中國南瓜CmNPR1基因的克隆和表達(dá)分析

陳培雯，張 立，陳學(xué)進(jìn)，李新崢，李慶飛*

(1 河南科技學(xué)院 園藝園林學(xué)院，河南新鄉(xiāng)453003；2 河南省園藝植物資源利用與種質(zhì)創(chuàng)新工程研究中心，河南新鄉(xiāng) 453003)

病程相關(guān)基因非表達(dá)子(nonexpressor of pathogenesis related genes1，NPR1)是植物系統(tǒng)獲得性抗性防御反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)控因子，最早發(fā)現(xiàn)于擬南芥突變體中，并以其突變體npr1的表型命名[1-4]。NPR1蛋白包含典型的錨蛋白重復(fù)序列(ankyrin repeats，簡稱ANK)結(jié)構(gòu)域和BTB /POZ(broad-complex，tramtrack，and bric-a-brac /poxvirus and zinc-Finger)結(jié)構(gòu)域，其結(jié)構(gòu)域與蛋白和蛋白之間的互作密切相關(guān)。擬南芥NPR1的ANK結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)其與Basic Domain/Leucine Zipper轉(zhuǎn)錄因子TGA的相互作用，在ANK突變體中無法形成NPR1-TGA復(fù)合體，且不能誘導(dǎo)病程相關(guān)基因(PR)的形成，其共激活需要BTB/POZ結(jié)構(gòu)域和C端半胱氨酸的氧化[5-7]。NPR1通過BTB/POZ結(jié)構(gòu)域與乙烯受體蛋白(ethylene insensitive3，EIN3)相互作用，干擾EIN3與靶基因啟動(dòng)子的結(jié)合，從而阻礙頂端彎鉤的形成[8]。N端的BTB/POZ結(jié)構(gòu)域可與C端的反式激活結(jié)構(gòu)相互作用抑制其功能，而NPR1與SA的結(jié)合可通過構(gòu)象變化破壞這種相互作用[9]。

誘導(dǎo)抗性響應(yīng)在植物防御系統(tǒng)中起著重要的作用。NPR1是系統(tǒng)獲得性抗性(SAR)信號(hào)傳導(dǎo)途徑上的關(guān)鍵調(diào)控因子，是調(diào)節(jié)植物的抗病性的重要基因[10]。SAR的誘導(dǎo)物促進(jìn)NPR1在Ser11/Ser15殘基上的磷酸化，然后促進(jìn)其被cullin3為基礎(chǔ)的泛素連接酶補(bǔ)充。磷酸化的NPR1的轉(zhuǎn)換是完全誘導(dǎo)靶基因和SAR建立所必需的[11]。蠟狀芽孢桿菌AR156通過激活SAR來增強(qiáng)擬南芥的抗病能力，AR156誘導(dǎo)的SAR依賴于NPR1和SA信號(hào)通路[12]。水楊酸(SA)是植物免疫所需的一種防御激素。擬南芥的NPR1和NPR3/NPR4先前被證明可以結(jié)合SA，這3種蛋白都是SA受體。NPR1為轉(zhuǎn)錄共激活因子，而NPR3/NPR4被認(rèn)為是促進(jìn)NPR1降解的E3連接酶，其在SA誘導(dǎo)的防御基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中起著相反的作用[13]。NPR1基因參與了多種植物病菌的防御調(diào)控。香蕉NPR1家族成員MaNPR4 及MaNPR11的表達(dá)量隨著枯萎病菌的侵染時(shí)間延長而不斷增加[14]。在擬南芥中，超量表達(dá)AtNPR1基因可以增強(qiáng)植株對(duì)霜霉病菌(peronosporaparasitica)和丁香假單胞菌(pseudomonassyringae)的抗性[15]。擬南芥AtNPR1基因在其他作物中也被證實(shí)可以增加植株抗病性，AtNPR1轉(zhuǎn)基因番茄不僅對(duì)番茄花葉病毒產(chǎn)生抗性，還對(duì)多種真菌性和細(xì)菌性病害表現(xiàn)出廣譜抗性[16]；AtNPR1轉(zhuǎn)基因胡蘿卜對(duì)核盤霉等病菌的抗性均明顯提高[17]；轉(zhuǎn)基因油菜表現(xiàn)出對(duì)丁香假單胞菌的抗性[18]。

