AQP2、HSP70在痛風(fēng)濕熱蘊(yùn)結(jié)證模型中表達(dá)的意義＊

郭玉星，朱珊瑩，康佩芝，湯 智，易法銀＊＊，邵先舫，熊 輝，劉永利，毛 果

（1. 湖南中醫(yī)藥大學(xué) 長(zhǎng)沙 410208；2. 湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院 長(zhǎng)沙 410006；3. 常德市第一中醫(yī)醫(yī)院 常德 415100；4. 湘潭市中醫(yī)院 湘潭 411100）

痛風(fēng)作為一種臨床常見的代謝性疾病。隨著人們飲食結(jié)構(gòu)的變化，患者數(shù)量猛增，有趕超糖尿病成為第一大代謝性疾病之勢(shì)，因其病程長(zhǎng)及難以治愈性的特點(diǎn)，嚴(yán)重影響著人類生命健康和生存質(zhì)量。目前臨床治療痛風(fēng)藥物主要以秋水仙堿、非甾體消炎藥、糖皮質(zhì)激素等緩解急性癥狀，苯溴馬隆、別嘌呤醇等降尿酸治療，雖然上述化學(xué)藥物治療效果可，但它們不良反應(yīng)（如肝腎損害、胃腸道反應(yīng)等）限制了它們的使用，尤其是痛風(fēng)易反復(fù)發(fā)作且需長(zhǎng)期服藥的特點(diǎn)，因此探尋一種安全性高、副作用小的治療藥物迫在眉睫。中醫(yī)藥對(duì)痛風(fēng)認(rèn)識(shí)已久，幾千年來痛風(fēng)被稱為“歷節(jié)”“痹癥”等范疇。諸多資料記載中醫(yī)藥對(duì)其治療效果良好，因此從浩瀚的祖國(guó)醫(yī)學(xué)中探尋防治痛風(fēng)藥物并對(duì)其作用機(jī)制、作用靶點(diǎn)研究具有重要意義。近年研究表明，痛風(fēng)中濕熱蘊(yùn)結(jié)是主要證型，課題組在臨床中也反復(fù)證實(shí)并以清熱利濕立法治療該病取得了非常好的臨床療效；實(shí)驗(yàn)方面也研究過清熱利濕立法的中藥復(fù)方治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制，但是實(shí)驗(yàn)造模常采用經(jīng)典的大鼠模型（即關(guān)節(jié)腔注射尿酸鈉復(fù)制急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎），不能區(qū)分痛風(fēng)各類證型及辯證論治，加之國(guó)內(nèi)學(xué)者有關(guān)痛風(fēng)及濕熱證的探討雖多，但涉及痛風(fēng)與中醫(yī)濕熱蘊(yùn)結(jié)證病機(jī)及病證結(jié)合模型的研究較少[1]，因此探討中醫(yī)藥復(fù)方干預(yù)痛風(fēng)濕熱蘊(yùn)結(jié)證效應(yīng)的研究具有重要意義及一定的創(chuàng)新性，通過諸多文獻(xiàn)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)水通道蛋白-2（AQP2）、熱休克蛋白70（HSP70）與濕熱關(guān)系密切。因此課題組通過建立痛風(fēng)濕熱蘊(yùn)結(jié)證動(dòng)物模型，并闡明該病癥與AQP2、HSP70 表達(dá)關(guān)系的機(jī)理，這對(duì)進(jìn)一步研究中醫(yī)藥復(fù)方治療痛風(fēng)濕熱蘊(yùn)結(jié)證作用機(jī)制及療效判斷具有重要的意義。本研究采用多因素復(fù)合造模方法復(fù)制濕熱模型，在此基礎(chǔ)上采用改良Coderre法[2]，復(fù)制痛風(fēng)濕熱蘊(yùn)結(jié)證動(dòng)物模型[3]，探討基于AQP2、HSP70 表達(dá)相關(guān)的痛風(fēng)濕熱蘊(yùn)結(jié)證可能的分子機(jī)制，為痛風(fēng)“濕熱蘊(yùn)結(jié)”病機(jī)提供科學(xué)內(nèi)涵?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

