鐵氰化鉀比色法測定小兒生血糖漿中亞鐵離子含量

宗海燕，呂勤，薛順國

(1.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院繼續(xù)教育部，武漢 430030;2.武漢市江岸區(qū)二七社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，430012;3.湖北省襄陽市藥品檢驗(yàn)所，441021)

小兒生血糖漿收入《部頒中藥成方制劑》第14冊(cè)，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)WS3-B-2654-97，功能主治為健脾養(yǎng)胃、補(bǔ)血生津，用于小兒缺鐵性貧血和營養(yǎng)不良性貧血。該藥的標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定項(xiàng)。亞鐵離子(Fe2+)測定有鈰量法［1］和鄰二氮菲比色法［2］。由于小兒生血糖漿中含有中藥成分，干擾鈰量法測定，故有學(xué)者采用鄰二氮菲比色法測定小兒生血糖漿中Fe2+的含量。因底色干擾較大(A=0.083)，重復(fù)性差，筆者在本實(shí)驗(yàn)中采用Fe2+與鐵氰化鉀生成藤氏蘭，在700 nm波長處測定吸光度，消除了底色干擾，收到良好效果。

1 儀器與試藥

UV-1200紫外分光光度計(jì)(北京瑞利儀器公司)，硫酸亞鐵對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào):111613-200301)，小兒生血糖漿 (珠海正太制藥有限公司，批號(hào):20060801，20060802，20060803)，鐵氰化鉀、硫酸等均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 測定波長的確定 取硫酸亞鐵對(duì)照品適量，精密稱定，加水制成每毫升含硫酸亞鐵0.12 mg的溶液。精密量取對(duì)照品溶液5 mL置于25 mL棕色量瓶，加0.5 mg· mL-1鐵氰化鉀溶液2 mL，稀硫酸溶液4 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，在暗處放置30 min;以相應(yīng)的試劑為空白。照紫外-可見分光光度法(《中華人民共和國藥典》2010年版附錄ⅣA)，在400～800 nm波長范圍內(nèi)測定吸光度，結(jié)果在700 nm波長處有最大吸收。

2.2 陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn) 陰性樣品的制備:除硫酸亞鐵外按小兒生血糖漿處方制備。測定方法:取陰性樣品5 mL，置25 mL棕色量瓶中，加0.5 mg· mL-1鐵氰化鉀溶液2 mL，稀硫酸溶液4 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，在暗處放置30 min;以相應(yīng)的試劑為空白。照紫外-可見分光光度法(《中華人民共和國藥典》2010年版附錄ⅣA)，在400～800 nm波長范圍內(nèi)測定吸光度。結(jié)果陰性對(duì)照試液在700 nm波長處吸光度為0.003，幾乎無干擾。

2.3 顯色劑用量對(duì)吸光度的影響 精密量取對(duì)照品溶液 5mL，置 25mL棕色量瓶中，分別加0.5 mg·mL-1鐵氰化鉀溶液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別加稀硫酸溶液4 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，在暗處放置30 min;以相應(yīng)的試劑為空白。照紫外-可見分光光度法(《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄ⅣA)，在700 nm波長處測定吸光度。結(jié)果顯示，隨著顯色劑用量的增加，吸光度亦隨之增加，當(dāng)顯色劑用量在4.0 mL時(shí)吸光度最大，故顯色劑的用量選擇4.0 mL。

2.4 顯示時(shí)間對(duì)吸光度的影響 精密量取對(duì)照品溶液5 mL，置25 mL棕色量瓶中，加0.5 mg·mL-1鐵氰化鉀溶和稀硫酸溶液各4 mL，以水稀釋至刻度，搖勻，在暗處放置10～120 min;以相應(yīng)的試劑為空白。照紫外-可見分光光度法(《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄ⅣA)，在700 nm波長處測定吸光度。結(jié)果顯示的時(shí)間在10～30 min，隨著時(shí)間的延長吸光度增加，30～120 min吸光度幾乎不隨時(shí)間改變，故顯色時(shí)間選為30 min。

2.5 酸度對(duì)吸光度的影響 精密量取對(duì)照品溶液5 mL，置25 mL棕色量瓶中，加0.5 mg·mL-1鐵氰化鉀溶液 4 mL，分別加稀硫酸溶液 0.0，0.1，0.3，0.5，0.7，0.9，1.0，2.0，3.0，4.0 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，在暗處放置30 min;以相應(yīng)的試劑為空白。照紫外-可見分光光度法(《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄ⅣA)，在700 nm波長處測定吸光度。結(jié)果顯示，當(dāng)加稀硫酸的量為0.3 mL時(shí)，吸光度最大，故選擇酸度為0.3 mL。

2.6 含量測定方法

2.6.1 對(duì)照品溶液的制備 取硫酸亞鐵對(duì)照品適量，精密稱定，加水制成每毫升含硫酸亞鐵0.12 mg的溶液。

2.6.2 供試品溶液的制備 精密量取本品5 mL，置于500 mL棕色量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度。

2.6.3 測定法 精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各 5mL，分別置于 25mL棕色量瓶中，加0.5 mg·mL-1鐵氰化鉀溶液 4 mL，稀硫酸溶液0.3 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，在暗處放置30 min，以相應(yīng)的試劑為空白。照紫外-可見分光光度法(《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄ⅣA)，在700 nm波長處測定吸光度。

2.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密量取本品2 mL，按1∶1加入硫酸亞鐵對(duì)照品溶液，照含量測定項(xiàng)下操作，測定硫酸亞鐵的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。平均加樣回收率100.2%，RSD=0.39%。

表1 硫酸亞鐵加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果 mg

2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密量取本品5 mL，照含量測定項(xiàng)下操作，取6份測其吸光度，結(jié)果顯示平均吸光度為0.680，RSD=0.26%，說明精密度符合要求。

2.9 穩(wěn)定性 取含量測定項(xiàng)下的樣品溶液，隔一定時(shí)間測一次吸光度，觀察其溶液的穩(wěn)定性，結(jié)果顯示樣品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 線性范圍考察 精密稱取硫酸亞鐵對(duì)照品，用水制成每毫升含硫酸亞鐵12 mg的溶液，取此溶液3.00，4.00，5.00，6.00，7.00，8.00 mL，照含量測定項(xiàng)下操作，結(jié)果本品在50.64～135.04 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)呈線性?；貧w方程為:C=5.585 6A+0.001 6，r=0.999 8(n=6)。

2.11 樣品的測試結(jié)果 按樣品照含量測定方法，對(duì)珠海正太制藥有限公司生產(chǎn)的小兒生血糖漿進(jìn)行檢測，批號(hào)為 20060801，20060802，20060803 的樣品，硫酸亞鐵含量分別為 12.54，12.48，12.44 mg·mL-1，均符合測定要求。

3 討論

硫酸亞鐵在酸性條件下穩(wěn)定，在堿性條件下不穩(wěn)定，易被空氣中的氧氧化成硫酸鐵，故本法是在酸性介質(zhì)中反應(yīng)。Fe2+與鐵氰化鉀反應(yīng)也是在弱酸性介質(zhì)中進(jìn)行，生成藤氏蘭，較穩(wěn)定。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，本法準(zhǔn)確度、精密度、穩(wěn)定性較好，陰性對(duì)照無干擾。本法操作簡便，快速。

［1］ 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(二部)［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:970.

［2］ 王慶陽.比色法測定小兒生血糖漿中Fe2+的含量［J］.兒科藥學(xué)雜志，2003，9(3):46-47.