• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    BRAF V600E野生型甲狀腺乳頭狀癌303例臨床病理學(xué)特征

    2022-02-01 03:31:08劉藝璇李雪晴王麗麗林東亮谷海燕王婧楠王繼綱
    臨床與實驗病理學(xué)雜志 2022年12期
    關(guān)鍵詞:突變型橋本濾泡

    李 棟,劉藝璇,李雪晴,王麗麗,林東亮,谷海燕,王婧楠,王繼綱

    甲狀腺癌是最常見的內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤,我國甲狀腺癌的發(fā)病率在過去幾十年內(nèi)始終處于上升趨勢。甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid cancer, PTC)是甲狀腺癌中最常見的類型,占85%~90%[1],文獻(xiàn)報道東亞人群中BRAF V600E基因突變率遠(yuǎn)高于西方國家,在日本PTC人群中BRAF V600E基因突變率約為85%[2],在美國PTC人群中BRAF V600E基因突變率約40%[3]。一般認(rèn)為BRAF V600E突變型PTC需要更加積極的治療策略,而在臨床實踐中發(fā)現(xiàn)部分BRAF V600E野生型PTC也具有高侵襲性的生物學(xué)行為。目前,國內(nèi)尚無BRAF V600E野生型PTC的大樣本研究報道,有關(guān)該類型的臨床病理特征以及基因?qū)W變異特點尚待進(jìn)一步分析。本文收集303例BRAF V600E野生型PTC,探討其臨床病理特征、診斷、鑒別診斷,為臨床和病理醫(yī)師提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 臨床資料收集2017年1月~2021年11月青島大學(xué)附屬醫(yī)院PTC手術(shù)標(biāo)本9 729例,其中4 757例行BRAF V600E免疫組化檢測;其中陽性者4 007例(84.2%),陰性者750例(15.8%)。甲狀腺微小PTC(最大徑<1 cm)的預(yù)后良好,本組排除微小癌病例。本組共納入1 564例PTC,其中BRAF V600E陽性者1 261例(80.6%),BRAF V600E陰性者303例(19.4%)。收集BRAF V600E陰性病例的病理切片和臨床資料,包括患者年齡、腫瘤大小、部位、數(shù)目、被膜侵犯(被膜下生長)、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、伴發(fā)病變等情況。隨訪時間1~4年,通過查閱本院病歷存檔系統(tǒng)獲取術(shù)后復(fù)查影像學(xué)結(jié)果,并通過細(xì)胞病理學(xué)或組織病理學(xué)結(jié)果判斷有無術(shù)后復(fù)發(fā)。PTC組織病理學(xué)分型標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)WHO(2017)內(nèi)分泌腫瘤:包括經(jīng)典型、包裹型、濾泡型(完全為濾泡性的生長方式,乳頭不超過1%,否則視為經(jīng)典型)、柱狀細(xì)胞型等多種。本實驗獲得青島大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會審批通過。

    1.2 BRAF V600E免疫組化染色及結(jié)果判讀免疫組化染色采用美國Ventana Medical Systems開發(fā)的VENTANA anti-BRAF V600E(克隆號VE1,針對氨基酸596-606的人工合成肽)鼠單抗,在Roche Bench mark ULTRA全自動免疫組化染色平臺上進(jìn)行。染色切片采用10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋的組織,脫蠟后,抗原修復(fù)(細(xì)胞調(diào)理液1)100 ℃ 64 min,過氧化物酶抑制劑5 min,一抗孵育36 ℃ 16 min,Opti View DAB IHC檢測試劑盒(包括HQ Linker和HRP Multimer,Ventana Medical Systems),用蘇木精Ⅱ和藍(lán)染試劑復(fù)染組織4 min。采用染色系統(tǒng)推薦的陰性試劑質(zhì)控小鼠單抗代替一抗評價非特異染色,陽性對照用已知的陽性PTC切片作為質(zhì)控對照。BRAF V600E(VE1)的陽性染色模式為低倍鏡下可見確切的腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)染色,結(jié)果由兩位病理醫(yī)師根據(jù)腫瘤中是否存在特異性胞質(zhì)染色來評估:對腫瘤細(xì)胞內(nèi)高于背景的、任何強(qiáng)度的明確胞質(zhì)染色判定為陽性。其中,對2017年5月~2019年6月連續(xù)103例BRAF V600E陰性石蠟標(biāo)本同時行ARMS-PCR檢測(ADx-ARMS BRAF基因V600E突變檢測試劑盒,廈門艾德生物公司),檢測方法按照試劑盒說明書進(jìn)行。

