急性腦梗死后脾臟體積變化及與炎癥因子、淋巴細(xì)胞水平的相關(guān)性

趙丹鵬，楊碩，劉喜燦，卜淑芳

(鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)科，河南 鄭州 450000)

急性腦梗死(acute cerebral infarction，ACI)是急性發(fā)生的大腦動(dòng)脈系統(tǒng)梗塞，栓塞或血栓造成缺血性表現(xiàn)，大腦血液供應(yīng)受阻使腦細(xì)胞功能發(fā)生損傷[1-2]。ACI會(huì)激活顱內(nèi)免疫應(yīng)答，大量釋放炎癥因子，增加血腦屏障的通透性，炎癥因子進(jìn)入腦實(shí)質(zhì)后加重腦細(xì)胞功能損傷[3]。脾臟受到病理刺激后釋放大量炎癥因子和免疫細(xì)胞，導(dǎo)致自身體積縮小，且其釋放的血小板活性更高，嚴(yán)重影響患者預(yù)后[4]。切除脾臟可降低炎癥因子及體循環(huán)中淋巴細(xì)胞數(shù)量，阻斷T淋巴因子向腦內(nèi)傳遞，保護(hù)大腦[4]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，腦內(nèi)缺血后脾臟會(huì)釋放炎癥因子和免疫細(xì)胞進(jìn)入外周循環(huán)系統(tǒng)，同時(shí)脾臟體積縮小[5]。本研究通過觀察ACI患者脾臟體積變化及與炎癥因子和淋巴細(xì)胞水平的相關(guān)性，以期為ACI的臨床治療提供免疫學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019年1月至2020年3月于鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科接受治療的194例ACI患者作為研究組。(1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)MRI或CT檢查后，符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2014》[6]中關(guān)于ACI的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡18～80歲；③美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表(National Institutes of Health stroke scale，NIHSS)評分>5分；④發(fā)病24 h內(nèi)入院；⑤發(fā)生ACI前服用阿司匹林1周以上。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)[7]：①自身免疫性疾??；②長期服用免疫抑制劑；③伴急性心肌梗死或癲癇；④伴心、肺、腹部嚴(yán)重疾病；⑤惡性腫瘤或血液疾病；⑥低氧血癥；⑦精神疾病或認(rèn)知障礙；⑧處于妊娠期或哺乳期；⑨中途退出研究。另選取同期于鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院體檢、基本資料匹配的120例非ACI患者作為對照組，年齡18～80歲，存在2項(xiàng)以上腦血管風(fēng)險(xiǎn)因素，入院前服用阿司匹林。本研究通過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批。入組人員均簽署研究知情同意書。對照組：男69例，女51例；年齡62～85(77.63±3.24)歲；既往存在高血壓88例，糖尿病51例，高脂血癥63例，腦卒中66例；穿支動(dòng)脈型腦梗死36例，大動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死59例，心源性腦梗死25例。研究組：男103例，女91例；年齡63～84(77.42±3.13)歲；既往存在高血壓144例，糖尿病76例，高脂血癥95例，腦卒中102例；穿支動(dòng)脈型腦梗死54例，大動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死101例，心源性腦梗死39例。兩組性別、年齡、既往疾病類型、腦梗死類型比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 檢測方法

1.2.1脾臟體積 參照Yang等[8]研究中的方法測量脾臟體積。采用Philips彩超診斷儀進(jìn)行測量，探頭條件為Abdomen，頻率2～5 MHz。檢測對象需空腹，取右側(cè)臥體位。探頭與肋間隙平行，調(diào)整圖像至厚度最大切面，測量脾臟厚度及長度，轉(zhuǎn)動(dòng)探頭與肋間隙垂直測量寬度，脾臟體積計(jì)算公式為：

V=a×b×c×π/6。

式中V代表脾臟體積，a代表脾臟長度，b代表脾臟厚度，c代表脾臟寬度。

采用同樣的方法檢測對照組脾臟體積，確定脾臟體積的基線值。分別于ACI患者發(fā)病24 h內(nèi)以及發(fā)病2、3、5 d測量脾臟體積。由2名超聲科資深醫(yī)生共同完成圖像檢測。

1.2.2炎癥因子 采集研究對象的空腹靜脈血，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測對照組和研究組發(fā)病后24 h內(nèi)和發(fā)病2、3、5 d的血清干擾素-γ水平。試劑盒由上海晶抗生物工程有限公司提供，檢測步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.3淋巴細(xì)胞 采用流式細(xì)胞儀檢測對照組和研究組發(fā)病后24 h內(nèi)和發(fā)病2、3、5 d的淋巴細(xì)胞。取入組人員清晨空腹肘靜脈血3 mL，置樣管中搖勻，取100 μL抗凝血加入樣管混勻，分別加入抗體(熒光素標(biāo)記)20 μL，同時(shí)做陰性對照，在避光室培養(yǎng)20 min后加入稀釋10倍的破紅細(xì)胞低滲液，離心后棄去上清液，經(jīng)PBS清洗后懸浮其中，檢測淋巴細(xì)胞(CD3+、CD4+、CD8+)水平。抗CD3+單克隆抗體標(biāo)志物為異硫氰酸熒光素，抗CD4+單克隆抗體標(biāo)志物為藻紅蛋白，抗CD8+單克隆抗體標(biāo)志物為葉綠素蛋白。