本實(shí)驗(yàn)選取8 周齡的SPF級(jí)健康成年SD 雄性大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，它們體質(zhì)量為（200±20）g，4 組共40只，每組10只。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑

造模試劑：52%紅星二鍋頭酒為北京紅星股份有限公司生產(chǎn)，尿酸鈉鹽購(gòu)于北京索萊寶科技有限公司Solarbio產(chǎn)品等；

檢測(cè)試劑：AQP2 試劑盒購(gòu)于碧云天生物技術(shù)研究所，HSP70 檢測(cè)試劑盒購(gòu)于上海超研生物科技有限公司，尿酸（UA）檢測(cè)試劑盒購(gòu)于德國(guó)羅氏診斷有限公司等。

1.3 主要儀器設(shè)備

人工氣候箱（型號(hào)：QHX-300BS-Ⅲ，上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司），雙目生物顯微鏡及圖像采集和分析軟件（型號(hào)：MoticB1，麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司），北京普朗酶標(biāo)儀（型號(hào)：DNM-9602，北京普朗新技術(shù)有限公司），臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（型號(hào)：TGL20，長(zhǎng)沙英泰儀器有限公司），微型漩渦混合儀（型號(hào)：WH-2，江蘇盛藍(lán)儀器制造有限公司）等。

2 方法

2.1 試劑制備

參照改良Coderre造模法，課題組前期造模中藥物配制[2]。

具體步驟為：先稱取微晶尿酸鈉（monosodium urate，MSU）1250 mg，然后加生理鹽水（normal saline，NS）45 mL,再加吐溫80（Tween-80）5 mL，將它們加熱并充分?jǐn)嚢?，以上共同制備成濃度?5 g·L-1的尿酸鈉溶液，備用。

2.2 動(dòng)物分組與造模

痛風(fēng)濕熱證造模方法參照課題組尹明等[3]造模方法。

2.2.1 分組

40 只SPF級(jí)健康成年SD 雄性大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，采用隨機(jī)數(shù)字表方法分為正常對(duì)照組、痛風(fēng)模型組、濕熱模型組、痛風(fēng)濕熱模型組，每組10只。

2.2.2 造模

（1）正常對(duì)照組

在正常溫濕度環(huán)境（24-28℃、相對(duì)濕度60%-75%），給予普通飼料、自由飲水喂養(yǎng)，造模共計(jì)15日。

（2）痛風(fēng)模型組

前15日同正常對(duì)照組。在第15日用5 號(hào)注射器針頭于受試大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)外側(cè)后方進(jìn)行穿刺（注意針口斜面朝前上方，針尖與脛骨成45°），刺入右踝關(guān)節(jié)腔后，予以提前配置好的25 g·L-1濃度的尿酸鈉溶液50μL 注入踝關(guān)節(jié)腔（以關(guān)節(jié)囊對(duì)側(cè)鼓起為標(biāo)準(zhǔn)），制備（急性）痛風(fēng)模型。

（3）濕熱模型組[3]

前10日，在正常溫濕度環(huán)境（見正常對(duì)照組），大鼠喂食普通飼料+200 g·L-1蜂蜜水自由飲用（作為高糖），并采用油脂和白酒隔日交替方式（油脂0.1 g·kg-1（作為高脂）、52°白酒（紅星二鍋頭）0.1 mL·kg-1）。第11 天到15 天，將大鼠放入人工氣候箱中，溫度調(diào)節(jié)為(32±2）℃，相對(duì)濕度(92±3)%。濕熱度造模時(shí)間為每日上午8-12 點(diǎn)，下午1-5 點(diǎn)，上述方法共持續(xù)5日，以制備濕熱證模型。

（4）痛風(fēng)濕熱模型組

綜合痛風(fēng)模型組、濕熱模型組兩組造模方法，前15日喂養(yǎng)造模同濕熱模型組，第15日起踝關(guān)節(jié)造模同痛風(fēng)模型組，制備痛風(fēng)濕熱證模型。

2.3 一般情況觀察

考慮到濕熱證臨床特點(diǎn)及動(dòng)物癥狀辨別的可行性，實(shí)驗(yàn)組主要選取8個(gè)時(shí)相點(diǎn)進(jìn)行一般情況的觀察，觀察的內(nèi)容包括受試大鼠的外觀、精神狀態(tài)、食飲量、體質(zhì)量等的變化情況。