    1.3 靶向基因二代測序采用All-in-One Cancer Panel進(jìn)行測序和生物信息分析(項目編號:X101SC20051089-Z01-J001)。該方法可以檢測560個與癌癥及用藥密切相關(guān)基因以及TERT基因的啟動子突變熱點區(qū)段,有效測序深度1 000×。15例BRAF V600E野生型PTC標(biāo)本(同時經(jīng)免疫組化及ARMS-PCR驗證)進(jìn)行測序,包括7例經(jīng)典型、5例濾泡型、1例柱狀細(xì)胞型、1例嗜酸細(xì)胞型、1例實性型。測序標(biāo)本采用石蠟包埋的癌和癌旁組織(11例為淋巴結(jié),4例為癌旁正常甲狀腺組織)進(jìn)行基因組DNA提取、文庫構(gòu)建、庫檢及上機(jī)測序。DNA經(jīng)Covaris破碎儀隨機(jī)打斷成長度為180~280 bp的片段,采用Agilent Sure Select XT Custom 試劑盒進(jìn)行建庫和捕獲,末端修復(fù)和加A尾后,在片段兩端分別連接接頭進(jìn)行文庫制備。帶有特異index的文庫與生物素標(biāo)記的探針進(jìn)行液相雜交,使用帶鏈霉素的磁珠將捕獲目標(biāo)基因的目標(biāo)片段,經(jīng)PCR線性擴(kuò)增后進(jìn)行文庫質(zhì)檢;根據(jù)有效濃度及數(shù)據(jù)產(chǎn)出需求進(jìn)行Illumina Hi Seq PE150測序。測序結(jié)束獲得原始測序序列后進(jìn)行基因變異信息挖掘及分析。利用Sam tools軟件檢測患者正常組織中的胚系突變,篩選可能的癌癥易感基因;將體細(xì)胞突變結(jié)果與數(shù)據(jù)庫中的已知驅(qū)動基因進(jìn)行比較,篩選已知驅(qū)動基因。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。采用χ2檢驗分析BRAF野生型和突變型PTC的臨床病理特征差異,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 BRAF V600E野生型PTC的臨床病理學(xué)特點303例BRAF V600E野生型PTC中,男性67例,女性236例,男女比為1 ∶3.5,年齡11~70歲,平均42歲,中位年齡43歲(圖1);病灶最大徑1~7.5 cm,平均1.8 cm,198例有被膜侵犯(或發(fā)生于被膜下)(65.3%),207例有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(68.3%),120例伴橋本甲狀腺炎(39.6%),80例為多發(fā)病灶(26.4%)。在1 261例BRAF V600E突變型PTC中,男性298例,女性963例(男女比為1 ∶3.2),年齡17~77歲,平均44歲(中位年齡43歲),病灶最大徑1~8 cm,平均1.58 cm,900例有被膜侵犯或位于被膜下(71.4%),717例有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(56.9%),221例伴有橋本甲狀腺炎(17.5%),411例病灶多發(fā)(32.6%)。隨訪BRAF V600E野生型PTC患者134例,其中3例復(fù)發(fā)(出現(xiàn)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,均未進(jìn)行二代測序)。隨訪BRAF V600E突變型PTC患者146例,其中6例復(fù)發(fā)(出現(xiàn)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)。

    圖1 303例BRAF V600E野生型甲狀腺乳頭狀癌的年齡及性別分布

    經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析顯示:與BRAF V600E突變型PTC相比,BRAF V600E野生型PTC更常伴發(fā)橋本甲狀腺炎,區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率更高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(表1)。

    表1 BRAF V600E突變型與野生型甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征對比分析[n(%)]

    2.2 BRAF V600E野生型PTC的病理學(xué)亞型103例BRAF V600E免疫組化陰性PTC的ARMS-PCR檢測結(jié)果均為野生型,采用免疫組化和ARMS-PCR兩種方法的檢測結(jié)果完全一致。BRAF V600E野生型PTC組織學(xué)類型:大部分為經(jīng)典型(79例),其他類型包括濾泡型21例、柱狀細(xì)胞型1例、嗜酸細(xì)胞型1例、實性型1例(圖2~6)。

