藥物性肝損傷中miR-122的動(dòng)態(tài)表達(dá)研究進(jìn)展

李娟娟 何婷 魏亞利 雷源 古巧燕

延安大學(xué)附屬醫(yī)院消化內(nèi)科（陜西延安 716000）

藥物性肝損傷（drug-induced liver injury，DILI）指藥物使用過程中因藥物本身或其代謝產(chǎn)物引起的肝臟損傷，臨床上以急性DILI為主，嚴(yán)重者可導(dǎo)致急性肝衰竭，甚至危及生命。由于臨床藥物種類增多、不規(guī)范用藥、中草藥以及預(yù)防保健藥物的廣泛應(yīng)用，全球范圍內(nèi)DILI發(fā)病率有逐年升高的趨勢，中國大陸的發(fā)病率已經(jīng)高于西方國家，達(dá)到23.80/10萬人[1]。DILI缺乏有效的生物標(biāo)志物使得中毒患者不能及早得到診斷及治療，很多人發(fā)展為急性肝衰竭。近年來許多研究報(bào)道m(xù)iR-122敏感性高、特異性好、穩(wěn)定性強(qiáng)，是DILI潛在生物標(biāo)志物[2]。微小 RNA（MicroRNAs，miRNAs）是一種小的、非編碼的RNA，通過與特定的信使RNA結(jié)合來調(diào)節(jié)基因表達(dá)和細(xì)胞過程。miR-122是肝臟的主要miRNA，持續(xù)表達(dá)于肝發(fā)育過程中，參與肝細(xì)胞表型、分化代謝和應(yīng)激應(yīng)答等肝臟生理過程和肝臟病理疾病的發(fā)生發(fā)展過程[3-6]。但較少有人動(dòng)態(tài)分析miR-122與DILI的密切關(guān)系，因此本文以DILI中miR-122的動(dòng)態(tài)表達(dá)為切入點(diǎn)，對(duì)其表達(dá)的時(shí)程變化、與DILI的肝再生與修復(fù)過程的相關(guān)性以及表達(dá)水平與肝組織病理損傷程度的對(duì)應(yīng)關(guān)系進(jìn)行綜述，以期總結(jié)miR-122的動(dòng)態(tài)表達(dá)規(guī)律，從而為臨床診治提供一定幫助。