2 結(jié)果

2.1 脾臟體積對照組脾臟體積為(119.76±8.15)cm3；研究組發(fā)病后24 h內(nèi)和發(fā)病2、3、5 d的脾臟體積分別為(116.82±7.83)、(114.64±7.23)、(125.38±8.61)、(127.91±9.86)cm3。研究組不同時(shí)間點(diǎn)脾臟體積比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。研究組脾臟體積先縮小后增大，發(fā)病24 h內(nèi)和2 d脾臟體積縮小，發(fā)病3 d和5 d脾臟體積增大。研究組發(fā)病24 h、2 d的脾臟體積小于對照組，發(fā)病3 d和5 d的脾臟體積大于對照組(P<0.05)。

2.2 炎癥因子及淋巴細(xì)胞水平研究組不同時(shí)間點(diǎn)干擾素-γ、CD3+淋巴細(xì)胞、CD4+淋巴細(xì)胞、CD8+淋巴細(xì)胞水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；研究組不同時(shí)間點(diǎn)干擾素-γ、CD3+淋巴細(xì)胞、CD4+淋巴細(xì)胞、CD8+淋巴細(xì)胞水平均高于對照組，發(fā)病2 d時(shí)干擾素-γ、CD3+淋巴細(xì)胞、CD4+淋巴細(xì)胞、CD8+淋巴細(xì)胞水平最高(P<0.05)。見表1。

2.3 研究組患者炎癥因子和淋巴細(xì)胞水平與脾臟體積的相關(guān)性研究組患者在發(fā)病24 h內(nèi)和發(fā)病2、3、5 d時(shí)CD8+淋巴細(xì)胞水平與脾臟體積無關(guān)(P>0.05)；研究組患者在發(fā)病24 h內(nèi)和發(fā)病2、3、5 d時(shí)CD3+淋巴細(xì)胞、CD4+淋巴細(xì)胞及干擾素-γ水平與脾臟體積呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見表2。

表1 兩組各時(shí)間點(diǎn)炎癥因子水平及淋巴細(xì)胞水平比較

表2 研究組不同時(shí)間點(diǎn)炎癥因子和淋巴細(xì)胞水平與 脾臟體積的相關(guān)系數(shù)(r)

3 討論

王月娟[9]研究表明，腦缺血損傷的加重與自身免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)相關(guān)，這在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中已得到證實(shí)，但臨床數(shù)據(jù)比較匱乏，病理學(xué)機(jī)制尚未被完全闡明。脾臟是重要的免疫器官，含大量淋巴細(xì)胞，未成熟的淋巴細(xì)胞被抗原激活后離開脾臟進(jìn)入體循環(huán)中，T細(xì)胞在人體的免疫過程中占主要部分[10]。本研究結(jié)果顯示，ACI患者脾臟體積先縮小后增大，發(fā)病后不同時(shí)間點(diǎn)外周血CD3+、CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞水平及干擾素-γ水平明顯升高，與劉潔等[11]報(bào)道一致。這表明ACI患者發(fā)病后脾臟體積增大，會(huì)釋放大量淋巴細(xì)胞及炎癥因子，加重病情。既往研究采用大腦動(dòng)脈閉塞構(gòu)建卒中模型，發(fā)現(xiàn)循環(huán)中被標(biāo)記的脾臟細(xì)胞增多，脾臟體積增大，經(jīng)過分析認(rèn)為是激活了脾臟的α1腎上腺素受體后平滑肌受刺激所致[12-13]。

在本研究中，干擾素-γ水平先升高再降低，但總體水平高于對照組，干擾素-γ水平與脾臟體積呈負(fù)相關(guān)。脾臟可能通過產(chǎn)生干擾素-γ等炎癥因子參與腦損傷過程，加重患者病情，但具體機(jī)制仍需進(jìn)行深入研究[14]。腦缺血后適應(yīng)性免疫和機(jī)體固有免疫吸引淋巴細(xì)胞進(jìn)入顱內(nèi)，這些淋巴細(xì)胞透過血腦屏障進(jìn)入腦實(shí)質(zhì)后會(huì)促進(jìn)炎癥反應(yīng)，改變細(xì)胞興奮性，對神經(jīng)細(xì)胞造成直接損傷，加重ACI患者的病情[13,15]。本研究僅選取4個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行檢測，數(shù)據(jù)缺乏連續(xù)性。因無法測量患者發(fā)病前脾臟體積，選取對照組測量值作為參考，會(huì)存在一定偏差。本研究優(yōu)點(diǎn)是具有前瞻性，樣本量較大，數(shù)據(jù)可信度較高，有一定參考意義。ACI患者在溶栓時(shí)間窗可應(yīng)用免疫抑制劑緩解ACI后的出血狀況，改善預(yù)后，機(jī)制為免疫抑制劑抑制了淋巴結(jié)釋放淋巴細(xì)胞，減輕免疫損傷[16]。

通過ACI患者發(fā)病后的脾臟體積、炎癥因子及淋巴細(xì)胞水平變化初步闡述脾臟在免疫反應(yīng)中的作用機(jī)制，這可能成為臨床治療ACI新的免疫學(xué)目標(biāo)靶點(diǎn)。