不同粒度的炒牛蒡子煮散工藝比較*

劉芳，張禮欣，束雅春，吳磊，黃亞威

南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院/江蘇省中醫(yī)院，南京210029

中藥煮散是指以水為溶媒與藥材顆?；蚣?xì)末煎煮取汁服用的用藥形式[1]。煮散既可提高利用率、減少藥物的用量，又可減少煎煮時(shí)間、節(jié)約能耗[2]。本實(shí)驗(yàn)選取2020 版《中國(guó)藥典》中明確規(guī)定“臨方搗碎”的炒牛蒡子進(jìn)行研究，通過(guò)對(duì)比不同粒度的炒牛蒡子煎煮過(guò)程中主要成分的煎出率并結(jié)合浸膏得率為指標(biāo)作綜合評(píng)價(jià)，篩選出最佳粒徑的煮散飲片。

1 儀器與藥品、試劑

Agilent 1100 高效液相色譜儀（安捷倫科技公司，含G1311A 四元泵、G1316A 柱溫箱、G1314A VWD 檢測(cè)器、Chemstation 工作站）；Agilent 1260 高效液相色譜儀（安捷倫科技公司，含G1312B 二元泵、G1316A 柱溫箱、G1367E 自動(dòng)進(jìn)樣器、G1322A 脫氣機(jī)、G4212B DAD 檢測(cè)器）；JE1001 電子天平（上海浦春計(jì)量?jī)x器公司）；BP-211D 萬(wàn)分之一分析天平，AX224ZH/E 電子天平（奧豪斯儀器常州公司）。

對(duì)照品：牛蒡苷（批號(hào)110819-201812，純度95.0%）、綠原酸（批號(hào)110753-202018，純度96.1%）購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；牛蒡子苷元（批號(hào)PCS-200509，純度98%）、異綠原酸A（批號(hào)PCS-200904，純度98%），購(gòu)于北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)公司。甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑為分析純；水為純凈水。

炒牛蒡子（批號(hào)：201201，產(chǎn)地遼寧）經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院黃亞威副主任中藥師鑒定為菊科牛蒡Arctium lappa L.的炒制后的干燥成熟果實(shí)。

2 方法與結(jié)果

2.1 不同粒度炒牛蒡子煮散的制備

根據(jù)2020 版《中國(guó)藥典》所用藥篩和粉末分等標(biāo)準(zhǔn)，牛蒡子屬種子類藥材，含有大量油性成分，粘性很大，容易粘連成塊并堵塞篩孔，所以本實(shí)驗(yàn)將炒牛蒡子粉碎成3 種粒徑：能全部通過(guò)5 目篩，且混有能通過(guò)10 目篩不超過(guò)20%的粉末；能全部通過(guò)10 目篩，且混有能通過(guò)50 目篩不超過(guò)20%的粉末；能全部通過(guò)24 目篩，且混有能通過(guò)65 目篩不超過(guò)40%的粉末；依次定為炒牛蒡子2 號(hào)、3 號(hào)、4號(hào)。以原炒牛蒡子（未粉碎）定為1 號(hào)。對(duì)4 種規(guī)格粉末粒度進(jìn)行考察。

2.2 不同粒度炒牛蒡子特征圖譜及其含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Hedera ODS-2（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）；檢測(cè)波長(zhǎng)：286 nm；柱溫：35℃；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：5μL。洗脫梯度見(jiàn)表1。

表1 梯度洗脫程序

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取牛蒡苷、異綠原酸A、牛蒡子苷元、綠原酸的對(duì)照品適量，用甲醇溶解后定容，得對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密移取各對(duì)照品儲(chǔ)備液一定量，混合定容至同一量瓶?jī)?nèi)，配制成綠原酸0.499 mg·mL-1、異綠原酸A 0.200 4 mg·mL-1、牛蒡苷9.22 mg·mL-1、牛蒡子苷元0.222 2 mg·mL-1的混合對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 參照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥煎藥室管理規(guī)范》（國(guó)中醫(yī)藥發(fā)〔2009〕3 號(hào)），分別取炒牛蒡子1、2、3、4 號(hào)各40 g，加入8 倍量水，浸潤(rùn)30 min，用武火煮沸后，改用文火再煎煮30 min，趁熱濾出藥液，殘?jiān)? 倍量水，煎煮20 min，趁熱過(guò)濾，合并煎煮液，得供試品溶液。

2.2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，用甲醇倍比稀釋后得系列質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液；精密吸取該液5 μL，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積值為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，4 種被測(cè)成分在各自線性范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，見(jiàn)表2。