除此之外，NPR1家族成員基因還參與了植物花和果實(shí)的發(fā)育。研究發(fā)現(xiàn)，2個(gè)NPR1-like基因BOP1和BOP2可以調(diào)控葉片和花的不對(duì)稱生長，其雙突變體出現(xiàn)多葉葉柄，花器官脫落，和被苞片包住的不對(duì)稱花[19]。油桐3個(gè)NPR1 家族基因在其雌花、雄花、兩性花中都顯著差異表達(dá)，且在雄花中表達(dá)量最高，推測(cè)油桐的3個(gè)NPR1 家族基因(VfNPR1/3/5)參與了花、果實(shí)發(fā)育和根系系統(tǒng)獲得性抗性信號(hào)途徑[20]。

南瓜是葫蘆科南瓜屬一年生蔓性草本植物[21]，具有易成活、營養(yǎng)價(jià)值高、產(chǎn)量大的特點(diǎn)，在世界各地均有種植[22]。中國南瓜(Cucurbitamoschata)是最具經(jīng)濟(jì)價(jià)值的栽培種，可炒食、蒸食，果肉和種子中含有較高的多糖、β-胡蘿卜素、果膠等保健成分，在降血糖、降血脂、增強(qiáng)機(jī)體免疫等方面具有明顯作用[23]。因此，南瓜是一種具有較高的營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值的蔬菜作物。前期課題組研究發(fā)現(xiàn)，CmNPR1在南瓜雌蕊敗育(表現(xiàn)為柱頭不同程度的缺失)材料中顯著下調(diào)表達(dá)，推測(cè)該基因?qū)δ瞎洗苹òl(fā)育具有重要作用。本研究對(duì)中國南瓜CmNPR1基因進(jìn)行表達(dá)模式分析、基因克隆、生物信息學(xué)分析以及亞細(xì)胞定位，為進(jìn)一步研究南瓜CmNPR1基因的生物學(xué)功能提供重要的參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 植物材料

試驗(yàn)所用植物材料為中國南瓜自交系‘3-1’，種植于新鄉(xiāng)市新東農(nóng)場(chǎng)試驗(yàn)田，采用常規(guī)方法進(jìn)行栽培管理。在植株盛花期，取不同發(fā)育時(shí)期的雌花、雄花(縱徑0.5、1.0和2.0 cm)，選取葉片、幼嫩雌花、雄花(肉眼能區(qū)分花不同結(jié)構(gòu)的最幼嫩時(shí)期，縱徑0.5～1.0 cm)解剖為雌花萼片、柱頭和子房，雄花萼片和雄蕊，取樣后立即放入液氮中冷凍，存儲(chǔ)于-80 ℃超低溫冰箱，用于后續(xù)檢測(cè)CmNPR1基因在花不同發(fā)育時(shí)期和花不同結(jié)構(gòu)中的表達(dá)水平以及用于后續(xù)基因克隆實(shí)驗(yàn)。

1.2 方 法

1.2.1 中國南瓜CmNPR1基因的克隆采用TaKaRa公司MiniBEST Plant RNA Extraction Kit試劑盒提取南瓜雌花的總RNA，根據(jù) TaKaRa公司PrimeScriptTM1st Strand cDNA Synthesis Kit試劑盒進(jìn)行一鏈cDNA的合成。利用中國南瓜基因組數(shù)據(jù)庫(http：//cucurbitgenomics.org/organism/9)中同源基因的CDS序列，設(shè)計(jì)基因特異引物，并送往鄭州生工生物工程有限公司合成，引物序列信息見表1。以合成的cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，回收目的基因片段。然后，將其連接至pMD19-T載體，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，選取陽性單克隆菌液送鄭州生工生物工程有限公司測(cè)序。