8 個(gè)時(shí)相點(diǎn)分別為：造模開始（即第1日），造模過程中（第5日），開始進(jìn)入人工氣候箱（第11日），痛風(fēng)造模開始（第15日），及痛風(fēng)造模結(jié)束后3 h、6 h、12 h、24 h。

2.4 關(guān)節(jié)炎癥指數(shù)[4-6]

2.4.1 分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

0級(jí)：正常，計(jì)0分；

1級(jí)：踝關(guān)節(jié)處皮膚發(fā)紅，輕度腫脹，可見其關(guān)節(jié)周圍骨性標(biāo)志，計(jì)2分；

2級(jí)：踝關(guān)節(jié)處出現(xiàn)明顯發(fā)紅，局部明顯腫脹，但腫脹僅局限在踝關(guān)節(jié)部位，其關(guān)節(jié)周圍的骨性標(biāo)志消失不可見，計(jì)4分；

3級(jí)：包含2級(jí)情況，同時(shí)出現(xiàn)踝關(guān)節(jié)部位以外肢體腫脹，計(jì)6分。

2.5 造模72 h各組大鼠的步態(tài)情況

參照大鼠步態(tài)分級(jí)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[4-6]:

0級(jí)：正常行走，計(jì)0分；

1級(jí)：輕度跛行，其右下肢出現(xiàn)稍微彎曲狀態(tài)，計(jì)2分；

2級(jí)：明顯跛行，其右下肢在行走過程中僅能剛剛觸及地面，計(jì)4分；

3級(jí)：重度跛行，其右下肢在行走過程中不能觸及地面，僅可余三足行走，計(jì)6分。

2.6 尿液AQP2含量測(cè)定

造模開始后第15日，將各組實(shí)驗(yàn)受試大鼠分別放于單獨(dú)的代謝籠中，遵循禁食但可任意飲水的要求。收集每只大鼠24 h 的尿液，對(duì)其進(jìn)行低溫離心并取上清液，使尿液濃縮，量達(dá)至＜1 mL，置于-20℃冰箱中凍存。課題組采用的考馬斯亮藍(lán)法（Bradford）來測(cè)定尿液中的AQP2 含量。采用的方法為：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為縱坐標(biāo)，OD 值為橫坐標(biāo)，在坐標(biāo)軸上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，從而計(jì)算樣品濃度，其代表尿液AQP2含量。

2.7 血漿HSP70、血尿酸含量測(cè)定

造模開始后第16日，先集中用一定濃度的水合氯醛腹腔注射使各大鼠麻醉，然后采用腹主動(dòng)脈取血方法進(jìn)行取血，取血約為2 mL，將其注入到含30 μL 7.5%EDTA-2Na（乙二胺四乙酸二鈉鹽）和40μL 抑肽酶的試管中，充分混勻，再在4℃下離心10 min（采用3000 r·min-1轉(zhuǎn)速，其離心半徑為30 mm），分離血漿。將樣品置于-20℃凍存。需要檢測(cè)時(shí)，取出并采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）對(duì)其血漿中HSP70、血尿酸的含量進(jìn)行檢測(cè)。

2.8 踝關(guān)節(jié)滑膜組織病理檢測(cè)

各組實(shí)驗(yàn)大鼠處死后，以其右踝為中心，分別從其上下0.5 cm 處進(jìn)行離斷，取右踝關(guān)節(jié)及周圍軟組織，再迅速切取踝關(guān)節(jié)滑膜（在顯微鏡下用尖刀片剝?nèi)。?，將剝?nèi)〉幕ぶ糜?0 g·L-1中性甲醛溶液中固定。然后采用100 g·L-1的乙二胺四乙酸進(jìn)行脫鈣，再經(jīng)過常規(guī)脫水、透明、包埋、切片、HE 染色（蘇木精-伊紅染色）程序，將玻片置于電鏡下，觀察各組大鼠右踝關(guān)節(jié)滑膜組織病理變化，并進(jìn)行比較。

