廣西玉林市小作坊花生油中黃曲霉毒素B1膳食暴露及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

梁馨予，陳 鳳，黎 強(qiáng)，張曉娟，莫禮艷

(玉林市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，廣西 玉林 537000)

黃曲霉毒素主要是由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)毒菌株產(chǎn)生的真菌毒素，其與氣候環(huán)境條件關(guān)系很大，產(chǎn)毒菌株在溫暖潮濕的環(huán)境容易繁殖生長(zhǎng)。目前已經(jīng)分離鑒定出12種以上黃曲霉毒素，其中黃曲霉毒素B1(AFB1)污染最普遍，危害最大，污染水平約占黃曲霉毒素總量的70%。AFB1具有遺傳毒性、致癌性，是影響人和動(dòng)物健康的主要真菌毒素之一，也是全球食品安全控制中最主要的真菌毒素。我國(guó)食品安全監(jiān)督抽檢中發(fā)現(xiàn)，黃曲霉毒素容易污染的食品有花生及其制品，尤其是散裝花生油或者自制花生油。花生油是廣西玉林市居民的主要食用油，當(dāng)?shù)鼐用竦南M(fèi)觀念和習(xí)慣使小油坊成為了花生油的主要消售渠道，但是在監(jiān)督抽檢中發(fā)現(xiàn)，小作坊花生油成為AFB1的超標(biāo)重災(zāi)區(qū)?？紤]到小作坊花生油中黃曲霉毒素含量可能增加對(duì)公眾健康的影響，同時(shí)考慮到廣西是我國(guó)肝細(xì)胞癌(HCC)高發(fā)地區(qū)[1]，乙型肝炎病毒感染和黃曲霉毒素暴露是誘發(fā)肝癌的重要危險(xiǎn)因素，在非洲和亞洲國(guó)家中，黃曲霉毒素對(duì)HCC的歸因危險(xiǎn)度接近50%[2]。因此，本研究對(duì)廣西玉林市居民通過(guò)小作坊花生油攝入AFB1進(jìn)行膳食暴露及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，為相關(guān)單位進(jìn)行監(jiān)督或者風(fēng)險(xiǎn)管理提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

樣品來(lái)源：采用隨機(jī)抽樣法，2020年在廣西玉林市轄區(qū)內(nèi)3個(gè)區(qū)和5個(gè)縣(市)的小作坊采取散裝食用花生油樣品共183批，每批樣品取樣兩份，一份檢樣，一份備樣。樣品均完好無(wú)損送達(dá)實(shí)驗(yàn)室完成試驗(yàn)。

食物攝入和人群體檢調(diào)查數(shù)據(jù)來(lái)源：《2010—2012廣西壯族自治區(qū)居民營(yíng)養(yǎng)健康狀況調(diào)查報(bào)告》[3]。

試劑與儀器：黃曲霉毒素B1(國(guó)家糧食局科學(xué)研究院，批號(hào)GBW(E)100302，1.96 μg/mL)，乙腈、甲醇(色譜純)，磷酸氫鈉(純度≥99.0%)，磷酸二氫鉀(純度≥99.5%)，吐溫-20(分析純)。Synergy超純水系統(tǒng)(美國(guó)Millipore)，XS205DU電子分析天平(瑞士Mettler-Toledo)，Thermo U3000高效液相色譜儀(美國(guó)Thermo Fisher Scientific)，Pinnacle PCX柱后衍生系統(tǒng)(美國(guó)Pickering Laboratories)，VM-01U渦旋器(美國(guó)精騏)，ROTANTA 460R離心機(jī)(德國(guó)Hettich)，免疫親和柱(批號(hào)K8420030，CNW公司)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 花生油中AFB1含量的測(cè)定

按照GB 5009.22—2016的第三法高效液相色譜-柱后光化學(xué)衍生法進(jìn)行AFB1含量的檢測(cè)。依據(jù)GB 2761—2017中花生油AFB1的限量20 μg/kg進(jìn)行判定，即檢出含量大于20 μg/kg判定為不合格。