1 miR-122表達(dá)的時(shí)程變化

既往報(bào)道m(xù)iR-122是DILI的潛在標(biāo)志物，正在進(jìn)行各種臨床試驗(yàn)，在不遠(yuǎn)的將來即將進(jìn)入臨床，指導(dǎo)DILI的診治，因此了解miR-122在不同時(shí)間點(diǎn)的動(dòng)態(tài)表達(dá)水平至關(guān)重要，特別是miR-122開始升高的時(shí)間點(diǎn)、達(dá)峰時(shí)間點(diǎn)以及降至正常時(shí)間點(diǎn)。目前關(guān)于DILI中miR-122時(shí)程變化的研究較少且仍以動(dòng)物實(shí)驗(yàn)為主，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)又以大鼠模型居多且研究結(jié)果并不一致。左憶楠等[7]在四氯化碳（carbon tetrachloride，CCl4）誘導(dǎo)的大鼠急性肝損傷模型和對(duì)乙酰氨基酚（Acetaminophen，APAP）誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型中，均發(fā)現(xiàn)血清中miR-122在肝損傷2 h就出現(xiàn)非常明顯的升高，在24 h左右維持在最高的水平，72 h逐漸下降至正常水平。WANG等[8]則發(fā)現(xiàn)大鼠服用APAP劑量雖不同，在1 h和3 h血漿miR-122水平都存在劑量依賴性和時(shí)間依賴性，miR-122在大鼠服用亞毒性劑量后3 h和中毒劑量后1 h都有所升高，尤其在后者更為顯著。YAMAURA等[9]也發(fā)現(xiàn)miR-122水平在SD大鼠服用APAP后3 h開始升高，12 h達(dá)到峰值。王雁等[10]報(bào)道APAP 1 250 mg/kg組大鼠血漿miR-122水平在1.5 h升高，12 h達(dá)到峰值，36 h下降至正常水平；APAP 625 mg/kg組大鼠血漿miR-122水平則在6 h開始升高，12 h達(dá)到峰值，36 h降至正常水平[10]，與PETRA 等[11]的研究結(jié)果一致。上述研究顯示APAP劑量越高，大鼠肝損傷發(fā)生的時(shí)間越早，損傷持續(xù)時(shí)間越長，miR-122水平達(dá)峰值時(shí)間大概是藥物攝入后12 h，恢復(fù)正常水平時(shí)間為藥物攝入后36 h。湯納平等[12]用APAP誘導(dǎo)的大鼠急性DILI模型中的研究結(jié)果與上述結(jié)果不完全一致，與對(duì)照組相比，APAP 1 250 mg/kg組給藥后1.5、3、6 h，血漿miR-122分別升高3.6、4.2、30.2倍，96 h時(shí)血漿miR-122恢復(fù)到正常水平，說明miR-122水平開始升高時(shí)間點(diǎn)在服藥后1.5 h之前。此外湯納平等[13]的后續(xù)研究顯示動(dòng)態(tài)檢測miR-122有可能區(qū)分急性肝損傷和慢性肝損傷。急性肝損傷模型中用藥后12 h和24 h血清miR-122水平明顯升高，24 h之后轉(zhuǎn)而下降；而miR-122水平在慢性肝損傷模型中一直處于升高態(tài)勢，提示我們急性肝損傷檢測血清miR-122的合適時(shí)間點(diǎn)在24 h之前，而選取不同時(shí)間點(diǎn)動(dòng)態(tài)檢測miR-122才可能確診慢性肝損傷[13]。

綜合上述研究結(jié)果可知，不同毒物劑量引起的肝損傷時(shí)間不同，血漿miR-122開始升高時(shí)間點(diǎn)為用藥后1～3 h，在中毒后1～3 h進(jìn)行臨床檢測miR-122水平可以及時(shí)發(fā)現(xiàn)DILI，并且毒物劑量越大，miR-122水平升高的時(shí)間點(diǎn)可能越早；miR-122達(dá)峰時(shí)間點(diǎn)與中毒劑量關(guān)系不大，為用藥后12 h，并且miR-122水平可能在用藥后3～4 d恢復(fù)至正常水平，最快可能為中毒36 h后降至正常，在此時(shí)間段內(nèi)檢測miR-122似乎作用并不大；但是慢性肝損傷的確診恰恰需要?jiǎng)討B(tài)檢測miR-122。