2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所得數(shù)據(jù)，課題組采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。針對(duì)4 組尿液AQP2、血漿HSP70 含量：采取方差分析進(jìn)行組間總體比較，采用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行組間兩兩比較，以α=0.05為標(biāo)準(zhǔn)。

3 結(jié)果

3.1 一般情況觀察結(jié)果

大鼠喂養(yǎng)期間，正常對(duì)照組一般情況（外觀、精神狀態(tài)、食飲量、體質(zhì)量等）均正常；痛風(fēng)模型組大鼠在造模前一般情況均正常，自第15日造模后出現(xiàn)食飲減少，煩躁不安，右踝關(guān)節(jié)明顯紅腫，關(guān)節(jié)局部皮溫升高，并伴活動(dòng)受限情況；濕熱模型組大鼠在開始造模后漸漸出現(xiàn)毛發(fā)蓬松、色枯槁，倦怠懶動(dòng)、行動(dòng)呆滯，食飲減少，小便黃，接著出現(xiàn)大便溏瀉或粘膩的表現(xiàn)；痛風(fēng)濕熱模型組大鼠造模后前15日一般情況與濕熱模型組大鼠相似，自第15日開始，合并出現(xiàn)痛風(fēng)模型組大鼠造模后的表現(xiàn)。說明通過濕熱及急性痛風(fēng)造模后，實(shí)驗(yàn)大鼠出現(xiàn)了痛風(fēng)、濕熱證的一般表現(xiàn)。

3.2 各組大鼠踝關(guān)節(jié)炎癥指數(shù)及步態(tài)評(píng)分比較

與正常對(duì)照組比較，痛風(fēng)模型組、痛風(fēng)濕熱模型組踝關(guān)節(jié)炎癥指數(shù)明顯增高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與濕熱模型組對(duì)比，痛風(fēng)模型組、痛風(fēng)濕熱模型組踝關(guān)節(jié)炎癥指數(shù)明顯增高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；正常對(duì)照組與濕熱模型組比較，痛風(fēng)模型組與痛風(fēng)濕熱模型比較，踝關(guān)節(jié)炎癥指數(shù)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，P＞0.05）。與正常對(duì)照組比較，痛風(fēng)模型組、痛風(fēng)濕熱模型組步態(tài)評(píng)分明顯增高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與濕熱模型組對(duì)比，痛風(fēng)模型組、痛風(fēng)濕熱模型組踝關(guān)節(jié)步態(tài)評(píng)分明顯增高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；正常對(duì)照組與濕熱模型組比較，痛風(fēng)模型組與痛風(fēng)濕熱模型比較，步態(tài)評(píng)分均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，P＞0.05）。以上提示經(jīng)過改良Coderre 法造模后大鼠踝關(guān)節(jié)炎癥指數(shù)及步態(tài)評(píng)分均明顯增加，符合急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎表現(xiàn)（表1）。

表1 痛風(fēng)造模72 h后各組大鼠踝關(guān)節(jié)炎癥指數(shù)、步態(tài)評(píng)分比較（n = 10,±s）

表1 痛風(fēng)造模72 h后各組大鼠踝關(guān)節(jié)炎癥指數(shù)、步態(tài)評(píng)分比較（n = 10,±s）

注：與正常對(duì)照組比較，★P ＜0.05；與濕熱模型組比較，▲P ＜0.05

組別正常對(duì)照組痛風(fēng)模型組濕熱模型組痛風(fēng)濕熱模型組踝關(guān)節(jié)炎癥指數(shù)0±04.21±0.42★▲0±04.07±0.67★▲步態(tài)評(píng)分0±04.04±0.82★▲0±03.95±0.71★▲

3.3 踝關(guān)節(jié)滑膜組織觀察結(jié)果

正常對(duì)照組及濕熱模型組大鼠右踝關(guān)節(jié)及其周圍組織結(jié)構(gòu)清晰完整，滑膜正常，無(wú)明顯組織病理學(xué)改變表現(xiàn)；痛風(fēng)模型組大鼠右踝關(guān)節(jié)及其周圍組織可見滑膜壁增厚，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，痛風(fēng)濕熱模型組表現(xiàn)同痛風(fēng)模型組，亦可見明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。在給痛風(fēng)模型組、痛風(fēng)濕熱模型組大鼠手術(shù)取標(biāo)本時(shí)，各大鼠右踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)均可見明顯的尿酸鹽結(jié)晶沉積。提示經(jīng)過改良Coderre造模法造模后，受試踝關(guān)節(jié)出現(xiàn)尿酸鈉沉積及表現(xiàn)出明顯的炎癥病理變化（圖1）。

