腸道病毒71型感染手足口病患兒Th17/Treg比例失衡與病情程度的關(guān)系

陸海榮，徐煒新，趙心怡

(上海健康醫(yī)學(xué)院附屬嘉定區(qū)中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 201800)

手足口病為兒童常見急性傳染病，目前普遍認(rèn)為其發(fā)病與腸道病毒感染密切相關(guān)，腸道病毒71型(enterovirus 71，EV71)為其主要感染病毒之一?；純号R床可表現(xiàn)出發(fā)熱、皰疹等癥狀，一般情況下癥狀輕微且有自限性，但部分患兒隨著病情進(jìn)展，可能導(dǎo)致中樞神經(jīng)受損及呼吸系統(tǒng)障礙，甚至誘導(dǎo)患兒死亡[1]。在病毒感染性疾病的發(fā)生和發(fā)展中，機(jī)體免疫防御系統(tǒng)受到刺激，可導(dǎo)致多種T淋巴細(xì)胞亞群比例變化，輔助性T細(xì)胞17(helper T cells 17， Th17)、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell，Treg)均為CD4+T細(xì)胞在經(jīng)過抗原提呈細(xì)胞的刺激后分化形成的效應(yīng)T細(xì)胞，Th17可釋放多種促炎因子，Treg則具備免疫抑制效果，可伴隨多種細(xì)胞因子釋放。但目前EV71感染手足口病患兒發(fā)病及病情進(jìn)展的免疫機(jī)制尚未完全明確[2]。本研究納入EV71感染手足口病患兒150例、體檢健康患兒90例進(jìn)行研究，旨在分析Th17/Treg比例失衡與EV71感染手足口病患兒病情程度的關(guān)系及臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將上海健康醫(yī)學(xué)院附屬嘉定區(qū)中心醫(yī)院2019年8月—2021年12月收治的EV71感染手足口病患兒150例納入研究，EV71感染手足口病患兒根據(jù)病情嚴(yán)重程度分為普通型組125例(表現(xiàn)為手、足、口、臀部出現(xiàn)皮疹，伴或不伴發(fā)熱)，重型組25例(表現(xiàn)為出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)受累，體征可見腦膜刺激征、腱反射減弱或消失)，另?yè)裢?0例體檢健康兒童作為對(duì)照組。回顧性收集研究對(duì)象的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：手足口病診斷符合《手足口病診療指南(2018年版)》[3]中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)者；經(jīng)病毒檢測(cè)確定為EV71感染者；無其他感染性疾病者；近期未參與過其他臨床研究者；臨床資料完整者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并惡性腫瘤者；合并自身免疫病者；合并肝腎功能異常者；免疫功能低下(如艾滋病、骨髓移植者)者；發(fā)病前半年內(nèi)有大型手術(shù)史者；接受調(diào)查前1月內(nèi)使用抗菌藥物者；合并嚴(yán)重貧血、甲亢者等。

1.2全血Th17、Treg和Th17/Treg水平 空腹采集普通型組、重型組、對(duì)照組靜脈血3 mL，EDTA-K2抗凝，采用美國(guó)BD FACSCanto Ⅱ流式細(xì)胞儀檢測(cè)全血Th17、Treg水平，并計(jì)算Th17/Treg。

1.3Th17和Treg相關(guān)細(xì)胞因子 采集3 mL非抗凝血液標(biāo)本，3 000 r/min離心10 min后取上層血清，采用熱景公司生產(chǎn)的C2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)血清IL-17、IL-6和IL-10，采用上海酶聯(lián)公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒檢測(cè)IL-23和TGF-β。

2 結(jié)果

2.1普通型組、重型組和對(duì)照組一般資料比較 3組性別、月齡、體質(zhì)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；重型組及普通型組的病程比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 3組一般資料比較

2.23組Th17、Treg相關(guān)細(xì)胞因子比較 與對(duì)照組相比，普通型組和重型組血清IL-17、IL-6水平呈升高降低趨勢(shì)，而血清IL-23、IL-10、TGF-β水平呈下降趨勢(shì)，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組Th17、Treg相關(guān)細(xì)胞因子