1.2.2CmNPR1的生物信息學(xué)分析利用ExPASy ProParam tool(https://web.expasy.org/protparam/)預(yù)測(cè)蛋白的理化性質(zhì)，利用NCBI-CDS(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi)預(yù)測(cè)蛋白的保守結(jié)構(gòu)域，利用Net Phos3.1 Serve(http://www.cbs.dtu.dk/services/NetPhos/)預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)磷酸化位點(diǎn)，利用NPS@：SOPMA(https://npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl?page=npsa_sopma.html)在線工具預(yù)測(cè)二級(jí)結(jié)構(gòu)，利用TMHMM Server V2.0(http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/)在線工具進(jìn)行跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)分析，利用SignalP 4.0 Server(http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP-4.0/)在線工具預(yù)測(cè)信號(hào)肽，利用NCBI blast(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)進(jìn)行基因序列同源性比對(duì)分析，利用DNAMAN 6.0軟件進(jìn)行多序列比對(duì)分析，MEGA7.0構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。

1.2.3CmNPR1基因在植株不同結(jié)構(gòu)中的表達(dá)采用TaKaRa公司MiniBEST Plant RNA Extraction Kit試劑盒分別提取不同發(fā)育時(shí)期的雌花、雄花(縱徑0.5、1.0和2.0 cm)，葉片和花不同結(jié)構(gòu)的總RNA，采用PrimeScriptTMRT Master Mix(Perfect Real Time)試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。利用Primer Premier 5.0 軟件設(shè)計(jì)CmNPR1和內(nèi)參β-Actin7基因的熒光定量引物，送鄭州生工生物技術(shù)有限公司進(jìn)行合成，引物序列信息見表1。按照TaKaRa公司的TB Green?Premix Ex TaqTMⅡ(Tli RNaseH Plus)熒光染料說明書進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，反應(yīng)設(shè)置3個(gè)生物學(xué)重復(fù)，采用2-ΔΔCt法計(jì)算目標(biāo)基因的相對(duì)表達(dá)量[24]。

表1 引物序列表

1.2.4 CmNPR1亞細(xì)胞位置的預(yù)測(cè)及定位首先利用在線軟件WoLF PSORT Prediction和Plant-mPLoc server對(duì)CmNPR1蛋白進(jìn)行亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)分析。其次，構(gòu)建GFP融合表達(dá)載體轉(zhuǎn)化擬南芥原生質(zhì)體，確定CmNPR1蛋白表達(dá)的亞細(xì)胞位置。采用酶切連接法，將CmNPR1基因CDS片段(去掉終止密碼子)連入帶有GFP標(biāo)簽的pBWA(V)HS-ccdb-GLosgfp載體，構(gòu)建目的基因及GFP融合表達(dá)載體。挑取陽性融合載體的菌斑，搖菌，提取質(zhì)粒DNA以備轉(zhuǎn)化。