    2.3 BRAF V600E野生型PTC的基因變異15例BRAF V600E野生型PTC中共篩選出30個腫瘤易感基因突變(圖7);此外,在4例樣本中檢出9個癌癥驅(qū)動基因外顯子區(qū)域的突變(表2),其中1例濾泡型PTC出現(xiàn)NIN無義突變,1例經(jīng)典型PTC出現(xiàn)CHIC2、KAT6B、AXIN1錯義突變和PHF6同義突變,1例經(jīng)典型PTC出現(xiàn)LPHN3錯義突變和DOCK8移碼突變,1例經(jīng)典型出現(xiàn)IKZF1和NLRP1同義突變。本組15例均未檢測到RAS基因及TERT啟動子突變。

    ②③④⑤⑥圖2 經(jīng)典型甲狀腺乳頭狀癌:以乳頭狀結(jié)構(gòu)為主,核為磨玻璃樣,常見核溝和核內(nèi)假包涵體 圖3 濾泡型甲狀腺乳頭狀癌:完全或幾乎完全由濾泡構(gòu)成,核磨玻璃樣,可有核溝和核內(nèi)假包涵體 圖4 柱狀細(xì)胞型甲狀腺乳頭狀癌:乳頭被覆假復(fù)層柱狀上皮,缺乏典型的乳頭狀癌樣核特征 圖5 嗜酸細(xì)胞型甲狀腺乳頭狀癌:嗜酸性濾泡上皮細(xì)胞,核具有典型的乳頭狀癌樣特

    表2 15例BRAF V600E野生型甲狀腺乳頭狀癌標(biāo)本的二代測序結(jié)果*

    3 討論

    BRAF V600E突變是PTC中常見的突變之一,既往研究認(rèn)為BRAF V600E狀態(tài)與PTC臨床生物學(xué)行為和預(yù)后相關(guān),BRAF V600E突變是PTC預(yù)后不良的獨立影響因素[4]。近年研究發(fā)現(xiàn),BRAF V600E突變狀態(tài)與PTC患者臨床預(yù)后無相關(guān)性:BRAF V600E突變與PTC組織學(xué)亞型有關(guān),與其他臨床病理特征未見相關(guān)性,不能作為PTC的獨立預(yù)后因子[5-6]。研究結(jié)果不同的原因可能是存在BRAF以外的其他因素,如重要的未知的驅(qū)動基因變異;其次不同人群中BRAF突變率存在顯著差異,如既往與預(yù)后相關(guān)的報道中BRAF突變率分別為48.5%、37.3%、45.7%[3-4,7],而無預(yù)后相關(guān)的報道中BRAF突變率較高,分別為86.5%、65%、56%[5-6,8]。本組BRAF突變率為80.4%,也遠(yuǎn)高于西方人群的報道。

    圖7 15例BRAF V600E野生型甲狀腺乳頭狀癌的癌癥易感基因

    本組發(fā)現(xiàn),相對于BRAF V600E突變型PTC,BRAF野生型PTC更常伴發(fā)橋本甲狀腺炎;在BRAF V600E突變型PTC中橋本甲狀腺炎的檢出率為17.5%,而BRAF V600E野生型PTC中的檢出率為39.6%。目前,大部分研究認(rèn)為合并橋本甲狀腺炎的PTC中BRAF V600E陽性率低[9-10],與本實驗結(jié)果基本一致。有研究表明,橋本甲狀腺炎可通過調(diào)控腫瘤特異性免疫反應(yīng)來降低腫瘤的侵襲風(fēng)險,抑制PTC的進(jìn)展,是PTC的保護(hù)性因素[11]。然而,橋本甲狀腺炎中的濾泡上皮經(jīng)常發(fā)生萎縮后不典型增生,在此基礎(chǔ)上可能更易發(fā)展為PTC,多為BRAF V600E野生型。