2 miR-122與DILI的肝再生與修復(fù)過程的相關(guān)性

藥物在誘導(dǎo)啟動(dòng)肝組織損傷的同時(shí)也可激發(fā)肝組織自身修復(fù)過程，雖然大多數(shù)DILI呈急性病程，但如果肝組織恢復(fù)性修復(fù)可以早期有效地限制逆轉(zhuǎn)肝損傷，便可以避免急性肝衰竭和肝損傷慢性病程化的發(fā)生，縮短肝損傷的臨床病程，改善不良轉(zhuǎn)歸，使患者受益。有研究表明異煙肼（Isoniazid，INH）制備的大鼠抗結(jié)核DILI模型中，miR-122水平3 d時(shí)顯著降低，14 d時(shí)降到最低點(diǎn)，然后上升，同時(shí)ALT、AST在給藥后21 d和14 d分別達(dá)到最高值，然后有所下降，他們分析miR-122的水平上升與肝臟再生密切相關(guān)[14]。崔立華等[15]制備的丙戊酸鈉DILI模型，同樣發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組miR-122在給藥7 d后逐漸向正常水平回升，結(jié)合ALT、AST變化水平與肝臟病理結(jié)果，認(rèn)為miR-122水平回升可能與肝細(xì)胞再生和自身修復(fù)有關(guān)[16]。此外，危及生命的急性肝功能衰竭（acute liver failure，ALF）大多數(shù)需要肝移植來防止死亡，但一些患者會(huì)自發(fā)恢復(fù)，并顯示出完全的肝臟再生[17]。JOHN等[18]通過研究ALF患者血清miRNAs與肝損傷和再生的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)與未恢復(fù)患者相比，ALF自愈的患者血清miR-122、miR-21和miR-221水平顯著升高。而在肝活檢組織中，miR-21和miR-221呈雙向表達(dá)模式，在自發(fā)存活者中水平較低，miR-122則在這些患者的血清和肝組織中均升高。提示miR-122、miR-21和miR-221均參與了肝再生，并可能有助于ALF的自發(fā)恢復(fù)。值得注意的是，有研究報(bào)道在APAP給藥后72 h，肝組織學(xué)顯示肝細(xì)胞出現(xiàn)有絲分裂和肝細(xì)胞再生，但miR-122水平無明顯變化[19]。綜合目前的研究證據(jù)，在一定情況下miR-122水平變化可反映DILI后肝臟再生，但是關(guān)于DILI的肝損傷過程和肝恢復(fù)性修復(fù)過程中miR-122的動(dòng)態(tài)變化機(jī)制尚不完全明確，因此選取更多時(shí)間點(diǎn)動(dòng)態(tài)研究miR-122表達(dá)水平與DILI的肝損傷過程和肝再生與修復(fù)過程的關(guān)系或許會(huì)有新的收獲。

3 miR-122的表達(dá)與組織病理損傷程度的對(duì)應(yīng)關(guān)系

肝組織病理學(xué)檢查對(duì)鑒別診斷及早期全面評(píng)估肝損傷程度，排除其他致病因素至關(guān)重要[20]，然而肝活檢是一項(xiàng)有創(chuàng)性操作，通常不被患者所接受，并且傳統(tǒng)肝損傷標(biāo)志物ALT和AST并不總是與組織學(xué)結(jié)果有很好的相關(guān)性。血清中miR-122濃度則取決于損傷的嚴(yán)重程度和持續(xù)時(shí)間，有報(bào)道稱相比中毒劑量，血清miR-122水平升高與肝組織病理學(xué)程度的相關(guān)性更強(qiáng)[21]，并且呈定量相關(guān)[9]。說明血清miR-122表達(dá)水平對(duì)肝臟組織損傷的病理改變具有更好的評(píng)估價(jià)值，從而預(yù)測DILI患者的中毒嚴(yán)重程度。