制備擬南芥原生質(zhì)體并轉(zhuǎn)化：選取25 ℃培養(yǎng)7～15 d的擬南芥愈傷組織，稱取5～10 g，磨碎。在組織中加入5～10 mL酶解液，以全部浸泡組織為宜。28 ℃，緩慢震蕩酶解5～6 h，用40 μm濾網(wǎng)過濾原生質(zhì)體，然后用大離心管50×g離心10 min，去上清，用預(yù)冷W5溶液10 mL洗滌2次，每次50×g，離心5 min，可見管底渾濁沉淀。根據(jù)需要加入500 μL的MMG溶液懸浮。鏡檢：40倍鏡下，檢測(cè)原生質(zhì)體。取200 μL原生質(zhì)體懸液加入10 μL的質(zhì)粒DNA(最好500 ng以上)，取與DNA和原生質(zhì)體體積相等的PEG溶液，500 ng以上的純化質(zhì)粒進(jìn)行輕柔均勻混合。室溫靜置30 min。用1 mL W5稀釋原生質(zhì)體?；旌暇鶆蚪K止反應(yīng)。100×g離心5 min收集原生質(zhì)體，去上清。加入1 mL W5溶液洗1～2次。最后，加入1 mL W5溶液，移至2 mL離心管中，28 ℃暗培養(yǎng)24～48 h，激光共聚焦顯微鏡觀察。其中，酶解液、W5溶液、MMG溶液參照Yoo等[25]進(jìn)行配制。

2 結(jié)果與分析

2.1 南瓜CmNPR1基因的克隆

以南瓜雌花組織RNA反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，用CmNPR1基因特異引物CmNPR1-F和CmNPR1-R進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，電泳結(jié)果如圖1，可見唯一特異條帶，CmNPR1基因的CDS全長為1 442 bp。

M. DL2000； 1. CmNPR1圖1 CmNPR1的PCR擴(kuò)增Fig.1 PCR product of CmNPR1

2.2 CmNPR1蛋白的理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)分析

經(jīng)預(yù)測(cè)CmNPR1蛋白由480個(gè)氨基酸組成，分子式為C2254H3628N646O698S24，總原子數(shù)7 250，相對(duì)分子量為51.71 kD，等電點(diǎn)值為5.88，正電荷殘基(精氨酸+賴氨酸)39個(gè)，負(fù)電荷殘基(天冬氨酸+谷氨酸)52個(gè)，脂肪氨基酸系數(shù) 95.50，平均親水性-0.047，不穩(wěn)定系數(shù)49.65，說明該蛋白屬于不穩(wěn)定性親水蛋白質(zhì)。磷酸化是蛋白翻譯后最重要的修飾之一。NetPhos 3.1 server預(yù)測(cè)顯示，CmNPR1有76個(gè)磷酸化位點(diǎn)，其中絲氨酸49個(gè)，蘇氨酸21個(gè)，酪氨酸6個(gè)。利用NPS@:SOPMA預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)，CmNPR1含有45.83%的α-螺旋，41.67%的無規(guī)則卷曲，7.92%的延伸鏈，4.58%的β-轉(zhuǎn)角，其中α-螺旋比例最高(圖2，A)。以已知蛋白結(jié)構(gòu)DARPin-DARPin (PDB ID：5leb.1.A)為模板，采用SWISS MODEL建模，得到CmNPR1的三維結(jié)構(gòu)，如圖2，B。SignalP 4.0 server和TMHMM分析顯示，CmNPR1蛋白無信號(hào)肽(圖3，A)和跨膜結(jié)構(gòu)(圖3，B)。CmNPR1保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)結(jié)果顯示，CmNPR1氨基酸序列含有一個(gè)BTB-POZ(8-174位氨基酸)保守結(jié)構(gòu)域，一個(gè)DUF3420(209-265位氨基酸)和一個(gè)錨蛋白重復(fù)序列Ank-2(272-353位氨基酸)特異位點(diǎn)(圖4)。

A. 二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)(a. α-螺旋；b. β-轉(zhuǎn)角；c. 延伸鏈；d. 無規(guī)則卷曲)；B. 三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)圖2 CmNPR1蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)A. Prediction of the secondary structure (a. α-helix; b. β-turn; c. Extended strand; d. Random coil); B. Prediction of the tertiary structureFig.2 Prediction of the secondary and tertiary structures of CmNPR1

A. 信號(hào)肽預(yù)測(cè)；B. 跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)圖3 CmNPR1蛋白的信號(hào)肽及跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)A. Prediction of the signal peptide；B. Prediction of the transmembrane domainFig.3 Prediction of the signal peptide and transmembrane domain of CmNPR1

