規(guī)模化種豬場口蹄疫病免疫凈化及效果評估

劉 威，單愛婷，袁芳艷，周丹娜，趙海忠，劉澤文，高 婷，郭 銳，楊克禮，孫 裴*，田永祥*

(1.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部獸用藥物與診斷技術(shù)湖北科學(xué)觀測實驗站，湖北 武漢 430064；2.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物科技學(xué)院，安徽 合肥 230036)

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病[1]，該病傳播途徑多、速度快[2]，曾多次在世界范圍內(nèi)暴發(fā)流行，造成巨大經(jīng)濟損失[3]，世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為法定通報性動物疫病[4]，我國將其列為一類動物疫病[5]。亞洲地區(qū)是口蹄疫重疫區(qū)[6-9]，O型口蹄疫為全世界流行最廣的一個血清型，也是我國豬口蹄疫的主要流行血清型[10]。中國鄰國眾多且是養(yǎng)豬大國，防控口蹄疫不僅對本國養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展起關(guān)鍵作用[11-12]，而且對全球口蹄疫防控有重要意義[13]。`

《全國獸醫(yī)衛(wèi)生事業(yè)發(fā)展規(guī)劃(2016—2020年)》中明確將口蹄疫列為有計劃控制并凈化的重點動物病種之一。“十三五”期間，為推動口蹄疫病的凈化工作，我國啟動了“種畜場口蹄疫凈化技術(shù)集成與示范”國家重點研發(fā)計劃項目，旨在應(yīng)用綜合集成的疫苗免疫、檢測、監(jiān)測、淘汰及生物安全等技術(shù)，構(gòu)筑種豬場口蹄疫綜合防控體系，建立口蹄疫凈化種豬示范場，以提升我國規(guī)模化養(yǎng)豬場動物疫病防控水平，促進畜禽養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展。本研究將對參與凈化的部分規(guī)?；N豬場的凈化效果和成效進行評估。

1 材料與方法

1.1 基因組序列與數(shù)據(jù)庫樣品來源于湖北、安徽地區(qū)部分規(guī)模化種豬場，樣本隨機采集。其中生產(chǎn)母豬抗凝血共2 405份、后備豬群抗凝血1 710份、種公豬抗凝血810份、保育豬抗凝血1 360份、育肥豬抗凝血1 860份、唾液樣本23份、扁桃體樣本40份、環(huán)境樣本15份。

1.2 試劑豬O型口蹄疫病毒ELISA抗體檢測試劑盒、豬A型口蹄疫病毒ELISA抗體檢測試劑盒、豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC-ELISA抗體檢測試劑盒均購自武漢科前生物股份有限公司；豬口蹄疫O型、亞洲1型、A型三價滅活疫苗和豬口蹄疫O型、A型二價滅活疫苗均購自金宇保靈生物藥品有限公司。

1.3 本底調(diào)查本底調(diào)查于2016年進行，旨在調(diào)查示范場口蹄疫流行狀況、疫苗使用及免疫程序、生物安全措施(人流、物流、車流、生物安全通道及消洗、隔離等)，評價疫苗免疫效果、野毒感染狀況等，查找風(fēng)險因素。公豬、生產(chǎn)母豬、后備母豬全群采集血樣，保育和育肥豬隨機抽檢，采樣計劃詳見表1。

表1 本底調(diào)查口蹄疫疫苗O型抗體和非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體檢測計劃

1.4 監(jiān)測采樣情況2017—2020年，為監(jiān)測疫苗免疫后O型抗體以及非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體陽性率，每年分2次，對公豬、后備母豬、生產(chǎn)母豬、保育和育肥豬進行隨機抽檢，監(jiān)測計劃詳見表2。

表2 種豬場口蹄疫疫苗O型抗體和非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體監(jiān)測計劃

1.5 口蹄疫凈化檢測技術(shù)扁桃體、唾液、環(huán)境樣本送湖北動物疫病控制中心、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物疫病診斷中心進行病原學(xué)檢測；采用豬O型口蹄疫病毒ELISA抗體檢測試劑盒檢測豬口蹄疫O型抗體；采用豬A型口蹄疫病毒ELISA抗體檢測試劑盒檢測豬口蹄疫A型抗體；采用豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC-ELISA抗體檢測方法檢測豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體。

1.6 陽性動物的處理經(jīng)濟價值較低的3ABC陽性豬直接淘汰處理。經(jīng)濟價值較高的3ABC陽性豬，隔離飼養(yǎng)，并間隔4周后第2次采樣檢測，如3ABC陰性，分群飼養(yǎng)，跟蹤觀察，適時淘汰；如3ABC陽性，淘汰處理，并采集淋巴結(jié)，送蘭州獸醫(yī)研究所確診。淘汰豬按國家有關(guān)規(guī)定處理。

2 結(jié)果

2.1 本底調(diào)查2016年對種豬場進行了本底調(diào)查，共對2 514份血清進行了O型抗體和3ABC抗體ELISA檢測，不同豬群檢測結(jié)果見圖1，2。結(jié)果顯示：湖北和安徽某種豬場公豬、生產(chǎn)母豬和后備母豬O型抗體陽性率均保持在85%以上，而保育豬、育肥豬O型抗體陽性率較低；安徽某種豬場后備母豬、保育豬和育肥豬3ABC抗體陽性率較高，湖北某種豬場3ABC抗體陽性率為0.0%。2個種豬場均建立了較為完善的人流、物流、車流、生物安全通道及消洗、隔離等生物安全措施。

