血管生成素樣因子2 與周圍血管病變相關(guān)性研究

蔡許超

周圍血管病變（PVD）是糖尿病最常見并發(fā)癥之一[1-2]，其特點(diǎn)為全身的動脈粥樣硬化，導(dǎo)致動脈壁增厚變硬、管腔狹窄及閉塞，引起所供應(yīng)的組織或器官缺血、壞死[3]。胰島素抵抗（IR）是引起2 型糖尿病的重要原因。因此，研究PVD 與IR 的相關(guān)性極為重要。IR 影響因素中，血管生成素樣因子2（ANGPTL2）是一個重要的炎癥介質(zhì)，通過加速白細(xì)胞介素-8（IL-8）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等炎癥因子產(chǎn)生，增強(qiáng)IR[4]，并且產(chǎn)生血管炎癥，進(jìn)一步對血管壁的內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生破壞[5]。本研究檢測PVD 患者血清ANGPTL2、TNF-α、IL-8、IR 水平，研究其相關(guān)性，報道如下。

1 資料與方法

1.1研究對象 收集自2016 年9 月—2019 年9 月于杭州市第一人民醫(yī)院血管外科血管造影確診為動脈粥樣硬化患者130 例，按多普勒超聲檢測結(jié)果分組，其中不穩(wěn)定性斑塊患者63 例納入觀察組，穩(wěn)定性斑塊患者67 例納入對照組。本項臨床研究為回顧性研究，僅采集患者臨床資料，不干預(yù)患者治療方案，不會對患者生理帶來風(fēng)險，研究者盡全力保護(hù)患者提供的信息不泄露個人隱私。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡＞65 歲；（2）出現(xiàn)外周動脈疾病，經(jīng)超聲檢查確診為下肢血管狹窄、閉塞或動脈斑塊形成；（3）伴血壓、血脂、血糖異常。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）嚴(yán)重的心、肝、腎、內(nèi)分泌功能不全患者；（2）因炎癥引發(fā)的血栓性閉塞性脈管炎、大動脈炎的患者；（3）具有嚴(yán)重認(rèn)知障礙或精神藥物依賴史者。

1.3研究方法

1.3.1問卷調(diào)查、指標(biāo)測量 采用問卷調(diào)查的方法收集所有研究對象的一般資料，內(nèi)容具體包括：性別、年齡、身高、體質(zhì)量、糖尿病病程等。計算身體質(zhì)量指數(shù)（BMI），BMI=體質(zhì)量（kg）/身高2（m2）。用魚躍公司血壓計測量血壓，連續(xù)測量3 次，計算平均值。

1.3.2血糖、胰島素測定 收集全部患者晨起空腹以及餐后2h 靜脈血3mL，分離血清標(biāo)本。通過歐姆龍公司血糖儀檢測血糖。利用德國羅氏公司全自動生化分析儀檢測患者血清總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平。采用化學(xué)發(fā)光免疫分析對胰島素進(jìn)行測定，計算IR 指數(shù)=空腹血糖×空腹胰島素/22.5。

1.3.3血清ANGPTL2、TNF-α、IL-8 水平測定 采集患者晨起空腹靜脈血，離心機(jī)分離血清標(biāo)本供檢測。IL-8、TNF-α 檢測分別采用上海開放生物科技有限公司和上海酶聯(lián)生物技術(shù)有限公司的酶聯(lián)免疫吸附法檢測試劑盒。ANGPTL2 檢測采用美國Sigma 公司速率法檢測試劑盒。檢測步驟參照儀器及試劑盒說明書。

1.3.4斑塊穩(wěn)定性檢測 斑塊穩(wěn)定性的判斷通過多普勒超聲檢測，穩(wěn)定性斑塊超聲表現(xiàn)為斑塊質(zhì)地均勻、表面光滑、回聲強(qiáng)并伴聲影；不穩(wěn)定性斑塊超聲表現(xiàn)為粗糙不平整、質(zhì)地不均勻，超聲回聲低弱不均一。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 26.0 及GarphPad 8.0軟件對數(shù)據(jù)與圖形處理。首先對數(shù)據(jù)采用（Kolmogorov-Smirnov test）檢驗與Levene 檢驗數(shù)據(jù)的正態(tài)性與方差齊性；計量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用配對樣本t 檢驗；計數(shù)數(shù)據(jù)以百分比（%）表示，采用卡方檢驗；采用Pearson 相關(guān)性分析與線性回歸分析其互相之間的聯(lián)系。P＜0.05 認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1兩組動脈粥樣硬化患者基線資料比較 觀察組與對照組年齡、性別、BMI、高血壓、吸煙史、高血脂、LDL-C、HDL-C、TC、TG、糖尿病等基礎(chǔ)資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 兩組動脈粥樣硬化患者基線資料比較

