聯(lián)合多種遺傳標(biāo)記鑒定姨甥關(guān)系1 例

王偉濤，李光興，趙凱，哈智，張韻梅，王先勇

1.云南現(xiàn)代司法鑒定所，云南 昆明 650000；2.云南弘誠(chéng)司法鑒定中心，云南 大理 671000；3.昆明市公安局，云南 昆明 650000

1 案 例

1.1 簡(jiǎn)要案情

據(jù)委托方自訴，曹某（女）是田某（男）的姨媽，現(xiàn)田某需要上戶口，因已無(wú)法找到除曹某外的其他親屬，特委托對(duì)曹某與田某之間是否存在姨甥關(guān)系進(jìn)行鑒定。

1.2 檢驗(yàn)方法

采集曹某、田某的指尖血，使用Chelex-100 法提取2 份樣本的DNA。常染色體采用MicroreaderTM21 ID 系統(tǒng)（北京閱微基因技術(shù)有限公司）與MicroreaderTM23sp ID 系統(tǒng)（北京閱微基因技術(shù)有限公司），X 染色體采用MicroreaderTM19X ID 系統(tǒng)（北京閱微基因技術(shù)有限公司）進(jìn)行PCR 復(fù)合擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物采用3130xl基因分析儀（美國(guó)Applied Biosystems 公司）進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測(cè)，采用GeneMapperTMID-Xv1.5 軟件（美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。mtDNA 高變區(qū)Ⅰ（16024 nt～16383 nt）和高變區(qū)Ⅱ（73 nt～340 nt）均采用5 μL 10×Buffer（北京閱微基因技術(shù)有限公司）、5 μL 25 mmol/L MgCl2、2 μL 10 mmol/L dNTP、10 μL 2.5 μmol/L 引物對(duì)[高變區(qū)I 引物對(duì)L16047（5'-CATGGGGAAGCAGATTTG-3'）和H16464（5'-TTAGCTACCCCCAAGTGT-3'）；高變區(qū)Ⅱ引物對(duì)L29（5'-GGTCTATCACCCTATTAACCAC-3'）和H408（5'-CTGTTAAAACTGCATACCGCCA-3'）]、0.4 μLTaqHotStart 酶（日本TAKARA 公司）及1～5 ng DNA、補(bǔ)去離子水至50 μL 體系進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，采用BigDyeTMTerminator v3.1 試劑盒（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）對(duì)PCR 產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，3130xl基因分析儀進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測(cè)，采用ChromasPro v2.1.3 軟件（澳大利亞Technelysium 公司）進(jìn)行序列分析。

采用ITO 法[1]計(jì)算常染色體叔侄指數(shù)（avuncular index，AI）。參照《法醫(yī)物證鑒定X-STR 檢驗(yàn)規(guī)范》[2]（SF/Z JD0105006—2018）（以下簡(jiǎn)稱《規(guī)范》）計(jì)算XSTR 的累積似然率（likelihood ratio，LR）。

1.3 檢驗(yàn)結(jié)果

1.3.1 常染色體STR 基因座分型結(jié)果

MicroreaderTM21 ID 系統(tǒng)和MicroreaderTM23sp ID 系統(tǒng)共計(jì)39 個(gè)常染色體STR 基因座，2 份樣本STR分型結(jié)果見(jiàn)表1。當(dāng)計(jì)算MicroreaderTM21 ID系統(tǒng)中包含的20個(gè)常染色體STR基因座時(shí)，累積叔侄指數(shù)（cumu?lative avuncular index，CAI）為87.244 9（98.87%），增加至39 個(gè)基因座時(shí)CAI 為74.242 9（98.67%），不排除曹某與田某之間具有姨甥關(guān)系。

表1 MicroreaderTM 21 ID 系統(tǒng)、MicroreaderTM 23sp ID 系統(tǒng)分型及ITO 法計(jì)算結(jié)果Tab.1 Calculation results of MicroreaderTM 21 ID system，MicroreaderTM 23sp ID system typing and ITO method

1.3.2 X 染色體STR 基因座分型結(jié)果

增加檢測(cè)MicroreaderTM19X ID 系統(tǒng)中的X-STR基因座，2 個(gè)樣本中19 個(gè)X-STR 基因座分型結(jié)果見(jiàn)表2。參照《規(guī)范》計(jì)算曹某與田某在上述基因座的累積LR值為4.089 6×1010，姨甥關(guān)系概率為99.999 9%，不排除曹某與田某之間具有姨甥關(guān)系。

表2 MicroreaderTM 19X ID 系統(tǒng)分型結(jié)果Tab.2 Typing results of MicroreaderTM 19X ID system