1.2.2 質(zhì)量控制

檢樣均搖勻后取樣，每20個(gè)待測(cè)溶液進(jìn)一針空白以確保系統(tǒng)不被污染，進(jìn)一針標(biāo)準(zhǔn)溶液以確保目標(biāo)物保留時(shí)間誤差控制在5%以內(nèi)。每次集中處理樣品，均平行做加標(biāo)回收。疑似不合格樣品均由具有資質(zhì)人員復(fù)測(cè)2次。本實(shí)驗(yàn)室檢出限為0.1 μg/kg。

1.2.3 低水平數(shù)據(jù)處理

根據(jù)WHO推薦，當(dāng)小于60%的結(jié)果低于檢出限(LOD)時(shí)，所有小于LOD的結(jié)果均以1/2 LOD計(jì)；當(dāng)大于60%的結(jié)果低于檢出限時(shí)，所有小于LOD的結(jié)果以0、1/2 LOD和LOD分別計(jì)算。

1.2.4 膳食暴露評(píng)估

1.2.4.1 膳食暴露量計(jì)算

采用點(diǎn)評(píng)估模型對(duì)AFB1進(jìn)行膳食暴露量計(jì)算，計(jì)算公式為：花生油中AFB1暴露量=食用油人均攝入量×花生油中AFB1含量/體重。將研究對(duì)象按不同區(qū)域，不同性別，城市、農(nóng)村，年齡/城鄉(xiāng)/性別分組，統(tǒng)計(jì)各自的AFB1平均膳食暴露量和各百分位數(shù)暴露量。

1.2.4.2 分組、體重、攝入量的選擇

將縣市區(qū)設(shè)置成6個(gè)區(qū)域，分別以字母BL、RX、XY、LC、BB、YL表示。按性別分為男性、女性。按城鄉(xiāng)分為城市、農(nóng)村。按年齡/城鄉(xiāng)/性別對(duì)人群分組，依次分為：6～11歲城市男生組，6～11歲農(nóng)村男生組；6～11城市女生組，6～11農(nóng)村女生組。12～14歲城市男生組，12～14歲農(nóng)村男生組；12～14歲城市女生組，12～14歲農(nóng)村女生組。15～17歲城市男生組，15～17歲農(nóng)村男生組；15～17歲城市女生組，15～17歲農(nóng)村女生組。成人體重相對(duì)穩(wěn)定，18～60歲人群分為18～60歲城市組，18～60歲農(nóng)村組；60歲以上人群分為60歲以上城市組，60歲以上農(nóng)村組。

由《2010—2012廣西壯族自治區(qū)居民營(yíng)養(yǎng)健康狀況調(diào)查報(bào)告》體檢數(shù)據(jù)[3]得知：廣西18歲以上居民平均體重為56.59 kg，其中男性61.32 kg，女性53.01 kg，城市59.27 kg，農(nóng)村54.47 kg。6～11歲平均體重男生(城市/農(nóng)村)27.99 kg，女生(城市/農(nóng)村)27.33 kg。12～14歲平均體重為城市男生48.07 kg，農(nóng)村男生39.66 kg；城市女生44.68 kg，農(nóng)村女生39.95 kg。15～17歲平均體重為城市男生58.37 kg，農(nóng)村男生51.02 kg；女生(城市/農(nóng)村)48.43 kg。

根據(jù)《2010—2012廣西壯族自治區(qū)居民營(yíng)養(yǎng)健康狀況調(diào)查報(bào)告》[3]，本研究采用了廣西居民膳食模式(模式B)食用油人均攝入量，即：廣西居民25.99 g/d，男性為26.31 g/d，女性為25.72 g/d，城市為27.03 d/g，農(nóng)村為25.18 g/d，18歲以下為23.07 g/d，18～60歲為26.48 g/d，60歲以上為26.29 g/d。