    本組BRAF V600E突變型與野生型PTC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差異有顯著性,BRAF V600E突變型PTC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率是56.9%,而BRAF V600E野生型為68.3%,提示BRAF V600E野生型PTC同樣具有較強(qiáng)的侵襲轉(zhuǎn)移能力。既往大多數(shù)研究認(rèn)為BRAF V600E突變型PTC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率更高[12],更易發(fā)生被膜侵犯[13-14]。不同研究結(jié)果的差異可能因其他重要的驅(qū)動基因或分子生物學(xué)指標(biāo)在不同人群中的分布差異,僅憑BRAF V600E指標(biāo)可能難以評估真實的生物學(xué)行為。本組BRAF V600E突變型PTC被膜侵犯的比例高于野生型病例(71.4%vs65.3%),但這并不能說明BRAF V600E是PTC發(fā)生被膜侵犯的危險因素,也不能說明BRAF V600E突變型具有較強(qiáng)的侵襲性,因為部分PTC好發(fā)于甲狀腺被膜下,且被膜侵犯的病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)病理醫(yī)師的主觀性較強(qiáng),作者認(rèn)為以被膜外軟組織的侵犯轉(zhuǎn)移作為局部浸潤侵襲性的指標(biāo)可能更具代表性。此外,Yan等[15]在研究PTC臨床病理特征時發(fā)現(xiàn),BRAF V600E突變與腫瘤多灶性相關(guān),這與本組結(jié)果一致,與BRAF V600E野生型PTC相比,BRAF V600E突變型PTC更易發(fā)生多個病灶,并且多發(fā)于雙側(cè)甲狀腺。本組中復(fù)發(fā)病例數(shù)較少(僅有9例),且隨訪時間均未超過5年,仍不能根據(jù)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或被膜侵犯情況來判斷預(yù)后,還需進(jìn)行更長時間的隨訪來研究BRAF V600E野生型PTC的遠(yuǎn)期結(jié)局。

    文獻(xiàn)報道男性PTC患者的BRAF V600E基因突變率高于女性,提示男性患者預(yù)后比女性差[12];而Basolo等[16]和本實驗結(jié)果均未顯示不同性別組中的BRAF V600E基因突變存在顯著差異,本組男性患者腫瘤BRAF V600E突變率高于女性。未來可進(jìn)一步研究來驗證性別應(yīng)用于PTC患者危險分層和管理時,是否應(yīng)該區(qū)分BRAF V600E基因突變狀態(tài)。

    本組發(fā)現(xiàn)BRAF V600E野生型PTC中約80%病例的組織學(xué)亞型為經(jīng)典型,約20%病例為濾泡型。雖然本組并未對BRAF V600E突變型PTC的組織學(xué)亞型進(jìn)行分類,但既往報道濾泡型PTC中BRAF多為野生型[17],BRAF野生型PTC中濾泡型的比例相對較高。既往研究發(fā)現(xiàn)不同基因變異可能與組織學(xué)類型和生物學(xué)行為密切相關(guān)[18]:BRAF突變PTC常為經(jīng)典型;RAS突變PTC多表現(xiàn)為濾泡型;RET/PTC1重排常發(fā)生在年輕散發(fā)的PTC患者,預(yù)后相對較好;RET/PTC3重排好發(fā)于射線暴露PTC且多為實體型;ETV6-NTRK3重排也與射線暴露相關(guān),且具有較強(qiáng)的侵襲性;TERT啟動子突變好發(fā)于老年男性患者。多項大樣本的高通量測序研究均提示:BRAF和RAS突變是PTC中較為常見的基因突變,但相對于歐美國家,中國人群BRAF突變發(fā)生率高,RAS突變率低[19-20]。本組15例BRAF V600E野生型PTC中均未檢測到RAS突變,亦提示我國人群RAS突變發(fā)生率較低。進(jìn)一步文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn),本組病例檢出的9種體細(xì)胞基因突變在既往PTC測序研究中罕見報道,進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行驗證,明確這幾種基因突變的臨床病理意義有助于對BRAF V600E野生型PTC進(jìn)一步分型。

    綜上,與文獻(xiàn)報道BRAF V600E突變可作為PTC獨立的預(yù)后危險因素不同,本組發(fā)現(xiàn)BRAF V600E野生型PTC更易合并橋本甲狀腺炎和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,提示應(yīng)對BRAF V600E野生型PTC進(jìn)行進(jìn)一步的危險度分層,尋找預(yù)后相關(guān)影響因素。進(jìn)一步明確BRAF V600E突變對PTC的影響及其對PTC患者預(yù)后的影響,尋找其他有價值的分子生物學(xué)指標(biāo),對這類疾病的精準(zhǔn)篩查、風(fēng)險監(jiān)測及個體化治療具有重要作用。