但目前相關(guān)性研究得出的結(jié)果并不完全一致。PARK等[22]給大鼠一次性口服APAP（1 000 mg/kg）或賦形劑，分別于3、6、24、48、72 h處死，檢測血清中miR-122的表達(dá)情況以及觀察肝組織的病理結(jié)果。APAP組大鼠在3 h和6 h，肝臟組織學(xué)正常，與賦形劑組相似，24 h可見少量小葉中心輕度壞死，48h病變最為嚴(yán)重，72 h組肝細(xì)胞有絲分裂較多見，損傷程度輕于48 h；而miR-122水平在這些時(shí)間點(diǎn)都顯著升高，并且以3 h組的倍數(shù)變化最大，72 h組miR-122表達(dá)倍數(shù)變化比較低，接近賦形劑組水平。上述結(jié)果顯示miR-122表達(dá)水平變化早于組織病理學(xué)變化，但是miR-122表達(dá)水平最高時(shí)間點(diǎn)與肝臟病變最嚴(yán)重時(shí)間點(diǎn)并不一致，這與王雁等[10]的研究結(jié)果部分相似。他們用（625、1250 mg/kg）APAP誘導(dǎo)SD雄性大鼠制備DILI模型，在1.5和3 h，與對(duì)照組相比兩組大鼠肝組織病理均無明顯變化。大鼠APAP（625 mg/kg）組肝組織病理在6 h和12 h顯示空泡樣變性和肝竇充血現(xiàn)象明顯，24 h顯示細(xì)胞壞死和炎性浸潤現(xiàn)象明顯，36 h時(shí)肝組織病理顯示基本正常，而大鼠血漿miR-122水平在6 h已升高5.2倍，12 h達(dá)峰后呈下降趨勢，在36 h降至正常水平；大鼠APAP 1250（mg/kg）組6 h時(shí)肝組織病理出現(xiàn)空泡樣變性和肝竇充血現(xiàn)象，12 h時(shí)空泡樣變性細(xì)胞增多伴有明顯的細(xì)胞壞死、炎癥細(xì)胞浸潤，24 h肝細(xì)胞壞死區(qū)域擴(kuò)大、肝索紊亂、大量炎癥細(xì)胞聚集，36 h后仍有炎癥細(xì)胞浸潤，而大鼠血漿miR-122 1.5 h即升高3.6倍，并且持續(xù)升高在12 h達(dá)峰值后開始下降，96 h恢復(fù)正常水平。綜合上述研究可見miR-122表達(dá)變化時(shí)間點(diǎn)早于肝臟病理學(xué)變化時(shí)間點(diǎn)，也說明miR-122水平的微小升高可能并不總是反映肝臟損傷；miR-122的表達(dá)水平與肝臟病理損傷程度并不完全對(duì)應(yīng)，但是miR-122表達(dá)水平變化趨勢與肝臟損傷程度變化趨勢一致。miR-122表達(dá)水平呈現(xiàn)先上升達(dá)峰值后下降繼而回歸到正常水平趨勢，肝臟損傷程度也呈現(xiàn)由輕而重繼而轉(zhuǎn)為輕的趨勢。然而，有研究明確表明在小鼠和大鼠藥物性肝損傷模型中，血清miR-122的絕對(duì)定量均反映急性肝損傷進(jìn)展，并且與APAP誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷組織病理評(píng)分具有良好的相關(guān)性[7]。這與宋磊等人的研究結(jié)果一致，他們用INH誘導(dǎo)小鼠制備的抗結(jié)核藥物性肝損傷模型中，發(fā)現(xiàn)無論是急性還是慢性毒物實(shí)驗(yàn)中，不但miR-122表達(dá)水平變化趨勢與肝臟損傷程度變化趨勢一致，而且miR-122表達(dá)變化的時(shí)間點(diǎn)與肝臟病理學(xué)變化時(shí)間點(diǎn)完全一致，即miR-122的表達(dá)水平與肝臟病理損傷程度對(duì)應(yīng)。急性毒物實(shí)驗(yàn)中，給藥后miR-122表達(dá)整體呈下降趨勢，在0.25 h發(fā)生顯著性下降[（56.50±27.77）%，P＜0.05]，肝組織病理同樣在0.25 h出現(xiàn)肝細(xì)胞損傷征象；慢性毒物實(shí)驗(yàn)中，連續(xù)給藥后miR-122從第3天開始表達(dá)下降[（88.72±5.15）%，P＜0.05]，肝臟病理學(xué)在第3天出現(xiàn)變化[23]。

就變化趨勢而言，miR-122的表達(dá)水平與組織病理學(xué)改變有很好的相關(guān)性。有些研究中具體時(shí)間無法完全對(duì)應(yīng)，可能與藥物本身的代謝動(dòng)力特點(diǎn)有關(guān)。有研究表明miR-122的表達(dá)變化與INH的藥物代謝動(dòng)力學(xué)存在一定的關(guān)系[23]，雷松等人[24]也證實(shí)在抗結(jié)核DILI模型中miR-122表達(dá)水平出現(xiàn)2次上升趨勢時(shí)間點(diǎn)與導(dǎo)致肝損傷的主要化學(xué)物質(zhì)異煙肼及其代謝物肼的峰值濃度時(shí)間0.25 h和1.5 h完全重合，由此推測藥物代謝也會(huì)影響miR-122的表達(dá)水平。而目前關(guān)于DILI中miR-122的動(dòng)態(tài)表達(dá)相關(guān)性研究很少，仍然需要大量的研究來驗(yàn)證和補(bǔ)充。也提示我們在之后的研究中，需要考慮藥物的代謝動(dòng)力學(xué)對(duì)于實(shí)驗(yàn)的影響，從而深入了解miR-122的動(dòng)態(tài)表達(dá)情況。