1.2.5 風(fēng)險(xiǎn)特征描述

本次研究采用了風(fēng)險(xiǎn)特征描述中最常用的暴露限值(MOE)法，參照2020年歐盟發(fā)布食品中黃曲霉毒素的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告[4]的BMDL10值400 ng/(kg·d)(即雄性大鼠每天暴露于AFB1下引發(fā)10%肝癌發(fā)病率的基準(zhǔn)劑量置信下限值)，用于暴露限值(MOE)法計(jì)算，計(jì)算公式為：MOE=BMDL10/暴露量。將研究對(duì)象按不同區(qū)域，不同性別，城市、農(nóng)村，年齡/城鄉(xiāng)/性別分組，統(tǒng)計(jì)各組的平均日膳食暴露MOE和百分位數(shù)MOE。風(fēng)險(xiǎn)可接受水平取決于MOE的大小，MOE越小，說(shuō)明導(dǎo)致不良反應(yīng)的劑量與人群的暴露量越接近，表明對(duì)人群健康的危害越大。當(dāng)MOE大于10 000時(shí)，可認(rèn)為具有較低的公共衛(wèi)生關(guān)注度，看作是一個(gè)低優(yōu)先級(jí)的風(fēng)險(xiǎn)管理行為；當(dāng)MOE小于10 000時(shí)，可認(rèn)為具有較高的公共衛(wèi)生關(guān)注度，當(dāng)優(yōu)先采取風(fēng)險(xiǎn)管理措施[5]。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法

統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)錄入Excel數(shù)據(jù)表，采用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 小作坊食用花生油中AFB1含量分布

183批廣西玉林市小作坊花生油中AFB1含量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 廣西玉林市小作坊花生油中AFB1的含量分布

由表1可見(jiàn)，全市小作坊花生油AFB1檢出率為59%，超標(biāo)率為18.6%，所有區(qū)域存在AFB1含量超標(biāo)情況，超標(biāo)率范圍7.5%～30.0%，各區(qū)域之間的超標(biāo)率不呈現(xiàn)顯著性差異(χ2=5.533，P>0.05)。全市AFB1的最高含量為243.00 μg/kg，是國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)(20 μg/kg)12.15倍，平均含量為16.91 μg/kg，并未超出國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)。6個(gè)縣市區(qū)域中，BL、XY的AFB1平均含量分別是國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)的1.2、1.6倍，其他縣市區(qū)域的均低于國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)，含量最大值(243.00 μg/kg)出現(xiàn)在XY的農(nóng)村。農(nóng)村與城市的AFB1平均含量均低于國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)，但農(nóng)村的平均含量高于城市，然而各區(qū)域標(biāo)準(zhǔn)差和百分位數(shù)結(jié)果顯示，各區(qū)域AFB1含量波動(dòng)較大，平均含量在一定程度高于各區(qū)域?qū)嶋H污染水平。

本次研究同時(shí)抽取10批預(yù)包裝花生油作為對(duì)照進(jìn)行AFB1含量檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)圖1。

注：**表示經(jīng)t檢驗(yàn)，與對(duì)照組比較有極顯著性差異(P<0.01)。

由圖1可見(jiàn)，各區(qū)域AFB1的平均含量是預(yù)包裝花生油的2.7～17.2倍。經(jīng)t檢驗(yàn)得到，BL、YL、全市小作坊花生油的AFB1平均含量與預(yù)包裝花生油的有極顯著性差異(P<0.01)，可以認(rèn)為全市小作坊花生油的AFB1含量遠(yuǎn)高于預(yù)包裝花生油的可能性比較大，尤其是BL、YL。

2.2 小作坊食用花生油中AFB1膳食暴露及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估(見(jiàn)表2)

由表2可見(jiàn)，全市小作坊花生油的AFB1平均暴露量為7.76 ng/(kg·d)，BL、XY AFB1平均暴露量明顯高于全市的，是全市的1.4、1.9倍，農(nóng)村AFB1平均暴露量明顯高于城市的，是城市的1.6倍，女性AFB1平均暴露量高于男性，是男性的1.1倍。各年齡段農(nóng)村組AFB1平均暴露量是各年齡段城市組的1.6～1.9倍，6～11歲農(nóng)村男、女生組平均AFB1暴露量明顯高于全市的，均約是全市的2倍。各分組平均MOE為171～25，遠(yuǎn)小于10 000，XY組、RX組MOE分別從P25、P75位開(kāi)始低于10 000，其他分組MOE在P50位開(kāi)始明顯低于10 000，表明廣西玉林市居民通過(guò)小作坊花生油攝入AFB1潛在健康風(fēng)險(xiǎn)較高，其中區(qū)域中BL、XY最高，農(nóng)村高于城市，女性高于男性，6～11歲人群>12～14歲人群>15歲以上人群。