    猜你喜歡
    突變型橋本濾泡
    Efficacy and safety of Revlimid combined with Rituximab in the treatment of follicular lymphoma: A meta-analysis
    超聲診斷甲狀腺濾泡型腫瘤的研究進(jìn)展
    橋本甲狀腺炎與病毒感染之間關(guān)系的研究進(jìn)展
    高頻甲狀腺超聲對濾泡性腫瘤的診斷價值
    Bcl-6 mRNA在HIV/AIDS患者濾泡輔助性T細(xì)胞中的表達(dá)及意義
    表皮生長因子受體非突變型非小細(xì)胞肺癌分子靶治療有效1病例報道及相關(guān)文獻(xiàn)復(fù)習(xí)
    CD41-42突變型β地中海貧血重組載體pEGFP-C2-CD41-42的構(gòu)建及其穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞模型的建立
    突變型PUMA(S10A)對Hela細(xì)胞的凋亡作用及其分子機(jī)制
    中國罕見的移碼突變型β珠蛋白生成障礙性貧血家系調(diào)查
    亚洲在线自拍视频| 国产黄片视频在线免费观看| 国产伦精品一区二区三区视频9| ponron亚洲| 看十八女毛片水多多多| 可以在线观看毛片的网站| 久久久久久久久久久丰满| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 亚洲精品日韩av片在线观看| 只有这里有精品99| 中文字幕av成人在线电影| 欧美日韩综合久久久久久| 色视频www国产| 久久久精品94久久精品| 久久国产乱子免费精品| 日日啪夜夜撸| 中文天堂在线官网| 国产精品国产三级专区第一集| 免费观看av网站的网址| av天堂中文字幕网| 国产精品人妻久久久久久| 成人一区二区视频在线观看| 久久久a久久爽久久v久久| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 最近的中文字幕免费完整| 简卡轻食公司| 国产亚洲精品久久久com| 国产精品久久视频播放| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 高清欧美精品videossex| 久久久久精品性色| 一区二区三区乱码不卡18| 一夜夜www| 午夜亚洲福利在线播放| 久久久精品94久久精品| 国产亚洲91精品色在线| 我的女老师完整版在线观看| 免费电影在线观看免费观看| 七月丁香在线播放| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 精华霜和精华液先用哪个| av在线观看视频网站免费| 国产黄色免费在线视频| 国内精品美女久久久久久| 欧美三级亚洲精品| 男的添女的下面高潮视频| 插逼视频在线观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 久久久久久久久久成人| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 一级毛片aaaaaa免费看小| 联通29元200g的流量卡| 日韩电影二区| 国产色爽女视频免费观看| av在线老鸭窝| 波多野结衣巨乳人妻| 熟妇人妻不卡中文字幕| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲精品成人av观看孕妇| 麻豆乱淫一区二区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 精品欧美国产一区二区三| 成年人午夜在线观看视频 | 秋霞在线观看毛片| 51国产日韩欧美| 国产精品国产三级国产专区5o| 能在线免费观看的黄片| 免费黄色在线免费观看| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲国产色片| 99久国产av精品国产电影| 男人和女人高潮做爰伦理| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲欧美一区二区三区国产| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 最近2019中文字幕mv第一页| 久久精品国产亚洲网站| 成人性生交大片免费视频hd| 五月天丁香电影| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 男人狂女人下面高潮的视频| 国产精品久久久久久久久免| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 黄色欧美视频在线观看| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产成人午夜福利电影在线观看| 97超碰精品成人国产| 在线播放无遮挡| 久久久久国产网址| 国产老妇女一区| 国产免费福利视频在线观看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 99久久中文字幕三级久久日本| xxx大片免费视频| 久久久精品94久久精品| 搡老妇女老女人老熟妇| 久久韩国三级中文字幕| 久久精品久久精品一区二区三区| 日本爱情动作片www.在线观看| 好男人视频免费观看在线| 午夜老司机福利剧场| 2021少妇久久久久久久久久久| 欧美成人a在线观看| 亚洲av成人av| 国产精品av视频在线免费观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 男女下面进入的视频免费午夜| 成人国产麻豆网| 高清av免费在线| 男女边吃奶边做爰视频| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲最大成人av| 校园人妻丝袜中文字幕| 视频中文字幕在线观看| 国产精品久久视频播放| 在线 av 中文字幕| 久久国内精品自在自线图片| 大香蕉97超碰在线| 成年人午夜在线观看视频 | 日韩欧美国产在线观看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 成人一区二区视频在线观看| 久久久久免费精品人妻一区二区| 精品国内亚洲2022精品成人| 黄色日韩在线| 日韩欧美精品v在线| 国产精品久久久久久精品电影| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲欧美清纯卡通| 