圖4 CmNPR1蛋白保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)Fig.4 Prediction of conserved domains of CmNPR1

2.3 CmNPR1蛋白的同源序列比對(duì)及進(jìn)化分析

同源比對(duì)結(jié)果顯示，CmNPR1氨基酸序列與中國南瓜數(shù)據(jù)庫中基因XP_022932990.1的氨基酸序列一致性最高，達(dá)到96.67%，其次與美洲南瓜(Cucurbitapepo， XP_023554537.1)、印度南瓜(Cucurbitamaxima，XP_022967689.1)、冬瓜(Benincasahispida，XP_038883416.1)和黃瓜(Cucumissativus， XP_004150250.1)等葫蘆科作物的氨基酸序列一致性較高，分別為96.05%、95.63%、86.00%和86.44%(圖5)，與其他科作物相似性較低。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析結(jié)果與同源序列比對(duì)結(jié)果相似，中國南瓜CmNPR1與美洲南瓜NPR1親緣關(guān)系最近，其次親緣關(guān)系較近的為印度南瓜、冬瓜和黃瓜等同科作物，與黃木薯、橡膠樹、栗、中?？Х?、香櫻桃咖啡和小果咖啡等其他科屬作物親緣關(guān)系較遠(yuǎn)(圖6)。

圖5 CmNPR1蛋白與其他同源作物的氨基酸多序列比對(duì)分析Fig.5 Multiple sequence alignment analysis of CmNPR1 protein with homologous proteins of other plants

圖6 中國南瓜與其他作物NPR1蛋白的進(jìn)化分析結(jié)果Fig.6 Phylogenetic analysis results of NPR1 in Cucurbita moschata and other plants

2.4 花發(fā)育不同時(shí)期及不同組織中CmNPR1的表達(dá)

利用熒光定量PCR技術(shù)，分析CmNPR1基因在南瓜雌花、雄花不同發(fā)育時(shí)期及花不同結(jié)構(gòu)中的表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，CmNPR1基因在不同發(fā)育時(shí)期(縱徑0.5、1.0和 2.0 cm)的雌花和雄花中都有表達(dá)，其中在所取最幼嫩的雌花或雄花(0.5 cm時(shí)期)中表達(dá)量最高，該時(shí)期是花分化為花不同結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵時(shí)期，其表達(dá)量顯著高于1.0 cm和2.0 cm時(shí)期，說明隨著雌花和雄花的發(fā)育，該基因表達(dá)量逐漸降低(圖7，A)。對(duì)該基因在雌花和雄花不同結(jié)構(gòu)中的表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)，CmNPR1基因在雌花柱頭中的表達(dá)量最高，其次是雄花萼片、雌花萼片、雄蕊、葉片和子房。其中，柱頭中表達(dá)量是雄蕊中表達(dá)量的15倍，是葉片中表達(dá)量的47倍(圖7，B)；推測(cè)CmNPR1在南瓜花發(fā)育過程中具有重要作用。

不同小寫字母表示基因表達(dá)存在顯著差異(P<0.05)圖7 花發(fā)育不同時(shí)期及不同結(jié)構(gòu)組織中CmNPR1的表達(dá)Different normal letters indicate significant difference in gene expression (P<0.05)Fig.7 Expression levels of CmNPR1 in different developmental stages and different structures of flowers and leaves

2.5 CmNPR1蛋白的亞細(xì)胞定位

在線軟件WoLF PSORT Prediction和Plant-mPLoc server亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)結(jié)果顯示CmNPR1蛋白位于葉綠體、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)、質(zhì)體的可能性較大。為了確定CmNPR1蛋白的亞細(xì)胞位置，構(gòu)建了CmNPR1-GFP融合蛋白表達(dá)載體，在激光共聚焦顯微鏡下觀察顯示，CmNPR1-GFP融合蛋白在葉綠體未見明顯熒光，根據(jù)熒光所在位置判斷CmNPR1可能位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核(圖8)。