表2 廣西玉林市小作坊花生油中AFB1暴露風(fēng)險(xiǎn)分布

續(xù)表2

3 討 論

本研究結(jié)果顯示廣西玉林市居民小作坊花生油AFB1的平均含量為16.91 μg/kg，平均暴露量為7.76 ng/(kg·d)，MOE為52，應(yīng)該引起較高的公共衛(wèi)生關(guān)注度。近10年調(diào)查研究顯示，云南、廣西一帶花生油等食用植物油的暴露或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果也呈現(xiàn)較高的風(fēng)險(xiǎn)。為了方便比較，其他文獻(xiàn)中通過(guò)模擬使用本研究數(shù)據(jù)(食用油人均攝入量25.99 g/d，體重56.59 kg，BMDL10400 ng/(kg·d))計(jì)算MOE。程恒怡等[6]研究結(jié)果顯示，廣西居民經(jīng)花生油攝入AFB1的平均暴露量為17.30 ng/(kg·d)，MOE為18，模擬MOE為23。石萌萌等[7]研究結(jié)果顯示，2013—2017年廣西地區(qū)居民油脂及其制品AFB1的平均暴露量為10.38 ng/(kg·d)，模擬MOE為39。王春雙等[8]研究結(jié)果顯示，2014—2017年廣西南寧市居民經(jīng)花生油攝入AFB1的平均暴露量為9.32 ng/(kg·d)，MOE為33，模擬MOE為43。劉展華等[9]研究結(jié)果顯示，2014年廣西城鄉(xiāng)油坊散裝花生油AFB1平均含量為70.2 μg/kg，模擬平均暴露量為32 ng/(kg·d)，模擬MOE為12。陳夏威等[10]研究結(jié)果顯示，2012—2018年廣東某市居民經(jīng)花生油攝入AFB1平均暴露量為2.34 ng/(kg·d)，MOE為107，模擬MOE為171。宋美英等[11]研究結(jié)果顯示，2017年廣東居民通過(guò)小作坊花生油攝入AFB1平均暴露量約為3 ng/(kg·d)，模擬MOE為133。黃少文等[12]研究結(jié)果顯示，廣東清遠(yuǎn)市居民小作坊花生油AFB1的平均暴露量為8.88 ng/(kg·d)，MOE為34.37，模擬MOE為45.05。鐘桂紅等[13]研究結(jié)果顯示，2013—2018年廣東梅州居民散裝花生油AFB1平均含量為3.195 μg/kg，模擬平均暴露量為1.47 ng/(kg·d)，模擬MOE為273。胡文敏等[14]研究結(jié)果顯示，2012—2017年云南省部分地區(qū)居民植物油AFB1的平均暴露量為0.09 ng/(kg·d)，模擬MOE小于4 500。由模擬結(jié)果可見(jiàn)，居民食用油MOE大小順序?yàn)閺V西<廣東<300<云南<5 000，遠(yuǎn)小于安全指數(shù)10 000，均具有較高的公共衛(wèi)生關(guān)注度，其中廣西MOE為43～12，風(fēng)險(xiǎn)最高。本次調(diào)查的廣西玉林市MOE為52，可見(jiàn)其風(fēng)險(xiǎn)較高，對(duì)風(fēng)險(xiǎn)管理和監(jiān)督管理者提出了迫切要求。