4 展望

DILI中miR-122的動(dòng)態(tài)表達(dá)規(guī)律在臨床實(shí)踐中意義非凡。在中毒后1～3 h進(jìn)行臨床檢測miR-122水平能及時(shí)發(fā)現(xiàn)DILI，并且毒物劑量越大，miR-122水平升高的時(shí)間點(diǎn)可能越早，miR-122水平在中毒后12 h達(dá)到最高，3～4 d恢復(fù)到正常水平。急性APAP過量后被送往醫(yī)院的患者的初始救治方式取決于APAP疑似攝入量以及攝入時(shí)間，超過12 g即可能危及生命，但是在未知中毒時(shí)間、未知中毒劑量以及因服用其他藥物而不能依賴常規(guī)的諾模圖檢測APAP的血藥濃度[27]情況下，或許依靠miR-122的時(shí)間與劑量依賴性可以估測患者的中毒劑量，確定中毒時(shí)間，從而給予患者正確的處理方法。此外，了解miR-122的動(dòng)態(tài)表達(dá)與DILI的肝損傷過程和肝組織恢復(fù)性修復(fù)過程，可動(dòng)態(tài)監(jiān)測患者的病情變化、預(yù)測病程急慢性化、甚至評(píng)估患者預(yù)后[19]。并且，miR-122的升高與組織病理學(xué)改變有很好的相關(guān)性，進(jìn)一步研究miR-122表達(dá)水平與肝臟損傷程度具體時(shí)間點(diǎn)的對(duì)應(yīng)關(guān)系，可以為無創(chuàng)判斷肝臟組織病理損傷程度提供更多價(jià)值。

與小鼠和人類相比，大鼠耐受高劑量的APAP，而本文歸納出的miR-122動(dòng)態(tài)規(guī)律卻主要來自于大鼠藥物性肝損傷模型，或許大家會(huì)質(zhì)疑大鼠模型研究APAP毒性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。事實(shí)上，APAP過量服用后，小鼠的損傷過程比人類進(jìn)展的更快，小鼠的ALT峰值在12～24 h，而人類的ALT峰值在36～48 h，大鼠的ALT峰值為48 h后，與人類的損傷進(jìn)程更相似[25]。此外，miR-122的動(dòng)態(tài)表達(dá)對(duì)于DILI有很大的臨床價(jià)值，而且作為新藥肝細(xì)胞毒性早期評(píng)價(jià)標(biāo)志物也具有潛在應(yīng)用價(jià)值，需繼續(xù)研究miR-122的動(dòng)態(tài)表達(dá)。但需注意：并不是所有DILI中miR-122的表達(dá)都升高，一線抗結(jié)核藥物異煙肼、利福平、吡嗪酰胺引起的肝損傷，患者血清中miR-122的表達(dá)水平降低，說明不同種類的藥物引起的DILI中miR-122的表達(dá)水平不同；盡管動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)均表明，miR-122對(duì)肝臟有特異性，是肝損傷和肝細(xì)胞死亡的獨(dú)立而有效的標(biāo)志物，但是miR-122并不是DILI特有的，在其他不同病因的肝損傷類型中，它在血清中表達(dá)不同。慢性胰腺炎相關(guān)性肝損傷與miR-122/miR-155表達(dá)升高有關(guān)，miR-122和miR-192是評(píng)價(jià)膽汁淤積性肝損傷較好的標(biāo)記物，在病毒、酒精和化學(xué)誘導(dǎo)患者和動(dòng)物模型中也發(fā)現(xiàn)miR-122濃度增加[27]。這提示在使用單個(gè)miRNAs診斷DILI之前，通過聯(lián)合其他miRNAs排除其他肝臟病變是很必要的。