久久久a久久爽久久v久久| 网址你懂的国产日韩在线| 3wmmmm亚洲av在线观看| 久久精品综合一区二区三区| 精品欧美国产一区二区三| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产伦理片在线播放av一区| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产视频首页在线观看| 亚洲精品第二区| videossex国产| 日本一二三区视频观看| 97精品久久久久久久久久精品| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲精品国产av蜜桃| 日韩视频在线欧美| 搞女人的毛片| 1000部很黄的大片| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 2022亚洲国产成人精品| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 2018国产大陆天天弄谢| 免费大片18禁| 69人妻影院| 最近中文字幕高清免费大全6| 一级二级三级毛片免费看| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 美女高潮的动态| 免费黄网站久久成人精品| 国产日韩欧美在线精品| 白带黄色成豆腐渣| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲精品自拍成人| 99久久中文字幕三级久久日本| 男女边吃奶边做爰视频| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国内精品宾馆在线| 极品教师在线视频| 欧美97在线视频| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲色图av天堂| 午夜福利高清视频| 免费观看a级毛片全部| 七月丁香在线播放| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲精品影视一区二区三区av| 能在线免费观看的黄片| 国产一级毛片在线| 精品久久久久久成人av| 中文字幕久久专区| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 精品久久久久久久末码| 国产毛片a区久久久久| 一级a做视频免费观看| 久久这里只有精品中国| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产精品1区2区在线观看.| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 日韩一区二区视频免费看| 亚洲在久久综合| 欧美日韩综合久久久久久| av播播在线观看一区| 日日撸夜夜添| 深爱激情五月婷婷| 精品久久久精品久久久| 欧美3d第一页| 免费少妇av软件| 日韩视频在线欧美| 在线a可以看的网站| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲国产欧美在线一区| 综合色av麻豆| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 国产乱人视频| 七月丁香在线播放| 一区二区三区四区激情视频| 最近的中文字幕免费完整| 国产探花在线观看一区二区| av在线亚洲专区| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 色网站视频免费| 国产亚洲5aaaaa淫片| 亚洲精品乱久久久久久| 97在线视频观看| 国产免费视频播放在线视频 | 亚洲欧美日韩东京热| 精品一区二区三区人妻视频| 久久这里只有精品中国| 搡老乐熟女国产| 久久久色成人| 亚洲国产成人一精品久久久| 精品国内亚洲2022精品成人| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲欧洲国产日韩| 深爱激情五月婷婷| 成人性生交大片免费视频hd| 国产单亲对白刺激| 秋霞伦理黄片| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲av中文av极速乱| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 一级毛片久久久久久久久女| 国产亚洲av嫩草精品影院| 女人被狂操c到高潮| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | eeuss影院久久| 久久久精品欧美日韩精品| 国产精品久久久久久av不卡| 在线免费十八禁| 99热这里只有是精品50| av天堂中文字幕网| 少妇被粗大猛烈的视频| 色综合站精品国产| 日韩欧美精品免费久久| 晚上一个人看的免费电影| 波多野结衣巨乳人妻| 人体艺术视频欧美日本| 精品久久久久久久久亚洲| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲三级黄色毛片| 免费观看在线日韩| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产又色又爽无遮挡免| 伦精品一区二区三区| 国产三级在线视频| 亚洲av一区综合| 日本黄色片子视频| 在线播放无遮挡| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 有码 亚洲区| 最近的中文字幕免费完整| 美女被艹到高潮喷水动态| av.