圖8 CmNPR1的亞細(xì)胞定位Fig.8 Subcellular localization of CmNPR1

3 討 論

南瓜是世界廣泛種植的蔬菜作物之一[26]。研究表明NPR1基因在植物花和果實(shí)的發(fā)育[19-20]、晝夜節(jié)律穩(wěn)態(tài)[27]以及抗凍性[28]等方面具有重要的調(diào)控作用，是SAR途徑中的關(guān)鍵調(diào)控因子，幾乎參與植物的整個(gè)生命周期[29]。本研究克隆南瓜CmNPR1基因，并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析。研究發(fā)現(xiàn)， NPR1在各物種中具有高度保守性，含錨蛋白重復(fù)和BTB/POZ兩個(gè)蛋白互作結(jié)構(gòu)域，這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域和蛋白與蛋白的相互作用緊密相關(guān)，對(duì)NPR1基因發(fā)揮其功能至關(guān)重要[2,6-9]。本研究中保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)，CmNPR1蛋白具有一個(gè)BTB/POZ保守結(jié)構(gòu)域和一個(gè)錨蛋白重復(fù)序列(ANK)，本研究結(jié)果與陳觀水等[30]對(duì)甘薯等7種植物NPR1蛋白預(yù)測(cè)結(jié)果相似。同源序列比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化樹分析顯示，CmNPR1與同為葫蘆科作物的美洲南瓜、印度南瓜、冬瓜和黃瓜的NPR1一致性較高，說明該蛋白在進(jìn)化過程中比較保守。了解蛋白的亞細(xì)胞定位有助于系統(tǒng)探究該基因的功能及其所在亞細(xì)胞位置和參與的代謝活動(dòng)。NPR1蛋白的核轉(zhuǎn)運(yùn)是其發(fā)揮調(diào)控作用的重要步驟，在沒有病原體攻擊的情況下，核NPR1蛋白不斷地被蛋白酶從細(xì)胞核中清除，抑制了其共激活活性[11]。本研究結(jié)果顯示CmNPR1蛋白位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中，說明CmNPR1可能在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中行使功能，這與蘋果中MdNPR1蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核的結(jié)果一致[31]。推測(cè)CmNPR1蛋白位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核兩個(gè)細(xì)胞位置可能和NPR1蛋白的核轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)。

多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)NPR1家族成員可能參與了植物花和果實(shí)的發(fā)育[19-20]。在蘋果中，研究發(fā)現(xiàn)MdNPR7、MdNPR8均在花中表達(dá)量最高，且在莖，葉片及種子中表達(dá)量較低[31]。ZmNPR1在玉米各組織中均有表達(dá)，其中在雌穗中的表達(dá)量較高[32]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)南瓜CmNPR1基因在南瓜雌蕊敗育材料中顯著下調(diào)表達(dá)[33]。為探究該基因在南瓜花發(fā)育中的作用，本研究分析了該基因在雌雄花不同發(fā)育時(shí)期、不同結(jié)構(gòu)中的表達(dá)，結(jié)果顯示，該基因在最小花發(fā)育時(shí)期和雌蕊柱頭中的表達(dá)量最高。該研究結(jié)果與玉米[32]中ZmNPR1的研究結(jié)果具有一致性，推測(cè)CmNPR1基因可能對(duì)南瓜雌花尤其是雌蕊的發(fā)育具有重要作用。但該基因在南瓜花發(fā)育方面的功能還需要進(jìn)一步進(jìn)行功能分析。本研究中CmNPR1基因CDS的獲得和生物信息學(xué)分析及其在雌雄花不同發(fā)育時(shí)期、不同結(jié)構(gòu)中的表達(dá)分析結(jié)果為深入研究該基因在南瓜花發(fā)育中的功能奠定了研究基礎(chǔ)。