圖1 受試踝關(guān)節(jié)滑膜組織病理表現(xiàn)（×200）

3.4 各組大鼠尿液AQP2、血漿HSP70、血尿酸含量變化比較

4組大鼠尿液AQP2含量比較：正常對(duì)照組與痛風(fēng)模型組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；濕熱模型組和痛風(fēng)濕熱模型組比較，無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。正常對(duì)照組明顯低于濕熱模型組和痛風(fēng)濕熱模型組（P＜0.05；P＜0.05）；痛風(fēng)模型組明顯低于濕熱模型組和痛風(fēng)濕熱模型組（P＜0.05；P＜0.05）。提示通過復(fù)合型濕熱造模后尿液AQP2明顯增高（表2）。

表2 4組大鼠尿液AQP2、血漿HSP70、血尿酸含量比較（n = 10,±s）

表2 4組大鼠尿液AQP2、血漿HSP70、血尿酸含量比較（n = 10,±s）

注：與正常對(duì)照組比較，★P ＜0.05；與痛風(fēng)模型組比較，◆P ＜0.05

組別正常對(duì)照組痛風(fēng)模型組濕熱模型組痛風(fēng)濕熱模型組AQP2/(mg·mL-1)0.237±0.0110.229±0.0160.254±0.013★◆0.247±0.022★◆HSP70/(pg·mL-1)19.39±2.7719.96±2.5746.08±4.52★◆45.93±4.64★◆血尿酸/(μmol/L)199.12±45.70207.88±37.08246.58±69.11★▲264.75±44.85★▲

4 組大鼠血漿HSP70 含量比較：正常對(duì)照組與痛風(fēng)模型組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；濕熱模型組和痛風(fēng)濕熱模型組比較，無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。正常對(duì)照組明顯低于濕熱模型組和痛風(fēng)濕熱模型組（P＜0.05；P＜0.05）；痛風(fēng)模型組明顯低于濕熱模型組和痛風(fēng)濕熱模型組（P＜0.05；P＜0.05）。提示通過復(fù)合型濕熱造模后血漿HSP70明顯增高（表2）。

4 組大鼠血尿酸水平比較：正常對(duì)照組與痛風(fēng)模型組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；濕熱模型組和痛風(fēng)濕熱模型組比較，無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。正常對(duì)照組低于濕熱模型組和痛風(fēng)濕熱模型組（P＜0.05；P＜0.05）；痛風(fēng)模型組低于濕熱模型組和痛風(fēng)濕熱模型組（P＜0.05；P＜0.05）。提示提示通過復(fù)合型濕熱造模后血尿酸也有一定增高（表2）。

4 討論

隨著社會(huì)快速發(fā)展，人類飲食結(jié)構(gòu)變化，號(hào)稱“富貴病”的痛風(fēng)患者越來越多，其中濕熱蘊(yùn)結(jié)型是其常見證候類型[7-9]。在臨床中，濕熱蘊(yùn)結(jié)證為主要證型[10，11]，因此通過建立痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎濕熱證動(dòng)物模型，對(duì)其相關(guān)分子機(jī)制進(jìn)行研究，具有重要的臨床和科研意義。