2.3全血Th17、Treg和Th17/Treg與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性分析 與對(duì)照組相比，普通型組、重型組全血Th17、Th17/Treg水平呈增加趨勢(shì)，而全血Treg水平呈下降趨勢(shì)，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。Pearson相關(guān)分析顯示，疾病嚴(yán)重程度與全血Treg水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.430，P<0.05)，疾病嚴(yán)重程度與全血Th17、Th17/Treg水平呈正相關(guān)(r=0.713、0.352，P<0.05)。

表3 3組全血Th17、Treg、Th17/Treg水平比較

3 討論

EV71感染后，手足口病患兒體內(nèi)CD4+T細(xì)胞多種亞型比例可在不同的條件下發(fā)生變化。Th17為輔助性T細(xì)胞亞型，可釋放多種促炎因子，進(jìn)而發(fā)揮殺滅EV71的作用，但也會(huì)增加組織炎性損傷[4]。Treg主要來源于胸腺，具有免疫抑制作用，可維持免疫系統(tǒng)穩(wěn)定性，在手足口病患兒EV71感染后的恢復(fù)期可控制機(jī)體免疫功能亢進(jìn)[5]。而本研究結(jié)果顯示，普通型組、重型組全血Th17、Th17/Treg水平呈升高趨勢(shì)，全血Treg水平呈降低趨勢(shì)，提示隨著EV71感染手足口病發(fā)生及病情加重，Th17、Th17/Treg水平升高，Treg水平降低，機(jī)體免疫殺傷作用增強(qiáng)，免疫抑制難以發(fā)揮作用，可加重患兒組織損傷。進(jìn)一步進(jìn)行Pearson相關(guān)分析法結(jié)果顯示，疾病嚴(yán)重程度與全血Treg水平呈負(fù)相關(guān)，疾病嚴(yán)重程度與全血Th17、Th17/Treg水平呈正相關(guān)，提示EV71感染手足口病患兒感染后全血Th17水平提高，全血Treg降低，Th17/Treg比例失衡，且與病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)。富凡春等[6]研究亦顯示，預(yù)后良好的手足口病患兒全血Th17、Th17/Treg水平提高，全血Treg降低，與本文結(jié)果一致。

Th17為機(jī)體免疫輔助T細(xì)胞，可釋放IL-17、IL-6等多種促炎因子。IL-17為炎癥反應(yīng)的早期啟動(dòng)因子，能夠活化嗜中性粒細(xì)胞，使其吞噬并消化細(xì)胞外EV71，還可通過促細(xì)胞分裂原活化蛋白激酶途徑，促使上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞以及成纖維細(xì)胞分泌IL-6。IL-6則可通過活化補(bǔ)體反應(yīng)，參與體液免疫應(yīng)答，促進(jìn)EV71的殺滅。但兒童免疫功能未發(fā)育完善，隨著手足口病加重，機(jī)體炎癥反應(yīng)亢進(jìn)，可增加組織炎性損傷，甚至發(fā)生多器官功能障礙，影響患兒康復(fù)[7]。IL-23、IL-10、TGF-β為Treg細(xì)胞釋放細(xì)胞因子，可抑制機(jī)體炎癥反應(yīng)，進(jìn)而保護(hù)EV71感染手足口病患兒免于炎癥性病理?yè)p害，維持機(jī)體免疫系統(tǒng)穩(wěn)定狀態(tài)[8]。本文普通型組、重型組患兒血清IL-17、IL-6水平呈升高趨勢(shì)，血清IL-23、IL-10、TGF-β水平呈降低趨勢(shì)，提示EV71感染手足口病患兒Th17/Treg比例失衡，可導(dǎo)致其介導(dǎo)炎性因子釋放改變，破壞機(jī)體促炎及抗炎反應(yīng)平衡，加重機(jī)體炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致組織損傷，進(jìn)而促進(jìn)病情進(jìn)展。

本文病例數(shù)有限,且為單中心回顧性研究等缺陷，可能影響結(jié)論的可靠性，因而EV71感染手足口病患兒Th17/Treg比例變化及與其發(fā)病機(jī)制的關(guān)聯(lián)性仍有待進(jìn)一步研究予以驗(yàn)證。