表2 炒牛蒡子中4 種成分線性關(guān)系

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2.3”項(xiàng)下制備的供試品溶液（炒牛蒡子4 號(hào)）5 μL，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得樣品中綠原酸、異綠原酸A、牛蒡苷、牛蒡子苷元峰面積，計(jì)算樣品含量，其含量的RSD 分別為0.03%、0.16%、0.13%、0.65%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液（炒牛蒡子4號(hào)），分別于0、2、4、8、12、24 h 按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣5 μL 測(cè)定，測(cè)得綠原酸、異綠原酸A、牛蒡苷、牛蒡子苷元峰面積，計(jì)算樣品含量，其含量的RSD 分別為0.45%、2.17%、0.24%、0.51%，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 按照 “2.2.3” 項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液（炒牛蒡子4 號(hào)）6份，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，測(cè)得綠原酸、異綠原酸A、牛蒡苷、牛蒡子苷元峰面積，計(jì)算樣品含量，其含量的RSD 分別為0.14%、0.57%、0.16%、0.58%，表明供試品溶液重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 分別精密吸取“2.2.3”項(xiàng)下供試品溶液（炒牛蒡子4 號(hào)）6份，每份600 μL，分別精密加入已知含量綠原酸、異綠原酸A、牛蒡苷、牛蒡子苷元混合對(duì)照品適量，依照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定含量,再根據(jù)公式：回收率（%）=（測(cè)得量-供試品稱樣量×樣品中含量）/加入量×100%，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 各指標(biāo)成分加樣回收率

2.2.9 樣品含量測(cè)定 按照上述含量測(cè)定方法,測(cè)定炒牛蒡子1、2、3、4 號(hào)煎煮液中綠原酸、異綠原酸A、牛蒡苷、牛蒡子苷元的含量。結(jié)果見(jiàn)圖1、表4。

表4 不同粒徑的炒牛蒡子煮散飲片煎煮湯劑中4 個(gè)有效成分含量（mg·g-1，n=3）

圖1 混合對(duì)照品溶液（A）及炒牛蒡子4 號(hào)供試品溶液（B）的HPLC 色圖譜

2.2.10 出膏率的測(cè)定 精密量取“2.2.3”項(xiàng)下4 種供試品溶液各5 mL，均平行3 份。供試品溶液質(zhì)量記為m1，置恒重蒸發(fā)皿中水浴蒸干，105℃干燥3 h，取出，置干燥器中冷卻0.5 h，精密稱定質(zhì)量，得到供試品干膏，質(zhì)量記為m2，根據(jù)公式（1）計(jì)算出膏率。炒牛蒡子1、2、3、4 號(hào)的平均出膏率分別為5.768%、10.584%、11.069%、12.642%；以4 號(hào)出膏率最高。

3 指標(biāo)權(quán)重確立和綜合評(píng)分

本實(shí)驗(yàn)選擇綜合加權(quán)評(píng)分法，篩選炒牛蒡子煮散飲片最佳粉碎粒度。設(shè)定滿分100分，共設(shè)5 個(gè)考察指標(biāo)：綠原酸、異綠原酸A、牛蒡苷、牛蒡子苷元的含量權(quán)重系數(shù)分別為18 分；浸膏得率反映中藥整體性，權(quán)重系數(shù)為28 分。以各考察指標(biāo)的最大值為滿分，對(duì)同一指標(biāo)其他數(shù)據(jù)進(jìn)行百分化處理并計(jì)算其對(duì)應(yīng)分?jǐn)?shù)，不同粒度的炒牛蒡子累加各自的5個(gè)考察指標(biāo)分?jǐn)?shù)即得到最終分?jǐn)?shù)，分值越大質(zhì)量相對(duì)越好，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 最佳炒牛蒡子煮散飲片煎煮湯劑加權(quán)評(píng)分表

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果及評(píng)分情況，炒牛蒡子4 號(hào)＞炒牛蒡子2 號(hào)＞炒牛蒡子3 號(hào)＞炒牛蒡子1 號(hào)。從比較結(jié)果可知，炒牛蒡子進(jìn)行煮散其加權(quán)評(píng)分結(jié)果均明顯高于原飲片?？紤]臨床上應(yīng)用炒牛蒡子打粉的可操作性和加權(quán)評(píng)分結(jié)果，確定炒牛蒡子煮散飲片最佳煎煮粒度為4號(hào)，即能全部通過(guò)24 目篩，且混有能通過(guò)65 目篩不超過(guò)40%。

4 小結(jié)

中藥煮散飲片的粒度大小能夠直接影響其成分煎出和浸膏得率。隨著煮散飲片粒度的減小，與水接觸的總表面積變大，利于有效成分的溶出；但煮散粒度過(guò)小時(shí)，在傳統(tǒng)煎煮方式下煮散會(huì)發(fā)生聚集效應(yīng)乃至吸附作用，不利于有效成分的溶出[3]。使用超聲提取工藝，提取率可進(jìn)一步提高[4]。