根據(jù)《中醫(yī)內(nèi)科病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》[12]中關(guān)于痛風(fēng)濕熱蘊(yùn)結(jié)證的診斷標(biāo)準(zhǔn)：下肢小關(guān)節(jié)突發(fā)紅腫熱痛，其局部拒按，觸之有灼熱感，遇熱則重，得涼則緩；并伴發(fā)熱口渴，小便色黃，舌質(zhì)紅，苔黃膩，脈象滑數(shù)。在本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中從大鼠的一般狀態(tài)提示：痛風(fēng)濕熱證模型組中大鼠的一般狀態(tài)表現(xiàn)與上述痛風(fēng)濕熱蘊(yùn)結(jié)證的診斷標(biāo)準(zhǔn)中表現(xiàn)相符合。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示大鼠踝關(guān)節(jié)炎癥指數(shù)、步態(tài)評(píng)分可以能夠作為證明痛風(fēng)造模成功的重要指標(biāo)，從而揭示可以作為證明痛風(fēng)加濕熱模型造模成功的一個(gè)重要因素。在對(duì)受試右踝關(guān)節(jié)進(jìn)行局部解剖取材時(shí)發(fā)現(xiàn)痛風(fēng)模型組及痛風(fēng)濕熱證模型組大鼠關(guān)節(jié)中明顯可見尿酸鈉結(jié)晶的沉積，這兩組滑膜的病理形態(tài)變化均符合尿酸鈉結(jié)晶誘導(dǎo)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型的滑膜組織病理變化[13]，也進(jìn)一步證實(shí)痛風(fēng)造模成功，保障了實(shí)驗(yàn)的正行性及后續(xù)研究可信性。

水通道蛋白（AQPS），又稱為水孔蛋白，是一種特異性的轉(zhuǎn)運(yùn)水的蛋白，它可顯著增加細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，常在細(xì)胞內(nèi)外平衡、對(duì)水的分泌吸收的調(diào)節(jié)中起重要作用。AQPS 目前已知有十三種亞型，而AQP2是其中常見的一種，它是存在于腎臟集合管中，具有調(diào)節(jié)水重吸收作用的關(guān)鍵蛋白之一[14]。付偉等實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)[15]：尿液AQP2 含量變化可作為評(píng)價(jià)“濕”邪的重要指標(biāo)。熱休克蛋白(HSPs)是一種廣泛存在的熱應(yīng)激蛋白，它的特點(diǎn)是當(dāng)機(jī)體遭受熱或其他應(yīng)激刺激時(shí)，其表達(dá)則明顯增多。目前共分為HSP70、HSP60等5類。而HSP70是其中最受關(guān)注且研究最為透徹的一種，它在應(yīng)激刺激下合成最為迅速、表達(dá)豐度最高，被稱為主要熱休克蛋白。諸多實(shí)驗(yàn)證實(shí)AQP2、HSP70關(guān)系密切[16]。實(shí)驗(yàn)證實(shí)[17]檢測(cè)AQP2、HSP70 可作為濕熱證辨證論治的量化指標(biāo)，因此將其用于對(duì)濕熱觀察具有一定的參考意義。

本研究中濕熱模型組、痛風(fēng)濕熱證模型組尿液AQP2、血漿HSP70 含量低于正常對(duì)照組、痛風(fēng)模型組，且比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而濕熱模型組與痛風(fēng)濕熱證模型組比較及正常對(duì)照組與痛風(fēng)模型組比較，以上兩指標(biāo)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，AQP2 含量、HSP70 含量?jī)蓚€(gè)指標(biāo)在判斷濕熱蘊(yùn)結(jié)證型時(shí)有著重要作用。血尿酸水平是痛風(fēng)病程度的一個(gè)重要指標(biāo)，在本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中提示:濕熱模型的造模在一定程度上提高了模型大鼠血尿酸水平，而常規(guī)痛風(fēng)造模（尿酸鈉關(guān)節(jié)腔注射）并沒有明顯影響其血尿酸水平，說明濕熱因素在痛風(fēng)中具有重要作用。

綜上所述，本研究結(jié)果提示：通過多因素（飲食+氣候環(huán)境+致病因子+局部用藥+全身用藥）復(fù)合造模方法可以復(fù)制出痛風(fēng)濕熱蘊(yùn)結(jié)證病證結(jié)合模型[3,18]，而且在判斷痛風(fēng)濕熱蘊(yùn)結(jié)證型時(shí)AQP2、HSP70 兩個(gè)指標(biāo)起著重要作用，痛風(fēng)濕熱蘊(yùn)結(jié)證模型建立成功與否可選取觀察AQP2、HSP70 含量變化以作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，其在臨床治療痛風(fēng)濕熱蘊(yùn)結(jié)證患者療效判定也可以作為重要參考指標(biāo)，值得進(jìn)一步研究。