從風(fēng)險(xiǎn)管理層面，當(dāng)前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB 2761—2017)中對(duì)花生、花生油中AFB1限量均為20 μg/kg；CAC標(biāo)準(zhǔn)對(duì)花生中黃曲霉毒素總量限量為15 μg/kg；歐盟對(duì)花生、花生油中AFB1限量分別為8、2 μg/kg；日本標(biāo)準(zhǔn)最嚴(yán)，黃曲霉毒素在所有產(chǎn)品中均不得檢出。假設(shè)中國(guó)人群，攝入達(dá)到中國(guó)和歐盟標(biāo)準(zhǔn)限量的花生油，歐盟限量MOE是中國(guó)的10倍，但是根據(jù)飲食習(xí)慣，中國(guó)花生油消費(fèi)水平明顯高于歐盟，即使同等限量下，消費(fèi)水平越高，暴露風(fēng)險(xiǎn)就越大，中國(guó)暴露水平高于歐盟。相關(guān)資料指出[15]，中國(guó)結(jié)合真菌毒素的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果，并充分考慮農(nóng)業(yè)操作規(guī)程、氣候環(huán)境以及工業(yè)發(fā)展等國(guó)情的影響制定了相對(duì)較高的毒素限量，早在1981年制定食品中真菌毒素的國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)(GB 2761—1981)，之后分別在2005、2011、2017年進(jìn)行修訂，但是花生及其制品、花生油中AFB1的限量(20 μg/kg)一直沒(méi)有修訂。標(biāo)準(zhǔn)制修訂是以風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估為基礎(chǔ)，國(guó)際主要組織和國(guó)家風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工作已從數(shù)據(jù)積累階段轉(zhuǎn)入有效管控階段，最近兩年歐洲食品安全局被要求就食品中黃曲霉毒素對(duì)公眾健康的危害發(fā)表科學(xué)意見(jiàn)，于是2018年歐盟發(fā)布花生及其制品中黃曲霉毒素總量最大限量由4 μg/kg增加到10 μg/kg的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告[16]，2020年歐盟發(fā)布了食品中黃曲霉毒素的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告[4]，報(bào)告中采用基準(zhǔn)劑量置信下限(BMDL10)400 ng/(kg·d)，歐盟平均膳食暴露于AFB1上限MOE為5 000～225，下限MOE為690～58。中國(guó)應(yīng)意識(shí)到歐盟接下來(lái)可能會(huì)對(duì)黃曲霉毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修訂，監(jiān)督管理和風(fēng)險(xiǎn)管理者應(yīng)密切關(guān)注。中國(guó)尚處于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估數(shù)據(jù)積累階段，因此需強(qiáng)化中國(guó)黃曲霉毒素的暴露風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工作，消除與國(guó)際范圍黃曲霉毒素限量標(biāo)準(zhǔn)的差異，促進(jìn)中國(guó)相關(guān)食品進(jìn)出口貿(mào)易的健康發(fā)展。

從監(jiān)督管理層面，監(jiān)督管理者應(yīng)加大抽檢和監(jiān)管力度，倒逼小油坊不斷提高工藝、技術(shù)和設(shè)備水平，同時(shí)指導(dǎo)油脂企業(yè)按照廣西地方標(biāo)準(zhǔn)(DBS 45/045—2017)進(jìn)行生產(chǎn)，提高油品的質(zhì)量。

本研究存在不確定性，因缺乏相應(yīng)數(shù)據(jù)，未評(píng)估6歲以下人群膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)。未考慮消費(fèi)者食品加工時(shí)發(fā)生的含量變化，如加熱、烘烤等可降低AFB1含量水平。抽樣時(shí)間集中在8月，高溫高濕季節(jié)使AFB1更容易產(chǎn)生，會(huì)高估整體含量。

4 結(jié) 論

結(jié)合《2010—2012廣西壯族自治區(qū)居民營(yíng)養(yǎng)健康狀況調(diào)查報(bào)告》調(diào)查數(shù)據(jù)，采用點(diǎn)評(píng)估模型，對(duì)廣西玉林市居民通過(guò)小作坊花生油攝入AFB1進(jìn)行暴露量計(jì)算，參照歐盟于2020年最新發(fā)布的食品中黃曲霉毒素的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告中BMDL10值400 ng/(kg·d)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。結(jié)果表明：2020年全市花生油小作坊AFB1檢出率為59%，超標(biāo)率為18.6%，平均含量為16.91 μg/kg，含量檢出范圍為0.05～243.00 μg/kg，平均暴露量為7.76 ng/(kg·d)，MOE為52；各組平均日膳食暴露MOE均介于200～25，遠(yuǎn)低于10 000，存在較大的風(fēng)險(xiǎn)，其中區(qū)域XY、BL風(fēng)險(xiǎn)最高，農(nóng)村風(fēng)險(xiǎn)高于城市，女性風(fēng)險(xiǎn)高于男性，6～11歲人群風(fēng)險(xiǎn)最高，其次是12～14歲人群，15歲以上人群風(fēng)險(xiǎn)最低。廣西玉林市居民通過(guò)小作坊花生油攝入AFB1潛在健康風(fēng)險(xiǎn)較高，應(yīng)引起較高的關(guān)注。