在线天堂| 美女国产视频在线观看| 性插视频无遮挡在线免费观看| 天堂俺去俺来也www色官网 | 插逼视频在线观看| 亚洲怡红院男人天堂| 欧美zozozo另类| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 有码 亚洲区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 精品一区二区三卡| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲综合色惰| 亚洲va在线va天堂va国产| 亚洲国产精品国产精品| 久久久久久久久久人人人人人人| 久久精品国产自在天天线| 国产高清有码在线观看视频| 成人鲁丝片一二三区免费| 尾随美女入室| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 激情 狠狠 欧美| 成人鲁丝片一二三区免费| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲伊人久久精品综合| 丝袜美腿在线中文| 午夜精品国产一区二区电影 | 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 午夜福利在线在线| 18禁在线播放成人免费| 久久久久性生活片| 国产精品99久久久久久久久| 免费观看a级毛片全部| 国产黄片视频在线免费观看| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 一个人观看的视频www高清免费观看| 九九爱精品视频在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影| 婷婷色综合大香蕉| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 欧美丝袜亚洲另类| 久久精品国产亚洲av涩爱| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产精品一区二区三区四区久久| 亚洲欧美清纯卡通| 青春草视频在线免费观看| 精品人妻偷拍中文字幕| 我要看日韩黄色一级片| 又爽又黄无遮挡网站| 免费av不卡在线播放| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 大香蕉97超碰在线| 亚洲在线观看片| 我的老师免费观看完整版| 午夜激情久久久久久久| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 尾随美女入室| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 欧美高清性xxxxhd video| .国产精品久久| 国产精品一区二区性色av| 少妇的逼好多水| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 成人av在线播放网站| av专区在线播放| 午夜福利在线在线| 99九九线精品视频在线观看视频| 一级av片app| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲高清免费不卡视频| 中文在线观看免费www的网站| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 精品一区在线观看国产| 麻豆av噜噜一区二区三区| 中文字幕av在线有码专区| 午夜日本视频在线| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲久久久久久中文字幕| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产精品三级大全| 亚洲精品456在线播放app| 欧美不卡视频在线免费观看| www.色视频.com| 乱系列少妇在线播放| 色5月婷婷丁香| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产高清有码在线观看视频| 国产乱人偷精品视频| 国产精品综合久久久久久久免费| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲一区高清亚洲精品| 欧美最新免费一区二区三区| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 久久精品久久久久久久性| 国产成人精品福利久久| 美女黄网站色视频| 亚洲最大成人手机在线| 美女被艹到高潮喷水动态| 91av网一区二区| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲国产精品国产精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 超碰av人人做人人爽久久| 中文字幕亚洲精品专区| 熟女电影av网| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲高清免费不卡视频| 国产色婷婷99| 日韩欧美精品v在线| 免费观看的影片在线观看| 国产午夜精品一二区理论片| 看非洲黑人一级黄片| 最近手机中文字幕大全| 欧美日本视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 久久97久久精品| 男女那种视频在线观看| 日本与韩国留学比较| av在线播放精品| 欧美97在线视频| 日韩欧美精品v在线| 日本欧美国产在线视频| 国产伦理片在线播放av一区| 日日撸夜夜添| a级毛色黄片| 亚洲电影在线观看av| 国产精品精品国产色婷婷| 老女人水多毛片| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产高清三级在线| 日韩欧美精品v在线| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看 | 亚洲最大成人手机在线| 国产一区二区三区综合在线观看 | 简卡轻食公司| 亚洲无线观看免费| 久久久成人免费电影| 99热6这里只有精品| av天堂中文字幕网| 搡老乐熟女国产| 色尼玛亚洲综合影院| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 色视频www国产| 国产有黄有色有爽视频| 久久久精品欧美日韩精品| 国产高清三级在线| 久久99精品国语久久久| 六月丁香七月| 91精品一卡2卡3卡4卡| 精品一区二区免费观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 日本-黄色视频高清免费观看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 中文字幕久久专区| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 久久久久网色| 久久鲁丝午夜福利片| 有码 亚洲区| 亚洲av在线观看美女高潮| 2021天堂中文幕一二区在线观| 色播亚洲综合网| 免费看不卡的av| 99久久中文字幕三级久久日本| 婷婷色av中文字幕| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 亚洲欧美日韩无卡精品| 一本久久精品| www.av在线官网国产| 国产精品三级大全| 