圖1 2016年湖北某種豬場O型抗體和3ABC抗體ELISA檢測結(jié)果

圖2 2016年安徽某種豬場O型抗體和3ABC抗體ELISA檢測結(jié)果

2.2 免疫程序調(diào)整湖北某種豬場使用豬口蹄疫O型、亞洲1型、A型三價滅活疫苗，仔豬50日齡首免，90日齡二免，公、母豬每年免疫2次，后備豬配種前免疫2次。通過母源抗體消長規(guī)律研究，發(fā)現(xiàn)仔豬母源抗體在30～50日齡急劇下降(圖3)，故調(diào)整免疫程序?qū)⑹酌鈺r間從50日齡調(diào)整為35日齡。2019年后使用金宇公司的豬口蹄疫O型、A型二價滅活疫苗。

圖3 湖北某種豬場母源抗體消長檢測結(jié)果

安徽某種豬場保育、育肥豬使用政府采購的口蹄疫O型單價苗，其他豬群使用金宇公司的豬口蹄疫O型、亞洲1型、A型三價滅活苗。根據(jù)本底調(diào)查結(jié)果，豬場保育、育肥豬O型抗體陽性率較低，故調(diào)整免疫程序?qū)⒁呙绺臑榻鹩畋ｌ`生物藥品有限公司的豬口蹄疫O型、亞洲1型、A型三價滅活疫苗。2018年后使用金宇公司的豬口蹄疫O型、A型二價滅活疫苗。

2.3 O型抗體監(jiān)測2016—2020年，種豬場共檢測O型抗體8 145份。湖北某種豬場O型抗體陽性率從89.7%提升到93.0%，安徽某種豬場O型抗體陽性率從81.3%提升到94.3%，其中保育豬和育肥豬O型抗體陽性率提升顯著(保育豬從77.6%提升到92.0%，育肥豬從69.9%提升到95.5%)(圖4，5)。

圖4 湖北某種豬場O型抗體監(jiān)測結(jié)果

2.4 3ABC抗體監(jiān)測2016—2020年，種豬場共檢測3ABC抗體8 145份。湖北某種豬場3ABC抗體陽性率始終為0.0%，安徽某種豬場3ABC抗體由陽性逐步轉(zhuǎn)為陰性(圖6)。

圖6 安徽某種豬場3ABC抗體監(jiān)測結(jié)果

2.5 A型抗體抽檢2020年，種豬場共抽檢A型抗體450份。湖北某種豬場A型抗體陽性率為90.67%，安徽某種豬場A型抗體陽性率為93.33%(表3)。

表3 種豬場A型抗體抽檢結(jié)果

2.6 病原學(xué)檢測采集豬唾液、扁桃體、環(huán)境樣品送湖北省動物疫病預(yù)防控制中心和華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物疫病診斷中心進行病原學(xué)檢測，檢測結(jié)果見表4。從結(jié)果可以看出，本試驗豬群無野毒感染及傳播，豬場內(nèi)無病毒傳播。

圖5 安徽某種豬場O型抗體監(jiān)測結(jié)果

表4 病原學(xué)檢測結(jié)果

3 討論

動物疫病凈化是在特定場群或區(qū)域消滅某種或某些動物疫病，是實現(xiàn)動物疫病的源頭控制，推動無疫區(qū)建設(shè)的重要基礎(chǔ)，也是保障公共衛(wèi)生安全的重要內(nèi)容[14]。為實現(xiàn)凈化目的，種畜場在開展凈化之前，應(yīng)根據(jù)相關(guān)規(guī)定要求，完善生物安全防護設(shè)施設(shè)備建設(shè)，強化飼養(yǎng)管理，建立嚴(yán)格的生物安全措施(包括消毒、生物安全通道管理、人員管理、物流管理、隔離措施等)。種豬場動物疫病凈化需要經(jīng)歷3個階段，即本底調(diào)查階段、免疫控制階段和凈化維持階段。本底調(diào)查主要是了解豬場生產(chǎn)、疫病流行、疫苗免疫效果、生物安全現(xiàn)狀、分析疫病相關(guān)風(fēng)險因素，便于查漏補缺，制定“一場一冊”凈化方案。免疫控制階段主要是通過免疫、監(jiān)測、分群和淘汰等措施，建立健康陰性群。監(jiān)測凈化階段必須嚴(yán)格執(zhí)行陽性動物淘汰策略，實現(xiàn)徹底的清群，并逐步擴大凈化效果。凈化維持階段主要依靠常規(guī)和維持性監(jiān)測以及健全的生物安全體系，防止輸入性感染，確保豬場免疫無疫或非免疫無疫。

本研究中口蹄疫凈化工作分別在安徽3ABC抗體陽性場和湖北3ABC抗體陰性場開展，通過5年的凈化實施，安徽某種豬場3ABC抗體陽性率由7.9% 降至0.0%，O型抗體陽性率從81.3%提升到94.3%，湖北某種豬場3ABC抗體陽性率始終維持在0.0%，O型抗體陽性率從89.7%提升到93.0%，提示本試驗中豬場口蹄疫凈化方案是有效和可行的。安徽某種豬場在調(diào)整免疫程序后，保育豬和育肥豬O型抗體陽性率提升顯著(保育豬從77.6%提升到92.0%，育肥豬從69.9%提升到95.5%)。湖北某種豬場在完成母源抗體消長規(guī)律研究后，將仔豬的首免時間從50日齡提前至35日齡，調(diào)整后保育豬O型抗體陽性率從76.9%提升到91.7%，育肥豬從82.0% 提升到92.9%。綜上所述，本研究所評估豬場的口蹄疫凈化效果顯著，為我國開展種豬場口蹄疫凈化提供了一定的經(jīng)驗。