2.2兩組動脈粥樣硬化患者血清ANGPTL2、TNFα、IL-8、IR 水平比較 觀察組患者血清ANGPTL2、TNF-α、IL-8 水平及IR 指數(shù)均顯著高于對照組（P均＜0.05），見表2。

表2 兩組動脈粥樣硬化患者血清ANGPTL2、TNF-α、IL-8、IR 水平比較（ng/L，）

表2 兩組動脈粥樣硬化患者血清ANGPTL2、TNF-α、IL-8、IR 水平比較（ng/L，）

注：觀察組為動脈粥樣硬化不穩(wěn)定性斑塊患者；對照組為動脈粥樣硬化穩(wěn)定性斑塊患者；ANGPTL2 為血管生成素樣因子2；TNF-α 為腫瘤壞死因子-α；IL-8 為加速白細(xì)胞介素-8；IR 為胰島素抵抗；與對照組比較，aP<0.05

2.3ANGPTL2、TNF-α 與IL-8 及IR 相關(guān)性分析ANGPTL2、TNF-α 與IL-8 及IR 呈顯著的正相關(guān)關(guān)系；進(jìn)一步將數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化后以IR 為因變量ANGPTL2 為自變量建立線性回歸分析可得Y=0.03x0.024。見圖1。

圖1 IR 與ANGPTL2 線性回歸分析

3 討論

ANGPTL2 是1999 年KIM 等[6]對成人心肌測序時發(fā)現(xiàn)的，由7 個基因編碼而成，可以調(diào)節(jié)血管生成。ANGTPL2 水平在糖尿病、肥胖和癌癥患者中升高，且研究發(fā)現(xiàn)，它在健康受試者中隨著年齡的增長而升高，ANGTPL2 在有高膽固醇和動脈粥樣硬化病變的老鼠中也過早升高[7]。動物實驗顯示，敲除ANGPTL2 基因的小鼠，高血脂、高血壓、炎癥反應(yīng)、糖耐量、IR 等情況顯著降低[8]。

本研究結(jié)果顯示，ANGPTL2 表達(dá)水平與PVD 的病情進(jìn)展呈顯著的正相關(guān)性，PVD 的病情越嚴(yán)重，其不穩(wěn)定斑塊患者血清ANGPTL2 水平含量越高。ANGPTL2 是脂肪來源的關(guān)鍵性炎癥因子，具有促炎作用，可以加速血管內(nèi)膜、中膜巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞數(shù)量，加速動脈粥樣硬化過程，斑塊穩(wěn)定性也變差[9]。本研究發(fā)現(xiàn)ANGPTL2 表達(dá)水平與脂肪、BMI 內(nèi)臟脂肪呈正相關(guān)。PVD 患者IL-8 的表達(dá)水平顯著高于對照組。IL-8 是一種廣泛多效的細(xì)胞炎癥因子，在PVD中能刺激CRP 與纖維蛋白原的生成[10]，形成血栓，堵塞管腔，從而加快PVD 的進(jìn)程。ANGPTL2 可通過整合素介導(dǎo)的核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）信號級聯(lián)反應(yīng)，增加內(nèi)皮細(xì)胞TNF-α、IL-8 表達(dá)，而后作用于胰島素信號系統(tǒng)，抑制胰島素受體磷酸化，干擾胰島素受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)而引起IR[11]。

本研究結(jié)果顯示，觀察組ANGPTL2、TNF-α、IL-6、IR 顯著高于對照組（P＜0.05）；結(jié)果說明PVD 斑塊穩(wěn)定性好的患者機(jī)體ANGPTL2、TNF-α、IL-8、IR 水平較低，表現(xiàn)為炎癥驅(qū)化聚集對血管組織損傷較小，并通過炎癥因子作用于胰島素，干擾胰島素敏感程度較弱，IR 水平較低。線性回歸分析結(jié)果表明，ANGPTL2 能通過串聯(lián)TNF-α 與IL-8 表達(dá)水平，而TNF-α、IL-8 等炎癥因子能作用于胰島素，使得胰島素對機(jī)體的敏感性下降，進(jìn)而引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生IR，從而加速PVD 疾病進(jìn)程。

總之，ANGPTL2 可能通過上調(diào)TNF-α 與IL-6表達(dá)水平從而引起IR，進(jìn)而引發(fā)糖脂代謝紊亂從而加快PVD 的疾病進(jìn)程。