 小續(xù)命湯) by using standard relation and analytic hierarchy process (AHP)-entropy method.With the content of pseudoephedrine hydrochloride, baicalin, and paeoniflorin in XXMD as well as paste yielding rate and fingerprint similarity as evaluation indexes, orthogonal experiment was used to research extraction process of XXMD after solid-liquid ratio, extraction times and extraction time as factors. The concept of standard relation was introduced for the first time to calculate standard relation between each samples and standard decoction of various indexes of different extraction parameters, while AHP-entropy method was applied to determine the weight of each index for comprehensive score.The modern extraction process parameters of XXMD, screened by using standard relation and AHP-entropy method, which was compound herbs extracted for 1 h with 12 times the amount of water. Six batches of comprehensive evaluation was greater than 94.12, RSD value was 1.87%, and meet the quality requirements of standard decoction. The parameter was consistent with the final mass production parameters in the actual practice.The results obtained in this study show the feasibility of standard relation combined with AHP-entropy method in selecting key process parameters, which can provide theoretical reference for the modern extraction research of other classical prescriptions.

standard relation; analytic hierarchy process; information entropy method; Xiaoxuming Decoction; extraction technology; pseudoephedrine hydrochloride; baicalin; paeoniflorin

R283.6

A

0253 - 2670(2022)03 - 0726 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.03.011

2021-08-24

四川省科技計劃重點研發(fā)項目（2020YFS0566）；四川省杰出青年科技人才項目（2020JDJQ0063）；四川省中醫(yī)藥科研專項（2021 MS207）

代 珊（1995—），女，碩士研究生，研究方向為中藥質(zhì)量分析。Tel: 18202858547 E-mail: 2742903617@qq.com

張愛軍（1968—），女，研究員，碩士生導(dǎo)師，研究方向為中藥新藥研發(fā)與基礎(chǔ)研究。Tel: 13880898533 E-mail: ajzh33@sohu.com

#共同第一作者：李 帥（1984—），女，工程師，研究方向中藥制藥。Tel: 13880732013 E-mail: 190548369@qq.com

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]