日韩欧美国产在线观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | av免费观看日本| 国产老妇伦熟女老妇高清| 天天一区二区日本电影三级| 日韩强制内射视频| 直男gayav资源| 国产 一区精品| 国产精品一区www在线观看| 九九在线视频观看精品| 国产av国产精品国产| 午夜免费男女啪啪视频观看| 亚州av有码| 99热这里只有精品一区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 日本一本二区三区精品| 日本色播在线视频| 久久精品国产亚洲网站| 精品一区二区三区人妻视频| 大片免费播放器 马上看| 日本熟妇午夜| 久久人人爽人人爽人人片va| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 中文字幕av成人在线电影| 久久久久网色| 网址你懂的国产日韩在线| 搡老妇女老女人老熟妇| a级一级毛片免费在线观看| 久久久成人免费电影| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产乱人视频| 亚洲va在线va天堂va国产| 国产黄片美女视频| 搡老妇女老女人老熟妇| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 爱豆传媒免费全集在线观看| 婷婷色av中文字幕| 一区二区三区高清视频在线| 一本久久精品| 少妇高潮的动态图| 免费观看性生交大片5| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 日韩av免费高清视频| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲精品成人久久久久久| 国产视频内射| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产淫片久久久久久久久| 最近中文字幕2019免费版| 69人妻影院| 日韩成人伦理影院| 亚洲最大成人av| 欧美变态另类bdsm刘玥| 少妇的逼好多水| 亚洲在线观看片| 国产精品久久久久久精品电影| 熟妇人妻不卡中文字幕| 国产 一区精品| 三级国产精品片| 日韩av在线免费看完整版不卡| 一本一本综合久久| 欧美三级亚洲精品| 亚洲va在线va天堂va国产| 波野结衣二区三区在线| 大片免费播放器 马上看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 青青草视频在线视频观看| 久久亚洲国产成人精品v| 国产高清国产精品国产三级 | 18禁在线播放成人免费| 国产在线男女| 国产高清不卡午夜福利| 91在线精品国自产拍蜜月| 18+在线观看网站| 欧美另类一区| 久久久精品免费免费高清| 2018国产大陆天天弄谢| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 免费电影在线观看免费观看| 国产在视频线在精品| 亚洲av.av天堂| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 又大又黄又爽视频免费| 久久精品国产亚洲av天美| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 九九爱精品视频在线观看| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 99久国产av精品| 最新中文字幕久久久久| 极品教师在线视频| 欧美bdsm另类| 中文字幕制服av| 人人妻人人澡欧美一区二区| 久久久久性生活片| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 51国产日韩欧美| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产黄色视频一区二区在线观看| 午夜福利高清视频| 成人性生交大片免费视频hd| 国产爱豆传媒在线观看| 三级毛片av免费| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 久久久久网色| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 午夜爱爱视频在线播放| 久久精品人妻少妇| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 蜜臀久久99精品久久宅男| 韩国av在线不卡| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲国产色片| 国产爱豆传媒在线观看| 国产麻豆成人av免费视频| av在线观看视频网站免费| 婷婷色av中文字幕| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲国产av新网站| 国产综合懂色| xxx大片免费视频| av专区在线播放| 亚洲最大成人av| 国产探花极品一区二区| 激情 狠狠 欧美| 国产成人freesex在线| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 白带黄色成豆腐渣| 最后的刺客免费高清国语| 日本免费在线观看一区| 在线 av 中文字幕| 男女边摸边吃奶| 女人被狂操c到高潮| 最新中文字幕久久久久| 高清在线视频一区二区三区| 黑人高潮一二区| 免费观看精品视频网站| 麻豆国产97在线/欧美| 尾随美女入室| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产老妇女一区| 在线 av 中文字幕| 日韩av在线免费看完整版不卡| 一本一本综合久久| 日韩av不卡免费在线播放| 婷婷色av中文字幕| 草草在线视频免费看| 久久久a久久爽久久v久久| 久久人人爽人人爽人人片va| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲av一区综合| 免费av不卡在线播放| 好男人在线观看高清免费视频| 久久久亚洲精品成人影院| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美成人午夜免费资源| 国产一区亚洲一区在线观看| 午夜视频国产福利| 青青草视频在线视频观看| 欧美最新免费一区二区三区| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | www.色视频.com|