1.3.3 mtDNA 測(cè)序結(jié)果分析

曹某與田某mtDNA 高變區(qū)Ⅰ、高變區(qū)Ⅱ測(cè)序結(jié)果（表3）顯示，曹某和田某mtDNA 與標(biāo)準(zhǔn)序列相比，在高變區(qū)Ⅰ、高變區(qū)Ⅱ堿基片段發(fā)生的序列變異一致。依據(jù)mtDNA 檢測(cè)結(jié)果，支持曹某、田某來(lái)自同一母系，這一檢測(cè)結(jié)果可作為支持曹某與田某之間存在姨甥關(guān)系的輔助證據(jù)。

表3 mtDNA 測(cè)序檢驗(yàn)結(jié)果Tab.3 Results of mtDNA sequencing

1.3.4 鑒定意見(jiàn)

經(jīng)多種遺傳標(biāo)記（常染色體STR、X 染色體STR、mtDNA）檢測(cè)結(jié)果相互驗(yàn)證和補(bǔ)充，支持曹某與田某之間存在姨甥關(guān)系。

2 討論

姨甥關(guān)系鑒定在鑒定工作中較少遇到，本案姨甥關(guān)系鑒定是在無(wú)其他人員（外公、外婆、生母、舅舅等）參與的情況下進(jìn)行，具有一定難度。陸惠玲等[1]建立了一套計(jì)算兩個(gè)體間的血緣關(guān)系概率的方法，針對(duì)無(wú)行業(yè)規(guī)范指導(dǎo)的親緣關(guān)系鑒定，ITO 法具有較高的參考價(jià)值。本案采用ITO 法計(jì)算常染色體STR 的CAI，初步得出不排除曹某與田某之間具有姨甥關(guān)系的鑒定意見(jiàn)。值得注意的是，本案中CAI 并沒(méi)有隨檢驗(yàn)基因座數(shù)量的增加而升高。常染色體STR 基因座的遺傳遵循孟德?tīng)栠z傳定律，在姨甥關(guān)系中，可以有1/2 相同或是1/2 全不相同的基因[1]，因此，增加檢測(cè)常染色體STR 基因座，有可能被鑒定個(gè)體間沒(méi)有同源基因的基因座數(shù)量也隨之增加。對(duì)于本例而言，檢測(cè)20 個(gè)STR 基因座時(shí)，有4 個(gè)STR 基因座沒(méi)有同源基因，增加檢測(cè)19 個(gè)STR 基因座時(shí)，有8 個(gè)STR 基因座沒(méi)有同源基因，故CAI 值沒(méi)有隨檢測(cè)的STR 基因座增加而升高。

為獲得明確的鑒定意見(jiàn)，增加檢測(cè)了X-STR 和mtDNA?！兑?guī)范》[2]給出了檢測(cè)X-STR 時(shí)，不同親緣關(guān)系、不同性別組合、不同X-STR 基因型組合的兩個(gè)體間X-STR 的似然率計(jì)算公式。X 染色體具有伴性遺傳特征，以單倍體形式遺傳給子代，姨媽的X 染色體上的等位基因一半來(lái)自外公、一半來(lái)自外婆，外甥的X 染色體上的等位基因則可從外公或外婆處遺傳獲得，姨媽與外甥在X 染色體基因座上共享一個(gè)等位基因的概率為3/4[3-4]。本案檢測(cè)的曹某和田某19 個(gè)XSTR 基因座均共享一個(gè)等位基因，計(jì)算姨甥關(guān)系XSTR 的累積LR 值，結(jié)果不排除曹某與田某之間具有姨甥關(guān)系。mtDNA 屬于母系遺傳標(biāo)記，同一母系個(gè)體的mtDNA 來(lái)自相同的母系祖先，對(duì)于母系親緣關(guān)系鑒定，mtDNA 高變區(qū)序列多態(tài)性檢測(cè)可作為重要的補(bǔ)充依據(jù)。本案通過(guò)mtDNA 高變區(qū)測(cè)序，結(jié)果支持曹某與田某來(lái)自同一母系，為最終的鑒定意見(jiàn)提供了有力支持。

在復(fù)雜親緣關(guān)系鑒定中，若參與親緣關(guān)系鑒定的個(gè)體足夠多，可通過(guò)家系重建法推斷出與被鑒定人遺傳關(guān)系更緊密個(gè)體的常染色體STR 等位基因分型，從而計(jì)算對(duì)應(yīng)關(guān)系的LR 值，以獲得明確的鑒定意見(jiàn)[5-6]。若參與親緣關(guān)系鑒定的個(gè)體有限，則可以根據(jù)被鑒定人之間存在的遺傳特點(diǎn)，增加檢測(cè)常染色體STR 或常染色體STR 外的遺傳標(biāo)記（Y-STR、X-STR、mtDNA 測(cè)序、SNP 測(cè)序等），以得到準(zhǔn)確可靠的鑒定意見(jiàn)。